Name: ウサギに寄生したマダニの汎用性の高いモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 38 s
Description: 学ぶマダニの飼育法と宿主相互作用の研究。EVAフォーム製カプセルフレームを用いた簡便な給養システムで、硬マダニの各発育段階に対応し、実験ニーズに応じて調整可能です。

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我々 は、イブリン ル Naour、研究所フランス国立農業研究 (INRA)、アラン ・ ベルニエ (INRA) ホテル ル Bidel (ANSES) ・の技術的な支援を認めます。コンスエロ ・ Almazán は、卓越性、統合的な生物学の新興感染症 (LabEx IBEID)、パスツール研究所の研究室から奨学金によって支えられました。ウサギと羊が ANSES によって購入されました。この仕事の一部健康グラント RO1AI090062 Y の公園に国立衛生研究所によって資金を供給されました。博士ジェフリー ・ l ・ ブレアは、原稿のレビューに認められています。

注: この研究では、食物と一緒に標準ケージの中で維持されたウサギと水提供食品、環境・衛生・安全 (ANSES) 認定動物施設カルカソンヌ、フランスでのフランス語代理店の自由。動物が異常な皮膚反応や健康上の問題の合併症のための 2 つの経験豊富な技術者が 2 回毎日。実験室は、タイマー刻みの偶発的なエスケープを避けるために両面テープで戸口のインテリアをフレーミングによって確保されました。二人は、チームとして仕事しますが、1 つの経験豊富な人の手を借りずシングルを完了することは、メソッドが最適です。ほとんどのウサギがおとなしい、穏やかな、ストレスの兆候の操作中に発生します。ウサギは苦労して自体を傷つけていないことを確保するため、マニュアルの束縛が軽く片方の手で首の首筋の押しながらもう一方の手でサポートされている遂行されるかもしれない後部の四分の一。6 ヶ月歳、ランブイエ、水や食料が供給されたアドリブと毎日 2 回チェックされた雌の羊がアルフォール国立獣医学校 (ENVA) で生物医学的研究 (CRBM) 施設のセンターで保たれました。
注: 当研究室は、それぞれ動物実験が来る Anses/ENVA/UPEC、許可番号 01741.01、11/10/16-5 b、倫理委員会による供給目盛りにウサギや羊を使用する許可を受けています。実験では病原体フリーの目盛りのみを使用、白兎会、パリ、フランスでの養子縁組のためこの研究で使用されるすべてのウサギが提供されました。
1. カプセルの調製
<ol><li>EVA 発泡シート (図 1A) からカプセルの希望のサイズをカットします。外側丸 (図 1B) をウサギの皮膚に接着することと、偶発的な剥離を最小限に抑えるためにカプセルのコーナーします。 注: カプセルのフレームの厚さでなければならない約 8 mm 幼虫、若虫、マダニなど小さなダニ大人の種に使用 5 mm 厚発泡シート。1 cm 厚の発泡シートは大型実験的要件に基づいてタカサゴキララマダニの sp、 Hyalomma sp.などカプセルのサイズ変化などアダルト チックに適しています。たとえば、20マダニ大人カップル、200 ニンフまたは 1,000 の幼虫は、我々 内部カプセルのサイズを使用 5 × 5 cm26 × 7 cm2 7 × 9 cm2、それぞれ。</li>
	<li>カット幅 8 mm ストリップ粘着フック (材料の表を参照) をテープし、準備の EVA 発泡体フレーム (図 1C) に貼っています。</li>
	<li>カットは、自己接着ループから同じサイズのストリップ (材料の表を参照) をテープやフックの両側にバインドは、EVA 発泡体フレーム (図 1D) に接続されています。</li>
	<li>EVA 発泡体フレームのサイズに細かい蚊メッシュ (メッシュ サイズより小さい 50 μ m) の適切なサイズをカットし、(図 1Eと1 f) 自己接着ループに固執します。必要な場合は、オーバー ハングをカットします。 カプセルのこの型を使用経由で、留められた幼虫の偶発的な脱出を防ぐために幼虫の餌 (補足図 1) カプセルの異なるシーリング システムが必要ですが、ニンフとマダニ種の大人をフィードする注。フックとループ側。</li>
</ol>2. マダニ寄生する前にウサギの準備
<ol><li>ウサギのバックとサイド バリカン (図 2A) に使用するための領域を剃る。</li>
	<li>非刺激性ラテックス接着剤を準備されたカプセルの表面全体に適用し、1 分 (図 2B) を待ちます。</li>
