Name: マウスにおける一般的な頸動脈の修理で再灌流を許可する中大脳動脈閉塞 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: 学ぶマウスの総頸動脈修復による中大脳動脈閉塞法。フィブリノゲン・トロンビンシーラントを用いた血管修復で再灌流を改善し、脳卒中モデルの再現性を高める神経科学研究手法です。

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齧歯動物で過渡 MCAO のフィラメント誘導は頻繁に使用する実験的ストローク モデル臨床虚血性脳卒中7の後のイベントの発生を模倣した患部に再灌流ことができます。マウスにおけるフィラメント誘起過渡 MCAO の従来の方法に代わる手術アプローチは、ここで報告します。代替アプローチは、MRI および組織学的染色法11を使用して評価すると低 LV 変動の鎮痛治療、ECA 結紮回避、および CCA 切開修理の結果を含みます。
主 MCAO を誘導するために従来の依存、断裂や少なくとも結紮、ECA は、飲酒行動と MCAO14以降体重の増加に影響を与える、ラットで示されています。ECA 結紮と鎮痛添加の回避を持つマウスで、ここで定義されたプロトコルは、体重減少しても性病変の容積に影響 MCAO の次の減少を提案しました。鎮痛の使用は避ける、または、少なくとも、ない実験結果への交絡影響が原因の脳卒中研究の大半で、報告します。鎮痛を完全に避けることは常に正当化されないし、科学的調査の目的の達成と動物の福祉のニーズのバランスをとる必要があります。
動物のサイズ、歪み、およびフィラメントのサイズと種類のバリエーションに加え、脳の解剖学の違いはすべてのストロークの結果23,24に影響を与える示唆されました。ここで説明した方法は、したがって、少なくとも部分で、可変性を減らす性病変の容積の動物の間に見、再灌流時の牛依存を回避できます。牛の解剖学は、C57BL に特に高いマウス、変数/6ひずみ実験的脳卒中の研究で頻繁に使用されます。c57bl/6 マウスの 90% があるために、様々 な後部通信 (PcomA) 動脈の開存性、MCA 領域13,の外の構造の不十分な血流による虚血性損傷の量に影響を及ぼす可能性のある不完全な牛25します。 ここで示すように、マウスで CCA の修復、血液の再確立の結果を介して虚血領域、ラット15で述べたように CCA 流れ。ここに代表的なデータは、CCA の血流量は直接計測していませんが CCA の修理が再灌流を増加させることを示します。しかし、外科医は近位および遠位修理場所にトランクに沿ってパルスとフル状態に戻ります、船舶修理の後の血を持つ CCA reperfuse を視覚化することが可能です。虚血領域のレーザー レーザードップラー血流計の測定値と一緒に、この視覚的に確認を使用して、血管の修復が成功を確認できます。CCA から血管クリップの除去や組織 pad アプリケーション間の時間することができます組織 pad アプリケーションの間の時間を減らす、CCA の結果開存に影響があるし、組織パッドの o 付着防止、クリップの取り外しCCA の pposite 側。技術的に困難なここで説明した代替 MCAO プロシージャにマウス MCAO の手術誘導を実行に必要なものよりも任意の追加のスキルは不要です。
伝統的アウトカム指標の高変動に関連付けられている、実験的ストローク研究はパワー不足になりがちをかもしれません。倫理的・福祉要件経済的かつ実用的な懸念との組み合わせでパワー不足される研究に貢献するかもしれない。結果の可変性を減らすと、したがって、実験グループ全体でより一貫性のある病変の成果を生産、適切に動力を与えられる研究の究極の目的をより効果的な電力計算を実行できます。
結論としては、マウスで、この代替の CCA 修理手順の実験的脳卒中病変容積のより少ない可変性の結果、適切な治療効果をテストするために必要になる有効小さいの実験グループの電源を計算使用されます。

脳卒中の主な原因は、中大脳動脈領域の虚血です。組織プラスミノーゲン活性化因子 (tPA) は、のみに薬理学的治療にもかかわらず、虚血性脳卒中1,2を対象とした多数の臨床試験の実績のある効果で利用可能です。ただし、安全上の懸念と狭い治療ウィンドウ (< 4.5 h) のためすべての脳卒中患者の ~ 15% のみが tPA を受け取る資格と再開通率は、< 503,4をすることができます。
ストロークの再現性と臨床的に関連する動物モデルは、新しい、潜在的な脳卒中治療の開発に知らせる必要と見なされます。ただし、一貫性と、動物モデルでの変動についての懸念のためそのまま前臨床試験からクリニックへの翻訳を改善するために既存の体内モデルを改良することが重要。臨床使用に潜在的な治療の臨床実験的効果から翻訳の不足は、ストローク研究5の継続的な問題です。翻訳の失敗の理由は複数あるらしい、試作、治療遅延、臨床ストロークの不均一性などに関連する可能性がありの動物モデルの限界が6を使用します。ストローク研究にとって重要な課題には、安全かつ効果的な治療法の開発が残っています。
