Name: 養殖と O9 1 神経堤細胞の操作 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 学ぶO9-1神経堤細胞の培養・分化・遺伝子操作法。siRNAノックダウンとCRISPR-Cas9ゲノム編集を用いて、神経科学および幹細胞研究における神経堤細胞の多能性を解明する実験手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

ニコール Stancel、博士号を取得、ELS、テキサス心臓研究所で科学的な出版物の編集サポートを提供しました。また次の資金源に感謝: アメリカの心臓協会のナショナル センターの科学者開発補助金 (j. 王に 14SDG19840000)、Rolanette、Berdon ローレンス ・骨疾患プログラムのテキサスから 2014 ローレンス研究賞 (j. 王に)、健康 (DE026561 ・ j ・ ワン、DE016320、r. Maxson に DE019650 に DE025873) の国立機関。

<ol><li>Achilleos, A., Trainor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+stem+cells%3A+discovery%2C+properties+and+potential+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Neural crest stem cells: discovery, properties and potential for therapy.</a> Cell Research. 22 (2), 288-304 (2012).</li>
<li>Le Douarin, N. M., Dupin, E. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0959437X03001138">Multipotentiality of the neural crest.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13 (5), 529-536 (2003).</li>
<li>Santagati, F., Rijli, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cranial+neural+crest+and+the+building+of+the+vertebrate+head%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cranial neural crest and the building of the vertebrate head.</a> Nature Reviews. Neuroscience. 4 (10), 806-818 (2003).</li>
<li>Cordero, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cranial+neural+crest+cells+on+the+move%3A+their+roles+in+craniofacial+development%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Medical+Genetics.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Cranial neural crest cells on the move: their roles in craniofacial development.</a> American Journal of Medical Genetics. Part A. 155 (2), 270-279 (2011).</li>
<li>Trainor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Craniofacial+birth+defects%3A+The+role+of+neural+crest+cells+in+the+etiology+and+pathogenesis+of+Treacher+Collins+syndrome+and+the+potential+for+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Medical+Genetics.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Craniofacial birth defects: The role of neural crest cells in the etiology and pathogenesis of Treacher Collins syndrome and the potential for prevention.</a> American Journal of Medical Genetics. Part A. 152 (12), 2984-2994 (2010).</li>
<li>Bronner, M. E., Simoes-Costa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neural+crest+migrating+into+the+twenty-first+century%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The neural crest migrating into the twenty-first century.</a> Current Topics in Developmental Biology. , 115-134 (2016).</li>
<li>Zurkirchen, L., Sommer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quo+vadis%3A+tracing+the+fate+of+neural+crest+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Quo vadis: tracing the fate of neural crest cells.</a> Current Opinion in Neurobiology. 47, 16-23 (2017).</li>
<li>Sauka-Spengler, T., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+regulatory+network+orchestrates+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">A gene regulatory network orchestrates neural crest formation.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 9 (7), 557-568 (2008).</li>
<li>Knecht, A. K., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+the+neural+crest%3A+a+multigene+process%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Induction of the neural crest: a multigene process.</a> Nature Reviews. Genetics. 3 (6), 453-461 (2002).</li>
<li>Steventon, B., Carmona-Fontaine, C., Mayor, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+network+during+neural+crest+induction%3A+from+cell+specification+to+cell+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Genetic network during neural crest induction: from cell specification to cell survival.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 16 (6), 647-654 (2005).</li>
<li>Raible, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+neural+crest%3A+achieving+specificity+in+regulatory+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Development of the neural crest: achieving specificity in regulatory pathways.</a> Current Opinion in Cell Biology. 18 (6), 698-703 (2006).</li>
