Name: 哺乳類セルラインの嫌気性成長と維持 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: 学ぶ哺乳類細胞の長期嫌気性培養法。酸素毒性下での細胞生理学研究や宿主病原体相互作用、がん細胞転移の解析に応用可能。17日間の生存を達成し、個別化医療への貢献が期待される革新的プロトコルです。

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1. 様々 な哺乳類細胞の嫌気性培養メディアを準備します。
<ol><li>
無酸素細胞文化25の完全な PS 74656 培地を作る。
	<ol>
<li>50 mL の脱イオン水の亜硝酸イオンの 17.25 g を溶解して滅菌亜硝酸原液 (100 x; 5 M) をし、それを殺菌するためにフィルターします。</li>
		<li>110 mg/l L-グルタミン, ピルビン酸ナトリウムと 10% 牛胎児血清の 584 mg/L の低血糖 DMEM (ブドウ糖 1 g/L) の 50 mL あたり亜硝酸原液 0.5 mL を追加 (FBS; 熱不活化)。 注: FBS 濃度の有毒である 10% より大きいを使用します。テスト 1 つの癌細胞株は、注意、亜硝酸 (MDA MB 231、乳房癌細胞株) メディアの低い耐性を持っていたおよび、したがって、亜硝酸の不在で育った。さらに、PS 74656 媒体が調べたすべての細胞の成長をサポートされています (n = 9)、特定の細胞 (例えば、Vero 細胞) 細胞濃度が高いと高グルコース (4.5 g/L) DMEM で PS 74656 で高い生存率を展示25。</li>
		<li>滅菌 50 mL の円錐形遠心チューブに培地 20 mL を配置します。キャップを締めていません。それは緩いはずです。</li>
		<li>解消ガス媒体で真空ベルジャーのチューブを配置することによって、約 45 ° の角度、媒体の表面積を最大化します。</li>
		<li>部屋の温度で真空ポンプまたは同等のものを使用して真空を適用します。泡はもはや観察されない (24-48 h) までの真空を維持します。</li>
		<li>瓶からチューブを削除し、すぐに中への空気の導入を最小限に抑えるためにチューブをシール、キャップを閉じます。</li>
		<li>商業の嫌気性チャンバーにチューブを置きます。</li>
		<li>チューブ キャップを緩めます、少なくとも 24 のチャンバーで嫌気性ガスの混合物の平衡にチューブの大気を許可します。 注: それが尽きるまで媒体を商工会議所でなければなりません。チューブ フラッシュ プロセスをスピードアップするため無菌転送ピペットを使用して無酸素ガスの混合物で、少なくとも 3 倍は N、CO2H2から成っている無酸素ガスでいっぱい2.
</li>
		<li>ドガのすべてのチューブ (10-15 分) チューブをシールし、商工会議所に配置する前に上記のように嫌気性チャンバーに配置されます。使用前に 1.5-2 mL 転送ピペットを使用して嫌気性ガス混合物でそれをフラッシュまたは無酸素とフラッシュされているピペット チップ ガスの少なくとも 3 倍。</li>
		<li>嫌気性チャンバー中に無菌脱マイクロ遠心チューブに媒体の 100 μ L を取り外してチャンバ内酸素プローブを使用して溶存酸素のそれをテストします。 注: 使用する前に製造元のプロトコルあたり酸素電極を校正します。正しく脱と釣合い嫌気性ガス混合メディアの測定値は、0 です。 注意: 測定値は 0.3 ppm の酸素を超えている場合、は、媒体を平衡により多くの時間が必要なので、嫌気性チャンバー内のメディアをインキュベートに進みます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 無酸素栽培様々 な哺乳類細胞株の
<ol><li>
指定日-1
	<ol>