腔内のフィラメントの挿入による中大脳動脈閉塞 (MCAO) は、実験線の生体内で最も頻繁に使用される齧歯動物モデルです。このモデルは、人間ストローク7で発生するイベントを模倣した虚血誘発後の血流の回復できます。ただし、特にマウスで様々 な標準偏差と異機種混在病変ボリューム発生定義でも外科プロトコル、応用8,9,10。バイモーダル分布小さな線条体と striato 皮質病変が大きいボリューム11を参照するが一般的です。虚血を誘導して、フィラメント、通常 CCA または完全に結紮12のままで、ECA の切開して挿入されます。CCA の永久的な結紮内頸動脈 (ICA) と、その後 MCA 領域への血流の再確立を防ぐことができます。これは、ウィリス動脈輪 (牛) 内で担保の供給に依存することに再灌流を発生します。牛の構造は C57BL/6 マウスの緊張体内ストローク研究13で通常使用で特に、個々 の動物の解剖学的変動。ECA、フィラメント挿入の代替方法は、CCA がこのメソッド妥協を通して継続的な灌流動物の有害な効果がラットで示されている ECA の領土への動脈供給を許可して幸福14。
担保供給と確立された MCAO モデルで再灌流の牛への依存可能性があります、次の閉塞病変量変動のアカウントの一部。代替のマウスの外科的処置、ECA 結紮は避け、CCA 切開を修復すると、CCA、牛の独立による再灌流が可能について述べる。CCA 切開の修理は以前から CCA15成功再灌流が発生するラットで示されています。我々 はマウス11正常にこのアプローチを適用したし、プロトコル性病変の容積、脳卒中の研究で使用される主な結果メジャーで減少変動の結果をここに報告します。
このプロトコルでは CCA 船舶修理、再灌流を許可する組織シーラントとパッド アプリケーションを含む続いて CCA 容器フィラメント挿入を介して MCAO を実施する方法を示します。

<table><tbody><tr><td>0.7 mmの適用範囲が広い単一繊維光学の調査</td><td>Moor Instruments、英国</td><td>P10d</td><td>マスターの調査コードとの使用: VP10M200ST</td></tr><tr><td>7-0シリコーンはモノフィラメントを塗った</td><td>Doccol、米国</td><td>701956PKRe</td><td>項目は動物のサイズおよび重量によって決まる - manufacteurerのガイドラインを使用して下さい。ここでの製品コードは、記事に示されている代表的な結果に使用されました。</td></tr><tr><td>9.4T 前臨床MRIシステム</td><td>Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA</td><td>MY11520101</td><td>マウスの脳イメージングに適したグラジエントコイルとRFコイルを装備</td></tr><tr><td>動物モニタリングおよびゲーティング機器</td><td>SA Instruments, Stony Brook, New York, USA</td><td>22124005</td><td>MRI対応の温度および呼吸モニタリング</td></tr><tr><td>ブピバカイン</td><td>国立獣医サービス, ストーク・オン・トレント, 英国</td><td>512345</td><td>Marcaine</td></tr><tr><td>C57BL/6 Mice</td><td>Charles River, Oxford, UK</td><td>B6JSIMA49D</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Norbrook Laboratories</td><td>143658</td><td>Carprieve 5% w/v 注射用小動物用溶液</td></tr><tr><td>クロルヘキシジン 4% ハンド クレンザー</td><td>溶液 VWR International Ltd, Lutterworth, UK</td><td>MOLN10008780</td><td>HibiScrub 抗菌ハンド クレンザー, Molnlycke Health</td></tr><tr><td>Care 綿棒</td><td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK</td><td>213512</td><td>オートクレーブ滅菌後、プラスチック製のボディ、綿棒の先端は、一度滅菌すると適しています。</td></tr><tr><td>解剖立体鏡</td><td>Carl Zeiss</td><td>OPMI99</td><td>常駐機器. x1-x5倍率の双眼解剖立体鏡が適しています。