<li>Dupin, E., Sommer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+progenitors+and+stem+cells%3A+from+early+development+to+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neural crest progenitors and stem cells: from early development to adulthood.</a> Developmental Biology. 366 (1), 83-95 (2012).</li>
<li>Henion, P. D., Weston, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+and+pattern+of+cell+fate+restrictions+in+the+neural+crest+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Timing and pattern of cell fate restrictions in the neural crest lineage.</a> Development. 124 (21), 4351-4359 (1997).</li>
<li>Harris, M. L., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+specification+in+neural+crest+cell+pathfinding%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Lineage specification in neural crest cell pathfinding.</a> Developmental Dynamics. 236 (1), 1-19 (2007).</li>
<li>Luo, R., Gao, J., Wehrle-Haller, B., Henion, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identification+of+distinct+neurogenic+and+melanogenic+neural+crest+sublineages%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Molecular identification of distinct neurogenic and melanogenic neural crest sublineages.</a> Development. 130 (2), 321-330 (2003).</li>
<li>Betters, E., Liu, Y., Kjaeldgaard, A., Sundstrom, E., Garcia-Castro, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+early+human+neural+crest+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of early human neural crest development.</a> Developmental Biology. 344 (2), 578-592 (2010).</li>
<li>Yang, S. Y., Beavan, M., Chau, K. Y., Taanman, J. W., Schapira, A. H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+human+neural+crest+stem+cell-derived+dopaminergic+neuronal+model+recapitulates+biochemical+abnormalities+in+GBA1+mutation+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">A human neural crest stem cell-derived dopaminergic neuronal model recapitulates biochemical abnormalities in GBA1 mutation carriers.</a> Stem Cell Reports. 8 (3), 728-742 (2017).</li>
<li>Ishii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stable+cranial+neural+crest+cell+line+from+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">A stable cranial neural crest cell line from mouse.</a> Stem Cells and Development. 21 (17), 3069-3080 (2012).</li>
<li>Yumoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta-activated+kinase+1+%28Tak1%29+mediates+agonist-induced+Smad+activation+and+linker+region+phosphorylation+in+embryonic+craniofacial+neural+crest-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">TGF-beta-activated kinase 1 (Tak1) mediates agonist-induced Smad activation and linker region phosphorylation in embryonic craniofacial neural crest-derived cells.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (19), 13467-13480 (2013).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yap+and+Taz+play+a+crucial+role+in+neural+crest-derived+craniofacial+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Yap and Taz play a crucial role in neural crest-derived craniofacial development.</a> Development. 143 (3), 504-515 (2016).</li>
<li>Heallen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippo+pathway+inhibits+Wnt+signaling+to+restrain+cardiomyocyte+proliferation+and+heart+size%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Hippo pathway inhibits Wnt signaling to restrain cardiomyocyte proliferation and heart size.</a> Science. 332 (6028), 458-461 (2011).</li>
<li>Wang, J., Martin, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippo+pathway%3A+An+emerging+regulator+of+craniofacial+and+dental+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Hippo pathway: An emerging regulator of craniofacial and dental development.</a> Journal of Dental Research. 96 (11), 1229-1237 (2017).</li>
<li>Pan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hippo+signaling+pathway+in+development+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">The hippo signaling pathway in development and cancer.</a> Developmental Cell. 19 (4), 491-505 (2010).</li>
<li>Xiao, Y., Leach, J., Wang, J., Martin, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippo%2FYap+signaling+in+cardiac+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Treatment+Options+in+Cardiovascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hippo/Yap signaling in cardiac development and regeneration.</a> Current Treatment Options in Cardiovascular Medicine. 18 (6), 38(2016).</li>
