Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

Xiujuan Peng; Jasmim Leal; Rashmi Mohanty; Melissa Soto; Debadyuti Ghosh

doi:10.3791/58165

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

バイオパニングから T7 バクテリオファージの量的な PCR

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05:42 min

September 27, 2018

DOI: 10.3791/58165-v

Xiujuan Peng¹, Jasmim Leal¹, Rashmi Mohanty¹, Melissa Soto¹, Debadyuti Ghosh¹

¹Division of Molecular Pharmaceutics and Drug Delivery, College of Pharmacy,University of Texas at Austin

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

再現性の高い、正確で、時間効率的な定量的 PCR (qPCR) を列挙するメソッド T7 バクテリオファージを次に紹介します。プロトコルはバクテリオファージ DNA 調製法、PCR 反応の準備、qPCR サイクリング条件、qPCR データ分析明確にについて説明します。

この方法は、複雑なサンプルおよびバクテリオファージベースの診断および治療からバクテリオファージの列挙に関連するウイルス学および微生物学分野の主要な問題に答えるのに役立つ可能性がある。この技術の主な利点は、従来のアッセイでは実現不可能なファージディスプレイバイオパンニング実験から多数のサンプルを時間効率よく正確に定量化できる点にあります。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の大学院生であるラシュミ・モハンティとジャスミン・リールです。

プライマーを設計し、ストック濃度を作成した後、マイクロリットル当たり0.1マイクログラムの濃度でT7ファージDNAを参照してください。超純水を使用して、このDNAをマイクロリットル当たり100万フェムトグラムから0.2ミリリットルPCRチューブでマイクロリットル当たり1個のフェムトグラムまで10倍に連続して希釈します。各濃度の20マイクロリットルを調製し、希釈の各段階の間にピペットチップと渦管を変更することを確認します。

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