</td></tr><tr><td>溶解性 6-0 縫合糸</td><td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK</td><td>9544</td><td>吸収性縫合糸 Ethicon コーティング Vicryl 6/0 (Ethicon code: W9981)</td></tr> <tr><td>ドーナツプローブホルダー</td><td>Moor Instruments, UK</td><td>PHDO</td><td>マウス用プローブホルダーは、レーザードップラー流量計装置と併用する場合、単一の光ファイバープローブと一緒に使用する必要があります。</td></tr><tr><td>デュモン#5鉗子</td><td>ワールドプレシジョンインスツルメンツ、ハートフォードシャー、英国</td><td>500342</td><td></td></tr><tr><td>フィブリノーゲンおよびトロンビンシーラント</td><td>バクスター、バークシャー、英国</td><td></td><td>1502243 TISSEEL シーラント2 mL</td>ゲル食品のすぐに使用できるソリューション</tr><tr><td></td><td>Datesandグループ、マンチェスター、英国</td><td>72065022</td><td>ダイエットジェルリカバリー</td></tr>画像<tr><td>表示および測定ソフトウェアパッケージ</td><td>3Dスライサー</td><td>https://www.slicer.org/</td><td>バージョン4.0</td></tr><tr><td>画像表示および測定ソフトウェアパッケージ</td><td>NIH, Maryland, USA</td><td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td><td>NIH/ImageJ</td></tr><tr><td>LDF monitor</td><td>Moor Instruments, UK</td><td>moorVMS-LDF</td><td></td></tr><tr><td>micro vannas scissors</td><td>InterFocus Ltd, Linton, UK</td><td>15000-08</td><td>他のマイクロバンナスプリングハサミは、細い先端が必要ですが、代替品として使用することができます。</td></tr><tr><td>微小血管クリップ</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, UK</td><td>15911</td><td>10 G Vessel Clip</td></tr><tr><td>microvascular clip holders</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, UK</td><td>14189</td><td></td></tr><tr><td>MRI取得および分析ソフトウェア</td><td>Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA</td><td>VnmrJ Version 4.2</td><td>Revision A</td></tr><tr><td>no. 15 scalpel</td><td>Scientific Laboratory Supplies,ノッティンガム、英国</td><td>INS4678</td><td>滅菌No15メス - 製造業者番号P305。他のサプライヤーが利用可能です。</td></tr><tr><td>非溶解性6-0縫合</td>糸 <td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK</td><td>W529</td><td>Ethicon Mersilk Sutures</td></tr><tr><td>Ocular lubricant</td><td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK</td><td>847288</td><td>Lacrilube (5100G13)</td></tr><tr><td>Optical matching gel</td><td>Moor Instruments, UK</td><td>PMG</td><td></td></tr><tr><td>Pulse Oximetry Reader</td><td>Starr Life Sciences Corp., Oakmont, PA, USA</td><td>MouseOx</td><td>MouseOx - ラット &マウスパルスオキシメータ&生理学的モニター マウスの大腿部センサーと一緒に使用します。