<li>Yu, F. X., Meng, Z., Plouffe, S. W., Guan, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippo+pathway+regulation+of+gastrointestinal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Hippo pathway regulation of gastrointestinal tissues.</a> Annual Review of Physiology. 77, 201-227 (2015).</li>
<li>Fu, V., Plouffe, S. W., Guan, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+pathway+in+organ+development%2C+homeostasis%2C+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The Hippo pathway in organ development, homeostasis, and regeneration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 49, 99-107 (2017).</li>
<li>Moya, I. M., Halder, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+pathway+in+cellular+reprogramming+and+regeneration+of+different+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The Hippo pathway in cellular reprogramming and regeneration of different organs.</a> Current Opinion in Cell Biology. 43, 62-68 (2016).</li>
<li>Piccolo, S., Dupont, S., Cordenonsi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+YAP%2FTAZ%3A+hippo+signaling+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The biology of YAP/TAZ: hippo signaling and beyond.</a> Physiological Reviews. 94 (4), 1287-1312 (2014).</li>
<li>Bauer, D. E., Canver, M. C., Orkin, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+genomic+deletions+in+mammalian+cell+lines+via+CRISPR%2FCas9%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Generation of genomic deletions in mammalian cell lines via CRISPR/Cas9.</a> Journal of Visual Experiments : JoVE. (95), e52118(2015).</li>
<li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+engineering+using+the+CRISPR-Cas9+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system.</a> Nature Protocols. 8 (11), 2281-2308 (2013).</li>
<li>Manderfield, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippo+signaling+is+required+for+Notch-dependent+smooth+muscle+differentiation+of+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Hippo signaling is required for Notch-dependent smooth muscle differentiation of neural crest.</a> Development. 142 (17), 2962-2971 (2015).</li>
<li>Hindley, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+pathway+member+YAP+enhances+human+neural+crest+cell+fate+and+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The Hippo pathway member YAP enhances human neural crest cell fate and migration.</a> Scientific Reports. 6, 23208(2016).</li>
<li>Nejigane, S., Haramoto, Y., Okuno, M., Takahashi, S., Asashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcriptional+coactivators+Yap+and+TAZ+are+expressed+during+early+Xenopus+development%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The transcriptional coactivators Yap and TAZ are expressed during early Xenopus development.</a> International Journal of Developmental Biology. 55 (1), 121-126 (2011).</li>
<li>Grefte, S., Vullinghs, S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Torensma, R., Von den Hoff, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel%2C+but+not+collagen+I%2C+maintains+the+differentiation+capacity+of+muscle+derived+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Matrigel, but not collagen I, maintains the differentiation capacity of muscle derived cells in vitro.</a> Biomedical Materials. 7 (5), 055004(2012).</li>
<li>Kang, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+matrigel+on+the+osteogenic+potential+of+canine+adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Medical+Science%22%5BJournal%5D)">Effect of matrigel on the osteogenic potential of canine adipose tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Journal of Veterinary Medical Science. 74 (7), 827-836 (2012).</li>
<li>Uemura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel+supports+survival+and+neuronal+differentiation+of+grafted+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Matrigel supports survival and neuronal differentiation of grafted embryonic stem cell-derived neural precursor cells.</a> Journal of Neuroscience Research. 88 (3), 542-551 (2010).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

