Name: ラットにおけるリポ多糖投与による亜急性の脳 Microhemorrhages (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: 学ぶ LPS投与による脳微小出血誘導法。Sprague-Dawleyラットを用いて炎症性メカニズムと血脳関門障害を評価し、神経変性疾患研究の基盤となる実験モデルを確立します。

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先生建風水レイと MRI におけるガイダンス首都医科大学からの同僚に感謝しますまた、テクニカル サポートを提供するため宜昌の第二人民病院神経内科から静曽を感謝いたします。

ここで説明したすべてのメソッドは、動物愛護と PLA の陸軍病院の使用委員会 (ACUC) によって承認されています。
1. 材料
<ol><li>LPS 注射液の調製<ol>
<li>最終濃度 1 mg/mL にサルモネラ菌由来 LPS 粉末 25 mg に 25 mL の蒸留水を追加します。ストア 4 ° C での生殖不能の管に注入 注意: LP は有毒です。</li>
		<li>通常使用濃度で EB 注入を保つために 0.9% 食塩液で 2 %eb ソリューションを準備します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 動物
<ol><li>10 週齢雄 Sprague-dawley (SD) ラットに組合を管理 (平均重量: 280 ± 20 g) 腹腔内投与によって。 注意: ラットを別の組織から購入した場合、適応位相ならない 7 日以内。</li>
</ol>3. 組合注射
<ol><li>LPS を 1 mg/kg の用量で各ラットに腹腔内注入し、彼らのホームのケージにラットを返します。 注: 麻酔は必要ではありません。</li>
	<li>6 時間後、同じラット LPS 注入量を注入します。</li>
	<li>16 時間後ラット LPS の同じ線量を注入します。 注意: は 1 mg/kg の用量で LPS を SD ラットに注射 5% の死亡率の可能性があります。死亡率は、若いまたは古いラットまたは妊娠中の雌ラットの更なる増加可能性があります。</li>
	<li>LPS 投与後ラットを檻に戻り、自由への食べ物や飲み物を提供します。 注: ラットは明確な全身性炎症反応を示すし、ケージが実験を通してきれいなまま、不可欠であるといえます。ラットが頻繁 (2 x 日) を監視する体重、一般的な外観および態度のため最初の LPS 投与後。ラット背を丸めて姿勢、移動する気力の無さ、有意な体重減少を示すように開始する場合 (> 20%)、EB 研究終点 7 日前に安楽死させたポルフィリン染色彼らが慈悲深くあります。</li>
</ol>4. 検体の採取
<ol><li>EB 注入<ol>
<li>最初の注射後 7 日間は麻酔ラット腹腔内、承認された IACUC プロトコルによると。</li>
		<li>1-2 分待ってからラット角膜反射反応を示さない。5-8 mm を実行-各ラット; 深い心臓穿刺貫通ポイントは、第 3 および第 4 肋間スペースで胸骨の左の余白を 5 mm にする必要があります。</li>
		<li>血回復が観察されるまで待ち、左心室に 0.2 mL/100 g 体重の投与量で EB を注入します。 注意: 心臓穿刺と EB 投与慎重に実行してください。EB は、胸腔や心膜ではなく左心室に注入される可能性があります。<ol>
<li>空チューブに戻って吸うし、故障率を減らすために投与前に、の EB 管でこのボリュームを置き換えます (e.g。、エラーによって胸郭への注入)。</li>
		</ol>
</li>
		<li>ラットを仰臥位で 10 分間にしてください。 注: 蛍光イメージングで EB 漏れを検出するサンプルを使用しない場合、この手順は省略できます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>肉眼観察<ol>
<li>氷冷 1 M リン酸バッファー生理食塩水 (PBS) を使用した脳血管と脳のクリア心臓 perfusions を実行します。<ol>
<li>メスを使用すると、ダイヤフラムの全体にわたって腹部切開を行います。</li>
			<li>肋骨だけのカットは、胸郭の正中線の左。</li>
			<li>胸腔内にオープン。クランプを使用して、中心部を公開する、血液や他の液体の排水を容易にします。</li>
			<li>挿入拡張に約 5 mm. に左心室の突起に針のエントリ ポイント近くクランプによってその位置に針を安全な直接鉗子 (心臓を破ってまだべきである)、着実に心を押しながら。 注意: は過度に内部の壁に穴を開けるし、ソリューションの循環を妥協することができます針を拡張します。</li>
			<li>灌流ポンプを使用して 20 mL/分前後で低速かつ安定した速度で流れ氷冷 PBS ソリューション (200-300 mL) を許可するようにバルブをリリースします。動物は、肉眼観察ではなく固定を必要とする場合は、冷たい 0.9% 食塩水の同量を使用します。</li>
			<li>鋭いはさみを使用して、ソリューションが連続的に流れていることを確認、アトリウムに切開を行います。流体が自由に流れない、動物の鼻の穴や口から来ている針の位置を変更します。</li>
		</ol>
</li>
		<li>肉眼観察で CMHs の画面。 注: サンプルは肉眼観察によって CMHs の番号の計算を使用しない場合、この手順は省略できます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>固定<ol>
<li>冷たい 0.9% 食塩液 (200-300 mL) 脳血管系をクリアして脳を使用して心臓の perfusions を実行します。</li>
		<li>固定のため氷の 4% パラホルムアルデヒドを使用して心臓の perfusions を実行します。</li>
		<li>ネズミの首をはねる、脳を分離、少なくとも 6 時間の 20% ショ糖液で脳を浸します。</li>
		<li>30% ショ糖溶液ならびに別 6 h.の修正プログラム ソリューションに変更します。
</li>
	</ol>
</li>
	<li>クライオスタットを用いた 10 mm 厚脳組織セクションを準備します。</li>
</ol>5. 彼の汚損
メモ: この手順は彼染色キットを使用して実行されます。
<ol><li>蒸留水でスライドを洗います。</li>
	<li>5 分間流水で 8 分洗浄のヘマトキシリン液で染色します。</li>
	<li>1 %1 分の水道の流水で 30 s. 洗浄酸アルコールで区別しなさい。</li>
	<li>0.2% アンモニア水 (ブルーイング) で染色または飽和リチウム炭酸溶液 30 s 5 分水道の流水で 1 分洗浄します。</li>
	<li>95% アルコール (10 dip) ですすいでください。</li>
	<li>エオシン ソリューション 30 の対比染色 1 分 s。</li>
	<li>95% アルコール、無水アルコール、5 分間の 2 つの変更で水分を取り除きます。</li>
	<li>30 キシレンのクリア s。</li>
	<li>劉方法9を使用してマウントします。</li>
	<li>明視野蛍光顕微鏡を用いて分析します。 注: CMHs のコンポーネントである血管から赤血球は HE 染色で赤オレンジ色で表示されます。</li>
</ol>6. Perl プルシアン ブルー染色
メモ: この手順は Perl 染色キットを使用して実行されます。
<ol><li>蒸留水とスライドを洗います。</li>
	<li>フェロシアン化と 10 分のための塩酸の等量混合物と反応液で染色します。</li>
	<li>脱水、オフ、マウント、および 5.7-5.10 の手順で説明するように、スライドを分析します。</li>
</ol>7. 理事会の二重染色
注: この手順に従います手順 4.1.3。
<ol><li>PBS で 3 回各 5 分用のスライドを洗います。</li>
	<li>スライド 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ソリューション室温で 15 分間、インキュベートします。</li>
	<li>洗浄は 3 回、それぞれ 5 分の PBS 溶液で滑るし、PBS-グリセリン溶液でスライドをマウントします。</li>
	<li>蛍光顕微鏡のイメージを分析します。EB 蒸着されて赤い蛍光性;核は、青色蛍光によって示されます。</li>
</ol>8. MRI SWI
<ol><li>積極的にシールド グラデーション システム (16 cm 内径) を搭載した 7 T の磁石で MRI を実行します。</li>
	<li>治療後 7 日間は、イソフルラン麻酔システムを使用して 1.5-2.0% イソフルランのフェイス マスク吸入ラットを麻酔します。</li>
	<li>麻酔中の乾燥を防ぐためにラットの目に獣医軟膏を塗る。</li>
	<li>腹臥位でラットを維持し、MRI SWI スキャンを実行します。</li>
	<li>次のパラメーターを使用して高速回転のエコー順序を使用して加重 SWI スキャンを取得: エコーの時間 (TE) 8 ms の繰り返し時間 (TR) 40 ms、反転角度 12 °、視野 (FOV) 35 mm × 35 mm の取得マトリックス 384 × 384、1 mm の厚さにスライスを取得する =。</li>
	<li>グリーンバーグらによると MRI SWI で CMHs を識別します。11、次の条件を含まれている: (1) 直径 ≤10 mm (2) 円形、分離、および低信号強度スポット。</li>
	<li>実験の終わりには、過剰摂取 (6 L/分の流れ) やコンテナー量の 30% で二酸化炭素法を用いたラットを安楽死させます。</li>
</ol>

