Name: データベース ガイド-フローサイトメトリー評価骨髄骨髄細胞の成熟のため (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 5 s
Description: 学ぶフローサイトメトリーによる骨髄細胞の成熟評価法。骨髄異形成症候群の診断精度向上に貢献し、検査者の主観性を低減して定量的な解析を可能にする臨床応用技術です。

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本研究で使用される抗体は、BD バイオ サイエンスによって提供されました。著者は彼らの同僚から、分子生物学、血液学研究所、大学病院のサンテティエンヌ、フランス、2 番目の NGS データの解釈のための専門知識を提供、Flandrin Gresta パスカル博士を感謝したいです。MDS の場合。著者は、彼らの関心と本研究の介入と患者と本研究に参加するアグリーメントの健康なドナーの臨床血液感謝しています。著者は出版のための金融支援「Les Amis de レミ」財団に感謝によってたいです。

<ol><li>Orfao, A., Ortuño, F., de Santiago, M., Lopez, A., San Miguel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotyping+of+Acute+Leukemias+and+Myelodysplastic+Syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Immunophenotyping of Acute Leukemias and Myelodysplastic Syndromes.</a> Cytometry Part A. 58, 62-71 (2004).</li>
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<li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26, 1986-2010 (2012).</li>
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<li>van Dongen, J. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+antibody+panels+for+standardized+n-dimensional+flow+cytometric+immunophenotyping+of+normal%2C+reactive+and+malignant+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes.</a> Leukemia. 26, 1908-1975 (2012).</li>
<li>Matarraz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+to+the+Diagnosis+and+Classification+of+Monocytic-Lineage+Leukemias+by+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+B+%28Clinical+Cytometry%29%22%5BJournal%5D)">Introduction to the Diagnosis and Classification of Monocytic-Lineage Leukemias by Flow Cytometry.</a> Cytometry Part B (Clinical Cytometry). 92 (3), 218-227 (2015).</li>
<li>Westers, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotypic+analysis+of+erythroid+dysplasia+in+myelodysplastic+syndromes.+A+report+from+the+IMDSFlow+working+group%29%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Immunophenotypic analysis of erythroid dysplasia in myelodysplastic syndromes. A report from the IMDSFlow working group).</a> Haematologica. 102, 308-319 (2017).</li>
<li>Shen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+immunophenotypic+findings+in+chronic+myelomonocytic+leukemia+and+its+utility+in+monitoring+treatment+response%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry immunophenotypic findings in chronic myelomonocytic leukemia and its utility in monitoring treatment response.</a> European Journal of Haematology. 95, 168-176 (2015).</li>
</ol>

著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。サンテティエンヌの大学病院で血液検査、フローサイトメトリー部門 EuroFlow コンソーシアムのメンバーであります。

BM 吸引の質が最終的な結果に影響を与えます。BM 吸引の希釈は、前駆細胞の不在のための成熟のさまざまな段階で細胞や前駆体細胞の分布をゆがめる可能性があります。おそらく大量に溶解法を用いた流れのフローサイトメトリーによる解析で希釈の BM 吸引の正規化で助けるかもしれない。また、フローサイトメトリーによる BM 骨髄異形成の評価のための重要なステップはサンプル処理や染色、データ集録、および解釈2,3。BM 収穫後最大 72 h 処理と染色サンプルを実行必要があります。データは、染色後すぐに、好ましくは、取得する必要があります。 または、4 ° c で 1 h 以上まで流れの cytometer で測定のための光から保護されたサンプルを格納します。データベース ガイド通訳は、BM の骨髄細胞の成熟の主観評価を回避できます。
抗体の組み合わせおよびサンプル準備はあった EuroFlow 手順9,<su...