NCC は、さまざまな組織や臓器に汎用性と主要コントリビューターを胚形態形成中です。O9 の-1 セルの行は、その潜在的な多くの異なったセルタイプに区別するためを維持し、Ncc、遺伝子機能とながん分子制御を勉強するため生体外で役に立つツールの生体内特性を模倣します。O9 の-1 セルの別の状態は、異なる神経堤の子孫体内O9 1 細胞の培養条件によって対応があります。O9 の-1 細胞は文化の条件を差別化する、正規の幹細胞文化のようで培養したときの多能性の状態で維持できます。差別 O9 1 セル可能性があります pre-migratory と渡り鳥多能性幹のようながん体内に対応しています。さらに、O9 1 セルは遺伝子機能および多能性幹から Ncc の分化時の調節を研究するための重要な利点である特定の分化培養条件下で多くの異なったセルタイプに区別することができます。特定の区別されたセルにセルを入力します。O9 の-1 細胞は種々 の細胞に分化する細胞の運命があるを用いて神経堤の子孫体内の対応があります。研究関心に応じて O9 1 セルを操作および補完...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58346/culturing-and-manipulation-of-o9-1-neural-crest-cells">Culturing and Manipulation of O9-1 Neural Crest Cells</a>. The Protocol section was updated.
Step 2.1 was updated from:
Prepare basal media for O9-1 cell culture by adding the following in DMEM (final concentrations are indicated): 15% FBS, 0.1 mM minimum essential media (MEM) nonessential amino acids, 1 mM sodium pyruvate, 55 mM beta-mercaptoethanol, 100 U/mL penicillin, 100 U/mL streptomycin, 2 mM L-glutamine, 103 units/mL leukemia inhibitory factor (LIF; added immediately before use, do not add to stock bottle), and 25 ng/mL fibroblast growth factor-basic (bFGF; added immediately before use, do not add to stock bottle).
to:
Prepare basal media for O9-1 cell culture by adding the following in DMEM (final concentrations are indicated): 15% FBS, 0.1 mM minimum essential media (MEM) nonessential amino acids, 1 mM sodium pyruvate, 55 &#181;M beta-mercaptoethanol, 100 U/mL penicillin, 100 &#181;g/mL streptomycin, 2 mM L-glutamine, 103 units/mL leukemia inhibitory factor (LIF; added immediately before use, do not add to stock bottle), and 25 ng/mL fibroblast growth factor-basic (bFGF; added immediately before use, do not add to stock bottle).
Step 5.1.1 was updated from:
To prepare osteogenic differentiation media, dilute the following in alpha-MEM (final concentrations are indicated): 0.1 mM dexamethasone, 100 ng/mL bone morphogenetic protein 2 (BMP2), 50 &#181;g/mL ascorbic acid, 10 mM b-glycerophosphate, 10% FBS, 100 U/mL penicillin, and 100 mg/mL streptomycin.
to:
To prepare osteogenic differentiation media, dilute the following in alpha-MEM (final concentrations are indicated): 0.1 &#181;M dexamethasone, 100 ng/mL bone morphogenetic protein 2 (BMP2), 50 &#181;g/mL ascorbic acid, 10 mM b-glycerophosphate, 10% FBS, 100 U/mL penicillin, and 100 &#181;g/mL streptomycin.
Step 5.2.1 was updated from:
To prepare chondrocyte differentiation media, dilute the following in alpha-MEM (final concentrations are indicated): 5% fetal calf serum (FCS), 1% insulin-transferrin-selenium (ITS), 100 U/mL penicillin, 100 mg/mL streptomycin, 10 ng/mL transforming growth factor beta (TGF-b3), 50 mg/mL ascorbic acid, 10 ng/mL BMP2, 0.1 mM dexamethasone, and 1 mM sodium pyruvate.
to:
To prepare chondrocyte differentiation media, dilute the following in alpha-MEM (final concentrations are indicated): 5% fetal calf serum (FCS), 1% insulin-transferrin-selenium (ITS), 100 U/mL penicillin, 100 &#181;g/mL streptomycin, 10 ng/mL transforming growth factor beta (TGF-b3), 50 &#181;g/mL ascorbic acid, 10 ng/mL BMP2, 0.1 &#181;M dexamethasone, and 1 mM sodium pyruvate.
Step 5.4.1 was updated from:
To prepare glial cell differentiation media, dilute the following in DMEM/F12 (final concentrations are indicated): 1x B-27 supplement, 2 mM L-glutamine, 50 ng/mL BMP2, 100 U/mL penicillin, 100 mg/mL streptomycin, 50 ng/mL LIF, and 1% heat-inactivated FBS.
to:
To prepare glial cell differentiation media, dilute the following in DMEM/F12 (final concentrations are indicated): 1x B-27 supplement, 2 mM L-glutamine, 50 ng/mL BMP2, 100 U/mL penicillin, 100 &#181;g/mL streptomycin, 50 ng/mL LIF, and 1% heat-inactivated FBS.

