Name: 膠芽腫の治療の幹細胞シード足場の頭蓋内注入画像誘導切除 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: 学ぶマウスの脳腫瘍切除と治療用間葉系幹細胞シード足場の頭蓋内移植法。神経腫瘍学と細胞治療の分野で、術後細胞移植や治療効果を評価する臨床模倣モデルとして有用です。

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著者は、博士キャサリン Pietrosimone から編集の貢献を認めます。PLA の足場は、ノースカロライナ州立大学で博士エリザベス Loboa の研究室で製造されました。この作品は、UNC 施設の大学がん研究基金と UNC トランスレーショナルリサーチと臨床科学研究所 (KL2TR001109、UL1TR001111) によって支えられました。

ここで説明するすべての方法は、制度的動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) のノースカロライナ大学チャペルヒル校によって承認されています。
注: 開く開頭術、マウスにこの手順を実行 Mostany と・ ポルテラ Cailliau19の摘出は骨組織を破棄する前記によるプロトコルの修正されたバージョンとして設立バリアフリー脳を残して、最終的な糸球体基底膜腫瘍切除術。小沢氏とジェームズの20記載, 開頭手術後腫瘍は定位注入を介して確立されます。我々 インプラント (前から mm) で次の定位座標で 1 × 105 U87 mCh Fl 細胞: (2.5, 0,-0.5)。
1. 細胞培養足場の準備
注: 足場は、マウスに注入する前に 48 h が準備されるべき。以下のボリュームは、足場ごとに基づいて提供しています。追加足場の必要に応じて数量を乗算します。
<ol><li>切除キャビティ サイズ (約 2 mm × 2 mm) に PLA の足場を切る。足場は、はさみを使用してまたは再現性の穴パンチを使用して手でカットできます。</li>
	<li>滅菌 PBS 中に浸漬後 15 分間 70% エタノールに浸漬します。播種用細胞を準備している間 10% 牛胎児血清 (FBS) 1% ペニシリン-ストレプトマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地 (DMEM) に足場を配置します。</li>
	<li>0.05% トリプシン (T75 フラスコの 3-5 mL) を用いた培養 MSCs を持ち上げます。37 ° C、5 分セルが持ち上げたことを確認で孵化させなさい、トリプシンを不活化するフラスコに 7-10 mL DMEM を追加します。</li>
	<li>15 mL 遠心管にフラスコの内容を転送します。診断を使用してセルをカウントします。5 x 105 5 分 100 × g で遠心分離を介して各足場 MSCs をペレットします。</li>
	<li>上清を吸引し、5 x 10 の5セルあたり 5 μ l 添加 DMEM で MSCs を再懸濁します。</li>
	<li>それらの乾燥を叩き、シードの足場を準備します。<ol>
<li>DMEM 浸漬から鉗子で足場を削除し、一時的に 6 ウェル プレートの蓋の上に置きます。過剰な DMEM の液滴を残して、ふたを足場を持ち上げます。</li>
		<li>新しい、乾燥場所で、再び蓋に戻って足場を配置します。3-5 回、繰り返す播種 6 ウェル プレートで部分的に乾燥した足場を配置します。各足場に対して繰り返します。 注: 部分的乾燥足場は、最適な細胞播種結果を提供します。足場が余りにぬれている場合、細胞は足場をオフにスライドし、ウェル プレートの下に従います。足場があまりにも乾燥している場合、液滴が全体の足場は、貧しい人々 の初期細胞配分に終って上普及していません。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ピペットを使用して、優しく、底に解決するかもしれないいくつかの細胞懸濁液を均質化する幹細胞のバイアルをミックスします。</li>
	<li>ゆっくりと新鮮な足場では、足場の上に小さな液滴を作成する上で直接 MSC を懸濁液を混合 2.5 μ L をピペットします。</li>
	<li>各井戸の端に 300 μ L DMEM を追加します。これはセル液滴の急速な蒸発を防ぐ。足場に付けるセルを許可する 30 分の 37 ° C で孵化させなさい。</li>
	<li>鉗子、優しくウェル プレートで足場を反転します。シード 2.5 μ L 混合新鮮な MSC に懸濁液 (この結果、足場ごとシード 5 x 10 の5セルの合計)。足場に付けるセルを許可する 30 分の 37 ° C で孵化させなさい。</li>
