Name: アンチ PD L1 抗体は生検で非小細胞肺癌患者からの細胞のサンプル集中 22 3 を使用して (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-25T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: 学ぶ22C3抗体濃縮液を用いた非小細胞肺癌患者のPD-L1発現評価法。生検・細胞診検体に対する免疫組織化学染色技術で、免疫療法適応患者選択の信頼性と再現性を向上させる。

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この研究は、米国ニュージャージー州ケニルワース ・株式会社メルク社によって主催されました。資金提供者は研究デザイン、データの収集と分析、意思決定を発行し、または原稿の準備で役割を果たしていません。

すべての手順は、倫理委員会によって承認されている (人間研究倫理委員会、センター病院ユニヴェルシテール ・ デ ・ ニース/Tumorothèque BB-0033-00025)。
メモ: このプロトコルが腫瘍生検と細胞診サンプルの調整 (オスミウムここ、材料表を見ると) 市販の自動 IHC テナーの 22 3 抗体濃縮物の使用のため特に。
1. 腫瘍組織試料作製法
<ol><li>10% 中性緩衝ホルマリン (NBF) カセットでの腫瘍組織を修正します。 注: 近位肺腫瘍から腫瘍は通常の呼吸器科、または肺専門家によって適度な鎮静下で行った気管支鏡検査によって得られます。末梢病変、びまん性肺疾患、気管支鏡や針生検が示されます。これらの手順は、手術室や集中治療室で通常行われます。</li>
	<li>パラフィンにカセットを埋め込みます。 注: 固定灌流または浸漬直後、解剖によって達成することができますが、通常 8-10 h を必要とします。定着性のボリュームは、検体量より高い 15-20 x をする必要があります。Overfixation を抗原のマスキングを引き起こすので、10 時間以上のための生検組織を修正する勧めしますないです。固定速度は室温で約 1 mm/h です。</li>
	<li>ティッシュ プロセッサにワックスで固定ティッシュ サンプルに潜入 (材料の表を参照してください)。 注: 濃度 70%、85% と 90% の増加と 3 つのアルコール風呂で脱水を行います。水は 3 つの最終絶対アルコール風呂で最終的に削除されます。クリアは 3 つのトルエン浴場やホット ワックスお風呂 (44-60 ° C) でワックス浸透で実行されます。</li>
	<li>溶融パラフィンでいっぱい金型内部組織を埋め込む (材料の表を参照) と凝固を待ちます。</li>
	<li>ミクロトームで 3 μ m の膜厚でパラフィン埋め込まれたティッシュをセクションします。</li>
	<li>転送正荷電顕微鏡ガラスにパラフィン リボン スライド (材料の表を参照してください)。</li>
	<li>37 ° C で 1 時間のスライドを乾燥します。 注: 保存切片 (推奨) 2-8 ° c または室温 25 ° C まで抗原を保持し、断面の 15 d 内を汚します。</li>
</ol>2. 細胞診用試料の調製
<ol><li>
防腐剤溶液中の気管支洗浄液を収集 (材料の表を参照してください)。 メモ: これは、標準的な気管支鏡検査手法が使用されます。<ol>
<li>洗浄サンプリングする気管支の分布。清潔な容器に洗浄を収集します。患者とコンテナーのラベルの最初と最後の名前、生年月日、及び検体の情報。</li>
	</ol>
</li>
	<li>気管支洗浄液を 50 mL の円錐管に転送し、DL ジチオトレイトールの 2 g を追加渦 30 分チューブ (材料の表を参照)、粉体、室温で 5 分間 250 × gで遠心分離します。</li>
	<li>上澄みを除去し、粘液溶解溶液 10 mL を追加 (材料の表を参照してください)。</li>
	<li>中速 (レベル 9) で 20 分間サンプルを振るし、部屋の温度で 5 分間 250 × gで遠心分離機します。</li>
	<li>上澄みを除去し、細胞ペレットを 10% 含有採血管で預金 NBF。</li>
	<li>セル ブロックの調製試薬の 4 滴を追加 (材料の表を参照してください) 細胞ペレットにします。</li>
	<li>細胞ペレットをカセットに転送、10% でそれを修正 NBF、パラフィン-埋め込むセル ブロックの準備および区分 (1.1 – 1.7 の手順を参照してください)。</li>
</ol>3. PD L1 染色法
<ol><li>オスミウムとコンピューターに切り替えます。</li>
	<li>オスミウムのアイコンをダブルクリックして、ユーザーを選択します。</li>
	<li>'作成ラベル'し、 [プロトコル]をクリックします。</li>
	<li>22 3 プロトコルをダブルクリックします。 注: プロトコルは、まずコンピューターにインストール オスミウムのプロトコルを作成]をクリックしています。完全なプロトコルは、ファイル 1 の補足として提供されます。</li>
	<li>患者の ID をラベルに書くし、 「印刷」をクリックします。</li>
	<li>スライドにラベルを貼る。</li>
	<li>選択されている引き出しのボタンを押すことでスライド] ドロワーを開きます。</li>
	<li>サーマル パッドの上のアップと内側に直面しているラベルでラベル付きのスライドを配置します。</li>
	<li>スライド引き出しを閉じます。</li>
	<li>ディスペンサーからキャップを外し、試薬のラックに試薬を読み込みます。</li>
	<li>テナーのフードを開き、確実な彼らに合う位置に保持する試薬のカルーセルにラックを配置します。</li>
	<li>フードを閉じます。</li>
	<li>ソフトウェア、計測器が使用され、 「実行」をクリックするをクリックしてします。</li>
	<li>IHC プロシージャの終わりには、水道水と洗浄液の一滴か、数秒間スライドをすすいでください。</li>
	<li>エタノール 100% の 1 つの風呂、エタノール 95% の 2 番目用のスライドを数秒間水分補給します。</li>
	<li>Coverslipping マシン、カバーガラスの自動ローディングのためにスライドを配置します。</li>
</ol>4. PD L1 染色の解釈
注: 修飾された病理学者は PD L1 ihc の解釈を行ってください。
<ol><li>患者の試験片の試験前に、の正と負のコントロールを分析することにより PD L1 染色の品質を評価します。 注: 患者の試料で得られた結果はコントロールの染色が受け入れられない場合は無効と見なされます。</li>
	<li>腫瘍細胞を顕微鏡で 100 の最小値の存在を確認します。 注: レポートは患者の標本が 100 未満の腫瘍細胞。</li>
	<li>4 X の低倍率、すべての正と負のよく保存された腫瘍領域を評価します。 注: 低倍率で部分的な膜染色または膜染色強度が弱い (1 +) がありますを認識することは困難。</li>
	<li>部分的または完全な細胞膜が染色をスコアします。 注: 細胞質染色解釈から除外するとしています。</li>
	<li>保存状態の良い腫瘍領域内に存在すべての腫瘍細胞に対する PD L1 肯定的な腫瘍細胞の割合を評価することによって、TP を計算します。 注: 腫瘍細胞のみを調べる必要があります。その他携帯電話の要素成果物、正常細胞や壊死細胞免疫細胞などは試験から除外する必要。</li>
</ol>