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58346/culturing-and-manipulation-of-o9-1-neural-crest-cells">Culturing and Manipulation of O9-1 Neural Crest Cells</a>. The Protocol section was updated.

Erratum: Culturing and Manipulation of O9-1 Neural Crest Cells

神経堤細胞 (Ncc) は、渡り鳥の驚くべき能力の萌芽期の開発の間に一時的な存在と多能性幹細胞です。Ncc は、表面の外胚葉と神経管の間発信や1萌芽期の開発の間に胚の他の部分への移行します。その機能領域に基づいて、いくつかの頭蓋を含む、さまざまな種類、トランク、迷走神経、仙骨の, と心臓 Ncc に Ncc を分類できます。さらに、Ncc は平滑筋細胞、骨細胞、神経細胞などの複数の細胞系統に分化し、様々 な組織2,3を生じさせるできます。Ncc の開発は、複雑な一連のさまざまな分子シグナルによって、微調整されてます形成イベントが特徴です。Ncc の複雑な規制と多数の構造への重要な貢献を与え、NCC 開発の破綻一般的に先天異常、すべてひと先天性先天性欠損症の約 30% を占めているにつながることができます。神経堤の開発中に異常口唇口蓋、欠陥につながることができます鼻形成、症候群、欠陥欠陥心臓流出路なども乳児死亡率1,4,5,6,7. NCC 開発の分子機構の解明は NCC 開発中の欠陥に起因する疾患の治療法開発のために重要です。様々 な生体外でそして生体内の使用に近づく8,9,10、11,12,13,14 ,15、かなり進展した NCC 研究。生体内で鶏、両生類、ゼブラフィッシュ、マウスなどの動物モデルは、Ncc1を調査する使用されています。さらに、早い人間の胚の開発16に NCC 移行の過程を研究する人間の胚が使用されています。生体外でセルのモデルながん患者の皮下脂肪に由来する人間の Ncc などパーキンソン病17を調査に使用されています。E8.5 マウス胚18から分離した内因性の Ncc の大衆文化から派生した当初、O9 1 NCC の行は勉強してながん。 重要なは、非分化培養条件下での強力な細胞モデル、O9 1 セル多能性幹のようながん。しかし、種類の識別細胞、平滑筋細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、グリア細胞18などに、さまざまな文化状況で O9 1 セルを区別できます。これらのプロパティを指定すると、セル O9 1 使用されている広く頭蓋顔面欠損19,20の分子メカニズム解明などの NCC 関連の研究。
O9 の-1 細胞を維持し、異なったセルタイプに O9 1 細胞を分化、CRISPR Cas9 ゲノム編集と小さい干渉の RNA (siRNA) 遺伝子の機能喪失の研究を実行することによって O9 1 セルを操作するため詳細なプロトコルを提供するここでは、-ノックダウン技術を媒介します。代表的な例としてヤップおよびTazの機能喪失を研究する O9 1 セルの使用が説明されます。ヤップと Taz は、シグナル伝達経路は、細胞の増殖・分化・ アポトーシスの重要な役割を果たしているカバの下流のエフェクターです。カバの経路は、開発といくつかの異なる組織や臓器の恒常性だけでなくさまざまな病気20,21,22,23 の病因に重要であることも示されています。 ,24,25,26,,2728。カバがシグナル伝達のコア コンポーネントには、腫瘍サプレッサー滅菌 20 のようなキナーゼ Mst1/2、WW ドメイン含有サルバドール足場タンパク質、大きい腫瘍のサプレッサーの相同物 (Lats1/2) キナーゼが含まれます。カバ シグナリング ヤップおよび Taz の活性を阻害して、細胞質の劣化を促進します。カバから抑圧せずヤップおよび Taz が核に若しし、転写共活性化因子として機能します。最近示した具体的Wnt1creを使用してヤップおよび Taz のエフェクタ マウス Ncc をシグナリング カバを不活化して重度の E10.5 で胚致死の結果Wnt1Cre2SORドライバー顎顔面欠損20。ヤップと Ncc の Taz の役割を調べるため O9 1 細胞を用いた研究も行ってきました。NCC の増殖と分化、ヤップ・タズノックダウン ヤップおよび Taz 関数を勉強するセル O9 1 細胞で siRNA を使用して生成された、ヤップノックアウト細胞だった CRISPR Cas9 ゲノム編集を使用して生成されます。その他の経路の異なるターゲット遺伝子遺伝子の機能喪失と同じ戦略を適用できます。さらに、ゲインの機能研究とトランスフェクション アッセイも適用できます O9 1 細胞遺伝子の機能と制御の研究をします。ここで説明されているプロトコルは、O9 の-多能性幹細胞性を維持するために細胞を培養するため、異なる培養条件下での他の種類の細胞に分化 O9 1 細胞および遺伝子の機能を研究するために研究者によってガイドとして使用してNcc の分子機構。