近年成熟経路 (の発現の変化の評価に基づく MDS の開始そして進行の間に骨髄系細胞で発生する異形成の変更を特定の表現型マーカーがない場合は、新しいアプローチを提案されています。成熟した骨髄系細胞の生産の間に骨髄性抗原) や骨髄 (BM) 内の別のセル型の異常分布の細胞コンパートメント1,2。
骨髄異形成症候群 (MDS) やその他の骨髄性血液疾患に関連する BM 骨髄球系細胞コンパートメントの異形成の変化を検出するために MFC の標準化されたアプリケーションのための新しい手法を提案します。本研究では、MFC データ解析のための成熟のデータベースを使用するユーティリティも示しています。
サンプルの準備の手順、データ集録、およびデータベースを用いた解析の標準化 BM 骨髄細胞の異形成の変化に関連する最も関連性の高い表現型異常の同定できるようになります。したがって、適切な標識が、よく知られている形式 (自動人口区切り記号 (APS) 図、ヒストグラム、およびドット プロット) に基づく統計的に選択したサブセットがその後の分析で使用できる解析戦略を開発するため必要丸めます。MDS の堅牢な表現型異常の発見とせず最小限の形態学的異形成や細胞遺伝学的 aberrancies なしの場合診断も和らぐ。肺浸潤パネルの削減を可能にする差別のパラメーターの同定可能性があります、現在スコア2、臨床病理学研究室で彼らの適用性を許可を簡略化します。
このメソッドは、MDS の診断3で通知されて、フローサイトメトリー データの主観的な解釈を制限します。この手順は、処理・解析の流れデータ4自動化ツールの開発のための前提条件です。
MDS は、スプライソソームの突然変異が MDS 表現型をもたらす特定のエピジェネティックな修飾子と協力して造血幹細胞 (HSC) 無秩序の異質グループで構成されます。それは今、HSC の突然変異と他のメカニズム異常免疫炎症や悪性造血と BM の間質の微小環境の相互作用など、MDS の病態に関与している知られています。しかし、これらのメカニズムは不十分な理解まま。MDS の広い臨床的および生物学的多様性は、挑戦診断と最適な治療法の選択を作る。過去 10 年間で複数の研究を示している MFC はしばしばより多くである異形成2形態、しかし技術的、経済的制約の検出に敏感な多くの場合異なります結果と標準化が困難なこの手法を作る、3通訳の経験。また、わかりにくい方法 MFC ができる他の非クローン BM から MDS に向かってバランス、細胞遺伝学的異常の有無や境界例低爆発カウント hypocellular MDS などの最小限の形態学的異形成の有無の場合での先端骨髄障害など障害 (すなわち。、再生不良性貧血)。それはまた急性骨髄性白血病 (AML) から爆発の過剰な MDS のボーダーラインのケースを区別することは困難に残る。これらのすべての理由から、臨床ガイドラインは MFC の MDS の最終的な診断テストを統合できません。2011 年、米国国立総合がんネットワーク (NCCN) では、CD34 陽性細胞の割合、発作性夜間血色素尿症クローンの検出と hypocellular MDS5の細胞傷害性 T 細胞クローンの存在の推定の MFC をお勧めします。臨床データは、免疫抑制療法6にこれらの患者の良い反応を示されているので、これら 2 つの後者の状況は治療目標も含まれます。国際作業グループ (IWG) 勧告を引用して 2017 の NCCN のガイドラインには、MDS の診断のため、任意の仕様6をすることがなく、共同の条件間で MFC による異常診療検出が一覧表示されます。さらに、最近公開された WHO 分類は MFC 所見だけでは決定的な形態学的・細胞遺伝学的データ7の不在で MDS の第一次診断を確立するのに十分でないことを定めています。ただし、MFC は成熟パターンの骨髄球系細胞の調節不全を示し、患者の病気の経過で特定の時間に通常からの「距離」を定量化追加テストとして使用できます。
このメソッドは、臨床研究所データシートまたは異形成異常とその他の骨髄性疾患の診断を絞り込むために MFC 診療を使用して BM 骨髄細胞の異形成の評価に興味を持って適用されます。