	<li>(図 2および2 D) 約 3 分指で (特に角の部分) で肌に押して、カプセルを接着します。 メモ: 複数のカプセルを接着するとき (図 2 eおよび2 f) それらの間に少なくとも 5 mm のスペースを維持することを確認してください。我々 は通常、背骨の領域を避けるため、必要な場合にそれを使用するかもしれない。</li>
	<li>やや皮膚への愛着を視覚的に確認するカプセルを持ち上げます。非添付領域がある場合は、別の 3 分押すし、へらを使用して接着剤が適用されます。</li>
	<li>ジャケット損傷 (図 2G) を防ぐためウサギのリアの足に保護テープを適用します。 注: この手順はオプションであり、ティック カプセルに損傷しないジャケット損傷を防ぐため、主に。</li>
	<li>開口部から前足を置き、快適なままの呼吸を確認してウサギを作って首を絞めるウサギのジャケットを置きます。この段階で弾性エンクロージャを通じて後ろ足を配置しないし、ジッパー オープン (図 2H) を残します。</li>
</ol>3. マダニ寄生
<ol><li>針端をカットし、(図 1G) 綿と差し込まれる (1 または 5 mL によって、個体数の) プラスチック注射器に目盛りを配置します。タイマー刻みの少量を出没する場合は、鉗子を使用します。 注: ティック コロニー維持できる吸血ダニ female(s) その後孵化時に幼虫の面倒な操作を避けるためゴム バンド12で包まれた蚊メッシュで覆われてシリンジ (5 または 10 mL) 中彼らの卵を産むため、します。ホスト (図 1H) に適用されます。注射器に脱皮する完全に飽血幼虫を許可可能性がありますまた、(補足図 1I; 5 または 10 mL) ニンフとウサギの直接侵入のため。</li>
	<li>場所に注射器を介して開いているカプセルに深くコーナー、シリンジのプランジャーを押すことにより、ダニを接種します。プランジャーに接続されている残りのダニを削除するウサギ皮膚に向かってプランジャーをゆっくりとツイストし、同時に (図 2私) カプセルから引き出します。 注: 個人のいくつかはカプセルからクロールする場合に返品して鉗子を使用します。</li>
	<li>フックとループのテープを refastening してカプセルを閉じます。</li>
	<li>ウサギの後ろ足をジャケットと zip の弾性筐体を閉じた後部に配置します。 注: ください、快適さを確保するため、またジャケットを噛んでを避けるためには、ジャケットの首とウサギの間の人差し指を合うことができます。</li>
	<li>ウサギをケージ (図 2J) に戻ります。 注: 侵入からいっぱいダニのコレクションまでの時間は別のカチカチ種、発達段階によって異なります。たとえば、イクソデススカプラリスマダニ ヒマの成虫、幼虫と幼虫の餌の期間はそれぞれ 6-9、3-4、2-3 日。(2016)9レビン、Shumacher の実験室の条件の下で 29 の異なるマダニのライフ サイクルへの参照のリストを見つけることが。</li>
</ol>4. コレクションとダニの監視
<ol><li>ベンチにケージからウサギを取るし、ジャケットを解凍します。</li>
	<li>優しく両手でウサギを抑制します。カプセルを開くフックとループのテープ (図 2 Kと2 L) を緩めるには、し、飽血幼虫 (補足図 1) またはプラスチックの皿にニンフをブラッシングまたは大人のため (図 2L 鉗子を使用してダニを収集).部分的に供給 (十分にない) 場合ダニが必要、それらをデタッチするティック体操や鉗子を使用します。 注: 場合維持して目盛りのコロニーは 3.1 の手順でメモを参照してください。充血したダニの適切な湿気のあるおよび特定のカチカチ種によると温度条件を維持します。</li>
	<li>必要な場合は、カプセルを閉じるにフックとループのテープを締め。</li>
</ol>5. ウサギの回復
<ol><li>カプセルから完全に蚊メッシュを削除し、ウサギ (図 2M) にジャケットを残します。</li>
	<li>3-4 週間待つし、優しく角 (図 2N) のいずれかをトリミングすることによって、カプセルを削除してみてください。カプセルがまだしっかりと接続されている場合は、1 週間後にこの手順を繰り返します。</li>
	<li>ケージでウサギを回復させジャケットを削除します。 メモ: カプセルがオフ、異常反応、ウサギの皮膚を確認します。通常治療は必要ない、エモリエント ローションは刺激の場合使用できます。</li>
	<li>プロトコルや実験ができるように、回復したウサギ (図 2O) を再利用か、養子縁組のために提供することができます。 注: ウサギは、繰り返されるダニのインフェ ステーション13; 一度露出されるダニの抵抗性を獲得するに示されています。したがって、実験が必要としない限り、reinfestations は推奨されません。</li>
</ol>