<table><tbody><tr><td>アクティブSTOフィーダー細胞</td><td>ATCC</td><td>ATCC CRL-1503</td><td>マイトマイシンC不活化形態でも利用可能、カタログ# ATCC 56-X</td></tr><tr><td>O9-1マウス脳神経堤細胞株</td><td>ミリポアシグマ</td><td>SCC049</td><td></td></tr><tr><td>DMEM、高グルコース、グルタミンなし</td><td>Gibco</td><td>11960-044</td><td></td></tr><tr><td>DMEM、高グル</td>コース <td>Hyclone</td><td>SH30243.01</td><td></td></tr><tr><td>FBS(ウシ胎児血清)</td><td>ミリポア シグマ</td><td>ES-009-B</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン - ストレプトマイシン</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン 200 mM (100x)</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>豚皮からのゼラチン</td><td>Sigma</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA 0.25% HBSS</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-510</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水) なしカルシウムまたはマグネシウム</td><td>ロンザ</td><td>17-512F</td><td></td></tr><tr><td>MEM 非必須アミノ酸 (MEM NEAA) 100Xx</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>ピルビン酸ナトリウム (100 mM)</td> <td>Gibco</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>2-メルカプトエタノール</td><td>Sigma</td><td>M-7522</td><td></td></tr><tr><td>ESGRO 白血病抑制因子 (LIF) 106 単位/mL</td><td>ミリポア シグマ</td><td>ESG1106</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒト線維芽細胞増殖因子-塩基性(rhFGF-basic)</td><td>R&D Systems</td><td>233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>マイトマイシン C</td><td>ロシュ</td><td>10107409001</td><td></td></tr><tr><td>マトリゲル基底行列</td><td>コーニング</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>DMSO (ジメチルスルホキシド)</td> <td>ミリポア Sigma</td><td>MX1458-6</td><td></td></tr><tr><td>リポフェクタミン RNAiMAX</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>13778-075</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I (1x)</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td></td></tr><tr><td>最小必須培地、アール塩、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシドを含むα 1xL-グルタミン</td><td>コーニング</td><td>10-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>ON-TARGETplus Wwtr1 siRNA</td><td>ダルマコン</td><td>L-041057</td><td></td></tr><tr><td>ON-TARGETplus ノンターゲティングプール</td><td>ダルマコン</td><td>D-001810</td><td></td></tr><tr><td>ON-TARGETplus Yap1 siRNA</td><td>ダルマコン</td><td>L-046247</td><td></td></tr><tr><td>FCS (子牛胎児血清)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ITS (インスリントランスフェリンセレン)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TGF-b3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アスコルビン酸</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BMP2(骨形成タンパク質2)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>デキサメタゾン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>B-27サプリメント</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

養殖と o9 1 神経堤細胞の操作

Culturing and Manipulation of O9-1 Neural Crest Cells

神経堤細胞 (Ncc) は異なったセルタイプに区別でき、複数の組織や臓器に上昇を与える多能性幹細胞に移行しています。O9 の-1 セルの行は、内因性から派生したマウスの胚の Ncc とその率を維持します。ただし、特定のカルチャ条件下で O9 1 細胞は異なる種類の細胞に分化することができます、研究用途の広い範囲で利用します。最近では、マウスでの研究と O9 1 細胞研究の組み合わせであることを示したシグナリング経路エフェクタ ヤップおよび Taz 顎顔面神経堤由来で重要な役割を果たすカバ。O9 の-細胞培養プロセスは他の細胞よりも複雑ですが、O9 1 細胞ラインは Ncc体外を調査するため強力なモデルです。ここでは、異なる種類の細胞、平滑筋細胞、骨芽細胞などに分化 O9 1 細胞のプロトコルと同様に、その、幹細胞性を維持するために O9 1 細胞株を培養するためのプロトコルを提案する.また、CRISPR Cas9 削除と小さい干渉の RNA を介したノックダウンによる O9 1 細胞の遺伝子の機能喪失の研究を実行するためのプロトコルを説明します。

