2018年8月22日
アガロース ベース組織模倣光ファントムが作られて 方法を示すここでは、その光学特性は、積分球を用いた従来の光学系を使用して決定されます。
このミサイルは、拡散反射鏡分光法に基づく光学ミサイルの開発など、生物医学光学分野の重要な問題に対処するのに役立ちます。この技術の主な利点は、拡散反射鏡スペクターが生きているのを助け、近赤外線には見えない生体組織の脳領域を容易に入手できる材料を使用して表現できることです。単層ゲルファントムの作成には、金型を使用する必要があります。
表皮ファントム型は、厚さ1mmのアクリル板をU字型にカットしたものです。最初のプレートを覆うためのミリメートルの厚さのアクリル板サイズもあります。このプレートは金型の片側を形成します。
2枚目の厚さ2mmのプレートが金型の反対側を形成します。コンポーネントを所定の位置に配置した状態で、5つのクリップを使用して固定します。同様に、厚さ5mmのU字型アクリル板を2〜2mmの厚さのプレートの間に挟んで、真皮ファントム型を構築します。
これらのピースをクリップで固定します。基材の製造には、生理食塩水とアガロース粉末が必要です。鍋に500ミリリットルの生理食塩水を入れます。
次に、5グラムのアガロースをゆっくりと加えながらかき混ぜます。温度計を追加し、ポットを1000ワットの設定で5分間ホットプレートに置きます。沸騰したら弱火に3分ほど火を移します。
混合物が摂氏約70度の温度に冷えるのを待ってから、容器に注ぎます。60°Cの恒温槽に30分間入れてください。表皮のメラニンは、表皮ファントムのコーヒー溶液によって模倣されます。
これは、ガラス瓶に4ミリリットルの淹れたてのコーヒーと16ミリリットルの生理食塩水を混ぜて作成します。次に、透明なプラスチックカップに5ミリリットルの脂質エマルジョンを入れ、10ミリリットルのコーヒー溶液を加えます。35ミリリットルの基材を加えながら混合物を攪拌します。
表皮ファントム型を準備し、混合物をシリンジに吸引します。泡の形成を避けながら、混合物をゆっくりと型に注入します。この充填された型は、ゲルを作成するために冷却する準備ができています。
摂氏5度で20分間冷却します。冷却が終わったら、クリップを型から取り外します。アクリル片の1つを外側にスライドさせて取り外します。
厚さ1mmの固化ゲルファントムを型から取り出します。外科用メスを使用して、ファントムを希望のサイズに切断します。次に、ゲルファントムを2つのスライドガラスの間に置き、保持します。
透明なプラスチックカップに5ミリリットルの脂質エマルジョンを入れます。酸素化された血液の場合は、全馬の血液を追加します。その後、基材を加えながら攪拌します。
真皮ファントム型を準備し、混合物を注射器に吸引します。混合物をゆっくりと型に注入し、気泡が形成されないようにします。これが、充填されて冷却の準備ができた後の型です。
型を5°Cで20分間冷却します。冷却後に型を取り出し、クリップと外側のアクリル片を1枚取り外します。露出した厚さ5mmの固化ゲルファントムを型から取り出します。
外科用メスを使用して、希望のサイズにカットします。ファントムを2つのスライドガラスの間に置き、保持します。脱酸素ファントムの場合は、酸素化された血液ファントムから始めます。
注射器を使用してジチオン酸ナトリウム溶液をファントムに滴下し、血液を脱酸素化します。ファントムを2つのスライドガラスの間に置き、保持して乾燥を防ぎます。表皮と真皮ファントムを取得します。
0.1ミリリットルの生理食塩水を真皮ファントムに滴下して、光学結合を助けます。次に、表皮ファントムを真皮ファントムと生理食塩水の上に置きます。表面をなでて、層間の気泡を押し出します。
2つのスライドガラスの間に2層のファントムを構築して、乾燥を防ぎます。反射率スペクトルを測定するように装置をセットアップします。測定の鍵となるのは、片側にサンプルホルダーを備えた積分球です。
反対側にはライトトラップと入射光の入口ポートがあります。分光器は、球体の検出器ポートから光ファイバーで光を収集します。この回路図は、セットアップの概要を示しています。