	<li>6 ウェル プレートの各ウェルに 2 mL を追加して DMEM で足場をカバーしてください。メディアがそれらの下に流れるように足場をそっと持ち上げます。移植手術前に 48 h にこの状態で 37 ° C で孵化させなさい。</li>
	<li>24 h と追加/変更メディア後足場を確認する余分な蒸発または pH の不均衡のため変色したメディアが観察される場合。</li>
</ol>2. 蛍光ガイド下切除と足場注入
注: 手術の初期化前にすべてのツールを滅菌します。機関 IACUC プロトコルに従って、予防的鎮痛を管理します。
<ol><li>解剖顕微鏡蛍光の段階の脳定位固定装置のフレームを配置します。</li>
	<li>誘導室における吸入イソフルランの下にマウスを麻酔します。一度麻酔、イソフルラン ノーズコーン アダプターを介して連続的な吸入麻酔供給脳定位固定装置のフレームでマウスを固定します。加熱パッドやプローブの体温を維持します。 注: 4-5% イソフルランは誘導に適した 2-3% 維持のために適して、この適応および各マウスの監視が必要であります。</li>
	<li>角膜の乾燥を防ぐために目に眼軟膏を適用します。3 つのアルコールや betadine ワイプの 3 つのシリーズで頭皮の切開部位を消毒します。</li>
	<li>各肢のつま先ピンチ反射テストを実行し、適切な anesthetization を確保するための否定応答を確認します。約 55 65 呼吸/分で安定した呼吸率を確保します。</li>
	<li>鉗子を使用して、ピンチ、優しく頭皮を持ち上げます。外科はさみで正中線の線形の吻側尾側切開を作る。PBS の切開部位に水を引くし、ブラッシングの円運動で綿の先端アプリケータと皮下脂肪を除去します。以前に確立した頭蓋ウィンドウが完全に表示されるよう、皮膚を配置します。</li>
	<li>優しくだけ 18 G 針を用いて頭蓋のウィンドウの境界線の内側の硬膜を穿刺します。切開完全トレース ウィンドウの内部までを繰り返します。</li>
	<li>硬膜を削除するには、離れて明らかに基になる柔組織と腫瘍の微細鉗子を使用してそれを剥離します。</li>
	<li>部屋のライトをオフにして、実体顕微鏡蛍光モードをオンにして U87 mCh フロリダ腫瘍を見つけます。真空ポンプのチューブの端に 1-200 μ L ピペット チップを読み込むことによって切除の準備します。</li>
	<li>真空ポンプをオンにします。信号がなくなるまで優しく蛍光組織を吸引によって腫瘍を切除します。真空ポンプの電源を切り、ピペット チップを破棄します。オン オフ蛍光と部屋のライトを入れます。 注: 出血を制御するため冷 PBS で灌漑し、綿の先端アプリケータと着実に圧力を適用します。深刻なケースで切除空洞も一時的にパックできます止血剤で出血が別の PBS の灌漑に続いて停止した後削除されます限り。</li>
	<li>注入直前にゆっくりと不要なメディアおよび関連コンポーネントを削除する PBS の PLA の MSC シード足場を浸しなさい。切除空洞に足場を注入します。必要な場合は、場所に 1 μ L フィブリノゲン (67 106 mg/mL) 1 μ L トロンビン、足場を確保する (400 625 な U/mL) に続いてを追加します。</li>
	<li>削除硬膜と骨フラップ既に破棄頭蓋の] ウィンドウから、皮膚を閉じるし、手術用の接着剤を適用するだけで傷をシールします。吸入麻酔薬から動物を外し、加熱面に回復することができます。</li>
	<li>ケージに戻り、一度歩行マウス。IACUC 承認スケジュールで鎮痛剤を管理します。各マウスの手順を繰り返します。</li>
</ol>3. 術後画像
<ol><li>28 G インスリン注射用の針を使用して、D-ルシフェリン (150 mg/kg 腹腔内投与) でマウスを注入します。</li>
	<li>10 分を待ちます。これは体全体を循環し、ピークの式を取得する脳内ルシフェラーゼ発現がん細胞と反応するルシフェリンをできるようになります。</li>
	<li>(前述のように) として、イソフルラン麻酔下で生物発光イメージング腫瘍を可視化する (結合) システムでマウスをイメージします。必要な (数秒から数分) 腫瘍の大きさに応じて、露出時間は異なります。</li>
	<li>腫瘍の成長速度を決定するため必要に応じて画像検査手順を繰り返します。動物の健康を監視し続けます。 注: 治療上の MSCs 恒常トレイル、がん細胞を殺すと全体的な腫瘍の成長を抑制することを表明します。2-5 日ごとのイメージングは、この目的のため十分な頻度を提供します。</li>
	<li>IACUC プロトコルで説明されている定義済みのエンドポイントが満たされているとき、transcardial 潅流によってマウスを犠牲にし解析のためのティッシュを収集します。</li>
</ol>