<ol><li>Garon, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+for+the+treatment+of+non-small-cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).</li>
<li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated%2C+PD-L1-positive%2C+advanced+non-small-cell+lung+cancer+%28KEYNOTE-010%29%3A+a+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li>
<li>Reck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+versus+Chemotherapy+for+PD-L1-Positive+Non-Small-Cell+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).</li>
<li>Langer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carboplatin+and+pemetrexed+with+or+without+pembrolizumab+for+advanced%2C+non-squamous+non-small-cell+lung+cancer%3A+a+randomised%2C+phase+2+cohort+of+the+open-label+KEYNOTE-021+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study.</a> The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).</li>
<li>Buttner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+Death-Ligand+1+Immunohistochemistry+Testing%3A+A+Review+of+Analytical+Assays+and+Clinical+Implementation+in+Non-Small-Cell+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).</li>
<li>Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+diagnosis+and+staging+in+the+minimally+invasive+age+with+increasing+demands+for+tissue+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Lung+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis.</a> Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).</li>
<li>Padmanabhan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+Adequacy+of+Small+Biopsy+and+Fine-Needle+Aspiration+Specimens+for+Molecular+Testing+by+Next-Generation+Sequencing+in+Patients+With+Lung+Cancer%3A+A+Quality+Improvement+Study+at+Dartmouth-Hitchcock+Medical+Center%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+%26+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center.</a> Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).</li>
<li>Tsao, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTsao%2C+MS+%22IASLC+ATLAS+of+PD-L1+Immunohistochemistry+Testing+in+Lung+Cancer%22">IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer</a>. , International Association for the Study of Lung Cancer (IASLC) Press. (2017).</li>
<li>Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-L1+IHC+in+NSCLC+with+a+global+and+methodological+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+Cancer%22%5BJournal%5D)">PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective.</a> Lung Cancer. , 102-105 (2017).</li>
<li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+22C3+anti-PD-L1+antibody+to+determine+PD-L1+expression+in+multiple+automated+immunohistochemistry+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms.</a> PLoS One. 12 (8), e0183023(2017).</li>
<li>Ilie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+22C3+anti-programmed+death+ligand+1+antibody+to+determine+programmed+death+ligand+1+expression+in+cytology+samples+obtained+from+non-small+cell+lung+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).</li>
<li>Skov, B. G., Skov, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paired+Comparison+of+PD-L1+Expression+on+Cytologic+and+Histologic+Specimens+From+Malignancies+in+the+Lung+Assessed+With+PD-L1+IHC+28-8pharmDx+and+PD-L1+IHC+22C3pharmDx%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Immunohistochemistry+%26+Molecular+Morphology%22%5BJournal%5D)">Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx.</a> Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).</li>
<li>Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytologic-histologic+correlation+of+programmed+death-ligand+1+immunohistochemistry+in+lung+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas.</a> Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).</li>
<li>Heymann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-L1+expression+in+non-small+cell+lung+carcinoma%3A+Comparison+among+cytology%2C+small+biopsy%2C+and+surgical+resection+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens.</a> Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).</li>
<li>Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+death-ligand+1+testing+of+lung+cancer+cytology+specimens+obtained+with+bronchoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy.</a> Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).</li>
<li>Ilie, M., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+of+PD-L1+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer-know+your+limits+but+never+stop+trying+to+exceed+them%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Lung+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them.</a> Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

