ラットにおける渇望のインキュベーションを測定するためエアコンの場所設定プロトコル
2018年11月6日
ここでは、モルヒネ エアコン場所選好 (CPP) プロトコルとラットの渇望のインキュベーションを測定する説明です。
この方法は、薬物使用欲求と渇望応答のインキュベーションに関する薬物中毒分野のいくつかの重要な質問に対処するのに役立ちます.モルヒネコンディショニングのわずか6日間で、条件付き場所優先メモリ応答を18日間まで延長して、ラットモデルにおける渇望現象を観察することができます。このラットモルヒネコンディショニングモデルの影響は、渇望のインキュベーションの根本的なメカニズムを理解するのに向かって広がっています。
手順を開始する前に、2つの大きな、黒い30 25、30センチメートル側の部屋からなる3つのチャンバー条件付き場所選好装置を構築する。そして、滑らかで白いPVCの床を持つ1つの白い11 25で30センチメートルの中間室。次に、ラットの初期の好みのテストのためにサイドチャンバーに異なる触覚キューを追加します。
動物の事前調整のために、装置全体への自由なアクセスを可能にするためにギロチンドアを取り外す。そして、中央の部屋にネズミを置きます。動物の活動を15分間記録し、3日目の両側チャンバーで過ごした時間をベースラインとして計算する。
動物のコンディショニングのために、モルヒネ条件付きラット群を1キログラムあたり1ミリリットルのミリリットル(10ミリグラム)で注射し、朝にモルヒネ塩酸塩IPあたり10ミリグラムを使用する。そして、1キログラム当たり1ミリリットルで、10時間後、毎日6日間。各ラットを適切な薬剤対に入れ、非好適または生理食前を対にし、各注射直後に45分間好ましいチャンバーを用いた。
モルヒネ調節動物の試験のために、最後のコンディショニングセッションの後の2日目、10日目、および18日目に、ギロチンドアを取り外して装置全体に自由にアクセスできるようにします。そして、モルヒネフリー状態で装置全体を自由に探査するために、中間室に配置後15分間各動物の活動を記録する。モルヒネ群および生理食合グループにおける条件付き場所優先の記憶保持は、最後のコンディショニングセッション後の複数の時点での条件付き場所優先スコアを測定することによって評価される。
側室へのエントリの数は、自己管理パラダイムにおけるアクティブ応答の数に似ており、モルヒネの強化特性を反映し、渇望のインキュベーションを示すエントリの数が増加する。図示したように、モルヒネ条件付き場所の好みは、このプロトコルを使用して正常に確立することができます。最後のコンディショニングセッションの後、最大18日間、長期モルヒネ報酬メモリを誘導する。
この手順を試みる際には、触覚の手掛かりのバランスをとることを忘れないようにしてください。この手順に従って、各調整後の復帰のような他の手段を実行することができます。渇望のインキュベーションの下での復帰が同様の根本的なメカニズムを持っているかどうかについての追加の質問に答えるために。
復帰後、この技術は、ラットの条件付き場所優先パラダイムにおける渇望のインキュベーションを探求するために、薬物添加の分野の研究者のための道を開いた。
概要
本記事では、ラットにおける渇望のインキュベーションを測定するためのモルヒネ条件付け場所好みの（CPP）プロトコルについて解説します。この手法により、薬物渇望と依存症の根底にあるメカニズムを探索することが可能になります。
研究の主要構成要素
科学分野
- 神経科学
- 行動心理学
- 薬理学
背景
- 薬物への渇望を理解することは、依存症研究において極めて重要です。
- 条件付け場所好感度は、薬物に関連する記憶を評価するための一般的な手法です。
- 渇望の潜伏現象は、このモデルを通じて研究することが可能です。
- 先行研究により、薬物条件付けの長期的影響が示されています。
研究目的
- ラットにおいて信頼性の高いモルヒネCPPモデルを確立すること。
- 時間の経過に伴う渇望のインキュベーション（増強）を調査すること。
- 行動反応を通じてモルヒネの強化特性を評価すること。
使用された手法
- テスト用に3室構造のCPP装置を構築した。
- ベースラインの嗜好性を確立するために、ラットに事前条件付けを行った。
- 6日間にわたり、モルヒネおよび生理食塩水の注射を投与した。
- 条件付け後、複数の時点で活動量と嗜好性を測定した。
主要な結果
- 長期的な記憶保持を伴うモルヒネCPPの構築に成功した。