<ol><li>Adamson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+multiforme%3A+a+review+of+where+we+have+been+and+where+we+are+going%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+opinion+on+investigational+drugs%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma multiforme: a review of where we have been and where we are going.</a> Expert opinion on investigational drugs. 18 (8), 1061-1083 (2009).</li>
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<li>Loebinger, M., Eddaoudi, A., Davies, D., Janes, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+Stem+Cell+Delivery+of+TRAIL+Can+Eliminate+Metastatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal Stem Cell Delivery of TRAIL Can Eliminate Metastatic Cancer.</a> Cancer Research. 69 (10), 4134-4142 (2009).</li>
<li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Craniotomy+Surgery+Procedure+for+Chronic+Brain+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging.</a> J. Vis. Exp. (12), e680(2008).</li>
<li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+Intracranial+Brain+Tumor+Xenografts+With+Subsequent+Analysis+of+Tumor+Growth+and+Response+to+Therapy+using+Bioluminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (41), e1986(2010).</li>
</ol>

夫妻のシート、Bagó、および Hingtgen の諸相幹細胞と足場技術 UNC チャペルヒルからライセンスを取得しているファルコン治療で公平があります。

次の点を考慮に入れて精度を最大化し、時間のかかる落とし穴を避けることを考えれば通常マウスあたり 30 分以内で手術を完了できます。まず、正しく手順を開始する前に脳定位固定装置でマウスを確認します。不要な頭の動きは、開頭手術の手術の精度、腫瘍移植と腫瘍切除の程度の位置に制限されます。切除前、硬膜腫瘍の部分を完全に削除します。それを吸引中にステータス退避とタフな線維性の硬膜が堅くなります。完全に削除されなかった場合焼入れ硬膜が吸引先端モビリティに制限し、完全な切除を防ぐ。切除、時に血管がしばしば誤って重要な出血を引き起こす腫瘍と一緒に切除しました。過剰な血蛍光信号の強度が減少して、腫瘍が不明瞭します。切除時に腫瘍の可視性を維持する切除、適切な範囲を確保し、健康な組織や余分な出血の除去を制限します。小さい出血は、冷たい生理食塩水で破損した容器に水を引くし、綿の先端アプリケータと穏やかな圧力を適用します。出血が続く場合は、2 〜 3 分の空洞に止血剤をパック、鉗子で取り外します。PBS セル シード足場を注入する前に生理学的 pH を復元するのにはその後で水を引きます。切除を完了し、出血が止まり、最終的な落とし穴は不十分な皮膚創傷閉鎖です。これ...

