Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

Esam S.B. Salem; Kazutoshi Murakami; Toshimasa Takahashi; Elise Bernhard; Vishnupriya Borra; Mridula Bethi; Takahisa Nakamura

doi:10.3791/58323

非放射性 L azidohomoalanine ラベル法による新生タンパク質合成解析用プライマリマウス肝細胞の分離

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Medicine

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Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

非放射性 L azidohomoalanine ラベル法による新生タンパク質合成解析用プライマリマウス肝細胞の分離

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08:04 min

October 23, 2018

DOI: 10.3791/58323-v

Esam S.B. Salem*^1,2, Kazutoshi Murakami*², Toshimasa Takahashi², Elise Bernhard², Vishnupriya Borra², Mridula Bethi², Takahisa Nakamura^2,3,4

¹Department of Pharmacology and Systems Physiology, College of Medicine,University of Cincinnati, ²Division of Endocrinology,Cincinnati Children's Hospital Medical Center, ³Division of Developmental Biology,Cincinnati Children's Hospital Medical Center, ⁴Department of Pediatrics, College of Medicine,University of Cincinnati

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ここでは、健康で機能的なプライマリマウス肝細胞の隔離のためのプロトコルを提案する.非放射性標識基板による肝新生タンパク質合成の検出については、肝臓でのエネルギー代謝の恒常性のコンテキストでのタンパク質合成の基になるメカニズムを理解するために提供されました。

この方法は、肥満、非アルコール性脂肪肝、および2型糖尿病における肝エネルギーおよびタンパク質生合成の分子変化に関する様々な代謝疾患研究分野における重要な質問に答える助けとなる。この技術の主な利点は、非放射性標識基質を介して機能的な一次マウス肝細胞および検出肝新生タンパク質の単離を容易にすることである。この方法の視覚的なデモンストレーションは、灌流ステップが小さく、細いマウス血管のために学ぶのが難しいので重要です。

肝臓灌流の場合は、右腎静脈との分岐で、24ゲージカテーテルを下の静脈カバまたはIVCに慎重に挿入します。カテーテル針を取り外し、IVC内でカニューレの位置を維持し、コネクタを使用して24ゲージカニューレを灌流管に接続します。4ミリリットルの永久流量で肝臓を温かいHBSSマイナスで穿ファジングし始めると、脾臓静脈を切断して内部血液を排出します。

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