Name: 回転運動の定量化システム (リクエスト) を用いたキイロショウジョウバエの運動レベルの測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 53 s
Description: 学ぼう、回転運動の定量化システム（REQS）を用いたDrosophila melanogasterの運動レベル測定法。リアルタイムで運動誘導と活動計測を同時に行い、加齢や遺伝的要因による運動応答の違いを解析する実験プロトコルです。

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仕事は、賞の数 P30DK056336 から、国立研究所の糖尿病と消化器系と腎臓病 NCR 栄養と肥満研究所アラバマ大学バーミンガムからパイロットをによって支えられました。

リクエストがショウジョウバエのアクティビティ モニター ユニットで構成されています (ソースについては、資料の表をご覧下さい) モーター ユニット (図 1) によって制御される、回転するアームにマウントされています。利用状況モニターは、アッセイ チューブのミドルを解剖のレーザ光線の配列が中断される所定の時間スパンで頻度を指定します。詳細な図面と詳細な特性評価、私たちの前の出版物9を参照してください。当社のシステムは、LAM25H ユニットを使用している間、リクエストは同様に他のショウジョウバエのアクティビティ モニター ユニットに合わせて変更できます。
1、リクエストのセットアップのテスト
<ol><li>ロード テストは、CO2や、処理のために、空のチューブにそれらを移動チューブをキャップその他の選択した方法で動物を麻酔によるガラス試料管に飛ぶ。</li>
	<li>頂いたガラス試料管をアクティビティ モニター ユニットのスロットに挿入します。チューブのゴム O リング (17-18 ゲージ) を使用してセキュリティで保護されたおよび/またはチューブを確保するユニットの両側に輪ゴムを回転中に移動しないでください。<ol>
<li>試料管を介して 1 つの o リングをスリップし、チューブの中間点近くに o リングを配置します。試料管を正面からアクティビティ モニターのスロットに挿入し、中央に配置。</li>
		<li>必要に応じて、o リングを移動し、試料管を中心にすると、一度は、o リングはできるだけ活動モニター ユニットの近くに下落したことを確認します。ガラス管を再びできるだけ活動モニター ユニットの近くに o リングを移動、後ろから 2 つ目の o リングを入れることによって場所の試料管を修正します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ユニットの前面にある電源スイッチを反転して、リクエストの回転を開始します。(4 rpm (1 分あたり回転) この例では) の所望の速度に、ユニットの前面のダイヤルで回転速度を調整します。 注: この例では回転の速度は、以前に発行された研究7を一致するように選ばれました。異なる回転速度になります異なる動物の活動レベル、新しい研究を開始するとき、特定の実験の設定 (遺伝子型、練習試合等の長さ) の回転速度の最適化が必要かもしれません。 注: 回転中にリクエスト単位の底に沿ってドラッグしないように、チューブが適切に配置することが重要です。</li>
	<li>DAMSystem308 ソフトウェアを開いて、接続光のいくつかの回転の緑色を保持してショウジョウバエのアクティビティ モニター装置に付属データ収集システムへの接続をテストします。ソフトウェアが記録データ テキスト ファイル (複数のモニターを使用している場合は、ユニット番号をされている) X"monitorX"にすぐに開始開始時に。「詳細設定」タブで調整できる周波数を記録通常 5 分間隔で記録されます。</li>
	<li>データ接続が正常に機能していることを確認する DAMSystem308 ソフトウェアによって生成されたテキスト ファイルを調査します。切り欠き (代表結果および表 2を参照)、リクエストですべてのポジションを 0 の活動が記録されている時点で接続に問題があります。切り欠きが発生した場合は、緩いまたはツイスト回転中にこの接続になることが回転の電話ジャックにつながるデータ接続を調整します。我々 は、この問題を回避に役立つテープとの接続を安定させることを見つけます。</li>
</ol>2. 動物の準備
注: すべての動物は発生し、糖蜜/コーンミール メディア10インキュベーター (25 ° C、湿度 60-70%、12 時間の明暗サイクル) で標準的な条件下でテストされました。
<ol><li>二週間前の計画実験がセットアップ バイアルから実験のハエを収集する動物密度の制御我々 は通常、男性 7 名、女性 10 名でバイアルを設定します。単一バイアルからの健全な株式を約 15 処女男女 15 名が 4 日間の期間に収集できます。試金; に必要な動物の数に基づいてセットアップ バイアル数を調整します。当研究室で典型的な試金には 10 処女男女の遺伝子型 (100 男女 100 名) につき 10 セットが含まれています。 注: 非処女のハエは、特定の実験の質問に応じて使用できます。長期的な非処女動物実験を実施、クロール幼虫は正確なアクティビティの監視を妨げる可能性があります。</li>