膠芽腫 (GBM) は、成人、陰気な生存期間中央値は 12-15 ヶ月1,2,3,4、5の最も一般的な脳腫瘍の症例です。2005 現在の放射線と併用し、補助のテモゾロマイド化学療法に続いて最大の外科的切除の臨床標準の頃6,7を採用したので生存率は、大幅に改善しません。この治療法は、患者の症状の一時的な救済を提供しながら治療の標準に必ず結果再発浸潤癌病巣切除を回避するし、血液脳関門 (BBB) によって全身療法から保護されます。この積極的な衰弱させる病気に対するトラクションを得るためには、BBB を回避しながら腫瘍浸潤巣を対象とする戦略が急務します。
ヒト間葉系幹細胞 (MSCs) は、そのネイティブの腫瘍親和性8,9による糸球体基底膜の配送車薬として約束を示します。MSCs の受容体を持っているし、間質細胞由来因子 1 α など、腫瘍が分泌する可溶性因子への移行 (自衛隊 1 α)、マトリックス マトリックスメタロプロテアーゼ 1 (MMP 1)、および単球走化性因子タンパク質-1 (MCP-1) 他の人の間で10,11,12,13。 工学 MSCs 表現および細胞毒性薬を分泌する腫瘍ホーミング薬物送達車として活かされることができます。設計された MSCs は、腫瘍浸潤巣に向かって移動、治療用タンパク質を提供します。このアプローチは、さまざまな臨床糸球体基底膜モデル9,14の可能性を実証しています。しかし、これらのモデルの大半はこのコンポーネントの臨床関連性にもかかわらず外科的切除を含めないでください。切除の新しいモデルを用いた研究を新たな外科的摘出が摘出腔15に直接注入される幹細胞の永続性を減少させることを明らかにしました。実行可能性の損失結果減少効果、腫瘍浸潤病巣に線量そして薬剤の持続期間の減少により可能性が配信されました。
幹細胞と薬剤投与を増やす、注入前に足場に MSCs をシードできます。このプロトコルでは生体親和性と吸収性のエレクトロスピニング ナノ poly(lactic acid))、MSCs PLA 折り曲げとインプラント治療のカバレッジを最大化、最小化時に切除キャビティの形状に適合のための足場として使用されます、。MSCs の距離は、腫瘍細胞に到達する旅行する必要があります。MSCs は、注入中に足場上に残ります、注入16,17後腫瘍細胞へ足場を移行します。MSCs と彼らを運ぶ、細胞傷害性薬剤は腫瘍巣に蓄積されます。腫瘍への薬剤の配達には、MSC 生存率および足場の注入による支援の永続化が必要です。
この手順でレンチウイルスベクターを使用 (体外追跡) 蛍光と発光 (生体内での追跡) を安定に発現を誘導するがんと幹細胞ラインのマーカー。ヒト糸球体基底膜ライン U87 は mCherry とホタルのルシフェラーゼ (U87 母子-フロリダ州) と GFP および renilla ルシフェラーゼ (MSC GFP Rluc) と非治療の MSCs に感染しています。MSCs の治療のバリエーションは、tnf α 関連アポトーシス誘導リガンド (TRAIL-MSC) を表現します。近くの癌の死の受容体にバインド トレイル、構成的分泌蛋白質、細胞およびカスパーゼ - アポトーシス18を開始。
ここでは、前臨床画像誘導 GBM の外科的切除と MSC シード足場の注入のためのプロトコルを提供します。簡単に言えば、ヌードマウスに開頭手術 3 日後に原発腫瘍を確立する U87 mCh フロリダの定位の同所性注入が続きますが与えられています。明らかな移植腫瘍は、約 1 週間の期間が増加します。PLA の足場は、切除手術する前に MSCs 48 h にシードされます。蛍光の指導の下で腫瘍は切除し、MSC ロード足場が切除キャビティ内に注入されます。腫瘍の負担とマウスの生存率は、生物発光イメージング (結合) の手術後、追跡されます。これらのプロシージャのタイムラインを (図 1) を以下に示します。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57452/57452fig1.jpg"> 図 1: プロシージャのタイムライン。マウスは、当初頭蓋ウィンドウ (0 日) を受け取る。腫瘍は、3 日間の回復期間後 (日 3) を注入し、約 1 週間の成長します。足場は、腫瘍の切除と移植の手順 (10 日) の前に 2 日間 MSCs (8 日) にシードされます。腫瘍の進行と治療効果は、術後その後イメージング (日 10 +) を介して評価されます。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57452/57452fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