対応する臨床的に検証された商用試験10,11と比較して 22 3 PD L1 抗体濃縮を使用して最適化された LDT を検証しました。22 3 には、生検 (~ 100%) と (~ 95%) 細胞診 ≥ 1 %tps で: 50% カット ポイント TPS PD L1 IHC 22 3 アッセイを用いて PD L1 IHC 式に比べて高い一致率を示した抗体を用いた LDT が集中しています。最近肺がんの研究のための国際協会によって推奨どおり、PD L1 正例領域は約 10 PD L1 負サンプル、10 PD L1 の肯定的なサンプル、および 20 のサンプルの線形ダイナミック レンジをカバーのための同じをする必要があります、PD L1 IHC テスト、8 を臨床的に検証します。120 生検と細胞診サンプルを 70 に有効性の検証を行った。全体的にみて、コンコー ダンスが高い陽性、標本の腫瘍組織型のカットオフの TPS とは無関係。成果をここで発表は組織や細胞診標本<sup...

最近の臨床試験は、ヒト化モノクローナル IgG4 カッパ アイソタイプの抗体 (PD 1) プログラムされた細胞死 1 間の相互作用をブロックする pembrolizumab とその有機配位子、PD L1 と L2-PD 患者の治療の有効性を実証しています。高度な非小細胞肺癌1,2,3,4。
50% や上皮成長因子受容体 (EGFR) や未分化リンパ腫キナーゼ (アルク) ゲノム腫瘍異常3 の PD L1 式 TPS 両方未治療患者の PD L1 表現する非小細胞肺癌の治療のための pembrolizumab の承認現在、以前の PD L1 TPS ≥ 11の患者を治療。
IHC によって検出された PD L1 蛋白質の表現は、アンチ-PD-1/PD-L1 治療予測バイオ マーカーのアッセイとして広く使用されています。Pembrolizumab 臨床試験で、ホルマリン固定パラフィン包埋 (FFPE) 組織サンプルで得られた PD L1 TPS は PD L1 IHC 22 3 コンパニオン試金5を使用して決定しました。この試金は米国食品医薬品局 (FDA) によって承認されているし、PD L1 TPS5腫瘍によるヨーロッパの CE-マークされています。
LDTs 22 3 抗体濃縮液を使用すると PD L1 TPS の信頼性の高い、高品質の評価のための機関間で追加のグローバル オプションが pembrolizumab の患者の適格性に関する臨床決断をサポートする重要です治療。病理学研究所の大規模な数には、コンパニオン診断 PD L1 IHC 22 3 試金へのアクセスがありません。したがって、信頼性と一貫性のある LDTs 広く利用可能な追加の IHC オスミウム プラットフォームと互換性の開発は不可欠です。
また、非小細胞肺癌患者から頻繁に利用できる唯一の検体の種類は、細胞診サンプルを使用して LDTs を確立する必要があります。気管支腫瘍細胞の 100 が得られます場合にのみ、bronchoscopies、コア針生検、切除 PD L1 IHC 22 3 コンパニオン アッセイが検証されます。上記サンプルの型が得られる頻度が細胞診サンプルより簡単に収集される、いくつかの機関6,7で最も一般的なサンプル タイプです。ただし、現在ありません検証診断アッセイ細胞診サンプルで PD L1 の式の評価に使用できます。細胞診サンプルと互換性のある信頼性の高い LDTs はさらに高品質な PD L1 テストを促進でしょう。
さらに、LDT の臨床的検証を設定した場合、IHC は対応する臨床的に検証された商業テスト8と同様の方法で実行必要があります。例えば、抗体価、溶銑予備処理の遅延、インキュベーション時間増幅システム9などシリアル セクションで同じ信号を取得するいくつかの重要な手順を検証すべき。
我々 は最近、腫瘍生検と細胞診サンプル10,11PD L1 の式を評価する 22 3 抗体濃縮液を使用する最適化された LDT を開発しました。LDT対「ゴールド スタンダード」PD L1 IHC 22 3 試金10,11と高い一致を発見しました。この臨床的に検証されたプロトコルは、信頼性の高い、高品質 PD-L1 グローバル領域でのテストをサポートします。