	<li>バイアルを設定した後 1 週間親のハエを削除します。</li>
	<li>バイアルを設定した後 10 日目に始まり、バイアルから処女ハエを収集し、セックスで区切られた保存します。</li>
	<li>実験と、この例では 3 日間必要に応じて年齢のため十分な動物を収集します。 注: 我々 は通常処理のための CO2を持つ動物を麻酔します。CO2は、治療後長期間の動物の活動レベルに影響を与える知られています (たとえば、バーソロミューら201511を参照)。CO2効果は、計画の下流のアッセイまたは解析と干渉する場合は、氷 anesthetization など異なる麻酔法を使用します。</li>
</ol>3. データ収集、リクエストで
<ol><li>CO2または別の麻酔方法で運動の定量化研究に使用される動物を麻酔します。必要に応じてグループに分けるし、アクティビティ モニターの空のガラス管に動物のグループを読み込むこの例では、同じ年齢の 10 の動物、ガラス管、各動物型 (セックス/遺伝子型) 10 複製し 1 に読み込まれました。注意各チューブにどの動物のタイプをロードすることを確認します。 注: 長い実験のため食品は検体チューブに含めることができます。この場合、食品が安全で、回転中に外れとなっていないが不可欠です。</li>
	<li>要件単位にガラス チューブはアッセイを読み込み、ゴム O リングで固定します。複数セックス/遺伝子型を操作する場合ランダム ブロックの設計または、リクエスト内の動物の位置のランダム化を使用して任意の潜在的な位置の影響がなくなります。ランダム化は、たとえば web ベース乱数ジェネレーター (例えばhttps://www.randomizer.org/) または、スプレッドシートの各バイアル ランダムな番号を割り当てると、ランダムな番号に基づいてバイアルを注文によって実現できます。</li>
	<li>一定の温度・湿度・光を確保するためインキュベーターに、リクエストを配置条件。データと電源のケーブルが正しく接続されていることを確認します。</li>
	<li>麻酔から回復して 1 h の新しい環境に順応する動物を許可します。</li>
	<li>希望の速度でリクエストの回転を開始することによって実験を開始します。 注: 別のオプションまず回転刺激に対する応答の活動のレベルを記録することによって、回転の開始前に動物からベースライン アクティビティ データを収集することです。</li>
	<li>(単にソフトウェア開始データ コレクションを開く) DAMsystem308 ソフトウェアを開いて、データの収集を開始します。データは、(ここでは 5 分) に指定された間隔でテキスト ファイルに書き込まれる必要に応じて、「プリファレンス」タブに間隔の設定を変更 (手順 1.4 参照).</li>
	<li>コンピューターにデータを正常に送信するためには、1 つまたは 2 つの時間間隔が経過して、ファイルにデータが書き込まれていることを確認した後、DAMsystem308 ソフトウェアによって生成されたテキスト ファイルを開きます。閉じて、再度任意の追加の時間の点からのデータを表示するこのファイルを開きます。時間の必要な量のデータを収集します。この例では、2 h。 注: 動物、あらゆる障害に対し非常に敏感と活動の増加で応答可能性があります、分析期間中にインキュベーターを開かないでください。</li>
	<li>運動アッセイの終わりには、DAMsystem308 ソフトウェアを終了してデータの収集を終了し、リクエストをオフにします。ガラス アッセイ チューブから動物を外し、チューブをきれい。繰り返しさまざまな年齢層での対策が必要な場合、動物は食品容器に戻すことができます。 注: 練習の政体の間に死亡者が発生した場合に記録されなければならないと死んだハエの存在することができますアクティビティの数に影響を与えます。DGRP2 フライ ライン12,13での経験、4 回転でのエクササイズ 2 h は任意の死亡で起因しなかったが、弱い株が異なる応答可能性があります。</li>
</ol>4. データ解析
<ol><li>ラベル「モニター 1」DAMSystem308 ソフトウェアによって生成された .txt ファイルを開きます。</li>
	<li>(不在時点、等; データ集録中に発生した可能性があります問題のデータ ファイルを確認します。表 1)。必要に応じて、先頭と末尾の記録のデータ ポイントを削除することによってファイルを検閲します。</li>
	<li>収集したデータを分析 (例えばR)、好みの統計ソフトウェアを使用しています。記述統計を生成し、データが正規分布のとき分散分析 (ANOVA) セックスなど遺伝子の効果を調査するを実行します。データが正規分布していない場合は、グループを比較するクラスカル-ウォリス テストなどの非パラメトリック法を使用します。必要な特定の分析は、特定の科学的な質問と実験的なデザインに依存します。</li>
</ol>