<li>3 24 ウェル プレート (80% 合流) の細胞の十分な数を提供するために、無酸素と比較文化コントロールの 90% 合流 T150 フラスコ細胞 (37 ° C、5% CO2) に拡張します。 注: この研究では、hela 細胞 229 および Vero 細胞が使用されました。このプロトコルはまたテストされ、成長と 7 他のセル行の25の維持の成功した証明しました。</li>
		<li>吸引フラスコからメディアを取り出して、HBSS の 10 mL で洗います。</li>
		<li>5 ml のトリプシンのメディアを交換してください。セルを視覚的にプラスチックからデタッチするまでフラスコを揺り動かしなさい。、トリプシンのほとんどを吸引し、付着性のセルを除去するフラスコをタップします。高グルコース DMEM の 10-15 mL を追加 (グルコースの 4.5 g/L、110 mg/L L-グルタミン、10% の FBS、ゲンタマイシンの 50 μ g/mL)、トリプシンを不活化します。</li>
		<li>すべての細胞塊が中断されるまでに 25 mL のピペットを使用してセルをカップ刻んだ。</li>
		<li>セルをカウントし、標準検定とトリパン ブルー色素排除法または自動化された同等を使用しての生存率を決定します。</li>
		<li>105セル/mL x 2.24 の細胞密度に前述高グルコース DMEM でセルを中断します。</li>
		<li>24 ウェル培養プレートの井戸に細胞懸濁液の 1 mL を追加 (2.24 105細胞/ウェル x; 80% 合流)。無酸素の文化とコントロールによる文化の種子 1 プレート。</li>
		<li>37 ° c 24 時間の培養条件 (5% CO2) で細胞を孵化させなさい。 注: セルは様々 な広い板にめっきすることが。ただし、フラスコで無酸素成長細胞を播種酸素導入のリスク システムにしない限り実行されます注意を払っても大気中のガスを完全に洗い流す。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
指定日 0
	<ol>
<li>平地培養 24 時間後嫌気性チャンバー (商業嫌気性チャンバー; に無酸素の成長のためプレートを配置します。図 1)。</li>
		<li>嫌気性チャンバーに 24 h の順応されて抗生物質無料デ熟れた PS 74656 媒体媒体をすぐに変更します。湿ったタオルでコンテナーにプレートを置き、疎の水分を維持するためにそれを閉じます。 注: 平地成長板は、すべての治療法は、大気条件下で行われる例外と同じ処理されます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
指定日 1
	<ol>
<li>嫌気培養の日 1 は 80% N210% の CO210% H2の標準的な嫌気性ガスの混合物が含まれている商業嫌気性チャンバー内培養 24 時間後に開始します。</li>
		<li>さまざまな期間のセルを孵化させなさい。</li>
		<li>時間の経過とともに色の変化のための嫌気性媒体を監視します。 注: 赤オレンジからマゼンタの色シフト信号媒体を変更する時間です。発生するまで 2 週間かかるでしょう。赤オレンジ黄色に培地の色ずれは、細菌汚染の存在を示します。</li>
		<li>中は赤からマゼンタに変化したときは、吸引して無宿者セルを削除します。</li>
		<li>脱、嫌気性ガスの無宿者のセルと吸気の使用済みメディアの場所平衡 microfuge の管、シールが、安全性し、遠心分離 (326 gx; 10 分室温で) それらを確認しながらチューブを閉じます。すぐに井戸に吸気のメディアを新しい脱 PS 74656 培地 1 mL に置き換えます。</li>
		<li>それを開く前に嫌気性チャンバーに播種細胞および microfuge の管を配置します。使用済み培地を吸引し、新鮮な脱 PS 74656 媒体および microfuge の管に 1 ml の容量にそれを置き換えます。</li>