</td></tr><tr><td>Rehydration gel</td><td>Datesand group, Manchester, UK</td><td>70015022</td><td>HydroGel</td></tr><tr><td>Small hair clippers</td><td>vetproductsuk.com</td><td>HS61</td><td>Contura コードレストリマー/クリッパー</td></tr><tr><td>滅菌 0.9% NaCl Solution</td><td>VWR International Ltd, Lutterworth, UK</td><td>LOCA3528286</td><td>塩化ナトリウム 0.9% W/V 静脈内注入 BP 500 ML IN ECOFLAC&frac12;PLUS</td></tr><tr><td>滅菌ペトリ皿</td><td>VWR International Ltd, Lutterworth, UK</td><td>5168021</td><td>50 mm 滅菌ペトリ皿。どんなブランドでも適しています。最小直径50mmが必要です。</td></tr><tr><td>局所組織接着剤</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, UK</td><td>503763</td><td>GLUture 局所組織接着剤</td></tr><tr><td>防水瞬間接着剤</td><td>ロックタイト</td><td>ロックタイト スーパーグルー プレシジョンマックス</td><td>ほとんどの金物店でご利用いただけます。</td></tr><tr><td>ホワイトペーパーチップ</td><td>Datesandグループ、マンチェスター、英国</td><td>CS1BPB</td><td>ピュアオセル</td></tr></tbody></table>

マウスにおける一般的な頸動脈の修理で再灌流を許可する中大脳動脈閉塞

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

虚血性脳卒中は、長期的な障害を成人と死の世界の主要な原因です。利用可能な現在の治療法が制限のみ組織プラスミノーゲン活性化因子 (tPA) 虚血性脳卒中を対象に承認された薬物治療として。虚血性脳卒中の分野の現在の研究は開発・新規医薬品のターゲットを調査するストロークの病態の理解に焦点を当ててください。信頼性の高い実験的ストローク モデルは、潜在的な治療の進行のために重要です。中大脳動脈閉塞 (MCAO) モデルは臨床的に関連する、最も頻繁に齧歯動物で虚血性脳卒中の外科的モデルを使用します。ただし、性病変の容積など、このモデルの結果は、マウスにおいて、変動性の高いレベルに関連付けられます。ここで説明した代替 MCAO モデルにより、総頸動脈 (CCA) の再灌流および容器、および改善された修復するフィブリノゲン系シーラントと組織パッドを使用中大脳動脈 (MCA) 領土増加血流(ECA) 外頸動脈結紮術を回避することによってマウスの福祉。これはマウスの変数でなければ高い解剖学的に知られているウィリス輪への依存が軽減されます。代表的なデータは、この手術方法を使用して病変ボリューム MCAO 従来とここで説明する別のアプローチの間の変動を減少させることを示しています。

24 大人男性 c57bl/6 マウス、24-31 g 外科の時の重さの合計は、研究で使用されました。中大脳動脈閉塞 (MCAO)、次 1 つの動物の死亡し、1 つは外科的合併症のため除外されました。ここで表示されるデータは、著者によって以前に出版された仕事から取得されます。これらは、MCAO の成果11血管修復の効果を説明するために使用されました。すべてのデータは、thr 平均 ± 標準偏差で表されます。データは、ダゴスティーノ ピアソン オムニバス正規性検定を用いて, 統計学的に評価されました。パラメーター データは、スチューデントのtを用いて比較した-(2 つの) テストと Sidak テスト (複数という意味) と一方向の分散分析。非パラメトリック データは、マン ・ ホイットニーの U 検定を用いて比較した.パラメーターのデータの変動は、 Fを使用して査定された-テスト、レーベンのテストを使用して非パラメトリック データ変動が評価されたと。
通常、MCAO の手順で遮蔽のフィラメントが CCA に挿入されます、ECA は、ICA よりもむしろ ECA に渡してからこのフィラメントを防ぐために結紮と。ECA 結紮の回避と鎮痛の傾向が認められた重減 48 h のポスト-MCAO で一方ない鎮痛と ECA 結紮を使用して同じ MCAO 時間を同じ外科医によって行われた以前の研究からのデータと比較した場合、LV影響を受けない登場、図 1を参照してください。