<table><tbody><tr><td>BD FACSCanto II フローサイトメーター</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>SN:</td> V33896301336 <td>3-laser, 4-2-2 configuration, フィルターとミラー 詳細: https://www.bdbiosciences.com/documents/BD_FACSCanto_II_FilterGuide.pdf</td></tr><tr><td>Awel C48-R 遠心分離機</td><td>AWEL Industries, FR</td><td>SN: 910120016;モデル番号:320002001</td><td>低速遠心分離機、容量60 FACSチューブピ</td></tr><tr><td>ペット10&micro;Lおよび200&micro;L</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>パスツールピペット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL ファルコンチューブ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ポリプロピレンチューブ FACS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マウス用 抗ヒト HLA-DR</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>655874</td><td>クローン L243 マウス BALB/c IgG2a, &kappa; Fluorochrome Horizon V450 (Ex max 404 nm/ Em max 448 nm)</td></tr><tr><td>マウス Anti-Human CD45</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>560777 clone</td><td>HI30 Mouse IgG1, &kappa; Fluorochrome Horizon V500 (Ex max 415 nm/ Em max 500 nm)</td></tr><tr><td>マウス Anti-Human CD16</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656146</td><td>クローン CLB/fcGran1 マウス BALB/c IgG2a, &kappa; 蛍光色素 FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD13</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>347406 clone</td><td>L138 Mouse BALB/c X C57BL/6 IgG1, &kappa; 蛍光色素 PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>マウス アンチヒト CD34</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>347222</td><td>clone 8G12 Mouse BALB/c IgG1, &kappa; 蛍光色素 PerCP-Cy5.5 (Ex max 482 nm/ Em max 678 nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD117</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>339217</td><td>クローン 104D2 マウス BALB/c IgG1 蛍光色素 PE-Cy7 (Ex max 496 nm/ Em max 785 nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD11b</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>333143</td><td>クローン D12 Mouse BALB/c IgG2a, &kappa; D12, Fluorochrome APC (Ex max 650 nm/ Em max 660nm</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Human CD10</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>646783</td>クローン <td>HI10A Mouse BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>マウス Anti-Human CD35</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>555452</td>クローン <td>E11 Mouse IgG1, &kappa; 蛍光色素 FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD64</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>644385</td><td>clone 10.1 Mouse BALB/c IgG1, &kappa; 蛍光色素 PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD300e</td><td>Immunostep</td><td>IREM2A-T100</td><td>クローン UP-H2 マウス BALB/c IgG1, k 蛍光色素 APC (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD14</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>641394</td><td>clone MoP9 Mouse BALB/c IgG2b, &kappa; 蛍光色素 APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD36</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656151</td>クローン <td>CLB-IVC7 Mouse IgG1, &kappa; 蛍光色素 FITC (Ex max 494 nm/ Em max 520 nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD105</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>560839</td><td>clone 266 Mouse BALB/c IgG1, &kappa; 蛍光色素 PE (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>マウス 抗ヒト CD33</td><td></td><td>345800</td><td>クローン P67.6 マウス BALB/c IgG1, &kappa; Fluorochrome APC (Ex max 496 nm/ Em max 578 nm)</td></tr><tr><td>マウス Anti-Human CD71</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>655408</td><td>clone M-A712 Mouse BALB/c IgG2a, &kappa; 蛍光色素 APC-H7 (Ex max 496 nm/ Em max 785nm)</td></tr><tr><td>Lysing Solution 10x Concentrate (IVD)</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>349202</td><td></td></tr><tr><td>FACSFlow Sheath Fluid</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>342003</td><td></td></tr><tr><td>FACSDiva CS&T IVD ビーズ</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>656046</td><td></td></tr><tr><td>RAINBOW CALIBRATION PARTICLES, 8 PEAKS</td><td>Cytognos, Salamanca, Spain</td><td>SPH-RCP-30-5A</td><td>lots EAB01, EAC01, EAD05, EAE01, EAF01, EAG01, EAH01, EAI01, EAJ01, EAK01</td></tr><tr><td>Compensation Particles Multicolor CompBeads(CE/IVD)</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td>ref. #51-90-9001229 + #51-90-9001291</td><td></td></tr><tr><td>Diva software versions 6.1.2 and 6.1.3</td><td>BD Biosciences, CA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水錠剤</td><td>R&D Systems, Minneapolis, USA</td><td>5564</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン&nbsp;(BSA)</td><td>Sigma-Aldrich, France</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Azide 99%</td><td>Sigma-Aldrich, France</td><td>199931</td><td></td></tr><tr><td>Infinicyt software version 1.8.0.e</td><td>Cytognos, Salamanca, Spain</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