ノックダウンとノックアウト実験の目的は、ヤップおよびTazの機能喪失 O9 1 細胞の効果を研究することだった。ノックダウンとノックアウト実験前に我々 確かめなければならない基底メディアと文化 O9 の-1 セル (例では、図 1、および回復 O9 1 細胞のように、全体の板をカバーする基底膜マトリックス ニーズのため上記のように準備します。図 2に示すように、液体窒素)。行ったノックダウン実験前述のヤップ・タズが同時にダウン ノックしました。ヤップsiRNA とTaz siRNA の同量は、メーカーの推奨最終巻に追加されました。コントロール プレートに nontargeting siRNA の等しい量を追加しました。
...

O9 1 は多能性マウス神経堤細胞株です。ここで O9 1 細胞を培養、特定の細胞型へ O9 1 細胞と分化および遺伝子 siRNA によるノックダウンや CRISPR Cas9 ゲノム編集による O9 1 セルを操作するための詳細なステップバイ ステップ プロトコルについて述べる。

養殖と O9 1 神経堤細胞の操作

Neural crest cells (NCCs) are migrating multipotent stem cells that can differentiate into different cell types and give rise to multiple tissues and ...

O9-1細胞株は、インビトロで神経堤細胞を研究するための非常に有用なツールです。それは研究の様々な使用の応用の広い範囲で使用するための大きな可能性を秘めている。O9-1細胞は、簡単にアクセスできるなどの明らかな利点を持ち、実験に十分な数の細胞を迅速に取得し、神経堤細胞のインビトロ研究に優れた強力な方法となっています。まず、テキストプロトコルに従ってO9-1細胞培養用の基底培地を準備します。次に、基底培地を濾過し、それをホイルで包んで光から保護します。この後、テキストプロトコルに従って、活性化されたSTOセルから条件付き基礎培地を収集します。まず、氷上の基質膜マトリックスのアリコートを2時間解凍する。その後、10%FBSで濾過されたDMEMで基膜マトリックスを希釈し、0.5mg/mlの最終濃度にします。プレートに基膜マトリックスを室温で1時間コーティングします。次いで、プレートを傾けながら基部膜マトリックスを吸引する。30°Cで30分間乾かします。プレートに基膜マトリックスを追加する場合は、細胞特性を維持し、実験の間に不必要な変動を避けるために、溶液が均一にウェルを覆っていることを確認してください。37°Cの水浴にクライオバイアルを置くことによってO9-1細胞を回復する。溶液が完全に液体に変わるまで、バイアルをゆっくりと旋回します。この後、細胞溶液をクライオバイアルから15ml遠心管に移します。10%FBS の DMEM を 5 巻追加して、セルを再中断します。180 Gsで3分間細胞を遠心分離し、次にスーパーナテントを吸引し、ペレットを乱さないよう注意する。次に、LIFおよびBFGFを補充した条件付き基底培地中のペレットを再懸濁する。6つのウェルプレートに細胞を播種し、プレートを攪拌して細胞を均等に播種します。プレートを攪拌するとき、プレートを渦巻くと細胞が中心に向かって集中するので、水平および垂直にそうしてください。そして、これらの細胞が一晩標準的な細胞培養インキュベーターに付着し、成長することを可能にする。メディアを変更する前に、セルが接続されていることを確認してください。O9-1細胞が80%合流に達すると、基質膜マトリックスを解凍し、先に述べたように基部膜マトリックス被覆板を調製する。次に、膜マトリックスにLIFとBFGFを添加した基底培地を添加します。2mlのDPBSでウェルを2回やさしくすすります。その後、セルを摂氏37度で0.05%トリプシンEDTAの1mlで3分間解化する。ウェルの表面全体に液体を繰り返しピペット化して、同量のDMEMを10%FBSで中和します。次いで、細胞溶液を遠心分離管に移す。そして、180 Gs.Aspirateで3分間遠心分離機細胞のペレットを乱すことなくスーパーナテントを吸引する。次に、LIFおよびBFGFを補ったコン

culturing-and-manipulation-of-o9-1-neural-crest-cells

Research

JoVE Journal

Genetics

遺伝学

in vitroで神経堤幹細胞（NCSC）を育成するために、特殊な培地（NCSCM）が必要です。...