<ol><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218(2016).</li>
<li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li>
<li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbleed+topography%2C+leukoaraiosis%2C+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li>
<li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li>
<li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Aging+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170(2016).</li>
<li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22(2018).</li>
<li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice%3A+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+H%26E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of H&E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li>
<li>Zeng, J., Zhào, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li>
<li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds%3A+A+guide+to+detection+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441(2016).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114(2017).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69(2018).</li>
<li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li>
<li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li>
<li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lipopolysaccharide+Parkinson%27s+disease+animal+model%3A+mechanistic+studies+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Fundamental+%26+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental & Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li>
<li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li>
<li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li>
<li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+small+vessel+disease%3A+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li>
<li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li>
<li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li>
<li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822(2017).</li>
<li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease%3F+-+New+insights+from+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Translational+Stroke+Medicine%22%5BJournal%5D)">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental & Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4(2013).</li>
</ol>

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CMHs に関する調査研究は、過去数年間で増加しています。ただし、CMHs のメカニズムは不明で、この特定の条件をシミュレートするモデル動物を確立する科学者を求めます。たとえば、ホフマンらCMHs が低酸素症および脳の自己調節12の中断によって引き起こされることを示す低酸素状態における CMHs マウス モデルを開発しました。ロイターら5 CMHs フィッシャーらの病因の主要な役割報告 LPS 投与9によって誘導された CMHs マウス モデル (CAA) 演劇、その脳アミロイドアンギオパチーを示した APP23 トランスジェニック マウスで CMHs モデルを確立します。CMHs が炎症2,13,14によって引き起こされることを明らかにしました。同様に、l...