データベース ガイド-フローサイトメトリー評価骨髄骨髄細胞の成熟のため

Database-guided Flow-cytometry for Evaluation of Bone Marrow Myeloid Cell Maturation

フランス語フローサイトメトリー協会 (AFC) 内を開始したワーキング グループは、フランスの骨髄疾患診断のため多項目フローサイトメトリー (MFC) のアプリケーションを調和させるために開発されました。ここで提示されたプロトコルが合意し、2013 年 9 月と 2015 年 11 月の間応用 6 フランス診断所 (サンテティエンヌ、グルノーブル、クレルモン ・ フェラン、ニース、リール、Institut パオリ-Calmettes での大学病院でマルセイユ)、骨髄サンプル準備およびデータ集録の標準化を許可します。3 つの成熟データベースは、好中球、単球と「健康」ドナー個人 (造血疾患の証拠なしの個人) から骨髄で赤芽球系に開発されました。各骨髄系の頑健な解析は日常的診断に該当する必要があります。新しいケースは同じ方法で解析でき、通常のデータベースと比較します。したがって、量的・質的形質異常を識別でき、2SD 通常骨髄のサンプルのデータと比較して上記の病理を示す考慮すべき。主な制限は、ハイブリドーマ技術に基づいて、現在臨床診断に使用方法で得られたモノクローナル抗体を使用して達成データ間の高い変動です。取得したデータの技術的な検証に関する条件を設定 MDS の診断のための MFC のユーティリティを向上させるを助けるかもしれない。これらの基準の確立には、データベースに対して分析が必要です。データ分析で調査官の主観の削減は、この方法の重要な利点です。

K-EDTA 血液凝固阻止剤で収穫された 54 の BM サンプルは研究に含まれていた。MFC データは、患者についての情報のない状態で分析されました。BM のサンプルを (男性 5 と 47.4 [35-48] の年齢の中央値と 2 人の女性、(8 男女 57.9 [35-72] の年齢の中央値で 3 名) 造血疾患の証拠と 11 個人や様々 な 36 例 7 の健康なドナーから示した回顧的研究 病理学の条件: 1 ケース貧血と貧血と高クレアチニン レベル、8 の炎症、貧血症例 3 例、低クレアチニン レベル 1 貧血症例によるビタミン B12欠乏症、貧血 ± 4 症例によって引き起こされる他の血球減少によって肝臓の損傷、3 症例の自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病 5 例、マクロファージ活性化症候群の 1 例、リンパ腫完全寛解 (微少残存病変 &lt; 0.01%) で 3 例, 7 例血液疾患 (4 MDS、1 急性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病の 1 と 1 骨髄増殖性症候群 JAK2 正) を運ぶ。18 男女各 18 名平均...

MDS の診断は非有益な細胞遺伝学または形態学的条件の不在で難しいです。MFC では、MDS の診断プロセスを改良を助けることができます。臨床練習のために便利になる、MFC 分析が十分な特異性と感度、パラメーターに基づく必要があります、データは異なる事業者間再現する必要があります。

A working group initiated within the French Cytometry Association (AFC) was developed in order to harmonize the application of multiparameter flow ...