<ol><li>Rieder, L. E., Larschan, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wisdom+from+the+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Wisdom from the fly.</a> Trends Genet. 30 (11), 479-481 (2014).</li>
<li>Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+tools+and+assays+for+the+study+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Drosophila tools and assays for the study of human diseases.</a> Dis Model Mech. 9 (3), 235-244 (2016).</li>
<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+fly%3A+A+primer+on+the+Drosophila+Model+System%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the fly: A primer on the Drosophila Model System.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li>
<li>Piazza, N., Gosangi, B., Devilla, S., Arking, R., Wessells, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise-training+in+young+Drosophila+melanogaster+reduces+age-related+decline+in+mobility+and+cardiac+performance%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Exercise-training in young Drosophila melanogaster reduces age-related decline in mobility and cardiac performance.</a> PLoS One. 4 (6), e5886(2009).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Tinkerhess, M. J., Ginzberg, S., Piazza, N., Wessells, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endurance+training+protocol+and+longitudinal+performance+assays+for+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Endurance training protocol and longitudinal performance assays for Drosophila melanogaster.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Mendez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TreadWheel%3A+A+novel+apparatus+to+measure+genetic+variation+in+response+to+gently+induced+exercise+for+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The TreadWheel: A novel apparatus to measure genetic variation in response to gently induced exercise for Drosophila.</a> PLoS One. 11 (10), e0164706(2016).</li>
<li>Katzenberger, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+of+closed+head+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model of closed head traumatic brain injury.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (44), E4152-E4159 (2013).</li>
<li>Watanabe, L. P., Riddle, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+Rotating+Exercise+Quantification+System+%28REQS%29%2C+a+novel+Drosophila+exercise+quantification+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of the Rotating Exercise Quantification System (REQS), a novel Drosophila exercise quantification apparatus.</a> PLoS One. 12 (10), e0185090(2017).</li>
<li>Reed, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotype-by-diet+interactions+drive+metabolic+phenotype+variation+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genotype-by-diet interactions drive metabolic phenotype variation in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 185 (3), 1009-1019 (2010).</li>
<li>Bartholomew, N. R., Burdett, J. M., VandenBrooks, J. M., Quinlan, M. C., Call, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+climbing+and+flight+behaviour+in+Drosophila+melanogaster+following+carbon+dioxide+anaesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Impaired climbing and flight behaviour in Drosophila melanogaster following carbon dioxide anaesthesia.</a> Sci Rep. 5, 15298(2015).</li>
<li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+variation+in+genome+architecture+among+205+Drosophila+melanogaster+Genetic+Reference+Panel+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Natural variation in genome architecture among 205 Drosophila melanogaster Genetic Reference Panel lines.</a> Genome Res. 24 (7), 1193-1208 (2014).</li>
<li>Mackay, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+melanogaster+Genetic+Reference+Panel%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The Drosophila melanogaster Genetic Reference Panel.</a> Nature. 482 (7384), 173-178 (2012).</li>
<li>Berlandi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swing+Boat%3A+Inducing+and+recording+locomotor+activity+in+a+Drosophila+melanogaster+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Swing Boat: Inducing and recording locomotor activity in a Drosophila melanogaster model of Alzheimer's disease.</a> Front Behav Neurosci. 11, 159(2017).</li>
<li>Faville, R., Kottler, B., Goodhill, G. J., Shaw, P. J., van Swinderen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+deeply+does+your+mutant+sleep%3F+Probing+arousal+to+better+understand+sleep+defects+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">How deeply does your mutant sleep? Probing arousal to better understand sleep defects in Drosophila.</a> Sci Rep. 5, 8454(2015).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