<ol><li>Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. <a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Biology-Ticks-1-Daniel-Sonenshine/dp/019974405X">Biology of Ticks, Vol I</a>. , Oxford University Press. (2014).</li>
<li>Kröber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Parasitology%22%5BJournal%5D)">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).</li>
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</ol>

著者が明らかに何もありません。

このプロトコルの全体の最も重要なステップは、剃毛肌にしっかりとカプセルを接着することです。このため、少なくとも 3 分間一定の圧力は、コーナーで特に重要です。それはそれらを適用する重要なカプセルにダニを接種シールの中にカチカチのエスケープを避けるためにオープンされているものから反対側の隅に深く。実験を計画するときは、すべてのカプセルが咀嚼や傷によって損傷を避けるためにジャケットで覆われていることを確認します。ジャケットの頸部はウサギが快適なまま、十分に緩いが追突しないようにタイトな十分なことを確認します。
記載した技術の主な利点の 1 つは、そのシンプルさとサイズの面でその変更とカプセルの数を使用することができます。私たちの実験中にカプセル、皮膚の剥離は認められなかった。ただし、時折ウサギ ジャケット (しかしないカプセル) 被害が発生します。
ウサギでは、我々 は、カプセルに入って、完全に充血した戸建のタイマー刻み (幼虫と若虫など主に未熟な段階) 脱水高速ウサギの温度を観察しました。このため、特定のカチカチ種と、剥離後すぐ...