この方法は、骨髄異形成症候群や骨髄細胞系統における成熟異常と共に進化する他の造尿疾患などの骨髄疾患の診断における重要な質問に答える助けとなる。この手法の主な利点は、その分析と解釈における研究者の主観性を低下させる点である。この方法は、骨髄異形成の最も差別的なパラメータを示す洞察を提供することができます。これは、通常の骨髄細胞集団との差を定量化することができます。手順を実証することは、私たちの研究室の博士研究員であるティファニー・ピコットです。15ミリリットルの円錐管に10ミリリットルの洗浄バッファーを含む10ミリリットルの洗浄バッファーと1本の洗浄バッファーの600マイクロリットルと、洗浄ごとに10ミリリットルの新鮮な洗浄バッファーを混合することから始めます。2回目の洗浄後、ペレットを400マイクロリットルの新鮮な洗浄バッファーで再懸濁し、350マイクロリットルの細胞懸濁液を5ミリリットルのポリプロピレンFACSチューブに移し、パネル全体のバックボーン抗体を含む。細胞を十分に混合した後、ピペット等量の細胞抗体溶液を3つの新しいポリプロピレンチューブに入れ、必要に応じて各チューブの最終体積を200マイクロリットルまで新鮮な洗浄バッファーで持ち込みます。次に、目的の細胞表面マーカーに対して適切な量の抗体を混合して添加し、室温で30分間インキュベーションを行い、光から保護する。インキュベーションの終わりに、混合して2ミリリットルの溶解溶液を加え、室温で10分間インキュベーションし、光から保護します。遠心分離によって細胞を採取し、ペレットを邪魔することなく、各チューブに最後の50マイクロリットルの上澄み物を除いてすべてを捨てます。残りの上清中のペレットを緩やかに混合して再中断し、各サンプルに新鮮な洗浄バッファーを2ミリリットル加えます。2回目の洗浄後、上清を捨てて、各チューブに約50マイクロリットルの残留体積を残し、ペレットを乱さずに放置する。すぐに分析するために、混合してPBSの200マイクロリットルでペレットを再懸濁します。フローサイトメーターでサンプルを読み取るために、まずフローサイトメーターソフトウェアで新しい実験を開き、名前、サンプルの種類、日付に従って実験の名前を変更します。3つのチューブに新しい標本を作成し、実験レイアウトの各チューブで使用する抗体を指定します。サイトメーターの設定を開き、アプリケーション設定を選択して、月次設定で取得した値を適用します。新しいグローバルワークシートを開き、単一細胞を腺球状、単球、爆風、リンパ球の集団に合わせて適切なドットプロットを作成します。報酬コントロール用の新しいグローバル ワークシートを作成します。次に、各チューブから500,000個のイベントを取得し、中程度の取得率で、その技術的検証後にfcs 3.0ファイルとしてデータをエクスポートする。新しい分析を開始する前に、好中球、単球、有核赤線系分、および分析ファイルを inp 形式で、正常骨髄データを含む cyt ファイルをダウンロードします。次に、データをデスクトップに保存します。好中球の成熟をデータベースに保存するために、まずInfinicytソフトウェアを開き、次に好中球の成熟データに対応するcytファイルを開きます。APS グラフに成熟経路を描画し、好中球の成熟経路をデータベースに保存します。解析する必要がある好中球系統成熟の fcs ファイルを開きます。プロファイルタブから好中球成熟 inp ファイルをアップロードします。この系統の分析は3つのステップに分かれています。CD34陽性、好中球をコミットした爆風の選択から始めます。この目的のために、7つのゲートの交点を使用して、CD34陽性、CD117陽性、HLADR低、CD10陰性、CD13陽性、CD11 b-陰性事象の選択を可能にする。CD117陽性、CD34陰性好中球前駆体の選択で分析を続ける。より成熟した好中球細胞の選択で分析を続ける。次に、単球系線細胞の解析を示す。APS グラフに成熟経路を描画します。成熟感を示す矢印が未熟、単球細胞、CD14陰性、IREM2陰性、成熟単球、CD14陽性、IREM2陽性に向かっていることを確認する。単球系の成熟経路をデータベースに保存します。