マウスは、60 分 MCAO 誘発虚血再潅流 CCA 船舶修理、CCA アプローチの典型的な結紮術を施行した.結紮と unligated の修復された CCA の模式図は、図 2に示すです。
レーザードップラー血流灌流地域で MCAO で MCA の CCA 船修理の前後を確認する使用されました。図 3は、フィラメントの除去、局所脳血流量 (rCBF) MCA の脳の領域で有意に増加したその 5 分を示しています。船舶修理、CCA 修理許可の信頼と比較して虚血性の領土に増加した血液灌流であることを示唆している CCA 船舶修理、次に示した MCA 領域に血流の増加と、血流が維持されウィリス輪だけ。
T2 強調 MRI は合計 LV を決定する使用され、コア、LV、MCAO 後 48 h を決定する DTI スキャンを使用しました。図 4 aは修理や結紮プロシージャ グループ間またはコアの合計 LV の大きな違いを示します。ただし、両方のデータの変動の合計し、LV をコアの Lavene のテストを使用して評価した非パラメトリックまたはF-パラメーター データをテスト、CCA 修理グループ内で有意に減少しました。図 4 bに示すように、合計の LV は皮質と皮質下の LV に分割されました。サブ皮質病変部は 2 つの手順グループ間影響されなかったに対し、皮質の部分だった CCA 修理グループで大幅に少ない変数です。
パワー解析を示した治療群あたりが少ない動物が MCAO CCA 修理対CCA 結紮の通常の手順を使用して、次の LV の 30% の減少を示して、表 1を参照してください必要になります。電源 1 β の仮定 = 0.8 と有意水準 α = 0.05 と予測電力解析のため使用されたグループという仮想のコントロールとテストの間の LV の 30% 削減。さらに、等しい分散グループ間としました。表 1は、テストに必要な動物の数を示しています、コントロール グループいずれか、典型的な CCA 結紮法を使用する場合または更新された CCA 修理方法前述のようが使用されます。メモ テスト グループが動物の仮説的治療群と対照群を指すという仮想のコントロール グループを参照します。両方のグループは、MCAO を受けるでしょう。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig1v2.jpg"> 図 1: 複合鎮痛治療と転帰 MCAO ECA 結紮後の省略。(A) 事前 MCAO 重量の割合として表示されます体重減少 MCAO 両方のグループに続く最初の 2 d。ECA unligated 群 (鎮痛 - MCAO ない ECA 結紮) では、2 番目の翌日、MCAO 減少体重減少傾向が認められました。(B) このパネルは、標準塩化トリフェニルテトラゾリウム)、MCAO 後 48 h を染色によって測定される性病変の容積 (3mm) を示しています。表示されるデータは、平均 ± 標準偏差です。結紮 ECA: n = 17、ECA unligated: n = 10。この図は、Trotman ルーカスらから変更されています。11.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig1v2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig2.jpg"> 図 2: 図標準的な CCA 方法と代替 CCA 修理方法次の MCAO 。(A) この回路図は完全に結紮 CCA CCA 切開のいずれかの側に適用される非溶ける縫合糸を使用して右の CCA の永久的な結紮術の結果を示しています。この回路図 (B) は、CCA の修理方法を示しています。フィブリノゲンをコーティングした小さな組織パッド、トロンビン シールはシール右 CCA の完全血流を許可するように、CCA 切開をカバーするため使用されます。この図は、Trotman ルーカスらから変更されています。11.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig3.jpg"> 図 3: MCAO の後に局所脳血流量 (rCBF) パラメーター 。190. は、MCAO 測定 CCA 結紮し、CCA 修理グループの両方 (ポスト-MCAO) 190. 基準 MCAO フィラメント除去後 5 分で変更。このパネルは、CCA 船舶修理 (修復前) の直前に、次の CCA 修理 (修復後) 5 分 rCBF データを示します。190. の有意な増加は、両方のグループにフィラメント除去 (ポスト MCAO) 後 5 分を示します。CCA 修理グループで CCA 修理 (修復後) に続く 190. 追加増加が表示されます。5 分のポスト MCAO と修復前の間、脳血流量の違いは表示されません。