マウス神経堤幹細胞の培養のためのニワトリ胚抽出物の製造

神経管から胚の神経堤の分離の使用を容易に...

胎児マウス神経管から神経堤細胞の単離および培養

このビデオでは、神経幹細胞の特定の目的遺伝子をサイレンシングし、適切な分化培地を使用して目的の細胞型に分化するための低分子干渉RNA(siRNA)の使用を示しています。この手順により、神経幹細胞の分化過程における特定の遺伝子の重要な役割の研究が可能になります。...

siRNAを介した神経幹細胞における遺伝子サイレンシング

このビデオは、ニワトリ胚の中脳領域から脳神経襞を分離する技術を示しています。神経襞の詳細な解剖過程、その配置、およびフィブロネクチン被覆ガラスへの付着を示し、続いて神経襞からの神経堤細胞の移動を観察します。...

ニワトリ胚からの頭蓋神経襞の単離による神経堤細胞培養

このプロトコルは、主に細胞移動の研究のために、マウスモデルからの頭蓋神経堤細胞の解剖および培養について説明する。使用されるライブイメージング技術と速度と細胞形状の変化の解析について述べた。...

神経クレスト細胞の形成と移動の研究のためのマウスからの原発性頭蓋神経クレスト細胞の解剖、培養および分析

本プロトコルでは、ヒト多能性幹細胞からの神経節後交感神経ニューロンの生成に対する安定した、高効率な分化戦略を説明する。このモデルは、複数の自律神経障害の研究の使用のためにニューロンを利用可能にします.

フィーダーフリーおよび化学的に定義された培養条件下でのヒト多能性幹細胞を用いた後神経節系交感神経ニューロンの効率的な分化

神経損傷後の嗅覚神経再生能力(OEG)の神経再生能力を評価するインビトロモデルを発表する。これは、OEG単層上のアキソトマイズ化された直上神経節ニューロン(RGN)の共培養と、RGN軸索およびソマト樹状マーカーを分析することによって、軸索再生のその後の研究に基づいています。...

アキソトマイズ化ラットレチナル神経節ニューロンの嗅覚エンシアシンググリアの共培養、成人軸索再生のインビトロモデルとしての

多能O9-1神経堤細胞と様々な剛性のポリアクリルアミドヒドロゲルを使用して 、インビトロで 機械的信号を研究するための詳細なステップバイステッププロトコルについて説明します。...

神経堤細胞の機械的信号を研究するための最適化されたO9-1/ヒドロゲルシステム

この汎用性の高いプロトコルは、ニワトリ胚からの脳神経襞の切除による遊走性神経堤細胞(NCC)の単離について説明しています。プレーティングとインキュベーションを行うと、遊走性NCCが神経襞の外植片から出現し、単純化された2D環境での細胞形態と遊走の評価を可能にします。...

ニワトリ頭蓋神経堤細胞培養物の作製と形態解析

このプロトコルは、神経堤細胞のヒアルロナンに富む細胞外マトリックスへのin vivo移動に関与する分子の機能解析に適したin...

インビトロ ヒアルロン酸に富む細胞外マトリックスが神経堤細胞遊走に及ぼす影響の検討

マウス胚性幹細胞から脳神経堤細胞を作製するための再現性のあるサイズのニューロスフェアを生成するための三次元(3D) in vitro...

多重化の試みのための頭蓋神経堤の細胞の三次元 の試験管 外分化のプロトコル

学ぶO9-1神経堤細胞の培養・分化・遺伝子操作法。siRNAノックダウンとCRISPR-Cas9ゲノム編集を用いて、神経科学および幹細胞研究における神経堤細胞の多能性を解明する実験手法です。

養殖と O9 1 神経堤細胞の操作

さらに動画を探す