解析する必要がある単球系の成熟のために fcs ファイルを開きます。単球系分分析のプロファイルをアップロードします。単球系の細胞を同定するために、CD64陽性高、CD117陽性、CD117陰性、HLADR陽性事象の選択を可能にする4つのゲートの交点を使用する。これらのイベントを、人口階層ツリーの単球タブに割り当てます。NRC データベースに保存する必要がある NRC cyt ファイルを開きます。APS グラフに成熟経路を描画し、核となる赤細胞の成熟経路をデータベースに保存します。解析する必要がある fcs ファイルを開きます。有核赤細胞の分析のテンプレートをプロファイルからアップロードします。この系統の解析は2つのステップに分かれています。CD34陽性の選択から始まり、エリスロイドは爆発を犯した。ここでは、7つのゲートの交点を使用して、CD34陽性、CD117陽性、HLADR低、CD105陽性、CD33陽性、CD36陽性、CD71陽性事象の選択を可能にする。これらのイベントを母集団階層の NRC タブに割り当てます。CD34陽性エリスロイドが爆発を確認できないように取り除きます。より成熟したエリスロイド細胞を同定するには、CD45陰性とCD45陽性低、サイドスキャッタ低、CD36陽性高、CD71陽性高の判別を可能にする4つのゲートの交点を使用する。次に、CD36ハイサイド散乱低血小板を有核赤血球から取り出し、この集団をNRCタブに割り当てる。骨髄区画における骨髄腫成熟を評価するために、評価する必要がある場合から目的の系統に対応するcytファイルを開く。母集団階層ツリーの中等球のタブに割り当てられたイベントのみを表示します。APSグラフに成熟経路を描画し、正常骨髄で好中球の成熟に対応するデータベースをロードし、データを比較します。データが少なくとも部分的に互換性がある場合、ソフトウェアは正規化された成熟差分図とパラメータバンドを作成して成熟の違いを視覚化します。骨髄区画における単球成熟を比較するために、単球データベースを含む正常な骨マローからのデータを持つ新しいケースについて、単球系に対応するcytファイルを開く。母集団階層ツリーの単球タブに割り当てられたイベントのみを表示し、APS グラフに成熟経路を描画します。通常の骨マローで単球成熟に対応するデータベースをロードし、データを比較します。骨髄区画中の有核赤細胞成熟を比較するために、新しい症例に対して、正常な骨髄からのデータをNRCデータベースに含めて、NRCの系統に対応するcytファイルを開く。母集団階層ツリーの NRC タブに割り当てられたイベントのみを表示します。そして、APSグラフに成熟経路を描きます。正常な骨髄でNRC成熟に対応するデータベースをロードし、データを比較します。次に、新しいファイルとデータベースに含まれるデータの差の有意性を視覚化するために、[正規化された成熟の差] をクリックしてズームします。フロー サイトメトリクス データ分析で階層分類アルゴリズムを使用するメソッドは、セルの母集団の重複にカウントされないため、主観的で本質的に不正確であることを覚えておいてください。骨髄系正常成熟データベースに対してMDSであると疑われるサイトペニアの新しい症例の評価により、細胞学的または細胞原性異常のない場合であっても、好中球、単球、およびNRC系統の異常発現成熟抗原の同定が可能になる。この手順を試みる間、フローサイトメトリックデータを標準化された方法で取得し、毎月のサイトメーター設定設定、毎日のチェック、使用前に抗体を厳密にピペットにし、染色時間を尊重することを忘れないでください。この手順に従って、コンパスのような別のメソッドを実行して、異なるケースグループを比較し、特定のケースグループの最終的なタイピック刻印など、追加の質問に答えることができます。その開発後、この技術は、不確定な可能性のクローン造形の場合、異形成プロセスに確実に関連する最終的なタイプの変化を特定するために、骨髄細胞成熟パターンを探求することに興味を持つ研究者のための道を開いた。健全なドナーからのデータの数を増やしてデータベースを更新すると、分析の堅牢性が向上する可能性があることに注意してください。