		<li>24 ウェル培養プレートのウェルにチューブからセルを返します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 嫌気培養細胞の顕微鏡観察による形質細胞分化の評価
<ol><li>
嫌気性チャンバー中に嫌気性ガス混合物でフラッシュ ジッパーのついた箱にプレートを置き、ボックスを閉じます。 注: ボックスは、水分を提供し乾燥からプレートを防ぐため少し湿らせたペーパー タオルを含める必要があります。顕微鏡、サンドイッチ袋は薄いのでベストを働かせます。<ol>
<li>顕微鏡下で細胞を観察するには、完全に袋を密封、商工会議所から取り外します。</li>
		<li>慎重に板の上にビニール袋を伸ばす、カメラの添付ファイルと逆の位相差顕微鏡を使用してセルを調べて、様々 な倍率での顕微鏡写真を取る。</li>
		<li>室に密封された袋のプレートを戻り、2.3.3 の手順で説明するように孵化を続けます。</li>
		<li>懸濁液にある無宿者セルを別々 に分析するには、手順 2.3.5 に示した手順に従います。 注: これらの細胞は好気性をテストするため使用できます。 または嫌気性チャンバーこの人口の特定のテストのために返すことができます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Plotkin, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+the+long-term+cultivation+of+mammalian+cells+in+the+absence+of+oxygen%3A+Characterization+of+cell+replication%2C+hypoxia-inducible+factor+expression+and+reactive+oxygen+species+production%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+and+Cell%22%5BJournal%5D)">A method for the long-term cultivation of mammalian cells in the absence of oxygen: Characterization of cell replication, hypoxia-inducible factor expression and reactive oxygen species production.</a> Tissue and Cell. 50 (Supplement C), 59-68 (2018).</li>
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<li>Plotkin, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+the+long-term+cultivation+of+mammalian+cells+in+the+absence+of+oxygen%3A+Characterization+of+cell+replication%2C+hypoxia-inducible+factor+expression+and+reactive+oxygen+species+production%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+and+Cell%22%5BJournal%5D)">A method for the long-term cultivation of mammalian cells in the absence of oxygen: Characterization of cell replication, hypoxia-inducible factor expression and reactive oxygen species production.</a> Tissue and Cell. 50, 59-68 (2018).</li>
</ol>