代表の結果が示すよう、リクエストはショウジョウバエを運動の活動を正確に計測が可能です。リクエスト、柔軟なさまざまな運動の生物学や運動介入に関連する研究質問に対処するための研究者をことができます。強調表示するプロトコルの 2 つの重要な手順があります。まず、リクエスト、リクエストから、DAMSystem308 へのデータ送信が正常に機能していることを確保するためのセットアップをテストするのには不可欠です。されていない場合正しくセットアップ、データ ケーブルは回転中もつれになることができ、(とはいえ、我々 にあった、リクエストのほぼ毎日の使用で、リクエストと、DAMSystem308 間の接続が磨耗・損傷による回転接続で中断される時々コネクタを交換、2 年に一度)。交換部品を手で保持することをお勧めします。第二に、環境パラメーターの一貫性は、実験の成功に不可欠です。ショウジョウバエが音や振動に非常に敏感、したがって、実験、データ収集中に邪魔されないことが重要です。従って、理想的には、実験は、実験の実行中にアクセスできない専用インキュベーターで実行されます。これらの 2 つの重要な手順に注意が、リクエスト数から質の高いデータを収集することを確...

最近では、研究者は、運動生物を勉強するミバエショウジョウバエを使用し始めています。キイロショウジョウバエは、以上 100 年1,2遺伝子モデル システムをされています。しかし、ショウジョウバエの研究は遺伝学だけでなく、さまざまな神経生物学、行動生物学、生理学3など他の分野にも貢献をしました。2009 年、力のタワーでショウジョウバエの最初の運動マシン説明4であった。力タワーでは、動物の負走応答を活用します。時、妨げ、ショウジョウバエは、彼らのエンクロージャの上に移動する傾向にあります。この応答がよく確立され、登坂力やショウジョウバエの体力を推定する人気の「リング」(急速な反復負走5) アッセイの基礎であります。力タワー (Tinkerhess et al. 20126負走応答を誘導するメカニカル アーム インチいくつかによって彼らのエンクロージャ内の動物セットを繰り返し持ち上げるモーター ユニットに接続し、地面にそれらをバック ドロップを使用します。力タワーの使用を示すビデオを提供する)。力タワーで長期の治療量を増やします (実行中または飛行) に身体活動の動物は無処理動物、体力4リングのアッセイでパフォーマンスが向上する時間リード比較して実行します。したがって、この作品は、運動の生物学のモデルとしてのショウジョウバエを使用しての可能性を実証しました。
2016 年にショウジョウバエ運動研究に利用できるツールのレパートリーを拡大するには、メンデスと同僚は 2 番目のショウジョウバエ運動マシンされて7を説明します。力タワーと同様に、されては、ショウジョウバエの負走応答を悪用します。ただし、この応答は、吊り上げおよび力タワーのようにドロップすることではなく、動物のエンクロージャの継続的な回転によって誘導されます。この誘導法は穏やかであり力タワーで運動中に発生する可能性があります任意の物理的な外傷を避けるより多く耐久性指向運動体制のことができます (を参照してください Katzenberger、r. j.ら20138の影響を繰り返し物理的なショウジョウバエの健康にトラウマ)。力タワー4と同様に、されて動物の運動治療にリード本体重量7トリグリセリドのレベル、体力の変化などの生理学的応答のさまざまな。したがって、2 つの相補的な方法は、ショウジョウバエ生物学者運動の勉強にあります。
力タワーのされて 1 つの制限は運動治療による活動の量を測定することができません。ビデオ録画、されてからの解析は、運動治療7に対処方法に様々 なショウジョウバエ系統間で有意差があったことを示した。具体的には、系統がどれだけ動物実行追加の活動刺激7内の異なる勉強しました。この観測は、3 番目の運動システム、回転運動の定量化システム (リクエスト)、回転誘発運動9時に動物の活動レベルを測定することができますを開発するお求め。リクエストは、監視ユニットを介して、されてのように回転運動を刺激するために回転アームにインストールされている市販の活動を利用しています。リクエストの最初の仕事が確約したショウジョウバエの遺伝的に異なる系統-男女 - 回転の刺激を大幅に異なる応答を持つことができ、このように誘発される運動量は異なった遺伝子型の9の間で同一ではないです。.したがって、リクエストは今運動分野でさまざまな研究に新しい道を開く処理によって誘発される運動量を測定するショウジョウバエの生物学者をできます。
ここで詳細に回転運動の定量化のためのリクエストを使用する方法を示します。リクエストは回転運動を誘導して同時に扱われる動物の活動レベルを測定します。リクエストはさまざまな運動プログラムを収容することができる、シンプルな 2 h に至るメンデスと同僚7、刺激によって複雑な間隔トレーニング方法を示す連続エクササイズを介して調整することができます。回転速度 (1 分あたり回転約 1-13) の間。リクエストを生成するために使用するアクティビティ モニター単位、に応じてこのメソッドは単一のハエの分析または動物の大規模な集団に適応されます。この汎用性のため、リクエストは、ショウジョウバエ研究者人口密度の影響、食事介入やさまざまな運動体制などを勉強する機会の配列を提供します。