database-guided-flow-cytometry-for-evaluation-bone-marrow-myeloid

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

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フローサイトメトリーによるマウス胚における赤血球系前駆細胞およびその子孫の同定

最小限、または測定可能な残存病変 (MRD) の検出は、リスク アセスメントを精製急性骨髄性白血病 (AML) の再発を予測するための重要な予後バイオ マーカーです。これらの包括的なガイドラインと、MRD の一貫性と正確な同定と検出のためのベスト...

サンプルおよび測定可能な残存病変と急性骨髄性白血病の白血病幹細胞を測定するプロセス骨髄に対する包括的なプロトコル

フローサイトメトリーによる主な急性骨髄性白血病細胞白血病幹細胞マーカーの同時発現を検出するためのプロトコルの概要を説明します。3 前駆細胞集団と増加する成熟の程度と推定される LSC...

フローサイトメトリーを診断とフォローで主に急性骨髄性白血病、白血病幹細胞患者由来異種での見積もりに

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寡能性と系列拘束されたマウスの骨髄から骨髄前駆細胞の分離と同定

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ここでは、マウス骨髄細胞を表現型造血幹および前駆細胞に単離および染色するための簡単なプロトコルと、支持するニッチ内皮および間葉系幹細胞について説明します。内膜および中枢骨髄領域に位置する細胞を濃縮する方法も含まれる。...

マウス骨髄造血幹・前駆細胞および間質ニッチ細胞のフローサイトメトリー解析

ここでは、細胞分裂の数、表面細胞の表現型、および細胞の親族関係を同時に測定できるフローサイトメトリーベースの技術を紹介します。これらのプロパティは、順列ベースのフレームワークを使用して統計的にテストできます。...

フローサイトメトリー による 造血幹細胞と前駆細胞の血縁関係、分裂数、表現型の同時評価

ここでは、骨髄異形成症候群および急性骨髄性白血病のマウスモデルから骨髄微小環境集団を分離および特徴付けるための詳細なプロトコルが提示されます。この技術は、疾患の進行に伴う内皮細胞や間葉系間質細胞を含む非造血骨髄ニッチの変化を特定します。...

骨髄異形成症候群および急性骨髄性白血病における骨髄微小環境集団の同定

本プロトコルは、マウス由来の非常に均質な骨髄間葉系幹細胞(BMSC)を精製、増殖、および特徴付けるための費用対効果の高い方法を説明しています。このアプローチにより、高い増殖と分化の可能性のある大量のBMSCの取得が容易になり、マウスモデルをサポートし、前臨床研究を前進させることができます。...

マウス由来骨髄間葉系幹細胞の精製、増殖、およびフローサイトメトリーに基づく表現型解析

これは、ミエロイド系のサプレッサー細胞（MDSC）をイムノおよびGr-1を豊かにし、迅速かつ包括的な方法です...

フローサイトメトリーおよび自動化された磁気活性化細胞選別（AutoMACS）を使用して、ナイーブ膵腫瘍を有するマウスからミエロイド系のサプレッサー細胞（MDSC）の調製

学ぶフローサイトメトリーによる骨髄細胞の成熟評価法。骨髄異形成症候群の診断精度向上に貢献し、検査者の主観性を低減して定量的な解析を可能にする臨床応用技術です。

データベースガイド-フローサイトメトリー評価骨髄骨髄細胞の成熟のため

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