<table><tbody><tr><td>NovaPrep HQ1</td><td>Novacyt</td><td>NA</td><td>細胞診標本用防腐剤溶液</td></tr><tr><td>Novaprep&reg;HQ+</td><td>B Novacyt</td><td>NA</td><td>粘液溶解性溶液</td></tr><tr><td>Tissue-Tek VIP 6</td><td>Sakura</td><td>6042 VIP 6</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek TEC 5 組織埋め込みコンソールシステム</td><td>Sakura</td><td>5229 TEC 5</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡ガラススライド SuperFrost Plus</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr><tr><td>DL-ジチオスレイトール粉末</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D3801</td><td></td></tr><tr><td>ハイドルフ マルチ Reax ボルテックス シェーカー</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>13-889-410</td><td></td></tr><tr><td>シャンドン サイトブロック</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>7401150</td><td></td></tr><tr><td>22C3 抗PD-L1濃縮抗体</td><td>アジレントダコ</td> <td>#M365329</td><td></td></tr><tr><td>PD-L1 IHC 22C3 pharmDx</td><td>アジレントダコ</td><td>SK006</td><td></td></tr><tr><td>オートステイナーリンク 48</td><td>アジレントダコ</td><td>AS480</td><td></td></tr><tr><td>BenchMark ULTRA autostainer</td><td>Ventana</td><td>#750-600</td><td></td></tr><tr><td>OptiView HQ Universal Linker</td><td>Ventana</td><td>#760-700</td><td></td></tr><tr><td>OptiView HRP Multimer</td><td>Ventana</td><td>#760-700</td><td></td></tr><tr><td>OptiView Amplification H2O2</td><td>Ventana</td><td>#760-099</td><td></td></tr><tr><td>OptiView アンプ</td><td>Ventana</td><td>#760-099</td><td></td></tr><tr><td>OptiViewAmplification Multimer</td><td>Ventana</td><td>#760-100</td><td></td></tr><tr><td>OptiView DAB</td><td>Ventana</td><td>#760-700</td><td></td></tr><tr><td>OptiView Copper</td><td>Ventana</td><td>#760-700</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin II</td><td>Ventana</td><td>#790-2208</td><td></td></tr><tr><td>Bluing Reagent</td><td>Ventana</td><td>#760-2037</td><td></td></tr><tr><td>Cell Conditioning 1 (CC1)</td><td>Ventana</td><td>#950-124</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュテックフィルムカバースリッパ</td><td>さくら</td><td>4742</td><td></td></tr></tbody></table>

アンチ pd l1 抗体は生検で非小細胞肺癌患者からの細胞のサンプル集中 22 3 を使用して

Using 22C3 Anti-PD-L1 Antibody Concentrate on Biopsy and Cytology Samples from Non-small Cell Lung Cancer Patients