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このメソッドは、酸素のない状態で長期間培養初めて哺乳類セルを表します。現在の観測に基づいて、無酸素成長機能を介して非発酵的経路嫌気性成長が表現型の相違で起因した哺乳類細胞ラインの28日間で普遍的なようであります。これはテストしたすべての細胞の観察されました。嫌気培養細胞の比率を増やす丸くなった、懸濁液のような人口を開発し、レプリケートすることができた。基板に付けられて残った二次電池の種類しかし、細胞の形態は、スピンドル (樹状突起) 図形に戻ります。これらの知見は解析と無酸素培養栽培に関する見解の一般的なエラーを指摘します。哺乳類細胞培養条件 (5% CO2) 栽培がラウンド アップ、デタッチすると、彼らが死んでいることを一般に認められます。逆に、酸素の場合は、不在を切り上げている細胞を育つセルのため正しく、戸建、単に形態学的に異なる細胞の集団。
無酸素の成長条件の最適化はセルライン依存です。中 PS 74656 全体的にサポートされているすべてのセルの成長線平地と MDA-MB-231 を除い...

固形腫瘍、幹細胞ニッチと粘膜の表面を裏から細胞が低酸素レベル、無酸素1,2,3、4を含む環境で存在します。通常の生理学的状態の酸素は低酸素血症低酸素 (酸素の完全な欠如)5,6のそれを越える異なります。大気中の酸素に悪影響哺乳類細胞複製劣化酸素条件下での in vitro細胞成長を最適化できる実現は、1970 年代初頭に報告されました。リヒターら7は、酸素レベル (低酸素) の 1-3% が大気中の酸素 (20%) と比較してめっき効率を高めることを示した。ヒト二倍体細胞の寿命は、低酸素培養条件8にも拡張されます。
酸素店が劣化 (例えば、激しい運動中に)生体内で、低酸素の条件が発生する発酵 (嫌気呼吸) に好気性の呼吸からの骨格筋における ATP の生産をスイッチにより前記の乳酸9の最終製品。悪性腫瘍、内部の病理、腫瘍の質量は貧しい血管新生による無酸素に低酸素10。義務づける嫌気性菌1によって植民地化腫瘍インテリアで腫瘍内部に限られた血流の影響は独立して検証します。機械論的に、低酸素の腫瘍細胞の生存は、低酸素誘導因子 1 α 遺伝子の発現に依存すると考えられる (HIF1-アルファ)、低酸素4,11初期の自発的な応答であります。,12. HIF1-アルファ、 HIF1をバインド熱ショックタンパク質に起因する低酸素の条件の下で-アルファ プロモーターと遺伝子転写12活性を上昇させる。これら熱ショック蛋白質は腫瘍低酸素環境で見られる様々 な表現型の誘導を支援するためと考えられています。これらの表現型は、細胞膜糖輸送担体の発現増加と解糖系 (Warburg 効果)13の率を表わします。その結果、乳酸発酵するミトコンドリアの酸化的リン酸化からスイッチです。
無酸素の生存はまた生存現象14,15をサポートするグルコースに選択肢を利用できます。最高の学び哺乳類の例はほくろのラットは、果糖駆動糖発酵経路14を介して酸素なしにほぼ 20 分間生き残ることができます。特定の魚の代替の適応が発生します (例えば、大幅に長く生き残ることができる鯉 [フナsp] の期間にターミナルの副産物としてエタノールと解糖系を使用して)15。両方のケースで発酵は酸素のない状態での生存を可能に代謝を駆動します。無酸素の生存のための現在の仮説は、長い間HIF1として-16嫌気的条件下で発生する酸素の必要性なしに、低酸素症、ミトコンドリア呼吸時にアルファがアクティブします。さらに、細胞は細胞生存17に有害であることを証明できる酸化ストレスを避けるので発酵経路の低酸素・無酸素の生存のための使用が腫瘍の生存率を高めることを仮定します。この仮説は、心筋、低酸素血症が腫瘍細胞17は、酸化ストレスを減少させることを示す最近の研究によってサポートされます。
日には、無酸素の哺乳類細胞の生存のための発酵経路の本質染み付いている文献、ため、できないこと 3 日以上酸素の完全な欠如に哺乳類細胞には、大部分の。しかし、細菌の嫌気性の生存のためには、解糖系の代わりに発生します。ある特定の細菌の窒素または硫酸 (他の化合物) の間では、酸素18の不在のチトクロム酸化酵素システムのターミナル電子アクセプターとして使用できます。ミトコンドリアが細胞にエネルギーを提供する 154 万 2000 年19 海の酸素化前に、の最後の普遍的な共通の祖先から分岐後並行発生した細菌や真核生物の進化が推定されています。.研究者は、分離ミトコンドリアがターミナル電子アクセプターとして亜硝酸の酸素の存在下で ATP を作り出すことができることを示しているので細胞が酸素のない状態で 3 日間よりも長い期間にわたって機能すると仮定するが妥当です。20,21,22,23. 本研究の方法論は多数の細胞の嫌気性の哺乳類細胞の成長のためのユーティリティ。