表示されるデータは、分析された時間経過データ レポート キー時刻ポイント、平均 ± 標準偏差としてここから凝縮されています。結紮 CCA: n = 10、CCA の修復: n = 10;P &lt; 0.01、* * *P &lt; 0.001、 ns: 有意ではないです。この図は、Trotman ルーカスらから変更されています。11.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig4.jpg"> 図 4: MRI 技術によって得られた性病変の容積の分析。(A) このパネルは、MCAO、MRI の T2 強調画像 (合計 LV) から合計 LV と DTI スキャンと分析 (コア LV) から撮影したコア LV 48 h で性病変の容積 (LV; mm3) を示しています。代表的な画像は、DTI コア病変ボリューム マスクを適用した T2 スキャン スライス画像から合計性病変の容積を示しています。両方合計 LV のグループ内での変動を有意に減少した (P = 0.015、CCA 修理: n = 10、結紮 CCA: n = 10、 F-テスト) とコア LV (P = 0.043、CCA 修理: n = 9、結紮 CCA: n= 6、Lavene のテスト)、 Fを使用して評価-パラメトリック データまたは非パラメトリック データのレーベンのテストのためのテスト。(B) このパネルには、48 h MCAO、MRI の T2 強調画像から撮影し、皮質と皮質下の病変領域に分かれて、次に LV が表示されます。CCA 修理データ変動を大幅に削減 (P = 0.03、 F-テスト) 皮質病変ですがデータに影響しない部皮質病変部の変動を示した。CCA 修理: n = 10、結紮 CCA: n = 10。表示されるデータは、平均 ± 標準偏差です。#P &lt; 0.05 (F-テスト)、 xP &lt; 0.05 (Lavene のテスト)。この図は、Trotman ルーカスらから変更されています。11.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>アプローチ</td>
			<td>性病変の容積 (LV; mm3平均 ± 標準偏差)</td>
			<td>電源</td>
			<td>有意水準</td>
			<td>Anticiapted 違い</td>
			<td>必要なグループ サイズ</td>
		</tr>
<tr>
<td>CCA 結紮 (従来の方法)</td>
			<td>94.08 ± 53.79</td>
			<td>0.8</td>
			<td>0.05</td>
			<td>30%</td>
			<td>
n = 58</td>
		</tr>
<tr>
<td>CCA 修理 (新しい方法)</td>
			<td>51.73 ± 22.78</td>
			<td>0.8</td>
			<td>0.05</td>
			<td>30%</td>
			<td>
n = 35</td>
		</tr>
</tbody></table>表 1: CCA 修理方法をここで説明した代替と伝統的な CCA 結紮を比較する代表的な電力解析します。このテーブルは、コントロール グループ、伝統的なまたは代替の (新しい) アプローチ (予測) テスト グループの LV で有意差を検出するために必要な予想されるグループのサイズを計算するために実施する電力解析を示しています。グループとしてサイズ表必要かどうか 0.8 の力を想定、0.05 の重要性レベルを適用すると、し予測テスト グループで 30% の差を示している場合、LV と比較対照群。両方 MCAO 方法 (CCA 結紮し、CCA 修理) LV の 30% の差を得るために必要な動物の数に違いがあるかを決定するための結果を表します。両方のメソッドは、等分散テストとコントロール グループの間とみなされます。この図は、Trotman ルーカスらから変更されています。11。

腔内フィラメント中大脳動脈閉塞症は、齧歯動物で実験的ストロークの生体内で最も頻繁に使用されるモデルです。一般的な頚動脈修復が可能にする手術方法は、総頸動脈の再灌流と中大脳動脈領域に完全再灌流が可能ここでは、実行されます。

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