- 薬物対チャンバーへの進入回数の増加は、渇望のインキュベーション（増強）を示していた。
- 行動反応は、モルヒネの強化特性を反映していた。
- これらの知見は、依存症における渇望メカニズムのさらなる探求を支持するものである。
結論
- モルヒネCPPモデルは、薬物渇望の研究に有効である。
- モルヒネによる条件付けの長期的な影響を観察することができる。
- このプロトコールは、依存症のダイナミクスの理解に寄与する。
よくある質問
産業界における重要性
このプロトコルにより、バイオ医薬品の研究者は、依存症治療における重要な課題である、禁欲期間中の薬物渇望の時間依存的な増加をモデル化することができます。ラットにおける渇望のインキュベーション（潜伏期間中の増強）を捉えることで、再発防止を目的とした新規介入策のターゲット検証およびメカニズムのデリスキングを支援します。本手法は、物質使用障害のパイプラインにおいて、前臨床スクリーニングと臨床候補薬の評価を繋ぐトランスレーショナルな橋渡しを提供します。
バイオ医薬品研究開発における戦略的応用
初期発見およびターゲットバリデーション
- 科学的価値： 長期的な報酬記憶および渇望の神経生物学に関する治療仮説を検証する。
- 運用的価値： インキュベーション現象の行動学的リードアウトを通じて、機能的なターゲット検証を可能にする。
- 予測的価値： 時間依存的な渇望の増強を調節するターゲットを特定することで、ポートフォリオの優先順位付けを支援する。
スクリーニングおよびアッセイの開発
- アッセイの準備：渇望エンドポイントに対する化合物スクリーニングに向けて、バリデートされた生物学的システムを準備します。
- 定量的な出力：能動的反応の指標としてチャンバーへの進入回数を測定し、用量反応解析を可能にします。
- 再現性：標準化された触覚キューとチャンバー設計により、渇望評価におけるラボ間の整合性を維持します。
翻訳および前臨床研究
- 疾患との関連性：ヒトの中毒において臨床的に観察される現象である、渇望のインキュベーションをモデル化しています。
- 前臨床の連続性：コンディショニング後18日間の観察ウィンドウを通じて、創薬研究を橋渡しします。
- リスク調整後の意思決定：試験化合物による渇望インキュベーションの減弱に基づき、Go/No-go判断基準に情報を与えます。
パイプラインおよびワークフローの統合
この手法は、標的仮説の検証からリード最適化に至る創薬の連続的なプロセスに適合し、特に長期の禁欲期間における渇望のインキュベーションを抑制する化合物の評価を可能にします。
- 基礎生物学研究： モルヒネに関連する記憶の持続性と渇望による神経適応のメカニズム解明を支援します。
- スクリーニング： 渇望のインキュベーションに対する化合物の影響を評価するための定量的な行動 readout（チャンバーへの進入回数）を提供します。
- 分析： 時系列の嗜好性と進入データを生成し、禁欲期間にわたる条件の比較を可能にします。
- トランスレーショナルリサーチ： 臨床的なインキュベーションのタイムラインと整合しており、再発防止戦略に対する予測妥当性を裏付けます。
- 企業での再利用： 渇望の持続性を標的とした多様な薬理学的介入を評価するための、再利用可能なプラットフォームを構築します。
運用および企業への影響
- 科学的価値：臨床的に関連のある渇望の軌跡をモデル化することにより、ターゲットエンゲージメントに対する予測的な信頼性を提供する。
- 運用の価値：手順の複雑さを最小限に抑え、渇望のインキュベーション（潜伏期）の標準化された拡張可能な評価を実現する。
- 戦略的価値：不適応的な記憶プロセスを減弱させる化合物の早期特定を可能にすることで、資本効率を高める。
- ポートフォリオへの影響：長期的な渇望の発現に対する効果に基づいた、リスク調整済みの候補化合物の優先順位付けを促進する。
実施上の検討事項
- 齧歯類の行動薬理学および場所嗜好性条件付けに関する専門知識が必要です。
- 触覚的な床材のキューが異なる、精密なチャンバー構築に依存します。
- 6日間の条件付け期間を通じて、一貫したハンドリングおよび投与スケジュールを遵守する必要があります。
- 観察者のバイアスを最小限に抑えるため、チャンバーへの進入回数のブラインドスコアリングに基づいています。
- アプローチ行動の測定に限定されており、渇望の感情的または動機付け的な側面は捉えられません。