<table><tbody><tr><td>ホイットニーA35嫌気性チャンバー</td><td>ドン・ホイットリー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>Microbiology International</td> チャンバーの<td>前面を取り外すことができるため、ポータルを通過する心配なく、機器を中に入れるのが簡単です。</td></tr><tr><td>CO2インキュベーター</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>3531</td><td></td></tr><tr><td>組織培養フード</td><td>Labconco</td><td>DO55735</td><td></td></tr><tr><td>ピペットエイド</td><td>ドラモンド</td><td>4-000-100</td><td></td></tr><tr><td>滅菌トランスファーピペット</td><td>サンタクルーズ</td><td>sc-358867</td><td></td></tr><tr><td>50 cc 滅菌円錐形遠心分離チューブ</td><td>DOT</td><td>451-PG</td><td></td></tr><tr><td>真空瓶</td><td>Nalgene 111410862889</td><td>BTA-Mall 5311-0250</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 高グルコース (4.5 g/L)</td><td>CellGro</td><td>10-017-CM</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 低グルコース (1 g/L)</td><td>CellGro</td><td>10-014-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>VWR</td><td>1500-500</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>VWR</td><td>20-021-CV</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン</td><td>VWR</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td>ギブコ</td><td>15750-060</td><td></td></tr>滅菌<tr><td>ピペット</td><td>CellTreat</td><td>229210B、229205B</td><td></td></tr><tr><td>組織培養フラスコ(T75またはT150)</td><td>サンタクルス</td><td>sc-200263、sc-200264</td><td></td></tr><tr><td>24ウェル組織培養処理皿</td><td>ドット</td><td>667124</td><td></td></tr><tr><td>うれしいジップロックサンドイッチバッグ</td><td>ジップロック</td><td>コストコ</td><td></td></tr><tr><td>逆位相顕微鏡(10、20 40倍対物レンズ、カメラ付き)</td><td>Nikon Eclipse</td><td>TS100</td><td></td></tr><tr><td>trypan blue</td><td>Invitrogen</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>血球計算盤</td><td>Invitrogen</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>Countess 自動セルカウンター</td><td>Life Technologies</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>レイニン マイクロタイターピペット</td><td>メトラー・トレド</td><td>レイニンクラシックピペット PR-100</td><td></td></tr><tr><td>マイクロタイターチップ</td><td>サンタクルスバイオテクノロジー</td><td>sc-213233 & sc-201717&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>試験管ラック(50ccチューブ)</td><td>ラボデポ</td><td>HS29050A</td>亜硝酸ナトリウムシグマ https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigald/237213?lang=en&region=US <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>蓋付きクリアボックスRosti</td><td>Mepal</td><td>ラバーメイド</td><td></td></tr><tr><td>ペーパータオル</td><td>ハウスセル</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スクレー</td><td>パーCellTreat</td><td>229310</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>社内で70</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%エタ</td><td>ノールフィッシャーサイエンティフィック</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ遠心チューブ滅菌サンタ</td><td>クルス</td><td>sc-200273</td><td></td></tr><tr><td>バイオハザードバッグホルダー付き(デスクトップ)</td><td>ヒースローサイエンティフィック</td><td>HS10320</td><td></td></tr><tr><td>ニトリル手袋</td><td>VWR89428</td><td></td><td></td></tr><tr><td>酸素電極</td><td>eDAQ</td><td>EPO354</td><td></td></tr><tr><td>pHメーター</td><td>Jenway</td><td>3510</td><td></td></tr><tr><td>pHペーパー/ pHydrion</td><td>Sigma Aldich</td><td>Z111813</td><td></td></tr></tbody></table>

哺乳類セルラインの嫌気性成長と維持

Anaerobic Growth and Maintenance of Mammalian Cell Lines

腫瘍と幹細胞ニッチにおける中点と共に最も粘膜表面が無酸素体の地理的な領域です。先行研究により平地 (空気 5% CO2 ) で孵化が示す低酸素または限られた可能性 (2-3 日) で無酸素インキュベーション (遊離酸素の不在) 結果続く条件 (低酸素のレベル)。小説の方法論は、(少なくとも 17 日; 最大時間テスト) の無酸素の培養を可能にする開発されました。この手法の最も重要な側面は、システムに酸素が生じないことを確認することです。これは、脱ガス、メディア、フラッシュ チューブや料理、フラスコ、ピペット、嫌気性ガスの混合物 (H2CO2N2) と無酸素 (無酸素) 環境に釣り合うために材料を許可することによって続いてによって得られる使用する前に。ときに得られる顕微鏡写真には、成果物が含まれていないことを確認するため顕微鏡写真を取得、追加のケアを行使しなければなりません。酸素のない場合は、細胞の形態を大幅に変更します。嫌気成長のすべてのセルの 2 つの異なる型が記載されています。成長し、酸素のない状態で哺乳類の細胞を維持する能力は、細胞生理学、モデルの相互作用、および小説がん新薬開発の生合成経路の特性の解析に適用できます。