Pembrolizumab 単独療法は、PD-L1-を表現する高度な非小細胞肺癌 (NSCLC) 患者の最初とセカンド ライン治療に承認されています。PD L1 式 PD L1 免疫組織染色 (IHC) 22 3 コンパニオン診断アッセイのテスト、腫瘍の割合を与えるスコア (TP)、腫瘍組織で検証済み。最適化研究室開発 (LDT) を使用するテスト 22 3 抗体 (Ab) 集中広く利用可能な IHC オスミウムの生検と細胞診標本を開発しました。PD L1 TPS 120 ペア全体腫瘍切片と生検を行ったし、70 を組み合わせて、生検や細胞診のサンプル (気管支洗浄、 n = 40; 胸水, n = 30)。22 3 は濃縮ベース LDT を示した細胞診と生検 (~ 100%) との間の一致率が高い (~ 95%) 標本両方 TPS の PD L1 IHC 22 3 コンパニオン アッセイを用いて PD L1 IHC 式と比較した場合はポイント (≥ 1%: 50%) をカットします。今回紹介した最適化された LDT 22 3 Ab 集中を使用して両方の腫瘍、細胞診、PD L1 式を決定する治療の非小細胞肺癌患者の適格性を評価するために世界中の研究所の能力を拡大します。信頼性が高く、再現性のある方法で単独で pembrolizumab。

このグループの最近の出版物10、11、詳細に記載されているこのトピックの手順を使用して、最適化された LDT が臨床的に手術を受けた患者から 120 のアーカイブ FFPE 非小細胞肺癌の生検サンプルと検証されました。切除やパスツール大学病院で生検 2007 年 3 月、2016 年 3 月の間、ニース。また、細胞診サンプルの PD L1 の式の評価のため、TPS は、70 対組織生検、気管支洗浄から作製したセルのブロックで評価した (n = 40) または胸水 (n = 30) (、パスツールで収集大学病院、ニース、2014 年 7 月から 11 月の 2016 年までの間)。すべてのスライドは新たに切って、24 時間以内に染色します。
生検標本 PD L1 IHC 22 3 コンパニオン アッセイ...

信頼性が高く、再現性のある方法で、pembrolizumab の治療のための肺癌症例の適格性を評価するために世界中の研究所の能力を展開し、我々 は広く使用可能な 22 3 抗体濃縮液を使用してアッセイを開発しました。生検と細胞診標本の免疫組織化学的オスミウム。

アンチ PD L1 抗体は生検で非小細胞肺癌患者からの細胞のサンプル集中 22 3 を使用して

Pembrolizumab monotherapy has been approved for the first- and second-line treatment of patients with PD-L1-expressing advanced non-small cell lung cancer ...

この方法は、22C3抗体濃縮物を用いて、腫瘍組織および細胞診標本の両方でPD-L1発現を決定し、信頼性の高い再現性のある方法で免疫療法のための非小細胞肺癌患者の選択を評価する実験室の能力を拡大する。この技術の主な利点は、ゴールドスタンダードアッセイと非常に一致しており、世界中の地域にわたって信頼性の高い高品質のPD-L1テストをサポートすることです。一般に、この方法に新しい病理学者は、時折観察される粒状染色のために苦労するだろう。さらに、ヒト細胞の染色は、金本規格で観察されたものよりもやや強い。従って病理学者の訓練は22C3 LDTとのPD-L1染色の正しい解釈を得るために必要である。手順を実証することは夫人になります。マラメ・ハミラ、私の研究室の技術者。まず、カセット内の10%中性緩衝ホルマリンで腫瘍組織を固定し、テキストプロトコルに概説されているようにパラフィンにカセットを埋め込みます。溶けたパラフィンで満たされた型の中に浸潤した組織を埋め込みます。パラフィンが固まるまで組織を型に留まらせます。この後、3マイクロメートルの厚さでパラフィン埋め込まれた組織を切除するためにミクロトームを使用してください。パラフィンリボンを正に帯電したガラス顕微鏡スライドに移します。その後、スライドを摂氏37度で1時間乾燥させます。まず、気管支の洗浄液を防腐液に集めます。洗浄液を50ミリリットルの円錐チューブに移します。DL-Dithreitolを2グラム加え、チューブを30分間ボルテックスし、室温で5分間250倍gで遠心分離機を加えます。上清を取り除き、粘液溶液を10ミリリットル加えます。サンプルを中速20分間振り、遠心分離機を250倍gで室温で5分間振ります。この後、上清を取り除き、セルペレットを10%中性緩衝ホルマリンを含む回収管に沈着させる。細胞ブロック調製剤を4滴追加します。細胞ペレットをカセットに移します。腫瘍組織サンプルを調製するために先に説明したプロセスを用いてパラフィン埋め込みおよび切片のための細胞ペレットを固定する。まず、オートステイナーとコンピュータの電源を入れ、電源を入れ、操作を開始します。オートステイナーアイコンをダブルクリックし、ユーザーを選択します。[ラベルの作成] をクリックし、[プロトコル] をクリックします。22C3 プロトコルをダブルクリックします。患者のIDを記入し、[印刷]をクリックします。この後、ラベルをスライドに貼り付けます。選択したスライドドロワーのボタンを押して開き、ラベルを上向きと内側に向けたサーマルパッドにラベル付きスライドを置きます。スライドドロワーを閉じます。次に、ディスペンサーからキャップを取り外します。試薬ラックに試薬を積み込みます。染色剤のボンネットを開き、試薬カルーセルに試薬ラックを置き、適切にフィットして所定