<table><tbody><tr><td>マウス用脳定位固定装置のためだけ</td><td>に Stoelting</td><td>51730</td><td>手術中に頭部の位置を安定させる</td></tr><tr><td>蛍光解剖実体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>M165 FC&nbsp;</td><td>切除中の腫瘍のリアルタイムイメージングが可能</td></tr><tr><td>電動統合型脳定位固定装置(ISI)システム</td><td>Stoelting</td><td>53315</td><td>正確な腫瘍細胞注入量と注入速度が可能</td></tr><tr><td>Vetbond組織接着剤</td><td>3M</td><td>1469</td><td>皮膚の傷を閉じるためのSugical接着剤</td></tr><tr><td>人工涙液</td><td>Akorn</td><td>664268</td><td>手術中の目の乾燥を防ぐ</td></tr><tr><td>Webcol アルコール製剤</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>切開部位の滅菌</td></tr><tr><td>ベタジン手術用スクラブ</td><td>Purdue Fredick Company</td><td>6761815117</td><td>切開部位の滅菌</td></tr><tr><td>コットンチップアプリケーター</td><td>フィッシャーブランド</td><td>23-400-115</td><td>手術ツール</td></tr><tr><td>E-vac吸引システム</td><td>Argos</td><td>EV310</td><td>腫瘍の切除に使用される真空ポンプ</td></tr><tr><td>フィブリノーゲンとトロンビンをそのまま受け取ったものから抽出 TISSEEL</td><td>Baxter</td><td></td> 足場<td>を一時的に固定するため切除腔内</td></tr><tr><td>IVIS Kinetic in vivo光学イメージングシステム</td><td>キャリパーライフサイエンス</td><td></td><td>生物発光イメージャー</td></tr><tr><td>D-ルシフェリンカリウム塩</td><td>PerkinElmer</td><td>122799</td><td>In vivoイメージング剤</td></tr></tbody></table>

膠芽腫の治療の幹細胞シード足場の頭蓋内注入画像誘導切除

Image-Guided Resection of Glioblastoma and Intracranial Implantation of Therapeutic Stem Cell-seeded Scaffolds

膠芽腫 (GBM)、最も一般的で積極的な脳腫瘍の症例は 12-15 ヶ月の余命を運ぶ。余命の短いは、侵襲性の腫瘍巣を除去するために続いて放射線と化学療法、外科的切除から成る現在の治療のできない一部予定です。これらの病巣の治療は、抗腫瘍ヒト間葉系幹細胞 (MSCs) によって改善されること。MSCs では、強力な腫瘍親和性を展示し、腫瘍細胞を殺す表現治療タンパク質を設計することができます。前臨床モデルの進歩を示すその切除早期 MSC 喪失を誘導し、治療効果を低減します。MSC 治療の有効性は、生分解性 poly(lactic acid)) 足場に播種 MSCs によって改善できます。PLA 足場に外科的切除空洞に MSC 配信は、セルの保持、保存、および腫瘍の殺害を復元します。糸球体基底膜の PLA の MSC シード注入の効果を研究、正確な前臨床モデルが必要です。ここで注入後 MSC シード足場免疫欠損マウスにおける糸球体基底膜の画像ガイド下腫瘍切除のため前臨床外科プロトコルを提供します。MSCs は、構成を表現し、蛍光の追跡を許可する緑色蛍光タンパク質 (GFP) と同様、治療 tnf α 関連アポトーシス誘導リガンド (TRAIL) を分泌するレンチ ウイルスの構造に設計されています。同様に、U87 腫瘍細胞は、エクスプレス mCherry とホタルのルシフェラーゼ、デュアル蛍光/発光の追跡を提供する設計されています。現在、治療の幹細胞を介した配信を調査に使用、このプロトコルは糸球体基底膜の他の介入に外科的切除の影響を調査する変更でした。

U87 腫瘍細胞は、高速 mCherry しホタルのルシフェラーゼ (U87 母子-フロリダ州)、注入前と画像誘導切除および発光 (図 2 a・ C) を追跡できるように設計されました。幹細胞同様に診断 GFP-Rluc (MSC GFP) または治療の GFP 試み (MSC 歩道) で設計されて, 添付ファイル (図 2 Dの-F) の増殖を確認する PLA 足場上.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57452/57452fig2.jpg"> 図 2: 蛍光がん細胞と MSCs の代表的なイメージは、PLA でシードします。...

