High-Resolution Comparison of Bacterial Conjugation Frequencies

Masaki Shintani; Moriya Ohkuma; Kazuhide Kimbara

doi:10.3791/57812

JoVE Journal
Genetics

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JoVE Journal Genetics

High-Resolution Comparison of Bacterial Conjugation Frequencies

細菌の活用頻度の高解像度の比較

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05:18 min

January 10, 2019

DOI: 10.3791/57812-v

Masaki Shintani^1,2,3, Moriya Ohkuma³, Kazuhide Kimbara¹

¹Applied Chemistry and Biochemical Engineering Course, Department of Engineering, Graduate School of Integrated Science and Technology,Shizuoka University, ²Department of Bioscience, Graduated School of Science and Technology,Shizuoka University, ³Japan Collection of Microorganisms,RIKEN BioResource Research Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

さまざまな条件の下で様々な細菌クェン DNA 要素の動作を理解することを目的と活用頻度、どのように効率的に推定する、高解像度の差異を検出のためのプロトコルについて述べるドナー菌活用を開始します。

この方法は、プラスミドDNAが異なる細菌間で広がる頻度に関する微生物学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、背景を縮小することで、高解像度で共役周波数の小さな違いを検出できることです。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の大学院生である柳屋康介です。

最も可能性の高い数で共役頻度を計算するには、ちょうど示したように、摂氏30度で45分間、一晩のレシピエント培養から1ミリリットルの一晩ドナー培養から1ミリリットルを濾過する。共培養がインキュベートされている間、ドナールリアスープ、またはLB、カナマイシン、またはレシピエントLBプラスゲンタマイシンプレートに30°Cで2日間培養するために、三重にめっきするための元のドナーおよびレシピエント培養物を連続して希釈する。インキュベーションの終了時に、カナマイシンおよびゲンタマイシンを含む無菌LBのフィルター上の培養を、4倍に96ウェル細胞培養プレートで連続希釈するために再中断する。

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