<table><tbody><tr><td>ショウジョウバエ活動モニター&nbsp;</td><td>Trikinetics</td><td>LAM25H</td><td>REQSコンポーネント</td></tr><tr><td>電話コードデタング</td><td>ラーUvital</td><td>uv20170719</td><td>REQSコンポーネント</td></tr><tr><td>バイアルクロージャー(flugs)</td><td>Genesee Scientific</td><td>49-102</td>ショ<td>ウジョウバエ培養用品</td></tr><tr><td>バイアル&nbsp;</td><td>ジェネシーサイエンティフィック</td><td>32-120</td><td>ショウジョウバエ培養用品</td></tr><tr><td>ショウジョウバエ培養ネット</td><td>カロライナ生物供給</td><td>173090</td><td>ショウジョウバエ培養用品</td></tr><tr><td>コーンミール</td><td>ペプシコ</td><td>43375</td><td>ショウジョウバエメディア</td></tr><tr><td>糖蜜</td><td>ゴールデンバレル</td><td>BLA-GAL</td><td>ショウジョウバエメディア</td></tr><tr><td>寒天</td><td>アペックスバイオリサーチ</td><td>66-103</td><td>ショウジョウバエ培地</td></tr><tr><td>不活性ドライイースト</td><td>ジェネシー・サイエンティフィック</td><td>62-106</td><td>ショウジョウバエ培地</td></tr><tr><td>テゴセプト・</td><td>エイペックス・バイオリサーチ</td><td>20-258</td><td>ショウジョウバエ培地</td></tr><tr><td>プロピオン酸</td><td>ジェネシー・サイエンティフィック</td><td>20-271</td><td>ショウジョウバエ培地</td></tr></tbody></table>

回転運動の定量化システム (リクエスト) を用いたキイロショウジョウバエの運動レベルの測定

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System (REQS)

キイロショウジョウバエは運動の生物学の研究の新しいモデル生物です。までに、2 つの主な運動システム力タワーと、されて記載されています。ただし、運動治療により誘起された動物の追加の活動の量を測定する方法を欠いてきた。回転運動を発生している動物のための動物の活動の測定を提供するこの必要性を回転運動の定量化システム (リクエスト) に塗りつぶします。このプロトコルは、回転運動中に動物の活動を評価するために、リクエストを使用する方法の詳細し、生成できるデータの種類を示しています。ここでは、運動誘発性活動性特異的ひずみと違いを測定するため、リクエストを使用する方法を示します。運動誘発性活動の年齢、食事、または人口のサイズなどさまざまな実験的パラメーターの影響を評価する、リクエストを使用もできます。さらに、それを使用して、さまざまな運動トレーニングのプロトコルの効果を比較できます。重要なは、必要な場合のグループ間の活動の同量を達成するために研究者を許可する系統間の運動治療を標準化する機会を提供します。したがって、リクエストは運動生物ショウジョウバエ モデル システムでの作業の注目すべき新しいリソースであり、運動の既存システムを補完します。