このプロトコルの強さには、長寿と複数の細胞の成長のサポートと深遠な変化と細胞形態25の発散があることの認識があります。この研究の最も重要な要素は、転送と厳密な嫌気下で細胞の維持です。これは、嫌気性チャンバー構成プロトコル (図 1) を最大化する顕微鏡または他のテストのいずれかのセルが削除される保証は、密閉された環境で保たれます必要があります。までに、無酸素生存の範囲細胞不滅癌の 15-17 日であったし、を 17 日の変形細胞 (無酸素成長のため上映 9 セル行)。実行可能なセルのレベルこれらの細胞は、無酸素状態に移動した後は、彼らが安定する前に少なくとも 10%、90%、最大を避けた。デュアルの表現型に戻されるすべての細胞 (テザーと無宿者) 時間経過と共に増加中断のセルの割合。数週間の長期の潜伏後でさえも残っていくつかの連結の細胞が、細胞の大部分は、丸みを帯びた無宿者形態 (図 2)。報告、これらの無...

ここでは、確立されたセルラインの嫌気の長期培養を可能にする新しい手法について述べる。テストされた最大生存期間は 17 日です。このメソッドは、細胞毒性薬のテストと、anoxically 複製細胞の生理機能の探索に適しています。

Most mucosal surfaces along with the midpoints in tumors and stem cell niches are geographic areas of the body that are anoxic. Previous studies show that ...

この方法は、無酸素細胞の生理機能を特徴付けるために使用でき、宿主病原体の相互作用、幹細胞の分化、がん細胞の転移、および治療感受性における重要な質問に答えるのに役立ちます。これは、哺乳動物細胞の長期無酸素培養を可能にする最初の記載されたプロトコルです。この技術の意味は、酸素毒性のために、複数の細胞タイプが成長のために低酸素環境を好むため、標的を絞った個別化されたがん治療と若返り療法にまで及びます。この方法は、細胞の嫌気性呼吸と代謝に関する洞察を得ることができますが、幹細胞培養などの他のシステムにも適用できます。一般的に、この方法に不慣れな人は、酸素汚染を防ぐために細心の注意を払わなければならないため、苦労するでしょう。酸素汚染を排除するために必要な注意は直感的ではないため、この方法を物理的に実証することは非常に重要です。まず、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ウシ胎児血清を含む低グルコースDMEMに0.5ミリリットルの亜硝酸塩原液を加えます。次に、20ミリリットルの培地を滅菌済みの50ミリリットルの円錐形遠心分離チューブに入れます。次に、チューブを真空ベルジャーに45度の角度で置いて、媒体を脱気します。真空ポンプを使用して、室温で真空を適用します。気泡が観察されなくなるまで、真空を24〜48時間維持します。ベルジャーからチューブを取り外し、すぐにキャップを閉じて、媒体への空気の混入を最小限に抑えます。次に、チューブを準備した嫌気性チャンバーに24時間置き、キャップを緩めます。チューブがチャンバー内にある間に、100マイクロリットルの培地を滅菌済みの脱気マイクロ遠心チューブに移します。次に、酸素プローブを使用して、チューブの溶存酸素をテストします。まず、T150フラスコで細胞を90%コンフルエントまで増殖させます。吸引によってフラスコから培地を取り出し、フラスコを10ミリリットルのHBSSで洗浄します。次に、取り外したHBSSを5ミリリットルのトリプシンと交換し、細胞がプラスチックから剥がれるまでフラスコを攪拌します。フラスコからほとんどのトリプシンを吸引し、フラスコを軽くたたいて付着した細胞を取り除きます。次に、10〜15ミリリットルの高グルコースDMEMを追加して、トリプシンを不活性化します。25ミリリットルのピペットを使用して、すべての細胞塊が破壊されるまで細胞を粉砕します。次に、標準的な血球計算盤を使用して、細胞をカウントし、生存率を決定します。細胞を高グルコースDMEMに懸濁し、24ウェル組織培養プレートのウェルに1ミリリットルの懸濁液を加えます。次に、細胞を摂氏37度で正常酸素条件で24時間インキュベートします。24時間のインキュベーション期間後、プレートをアネロビックチャンバーに移します。その後、直ちに培地を抗生物質を含まない、脱気したPS-7

