糖尿病マウスの慢性創傷を作成するためのプロトコル

このマウスモデルは、創傷の慢性の医療分野における質問に答えるのに役立ちます。このモデルの主な利点は、マウスの慢性創傷がヒトの慢性創傷の多くの側面を模倣していることである。まず、きれいな表面にマウスを置き、尾のベースをつまんで所定の位置に保持します。

その後、毛髪のバリカンを準備し、マウスが突然動いた場合はすぐにそれらを引き離す準備ができています。首から尾の周りを含む尾まで背中全体を剃ります。最も効率的なカットのために、髪の成長の方向に対して軽く刃を実行します。

これは傷ついたり切ったりする可能性がありますので、皮膚の奥深くにバリカンを押し込みないでください。次に、脱毛ローションの塗布用に皮膚を準備する。化学的な火傷を防ぐために水浸しペーパータオルで皮膚を湿らせます。

カットした髪を皮膚に濡らすのに十分な圧力で軽く押します。その後、皮膚が濡れている間に、脱毛ローションの小さな人形を剃った領域に15〜20秒間こすります。塗布後、20~45秒間、ローションを肌と反応させます。

ローションを洗い流す前に、様々な場所でローションを軽く拭き取り、反応を確認します。肌がピンクで毛のない場合は、反応が完了します。次に、マウスを握って洗い流します。

親指で非支配的な手を使用して、手のひらに対して尾のベースを押し下げ、他の指を閉じます。その後、マウスの鼻を上にして水から離して、水を動物の背中の上に流します。その後、すぐに、しかし穏やかに、ローションを洗い流すためにもう一方の手でマウスの後ろをこすります。

脱毛クリームをすべて取り除いた後、ペーパータオルで肌を乾かします。顔の近くや耳、尾、またはどこにもローションを塗らないようにすることが重要です。このような場合は、すぐに濡れたタオルでローションを拭き取り、これらの領域への損傷を防ぐためにマウスの上に水を実行します。

クリームを使用した後に暗い斑点が気づいた場合は、それらの領域にクリームを再適用します。皮膚の暗い斑点は、実験の期間中、より速く髪を成長させます。だから、必要に応じて3〜5日ごとに短い髪をクリップします。

傷の部位の上にない1つまたは2つのパッチは許容されますが、マウスの背面に暗い斑点が多い場合は、慢性創傷モデルに使用しないでください。髪を取り除いた後、皮膚が脱毛ローションから敏感になりすぎるので、傷つく前に少なくとも1日は一人でマウスを入れておきなさい。手術の30分前に、無菌PBSで腹腔内に120マイクロリットルのブプレノルフィンをマウスに注入する。

この手順のすべてのボリュームは、60グラムのマウスを想定しています。手術の20分前に、無菌PBSで480マイクロリットルのATZ腹腔内にマウスを注入する。腹部の両側のボリュームを分割します。

ATZを投与した後、手術が始まるまで、温かい加熱パッドの上に小さなプラスチック容器にマウスを置きます。小さな容器にペーパータオルをかぶり、熱を封じ込めます。マウスは暖かくなるにつれて落ち着くはずです。

麻酔状態を確認した後、傷を続ける。創傷手順を開始するには、70%エタノールでケムワイプをスプレーしてマウスの背面を拭き取り、創傷部位と皮膚表面を清掃します。過度に拭かないか、皮膚に存在する細菌を殺す危険性があります。

慢性創傷モデルの成功は非無菌状態に依存する。これらのマウスは生殖を含まないものではなく、従来のビバリウムに収容されている。皮膚に存在する細菌微生物叢は、抗酸化酵素の阻害剤による治療時の慢性創傷の開始と開発に不可欠である。

次に、傷の場所を考えてみましょう。理想的には、マウスの後側を中心にして皮膚の暗い斑点から離して使用します。今度は30〜45秒でドレッシング処置に傷を行う。

まず、7ミリメートルの皮膚生検パンチを目的の創傷部位に軽く押し付け、パンチの印象を残すのに十分な深さの周りにパンチをねじります。その後、ピンセットでパンチの中心を引き上げ、外科用ハサミで輪郭に沿って切断することによって、輪郭の皮膚を切除します。完成したら、透明なフィルムドレッシングの半分で傷をしっかりと覆います。

創傷の10分以内に、無菌PBSにMSAの60マイクロリットルのアリコートを適用し、MSAを創傷に局所的に沈着させる。その後、手術の6時間後に、ブプレノルフィンの別の行を投与する。余分な用量は、必要に応じて与えられてもよいです.

慢性創傷開始は6時間以内に起こり、創傷のマージンは酸化ストレスから目に見えて変化する。慢性創傷は開いたままの創傷であり、最初の創傷と比較して拡大し、バイオフィルムを含む。20日後、創傷は完全な慢性である。

創傷部位を支配するバイオフィルム形成細菌には、緑膿菌、エンテロバクター・クロアカエ、および様々なブドウ球菌およびコリネバクテリウム種が含まれる。これらの細菌は、人間の慢性創傷にも見られる。このビデオを見た後、あなたはマウスに慢性的な創傷を作成する方法をよく理解している必要があります。

これらの慢性創傷を確立したら、それらを使用して、創傷の慢性の開始に関与する細胞分子メカニズムの多くを調査することができます。