ハード タイマー刻み (された) 低速送り節足動物としてよく知られているし、数日間ホストに付けることができるまたは週間、種に応じて、発達段階1。これらの義務の吸血性節足動物はさまざまな細菌、原虫、ウイルスなどの病原菌の媒介し、このように人間と動物の健康1に重大なリスクを提示します。ときダニの生物学を勉強したり、新しい制御法の評価、飼養管理方式の効果的な目盛りの確立は効果的に実験を設計し、研究の目的を達成するために重要。最近、(生きている動物の使用を避ける) いくつかの人工チック給餌システムの開発2,3,4をされている、可能な限り使用されるべきであります。しかし、これらのシステムは、ティック、生きている動物の給餌を完全に置き換えることができるしていない、彼らは科学的な研究に必要な多くの生理学的な条件のための適切な代替ではありません。したがって、いくつかのケースで実験動物のホストの使用は、実験結果の妥当性を保証することが重要です。
研究所ニュージーランドのウサギは、いくつかマダニ マダニ種5,6,7,8,9の最も適切なアクセス可能なホストに示されています。ウサギの餌目盛りの 2 つの一般的な戦略が頻繁に使用されている: a) コットン布や靴下6、7で覆われているウサギの耳に餌と b) 綿袋9、ナイロン ボトル10またはネオプレンで給餌部屋11ウサギの背中に釘付け。ウサギの耳に餌はエレガントなシステム タイマー刻み (特に初期段階、幼虫や幼虫) 可能性がありますクロールし、動物のために快適ではないし、ダニの餌やのリカバリの監視は、外耳道の奥深くに添付充血ダニは難しい。このシステムは動物のためのかなりの不快感を表すエリザベスつばによって保護されたソックスで覆われて完全に耳に 2 つだけのティック グループも。他システムの9,10,11は間違いなくより高度なマダニ植民地維持のために適して。しかし、ウサギは、実験グループの数だけでなく、授乳室の変更のサイズ/形状に制限されます。さらに、これらのプロトコルがよく傷および手入れをすることを防ぐためにエリザベス朝の首輪の使用を避けるために後部のウサギの足をちょこちょこ必要があります。
ここエリザベス カラーの必要性を除去する実験中にちょこちょこチャンバ ジャケットで覆われて戻ってウサギに釘付けのハード タイマー刻みの複数のグループをフィードする単純な非骨の折れると非常に効果的な手法を提案します。具体的には、当社のシステムは、蚊メッシュで覆われ、剃毛のウサギに戻って高速凝固 (3 分) 非刺激性ラテックス接着剤で接着エチレンビニル アセテート (EVA) 発泡シートから作られた弾性のカプセルを使用します。このテクニックにより、望みの大きさや形の複数のカプセルの添付ファイルと実験後の数週間、ウサギが完全に回復します。システムは主にマダニ幼虫および大人の段階に適したが、少しの変更で幼虫も餌の使用することができます。供給ハードのティックの EVA フォーム ベースの方法は、脊椎動物のホスト (本稿での選択肢の 1 つとして示されて) いる羊などの他の種類に適応する可能性があります。

<table><tbody><tr><td>ニュージーランドウサギ(2.5-3.5 kg)</td><td>チャールズリバー&nbsp;</td><td>ひずみコード571</td><td></td></tr><tr><td>ランブイエ羊</td>地元の<td>プロバイダー-ダニのない農場</td><td>女性6ヶ月</td><td></td></tr><tr><td>EVAフォーム厚さ5ミリメートル&nbsp;</td><td>コスプレショップ</td><td>EVA-PE451kg(950mm x 450mm)</td><td>コスプレショップの10mmPE45kgフォームは、大きな大人のダニ種に使用できます</td></tr><tr><td>フォームシート9 "X 12" 6 mm-ホワイト</td><td>アマゾン</td><td>FOAMSHT6-20</td><td>6 mm-EVAフォームは、コスプレショップのフォームの代替品としてAmazon経由で注文できます</td></tr><tr><td>フルレングスのウサギのジャケット&nbsp;</td><td>ハーバード・イスクライム社&nbsp;</td><td>620077-中、6270078-大&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>無毒のラテックス接着剤&nbsp;</td><td>涙の修復&nbsp;</td><td>ファブリック&レザー接着剤</td><td></td></tr><tr><td>管状綿整形外科用ストッキネット</td><td>BSNメディカル</td><td>9076(幅12-15 cm)</td><td></td></tr><tr><td>蚊メッシュ&nbsp;</td><td>Loisirs Creatifs</td><td>非常に細かいフィルターナイロンメッシュ生地メッシュサイズ</td><td>50&mu未満の任意の蚊のメッシュ、またはカーテン素材。mが適しています。</td></tr><tr><td>白血球形成体&nbsp;</td><td>BSNの医療S.A.S</td><td>LF 72361-02</td><td></td></tr><tr><td>付着力の面子テープ AIEX</td><td>の店 AIEX</td><td>39.37フィート/12mのホックおよびループ自己付着力テープ ロール、20のmmの幅、白い色</td> Amazon<td></td></tr><tr><td>の速い乾燥のり</td>によってFullfiled &nbsp;<td>フィクストアウト&nbsp;</td><td>瞬間接着剤</td><td></td></tr></tbody></table>