using-22c3-anti-pd-l1-antibody-concentrate-on-biopsy-cytology-samples

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

このビデオでは、非小細胞肺がん患者サンプル中の循環腫瘍細胞上のバイオマーカーを特徴付ける技術であるCirculating Tumor...

CTC免疫蛍光アッセイ:循環腫瘍細胞の特性評価技術

このプロトコルは、非小細胞肺癌(NSCLC)の組織および細胞学サンプルを保存するために使用されるホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍サンプルの調製を説明しています。...

ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍サンプルの調製:非小細胞肺がん(NSCLC)からの組織および細胞学サンプルを保存するためのプロトコル

ホルマリン固定癌組織標本の腫瘍免疫研究の自動多重蛍光パネル

循環腫瘍細胞(CTC)の特徴付けは、翻訳研究で一般的な話題です。このプロトコルは、非小細胞肺癌(NSCLC)患者サンプルにおけるCTCのPD-L1特性測定および列挙に関する半自動免疫蛍光(IF)アッセイについて説明する。...

免疫蛍光による非小細胞肺癌患者からの循環腫瘍細胞の半自動PD-L1特性図と列挙

この実験プロトコルは、主にシングルチャネル抗体のインキュベーション条件を最適化し、抗体とチャネルの設定を調整して、臨床起源の肺癌組織における自家蛍光およびチャネルクロストークの問題を解決することにより、マルチプレックス免疫組織化学(IHC)染色法を説明および最適化します。...

パラフィン包埋肺癌組織のマルチプレックス免疫組織化学染色

この記事では、ロボット支援気管支鏡検査を透視法、放射状気管支内超音波検査、およびコーンビームコンピューター断層撮影と組み合わせて実行するための段階的なアプローチについて説明し、標的となる経気管支肺凍結生検を取得することを目的としています。...

標的肺凍結生検のためのマルチモーダルイメージングと組み合わせたロボット支援気管支鏡検査

この原稿では、バイオインフォマティクス分析と実験的検証を通じて、原発性シェーグレン症候群と肺腺がんを結びつける可能性のある一般的な病原性メカニズムを調査するための運用手順と予防措置について説明します。...

肺腺癌に関連する原発性シェーグレン症候群:潜在的な一般的な病原性メカニズムの調査と実験的検証

本稿では、腫瘍の転移の動物モデルにおける肺腫瘍細胞蓄積を定量化する方法について説明します。...

肺腫瘍細胞募集試験

ここでは、早期肺癌発見のため循環マイクロ Rna 署名分類テストの実施試験をスクリーニングして、BioMILD...

マイクロ Rna による液体生検: プラズマ miRNA 署名分類 (MSC) がん検診用の経験

血中循環がん細胞 (Ctc) がん転移中に肺を植民地化を促進する上での役割を解読する動物モデルです。ここでは、私たちが設立され、正常に実行体内法を具体的にテスト肺植民地化の Ctc の高分子フィブロネクチン (polyFN)...

肺組織に腫瘍のセルの視覚化を循環させるため肺植民地化アッセイの確立

学ぶ22C3抗体濃縮液を用いた非小細胞肺癌患者のPD-L1発現評価法。生検・細胞診検体に対する免疫組織化学染色技術で、免疫療法適応患者選択の信頼性と再現性を向上させる。

アンチ PD L1 抗体は生検で非小細胞肺癌患者からの細胞のサンプル集中 22 3 を使用して

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