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

アンインビトロ</em転移性増殖に腫瘍の休眠とスイッチを研究する>システム

その場代謝プロファイリングで用フェルスター共鳴エネルギー移動統合生物学的センサー（FIBS）を校正する方法の説明が提示されている。 FIBSは、非侵襲的に代謝モデルおよびバイオプロセス条件のハイスループットスクリーニングの開発を補助する代謝物の細胞内レベルを測定するために使用することができる。...

FIBS対応の非侵襲メタボリック·プロファイリング

ここでは、in vitroでHomalodisca vitripennis細胞やHOCV-1を伝播するためのプロトコルを提示する。媒体はHOCV-1陽性培養物から除去し、RNAを168時間ごとに24時間抽出した。細胞生存率をトリパンブルー染色によって定量した。全ウイルス粒子は、感染後抽出した。抽出されたRNAは、定量RT-PCRによって定量した。...

の伝播<em&gt; Homalodisca coagulataウイルス01</em&gt;経由<em&gt; Homalodisca vitripennis</em&gt;細胞培養

空気圧式バイオリアクターを使用して、哺乳類細胞の増殖のためのこの使い捨てバイオリアクターシステムの組み立て、操作、および性能を実証します。...

使い捨て空気圧バイオリアクターシステムを使用して、哺乳動物細胞の培養

栄養調整は、攪拌懸濁バイオリアクターでの培養物に対する断続的なバッチ給餌と比較して、哺乳類細胞スフェロイドの増殖速度を改善します。...

スフェロイドにおける哺乳動物細胞の大規模拡張のための連続供給することによって栄養規制

培養一次または確立された細胞株は、動物モデルを使用する前に初期のアプローチとして、基本的な生物学的および機械的な質問に対処するために一般的に使用される。このプロトコルは、亜鉛 (Zn)...

哺乳類細胞内の細胞内亜鉛プールを測定するための原子吸光度分光法

ここでは、インビトロマンモスフィア自己再生定量アッセイの実施と解釈について説明する。...

マウスマンモスフィア培養における自己再生の定量

骨格筋は、常在幹細胞を含む複数の細胞タイプで構成されており、それぞれが筋肉の恒常性と再生に特別な貢献をしています。ここでは、生理学的、in vivo、および環境的特性の多くを保持するex...

マウス骨格筋の未分画バルク培養によるニッチおよび幹細胞の静止を再現

このプロトコルは、二重層マイクロ流体チップを作製し、急速な酸素振動下での微生物増殖を分析する方法を提示します。このデバイスの性能は、流体チャネルでの酸素センシングと微生物培養を通じて検証されました。...

マイクロ流体二重層デバイスを用いた微生物1細胞増殖解析における急速酸素振動の創出

私たちはミリ流体連続培養装置(MCCD)のプロトコルを提示します。これは、一定の低栄養素条件(数百ナノモル濃度まで)または時間的な栄養素変動を極短の時間スケールで培養することを可能にします。...

低栄養素および変動する栄養条件下での 大腸菌 研究のための連続培養ミリ流体装置

学ぶ哺乳類細胞の長期嫌気性培養法。酸素毒性下での細胞生理学研究や宿主病原体相互作用、がん細胞転移の解析に応用可能。17日間の生存を達成し、個別化医療への貢献が期待される革新的プロトコルです。

哺乳類セルラインの嫌気性成長と維持

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