未使用のポートは、光が球体に入るのを防ぐために差し込まれていることに注意してください。光源は150ワットのハロゲンランプで、アクロマティックレンズを使用したライトガイドでサンプルに光を集中させます。ハロゲンランプを点灯します。
温まったら、積分球のサンプルポートに移動します。そこで、サンプルホルダーに標準の白色ディフューザーを置き、測定の準備をします。分光器の積分時間を調整し、参照スペクトルを保存します。
ファントムの1つをサンプルホルダーに持っていきます。2つのスライドガラスに挟まれたままのファントムをサンプルポートに置き、別の測定の準備をします。送信されたスペクトルを測定し、データをファイルに保存します。
透過率スペクトルを測定するには、この回路図と一致するように設定を変更します。光は、サンプル ポートのサンプルを介して積分球に入ることに注意してください。他のポートは差し込まれています。
これは、透過率スペクトルを測定する準備ができている積分球です。測定には、2枚のスライドガラスの間に挟まれたファントムをサンプルホルダーに置きます。測定を行い、データを保存します。
これらのスペクトルは、真皮層に酸素化された血液を持つ2層構造のファントムからのもので、濃度は3%で、スペクトルは表皮層に2つの異なるコーヒー溶液濃度を持つサンプル用です。拡散反射率は、メラニンを模倣するコーヒー溶液の増加とともに減少します。これは、短波長で特に顕著です。
これは、表皮層のコーヒー溶液濃度が一定で、真皮層の血液濃度が変化するスペクトルです。ヘモグロビンの強い光吸収は、500〜600ナノメートルの範囲のスペクトルの違いを説明しています。拡散反射スペクトルは、血液の酸素化状態によって異なります。
これらのスペクトルのそれぞれについて、表皮層のコーヒー溶液濃度は7%に固定され、真皮層の血液濃度は3%に固定されています収集されたデータは、逆モンテカルロシミュレーションを介してファントムの光学特性を推定するのに役立ちます。これらは、計算された平均減少散乱係数スペクトルと表皮層と真皮層の吸収係数の例です。このテクニックは、一度マスターすれば、適切にプログラムされていれば6時間で習得できます。
ファントムを製作する際には、基材を摂氏60度の恒温槽で維持することを忘れないようにすることが重要です。この手順を行うことで、3層または4層のファントムを構築して、より複雑な回路図を持つ生体組織の以前の反射スペクトルの表現などの他のトピックを探求することができます。その開発後、この技術は、生物医学光学の分野の研究者が光学ミサイルとシステムの新しい方法を委任する道を開きました。
このビデオを見れば、生体組織内の光輸送を模倣する光学ファントムを作成する方法や、その光学特性を特徴づける方法についてよく理解できるはずです。ジチオナイトナトリウムでの作業は危険であり、酸素化された血液を含む皮膚ファントムを作成する際には、ゴーグル、手袋、フェイスマスクなどの適切な機器を着用する必要があることを忘れないでください。
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本研究では、アガロースベースの組織模倣光学ファントムの作製と、積分球を備えた標準的な光学システムを用いたその光学特性の決定について実証します。
本プロトコルでは、アガロースとアクリル製モールドを用いて組織模倣光学ファントムを作製し、初期段階のバイオメディカル光学研究において光と組織の相互作用を評価するための再現性のあるプラットフォームを提供します。メラニンおよびヘモグロビン濃度を調整可能な表皮層および真皮層をシミュレートすることで、コストの高いin vivo研究に先立ち、光学センサおよびイメージング技術のメカニズム的なリスク低減を可能にします。この手法により、制御された生理学的に関連のある条件下で拡散反射分光システムの系統的な検証が可能となり、前臨床開発における予測の信頼性が向上します。
本手法は、リード化合物の同定および前臨床検証段階に先立ち、プローブ設計に不可欠な初期の光学特性評価を可能にすることで、創薬研究の連続的なプロセスに組み込まれています。