腫瘍を求めて治療間葉系幹細胞 (MSCs) 侵襲神経膠芽腫のための処置として約束を示します。最適な移植には、足場に腫瘍切除キャビティへの MSCs の配信が含まれます。ここでは、神経膠芽腫の MSC 治療を研究する臨床技術を含んで提供される: 画像ガイド下腫瘍切除;MSC シード足場; の注入術後療法を追跡します。

Glioblastoma (GBM), the most common and aggressive primary brain cancer, carries a life expectancy of 12-15 months. The short life expectancy is due in ...

この手順の全体的な目標は、マウスの脳腫瘍を外科的に切除し、腫瘍ホーミング治療幹細胞を播種した足場を術後切除腔に移植することです。この方法は、外科的切除が手術腔への細胞移植にどのように影響するか、新しい治療薬が術後脳腫瘍にどの程度効果的であるか、スキャフォールドベースの送達システムが治療結果にどのように影響するかなど、細胞治療および神経腫瘍学の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、脳腫瘍の介入を、ヒト患者の臨床標準治療に厳密に模倣する方法でマウスで研究できることです。この方法は、足場上で行われる幹細胞治療に関する洞察を得ることができますが、ナノ粒子、低分子、腫瘍溶解性ウイルス、その他の新しい治療法など、他の介入にも適用できます。マウスに移植する48時間前に、まずPLAの足場を約2×2mmの切除空洞サイズの断片に切断して、足場を作製します。足場を70%エタノールに15分間浸して滅菌します。15分後、足場をPBSに浸します。次に、10%のウシ胎児血清と1%のペニシリン-ストレプトマイシンを含むダルベッコの改変イーグル培地に足場を置き、播種用の細胞を準備します。細胞を調製するには、まず0.05%トリプシンを使用して培養MSCをリフトします。摂氏37度で5分間インキュベートします。インキュベーション後、細胞が浮き上がったことを確認します。次に、フラスコにDMEMを追加してトリプシンを不活性化します。次に、フラスコの内容物を15ミリリットルの遠心分離管に移します。血球計算盤を使用して細胞をカウントします。次に、各足場の5回10〜5番目のMSCにペレットを100回gで5分間遠心分離します。遠心分離後、上清を吸引し、MSCを5番目の細胞の10倍あたり5マイクロリットルのDMEMに再懸濁します。次に、鉗子によるDMEM浸漬から足場を取り外し、6ウェルプレートの蓋に置きます。足場を持ち上げて蓋から外し、余分なDMEMの液滴を残します。足場を再び蓋に戻し、新しい乾燥した場所に置きます。3〜5回繰り返します。次に、部分的に乾燥した足場を新しい6ウェルプレートに入れて播種します。部分的に乾燥した足場は、最適な細胞播種結果を提供します。足場が濡れすぎていると、細胞が足場から滑り落ちて下のプレートに付着します。足場が乾燥しすぎると、液滴が足場全体に広がらず、初期細胞の分布が悪くなります。ピペットを使用して、MSCのチューブを穏やかに混合し、一部の細胞が底に沈殿した可能性があるため、懸濁液を均質化します。2.5マイクロリットルの新たに混合したMSC懸濁液を足場に直接ゆっくりとピペットで移し、足場の上部に小さな液滴を作ります。各ウェルのエッジに300マイクロリットルのDMEMを添加して、細胞滴の急速な蒸発を防ぎます。摂氏37度で30分間インキュベートし、細胞を足

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その後の3Dと頭蓋内注入インビボでの</emマウス神経膠腫の>生物発光イメージング

私たちは、ヌードマウスとその後シリアルの脳に人間の多形性膠芽腫細胞の正確な、定位注入のための統合方法を説​​明...

