2018年9月14日
ミツバチの脳の異なる領域におけるホスホリパーゼ C (PLC) 薬理学的薬剤の抑制効果をテストするためこれらの地域で PLC 活性を測定する生化学的アッセイを提案する.この試金は PLC 活動組織の中でだけでなく、さまざまな動作を示すミツバチの間での比較に役に立つかもしれません。
この方法は、異なる脳領域におけるPLC活動がミツバチの脳機能にどのように関与しているかなど、神経科学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、このプロトコルは基本的な操作しか必要とするため、研究者が標準的な実験室施設で実験を簡単にプリフォームできることです。まず、ミツバチを含む50mlのチューブを氷の上に30分間置き、ミツバチを麻酔します。次に、歯科用ワックスを半分に折り畳んでプラスチック皿に入れることで、解剖段階を準備します。双眼鏡顕微鏡の下で、ピンセットを使用して、ビーの頭を体から分離します。次に、歯科用ワックスの頭部を固定し、各アンテナのベースに昆虫ピンを挿入して、ヘッドの内部を上向きの位置に保持します。次に、それをカバーするために頭の上に十分な生理液を注ぎます。ピンセットを使用すると、アンテナを取り外します。この後、メスを使用してアンテナのベース付近で水平カットを行い、複合眼の境界で縦切りを行います。頭の上に水平カットを行い、脳の上に窓を開くためにキューティクルを削除します。次に、ピンセットを使用して、脳の内部表面からオシクルからレチンアイと気管を取り除きます。次に、ピンセットを眼球キューティクルの直下に挿入し、複合眼とレチン眼のキューティクルとの間の結合組織を除去する。その後、複合眼のキューティクルとレチンアイを取り除きます。次に、ピンセットを使用して、脳の内部表面から残りの気管を慎重に取り除きます。次に、脳と組織の周りの結合組織を切断し、ヘッドカプセルから脳を解剖する。ピンセットを使用して、脳の後部表面の気管を剥がします。その後、メスを使用して、キノコの体またはMBと垂直ローブの隣の他の脳領域との間の接続を切断します。解剖したMBと残りの脳組織を1.5mlチューブに入れ、ドライアイスで急速に凍結します。まず、凍結した脳組織に10mlの均質化バッファーを加える。プラスチックペゼルを使用して、1.5mlチューブ内の組織を手動で均質化します。この後、均質化された組織溶液をロット内の次の組織に移し、均質化プロセスを繰り返す。次に、30 を追加します。
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本研究では、ミツバチの脳のさまざまな領域におけるホスホリパーゼC(PLC)活性を測定するために設計された生化学的アッセイを提示します。このアッセイは、異なる組織間、および多様な行動を示すミツバチ間でのPLC活性の比較を容易にすることを目的としています。
脳の特定領域におけるホスホリパーゼC(PLC)活性を定量的に検出することで、モデルシステムにおける神経シグナル伝達の仮説についてメカニズム的なリスク低減が可能になります。このワークフローは、生化学的活性を領域特異的な脳機能に関連付けることで、初期段階のターゲットバリデーションを支援し、分子レベルから行動表現型へのトランスレーショナルな連続性に情報を与えます。本アプローチは、比較神経生物学および薬理学的解析のための、スケーラブルで非放射性のアッセイプラットフォームを提供します。
このPLC活性アッセイは、初期探索から前臨床段階の連続的なプロセスに位置づけられており、神経組織モデルにおける仮説検証および薬理学的妥当性の確認を可能にします。