リーフ スプレー質量分析: 植物組織由来の代謝産物を直接評価するの急速な周囲のイオン化法

リーフスプレーMSは、無傷の植物組織の定性的および半定量的分析のための迅速な方法であり、さまざまな用途があります。この手法の主な利点は、基本的にサンプル調製なしで植物組織を直接分析できることです。この分析法は、Sceletium由来のメセンブリンアルカロイドに関する優れた洞察を提供しますが、他のさまざまな植物種や農薬などの外因性化学物質の分析にも使用できます。

この方法に不慣れな方は、各植物種、組織タイプ、および目的の化合物に対してプロトコールを最適化する必要があるため、難しいと感じるかもしれません。リーフスプレーMSに流動成分が不要な MS.As リーフスプレー用の改質ナノスプレーソースを使用し、液体クロマトグラフィープローブをソースから取り外してソースを変更します。植物組織に電圧を印加するリーフスプレー質量分析ワイヤーは、一方の端にワイヤーにはんだ付けされたピンと、もう一方の端にはんだ付けされたクランプがあります。

システムを最近使用した場合は、スイープコーン内の別のソースを取り外す前に、触って冷ましてください。次に、ナノスプレーリーフスプレーMSソースを取り付けます。最後に、テキストプロトコルで説明されているように、tuneファイルとメソッドファイルを作成します。

常に手袋を着用し、素手で取り扱った植物ティッシュは使用しないでください。そうしないと、ポリエチレングリコールなどの汚染物質イオンがスペクトルを支配します。分析用の植物組織を質量分析システムと同じ部屋に持ち込むと、迅速なサンプリングが可能になります。

先端が自然に尖っていない植物組織の場合は、スライドガラスにカミソリの刃を使用して、先細りの先端を切り取ります。発芽後10週間でSceletium tortuosumの葉を細いストリップに切り、それぞれに先細りの端を付けてポイントを形成します。鉗子を使用して、クランプする端の植物組織を優しく選択します。

鉗子で組織を保持し、慎重にクランプに移します。フレキシブルアームとワイヤーをクランプで調整し、組織をMSインレットに沿って配置します。各特定の質量分析計のイオンインレットからの最適な距離については、テキストを参照してください。

最初の試みでシグナル強度が低かった場合は、植物組織をイオン入口に近づけることができます。メソッドファイルをロードします。データファイルに名前を付け、ファイルの保存場所を設定します。

次に、[再生]をクリックしてMSシステムの電源を入れ、[開始]をクリックしてデータの取得を開始します。ゲルローディングチップ付きのピペットを使用して溶媒を塗布し、高電圧とユーザーの手との距離を最大化して保護します。信号が持続する限り、または適切なスペクトルが収集されるまで(通常は30〜60秒)データを集録します。

データ集録を停止し、MSシステムを一時停止します。取得後、ティッシュを取り外し、糸くずの出ないワイプでクランプを100%メタノールで洗浄します。データファイルを開き、ベースピーク質量クロノグラムを目視で確認します。

信号強度が約1,000万から5億であることを確認してください。小数点以下 4 桁までの M over Z のインクルード リストを含む新しいメソッド ファイルを作成します。グローバルリストとインクルージョンをクリックします。

PRM のプロパティで、フラグメンテーションエネルギーとその他のタンデム MS パラメータを選択します。メセンブリンアルカロイドのタンデムMSデータを取得するには、Z軸276.1583 M、Z軸290.1742 M、Z軸292.1897 Mのイオンを正規化衝突エネルギー35でフラグメント化します。次に、タンデムMSメソッドファイルと名前付きデータファイルをロードします。

MSシステムの電源を入れ、必要に応じて溶媒を追加してデータの取得を開始します。適切なスペクトルが収集されたら、通常は30〜60秒後に、取得を停止します。テキストプロトコルで説明されているようにデータ分析を実行します。

リーフスプレーMSおよびポジティブイオン化によるSceletium tortuosumの代謝プロファイリングの代表的な結果は、この研究 Z.In、合計9つのメセンブリンアルカロイドがリーフスプレーMSによって検出され、薬物同定が行われました。リーフスプレーMSトータルイオンカウント質量クロノグラムは、取得の全期間にわたって安定したシグナルが維持されたリーフスプレーMS実験の成功を表しています。各ピークについて、上の数字は分単位の時間で、下の数字は M over Z.Tandem 質量スペクトルで、Sceletium tortuosum カットリーフとリーフスプレー MS から作られた正イオン化で収集されました。アルカロイドのPuditic同定は、メセンブリンMおよびメセンブレノンM異性体、メセンブリンおよびメセンブリンMジヒドロの正確な質量および質量断片化から行われました。

このビデオを見れば、リーフスプレーMSを使用して植物代謝物を検出する方法について十分に理解できるはずです。リーフスプレーMSは、農薬などの外因性化合物だけでなく、内因性化合物の検出にも使用されています。