定位頭蓋内注入と<emインビボ&gt;</em多形性膠芽腫のマウスモデル系における腫瘍異種移植片の&gt;生物発光イメージング

ポリッシュと補強薄頭蓋骨（ポート）頭蓋窓と神経膠芽腫（GBM）の細胞注入を組み合わせることによって、我々は、神経膠腫の開始と縦ライブマウスの脳内に注入GBM細胞からの成長を観察することができます。...

イメージンググリオーマ開始<emインビボで&gt;</em&gt;ポリッシュと補強シン頭蓋骨頭蓋窓スルー

このビデオでは、間葉系幹細胞(MSC)を生分解性のポリ(乳酸)(PLA)足場に播種する技術について説明しています。調製された足場は、脳の外科的切除腔に埋め込むことができ、そこから腫瘍病巣に向かって移動する可能性があります。さらに、これらの細胞は、がん細胞のアポトーシスを刺激する治療用タンパク質を発現するように操作することができます。...

MSC播種足場調製:マウスモデルへの外科的移植のための間葉系幹細胞播種足場を調製する技術

このビデオでは、遺伝子操作された間葉系幹細胞または腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンドまたはTRAILを発現する遺伝子操作間葉系幹細胞またはMSCを播種したバイオスキャフォールドの画像誘導腫瘍切除および移植の外科的処置を紹介しています。これらの治療用MSCは、脳腫瘍の治療に可能性を秘めています。...

マウスモデルにおける蛍光ガイド下腫瘍切除とMSCシード足場移植:マウスモデルにおける脳腫瘍切除腔内治療用間葉系幹細胞送達の外科的手技

我々は、腫瘍の成長の間の遊びで、通常の生物物理学的な制約を再現生体2光子顕微鏡用マウスにおける皮質同所神経膠芽腫モデルを確立している。腫瘍の上に頭蓋骨を交換慢性ガラス窓は、2光子顕微鏡による経時的な腫瘍進行のフォローアップを可能にします。...

同所神経膠芽腫モデルマウスは、脳実質細胞の物理的制約を維持し、生体内二光子顕微鏡に適し

幹細胞は、その固有の腫瘍指向性のために脳腫瘍を治療するための有望な治療キャリアである。非侵襲性の鼻腔内幹細胞送達は、血液脳関門を迂回し、臨床翻訳の可能性を示す。この記事では、神経膠腫のマウスモデルにおける鼻腔内幹細胞送達の基本原理を要約する。...

マウスモデルにおける膠芽細胞腫に対する治療用幹細胞の鼻腔内送達

この研究では、3D脳腫瘍モデル、すなわち in vitro 培養、in ovo モデル、 およびin vivo...

膠芽腫のパルス電界治療のための柔軟な有機電子デバイス

マウスモデルにおける膠芽腫への蛍光標識酸化鉄ナノ粒子の腫瘍送達の2光子顕微鏡法の新しいアプローチを紹介します。...

マウスモデルにおける神経膠芽腫の2光子生体内顕微鏡

生体内では、膠芽腫(GBM)など多くの中枢神経系疾患の基盤となる細胞間コミュニケーションは、測定や特徴付けが非常に困難であることで知られています。ここでは、GBMの縦断動物モデルで間質性液体成分を採取するために用いられる脳開放流微量灌流(cOFM)の手順について説明します。...

動物モデルにおける間質液の縦断採取における脳開流微量灌流の利用

このプロトコルの目的は、研究者に頭蓋内移植のための再現性の高い技術を提供することです。...

マウスにおける膠芽腫患者由来異種移植細胞株の立体定位頭蓋内移植

学ぶマウスの脳腫瘍切除と治療用間葉系幹細胞シード足場の頭蓋内移植法。神経腫瘍学と細胞治療の分野で、術後細胞移植や治療効果を評価する臨床模倣モデルとして有用です。

膠芽腫の治療の幹細胞シード足場の頭蓋内注入画像誘導切除

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