この方法は、これらのモデルに関連付けられている削減方法や再現性を向上させる方法など、実験ストローク分野の主要な質問に答える上で役立ちます。この技術の主な利点は、一般的な頸動脈を介して再灌流を可能にするため、動物間で解剖学的に変化するウィリスの円に依存しないため、実験的な結果測定に見られる変動に寄与する可能性がある。CCA容器の修理手順は、CCAが完全に特許を取得していることを確認するためにシーラントを使用する際に伴う技術的な困難のために、CCAの修理ステップが困難であるため、この方法の視覚的なデモンストレーションは、重要です, 修復後.まず、テストプロトコルに従ってマウスを準備し、麻酔します。その後、15個のメスブレードを使用して、露出した腹側頸部に1.5cmの正中線切開を行います。鈍解解法を用いて、唾液腺を横に静かに引き込み、気管を露出させる。その後、周囲の組織および迷走神経から解放された一般的な頸動脈(CCA)を解剖する。この後、CCAの下に解解不可能な6-0縫合糸の2つの小さなセクションを渡し、CCAに後側を、そして腹側を迷走神経に渡す。1つのシルクネクタイを外科医に近づけ、CCAの周りにゆるく結びます。その後、内側頸動脈と外頸動脈の分岐に向かって2番目のシルクネクタイをゆるやかに結びます。次に、遠位のネクタイのすぐ上に微小血管クリップを適用し、分岐が妨げられないようにします。CCAに小さな穴を作るためにマイクロ静脈はさみを使用してください。7-0シリコーンコーティングされたマイクロフィラメントをCCAに挿入し、微小血管クリップに向かって進めます。次に、遠位のネクタイを締めてフィラメントを所定の位置に固定します。そして、微小血管クリップを取り外すためにクリップホルダーを使用してください。次に、フィラメントを内部頸動脈、またはICAに進めます。フィラメントヘッドが遠位のネクタイを通過したら、ネクタイをしっかりと引っ張り、失血を防ぎます。遠位シルクのネクタイを使用して、CCAを持ち上げてマウスの体の外側に引っ張り、フィラメントをベンドに導き、翼状突き動脈(PPA)の開口部を越えて曲がります。フィラメントが所定の位置に置かれたら、遠位シルクのネクタイをさらに締めて固定します。MCAO期間の終わりに、白いフィラメントヘッドがはっきりと見えるまでフィラメントを引き込む。その後、遠位CCAのネクタイを緩めて、フィラメントヘッドを容器から取り除きます。次に、フィラメントヘッドを容器から完全に取り外します。この後、微小血管クリップを水平位置に配置し、CCA分岐に向かって、遠位のネクタイの隣に置きます。その後、外科医に向かって、近位CCAネクタイの下に別のクリップを配置します。慎重にシルクのネクタイの両方を除去するためにDumont 5鉗子を使用してください。そして、滅菌綿棒を使用して領域を乾燥させます。その後、フィブリノーゲンとトロンビンシーラント溶液1と2を無菌ペトリ皿に加えます。微小静脈はさみと鈍解解法を用いて、胸部腫筋の薄い腹側スライスを得る。次に、Dumont 5鉗子を使用して、組織パッドを取り、フィブリノーゲンおよびトロンビンシーラント溶液全体に均等に混合する。ここでは、組織パッドがCCA切開をカバーするのに十分な大きさであることを確認することが重要です。そして、それが2つの溶液全体に混合されると、それは過剰凝固および貧弱な接着を防ぐために、切開の上に直ちに置かれなければならない。2つの溶液の間に混合したら、CCA切開部に組織パッドを取り除く。組織パッドを中圧で切開部に平らにし、鉗子を開きます。組織パッドを所定の位置に保持したまま、遠位微小血管クリップを素早く取り外します。次に、組織パッドからの圧力をゆっくりと緩和し、切開領域の下で血液が流れることを可能にする。さて、ゆっくりと穏やかに近位微小血管クリップからの圧力を解放し、その後、完全に除去する。トップクリップを除去すると、少量の血液がシーラントを活性化することができます。遠位クリップの安定した解放は切開の場所で徐々に圧力の増加を可能にし、さらに活性化し、失敗した修理を防ぐのに役立つ。最後に、容器が密封されたら、解きもらえる6-0縫合糸で創傷を縫合する。このプロトコルでは、中大脳動脈閉塞、またはMCAOを、24匹の成体雄マウスに対して行った。ECAライゲーションの回避と鎮痛の追加は、MCAO後48時間で減量を減少させる傾向を示した。フィラメント除去の5分後、MCAの脳領域において、領域的脳血流が有意に増加した。灌流は、CCA容器の修理後、MCA領土への灌流の増加と、船舶の修理まで維持された。これは、CCAの修復は、ウィリスの円だけに依存と比較して、虚血領域への血液灌流の増加を可能にしたことを示唆している。T2加重MRIを使用して総LVを決定し、DTIスキャンを使用してMCAOの48時間後にコアLVを決定しました。これら2つのグループの間に有意な差はなかった。興味深いことに、CCA修理グループでは、トータルLVとコアLVの変動性が大幅に減少しました。我々の分析は、典型的なCCA合動手順に対して、MCAOに続いて、LVの30%削減を実証するために必要な動物が治療群あたりより少ないことが示された。この手順を試みる間、組織パックがCCA切開をカバーするのに十分なサイズであることを確認することが重要です。また、速度が重要であり、シーラント過凝固を防止するために、パッドをCCAに配置する前に。

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