リクエストと個々 の実行からの出力は、(使用例は補足のファイル 1) 既定でに"Monitor1.txt"をラベル付けする DAMSystem308 ソフトウェアによって生成されたデータ テーブルです。このような表からの抜粋は、表 1に示します。各列には、行に最後 (下) に実験 (上) の初めから各時間間隔で測定されるアクティビティが含まれている間、個々 のアッセイ チューブからのデータが含まれています。というケース、ケーブルを調整する必要があります (これらに見られるなど表 2)、データ切り抜き絵があります、最初の 3 つのデータ ポイントを監視する必要があります。
図 2は、4 つの遺伝的に異なるショウジョウバエ ライン (DGRP2 ライン 897、810、703 371<sup cl...

回転運動の定量化システム (リクエスト) は、動物によって実行されるアクティビティの量を同時に測定しながら回転をショウジョウバエ運動を引き起こすことができます。今回、リクエストを使用して回転運動治療法を経験している動物の活動レベルを測定する方法を詳述したポイントによってプロトコル

Drosophila melanogaster is a new model organism for studies in exercise biology. To date, two main exercise systems, the Power Tower and the Treadwheel ...

この方法は、年齢によって運動反応がどのように異なるのか、運動反応を制御する遺伝的経路は何かなど、運動生物学の分野における重要な疑問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、研究者が初めて、回転運動を行うハエの活動をリアルタイムで測定できることです。その手順を実演するのは、私の研究室の大学院生であるLouis Patrick Watanabeです。計画された実験の前に、オスとメスのハエの交配を設定して、実験のために制御された各子孫を収集できるようにします。まず、バイアルごとに8本のガラス製試験片チューブに10個の麻酔テストフライをロードします。標準的な実験グループは、各性別の10匹のハエの10バイアルで構成されています。バイアルをREQSにロードするには、バイアルをアクティビティモニターのスロットに正面から挿入します。次に、バイアルに2番目のキャップを取り付け、バイアルの中央に置き、必要に応じてOリングを動かします。REQSをインキュベーターに収納し、制御された環境条件に対応します。動物がこのインキュベーターで1時間麻酔から回復するのを待ってから、先に進みます。8時間を超えるアッセイでは、チューブの一端に非常にしっかりと取り付けられている食品を含むバイアルを使用することができます。順応期間が経過すると、デバイスの電源を入れて回転を開始します。速度を4RPMなどの希望の速度に調整します。チューブが適切に配置されている場合、チューブが底面に接触しないようにしてください。一般的なアッセイでは、ソフトウェアを起動し、必要な時間(例えば、バイアルを食事なしで使用した場合の2時間など)の活性を記録するだけです。開始すると、ソフトウェアは自動的にデータをテキストファイルに保存します。ソフトウェアでは、緑色の接続ライトは、ソフトウェアがデータを収集していることを示します。録音周波数は、[設定]タブで調整できます。通常、5 分間隔が使用されます。アッセイ中は、動物があらゆる障害に非常に敏感であり、活動の増加とともに反応する可能性が高いため、インキュベーターを開かないでください。アッセイの最後に、ソフトウェアを閉じてデータ収集を終了し、REQSをオフにしてチューブを検査します。運動期間中に発生した死亡者に注意してください。一般的に、2時間で4回転は健康な株にとって致命的ではありません。最後に、ハエに二酸化炭素を麻酔してバイアルを降ろします。データファイルは、任意の統計パッケージで分析できます。すべてのポジションでアクティビティ スコアが 0 が記録される時点がある場合は、これらの時点で接続に切り欠きがありました。切り欠きが発生した場合は、回転するフォーンジャックにつながる接続をテープで安定させます。遺伝的に異なる4つのショウジョウバエ系統を、記載されたプロトコルを用いてREQSでアッセイした。各グループは、100匹のハエを10本のバイアルに分割して構成した。平均活性は、4 RPM で実施された 2 時間のアッセイで 5 分間のビンで計算されました。4つの遺伝子型すべての間の平均運動活動は有意に異なっていましたが、処女の雄と処女の雌のハエの間に有意差は見られなかったため、この分析ではそれらのデータを一緒に提示します。その開発後、この技術は、運動遺伝学の分野の研究者がショウジョウバエの様々な運動反応を探求し、動物の行動や生理学に対する運動の影響を研究する道を開きました。この手順に続いて、体組成分析、ストレステスト、フィットネステストなどの他の方法を使用して、動物に対する運動治療の影響に関する追加の質問に答えることができます。