ウサギに寄生したマダニの汎用性の高いモデル

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

ダニ研究の動物の使用は、さまざまな実験室でマダニの植民地の維持を含む実験の目的のため重要です。ダニ、(卵) を除くすべての発達段階は、吸血性、血食事、脊椎動物のホストに接続されている場合を取得自分の生活サイクルが正常に完了のために不可欠。ウサギのハードのダニの餌に簡単に開閉式のカプセルを使用する単純な方法を示します。提案手法の利点には、そのシンプルさ、短い期間と実験の特定の要件のニーズに最も重要な汎用性の高い調整があります。メソッドになります動物全体的な要件を軽減しながら複数の段階または別の実験グループの供給を可能にする同じ動物に (各種サイズ) の複数室の使用可能。非刺激性、簡単にアクセスできる材料を使用ことができます簡単に実験から回復し採用のために提供または倫理的なプロトコルは、それを許可されている場合を再利用、動物に不快感を最小限に抑えます。

ここで提案する初めてのマダニは EVA 発泡体の供給の詳細なステップバイ ステップ法 (図 1および 図 2) のジャケットで覆われて剃毛ウサギの背中に適用されるカプセル。このプロトコルは、同じホスト上の別のティック グループが必要とマダニの大量飼育にも使える各種実験に適しています。研究室で主に吸血ダニはマダニ個体の適合技術自体よりもむしろ特定のカチカチ種のウサギ ホストの適合性に依存します。EVA 発泡体を用いてウサギをバックに釘付けのカプセルは羊 (など、研究室のホストの他のタイプに適応する種 (表 1) と 5 月も様々 なマダニのさまざまな発達段階を供給する非常に成功した証明されています。図 3)。
...

ウサギをハードのダニを餌にシンプルで汎用性の高いシステムを提案します。私たち非骨の折れるプロトコルやすい材料を使用して、さまざまな実験的設定の要件に応じて調整することができます。メソッドでは、快適な監視および/または全体の給餌期間中にダニのサンプリングをことができます。

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

この方法は、硬いコロニーを維持し、ダニ生物学または宿主ベクター病原体相互作用を研究したり、これらの医学的に重要な属性の異なる制御尺度を評価するのに適している。これらの技術の主な利点は、そのシンプルさと短い期間です。そして最も重要な研究の実験ニーズに従って、修正される能力。この方法は、実験室のウサギのハードダニの異なるライフステージを供給するために使用することができますが。また、羊などの他のホストシステムに適応することができます。溶け込み時の偶発的な剥離を最小限に抑えるために、外側のコーナーを丸めるEVA Foamのシートから適切なサイズのカプセルフレームを切断することから始めます。自己接着フックテープの幅8ミリメートルのストリップを4枚カットし、フレームの側面にストリップを取り付けます。自己接着ループテープから同じサイズのストリップをカットし、フレーム上のフックテープにバインドします。次に、フレームを覆うのに十分な大きさの松の蚊のメッシュをカットし、必要に応じて張り出した材料をトリミングし、自己接着ループストリップにメッシュを貼り付けます。カプセルの準備ができたら、ウサギを手動で拘束し、動物の背中と側面の実験領域を剃ります。速乾性非刺激性ラテックス接着剤を、調製したカプセルの全面に塗布し、1分後にカプセルを皮膚に軽く押し付けます。プロトコルの最も重要なステップは、皮膚にカプセルのフィールドアタッチメントです。そのため、特に少なくとも3分間は角部でウサギの皮にカプセルの一定の圧力が必要となる。3分後、カプセルを少し持ち上げて、スパチュラを使って付着を視覚的に確認し、取り付けられていない部品に接着剤を塗布します。カプセルが固定されたら、ジャケットの損傷を防ぐために後足に保護テープを貼り、前脚を前のジャケットの開口部を通して、動物とジャケットの間の1本の指幅にジャケットの首を締めます。ダニの侵入を開始するには、まず、カットオフチップで注射器にプラスチック綿栓のプランジャーエンドにダニを追加します。次に、カプセルの片隅からメッシュを持ち上げ、注射器をカプセルの奥深くに入れ、開口部を通ります。スポイトにプランジャーを挿入して、動物にダニをはびかせます。その後、ゆっくりとカプセルからプランジャーを引っ張り出しながら、残りのダニを取り除くために皮膚に向かってプランジャーをねじります。すべてのティックが配信されたら、フックとループテープを再取り付けします。ジャケットの裏側をジッピングしてジャケットを閉じ、ウサギの後ろ足を後部弾性エンクロージャに挿入します。その後、そのケージにウサギを返します。適切な実験時に、ウサギをベンチに移し、ジャケットを解凍します。ウサギを穏やかに拘束し、カプセルを開き、鉗子を使用して完全に魅了された成人とダニのツイスターを収集して、部分的に供給された