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Research

JoVE Journal

Genetics

遺伝学

我々は、重要な遺伝的モデル生物種の最初の持久力トレーニングのプロトコルについて説明します。...

キイロショウジョウバエのための持久力トレーニングのプロトコルと縦パフォーマンスアッセイ

このビデオでは、ハエの移動を定量化する簡単な方法と、実施されたクライミングアッセイを示しています。フライクライミングアッセイは、ジオタクシスの負の反応に依存する運動機能の一般的なテストです。...

フライクライミングアッセイ:Drosophila melanogasterの一般的な移動をテストする方法

このビデオでは、自由に歩くハエを追跡して一般的な移動能力を評価する方法を説明しています。注目のプロトコルは、ビデオ追跡ソフトウェアを使用したアッセイのセットアップとデータ解析を示しています。...

自由に歩くハエの追跡:ショウジョウバエの移動を評価する方法

このビデオでは、自発運動を追跡するために使用されるショウジョウバエ活動モニタ(DAM)システムについて説明しています。研究者は、DAMから収集した活動データを使用して、ショウジョウバエの概日リズムを研究しています。注目のプロトコルクリップは、デバイスにハエをロードし、概日実験のための活動データを記録する方法を示しています。...

ショウジョウバエ活動量モニター(DAM):ハエの自発運動を測定する方法

キイロショウジョウバエでは、自発運動などの行動に影響を与える遺伝的または環境的操作を研究するのに有用である。ここでは、赤外線ビームと自発運動を定量化するためのデータ解析ソフトウェアのモニターを利用したプロトコルを記述します。...

における自発運動量の測定<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

代謝障害はヒトにおいて最も一般的な疾患の1つである。遺伝的に扱いやすいモデル生物D.キイロは、代謝を調節する新規遺伝子を同定するために使用することができる。本稿では、そのCO 2産生を測定することにより、ハエに代謝率を研究することができ、比較的簡単な方法を説明します。...

代謝率の測定に<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;呼吸計測を使用した

このレポートは、TriKinetics Drosophila Activity...

幼虫活性の測定<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;アクティビティモニタ

されては、そっとハエの生得的な負の走を利用して大人のショウジョウバエの運動を誘導するために回転運動を使用します。代謝状態を評価する練習および遺伝子型、セックス、ダイエット、生理・分子アッセイへの影響などの要因間の相互作用の解析が可能です。...

キイロショウジョウバエで優しく誘導運動されて: インターバル トレーニングのプロトコル

本プロトコルは、オープンソースソフトウェアフィジーを使用して手作りのアリーナでのハエの動きを追跡および分析することにより、ショ ウジョウバエ...

ショウジョウバエの自発運動活性をアッセイする簡単な技術

このプロトコルの目標は、ショウジョウバエに飛行運動を提供することです。代表的な結果は、飛行運動トレーニングが有酸素能力と高脂肪食に対する抵抗力の増加をもたらすことを示しています。...

FLEX:ショウジョウバエの飛行運動トレーニングプロトコル

ショウジョウバエにおけるストレス誘発性うつ様状態の多様行動表現型

学ぼう、回転運動の定量化システム（REQS）を用いたDrosophila melanogasterの運動レベル測定法。リアルタイムで運動誘導と活動計測を同時に行い、加齢や遺伝的要因による運動応答の違いを解析する実験プロトコルです。

回転運動の定量化システム (リクエスト) を用いたキイロショウジョウバエの運動レベルの測定

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