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生物学

実験用ラットとマウスにおけるエクト - とEndoparasitesの診断

このビデオでは、細菌の漏れを防ぐために骨ワックスを使用してウサギの骨髄に細菌感染を外科的に誘発する技術について説明しています。このウサギモデルは、骨感染症の治療や骨の再生の研究に使用することができます。...

骨感染症のウサギモデルの生成:骨髄に直接細菌を注入して慢性感染を誘発する技術

ライム病は、北米で最も一般的に報告された媒介疾患である。原因物質、 ボレリア·ブルグドルフェリティックマダニによって送信されたスピロヘータ細菌である。動物モデルでの感染の伝播および検出は、我々はここで説明するダニ送り、使用することによって最適化されています。...

ライム病研究における送信および外因診断法のために動物にダニの摂食

健康的な実験室飼育の生産は、ダニの生物学の研究、およびダニ病原体相互作用に不可欠であるダニ。ここでは、費用対効果およびマウスにストレスの少ないです未熟ダニ供給のための単純なプロトコルを示しています。...

飼育<em&gt; Ixodes肩甲骨、</em&gt;ブラック・ティック・ティック：未熟期をマウスに与える

本研究では、実験用マウスに付着したカプセルを用いて、硬ダニのニンファルおよび幼虫段階の給餌システムを開発した。供給カプセルは、柔軟な材料から作られ、少なくとも1週間はしっかりとマウスに取り付けられたままで、ダニの供給の快適なモニタリングを可能にします。...

実験室マウスにおける未熟なハードティックステージのカプセルベースモデル

本プロトコールは、ダニ唾液腺および精製された細胞外小胞からのマイクロRNAの単離を記載する。これは、一般的に使用される試薬と消耗品を組み合わせた普遍的な手順です。この方法はまた、少数のダニの使用を可能にし、容易に配列決定することができる高品質のマイクロRNAをもたらす。...

ダニ Ex Vivo 唾液腺培養物および細胞外小胞からのマイクロRNAの単離

ここに提示されるのは、様々なダニの生活段階の部分的または完全な充血を可能にするために、人工膜システム を介してインビトロで...

肩甲骨イクソデスのためのダニ人工膜給餌

この記事では、臨床研究のためにヒトを幼虫の Ixodes scapularis...

幼虫 Ixodes scapularis Ticsへのヒトの実験的曝露モデル

ウサギの日常的な飼育手順の積極的な強化を含むトレーニングプロトコルが開発され、ウサギが毎週の一般検査で訓練された行動を確実に示したため、成功することが証明されました。輸送ボックスでウサギを拾うことは、従来の取り扱い技術よりも嫌悪感が少なかった。...

日常的な飼育手順を改善するための実験用ウサギのトレーニング

酵母の遺伝学的研究は、細胞のDNA代謝におけるヒト遺伝子の分子や細胞機能を調べるために用いることができる。メソッドは、人間の遺伝的特性に記載されている...

人間のDNA修復タンパク質の遺伝的研究は、モデルシステムとして酵母を使用

学ぶマダニの飼育法と宿主相互作用の研究。EVAフォーム製カプセルフレームを用いた簡便な給養システムで、硬マダニの各発育段階に対応し、実験ニーズに応じて調整可能です。

ウサギに寄生したマダニの汎用性の高いモデル

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