古典的な脳 microhemorrhages (CMHs) は、脳1の赤血球からヘモジデリンなど血液分解産物の小さな血管堆積物を参照します。ロッテルダムのスキャン調査によると CMHs は、60-69 歳以上の人の約 17.8% と 80 年の2以上の方で 38.3% でした。CMHs の高齢者の有病率は比較的高いと CMHs の蓄積と認知と神経の機能不全間の相関関係は確立された3,4をされています。CMHs のいくつかの動物モデルが最近報告されて、タイプ IV コラゲナーゼ定位注射5、APP トランスジェニック6β N methylamino L-アラニン露出7、および高血圧症8によって誘起される齧歯動物モデルを含む最も広く受け入れられた選択肢の一つとして全身性炎症による CMHs。フィッシャーら9は、まず急性の CMHs マウス モデルを開発するのにサルモネラ菌由来 LPS を使用しました。その後、同じグループは同じアプローチ2を使用して亜急性 CMHs マウス モデルの開発を報告しました。
LPS は、腹腔内投与によって標準化された炎症性刺激として考慮されます。前の研究は、lps は、ミクログリアの大量を反映して neuroinflammation を原因し、2,10のモデル動物におけるアストロ サイトの活性化を確認しました。さらに、neuroinflammation 活性化の活性化と CMHs の数には正の相関は、確立された2,10をされています。これらの先行研究に基づいて、我々 は LPS の腹腔内投与によって CMHs ラットのモデルを開発する刺激されました。
進歩検出技術は、CMHs の研究調査の数の増加で起因しました。最も広く CMHs を検出する方法は、ヘマトキシリンとエオシン (HE) 染色、染色9、プルシアン ブルーによる鉄検出による赤血球の検出を認めたエバンスの検出ブルー (EB) 抗体法による蒸着イメージング、および 7.0 テスラ磁気共鳴イメージ投射感受性加重イメージング (MRI SWI)10。本研究は、CMHs のためのスクリーニング法の開発を目指しています。

<table><tbody><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-2630</td><td>炎症誘発用</td></tr><tr><td>EB</td><td>Sigma-aldrich</td><td>E2129</td><td>EB漏れ検出用</td></tr><tr><td>DAPI死の溶液</td><td>Servicbio</td><td>G1012</td><td>IF用培地</td></tr> Perl<tr><td>'s プロイセン染色</td><td>Solarbio</td><td>G1424</td><td>プロイセン染色用キット</td></tr><tr><td>HE 染色</td><td>Solarbio</td><td>G1120</td><td>HE染色用キット</td></tr><tr><td>クロラール水和物</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47335U</td><td>麻酔用</td></tr><tr><td>リン酸塩緩衝液生理食塩水 (PBS)</td> <td>Solarbio</td><td>P1022</td><td>実験で一般的に使用される緩衝液の一種</td></tr><tr><td>0.9% 生理食塩水</td><td>海南東聯長福製薬有限公司、</td><td>灌流</td>パラホルムアルデヒドのための中国<td></td></tr><tr><td></td><td>溶液 Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>固定に一般的に使用される溶液</td></tr>の一種 <tr><td>20%ショ糖溶液</td><td>Solarbio</td><td>G2461</td><td>固定に一般的に使用される溶液</td></tr><tr><td>30%ショ糖溶液</td><td>Solarbio</td><td>G2460</td><td>固定に</td></tr><tr>一般的に使用される溶液の一種<td>獣医軟膏</td><td>Solcoserylアイジェル、バセル、</td><td>ラットの目の保護のための</td>スイス<td></td></tr></tbody></table>

ラットにおけるリポ多糖投与による亜急性の脳 microhemorrhages

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

脳 microhemorrhages (CMHs) は高齢患者で共通、さまざまな精神神経疾患に関連しています。CMHs の病因は複雑であり、neuroinflammation が共起関係としてよく見られます。ここで、亜急性は説明 CMHs。 全身 lps の自動検出法と同様に、リポ多糖 (LPS) の注入によって誘起される CMHs ラット モデルが比較的簡単な、経済的な、および費用対効果。Lps の主要な利点の 1 つは、炎症を誘発するその安定性です。Lps による CMHs は、肉眼観察、ヘマトキシリンとエオシン (HE) 染色、Perl のプロイセン染色、エバンス ブルー (EB) ダブル-ラベリングおよび磁気共鳴イメージ投射感受性加重イメージング (MRI SWI) 技術によって検出でした。最後に、他の方法の利点や欠点を含む、CMHs 動物モデルの開発を本報告で述べる。

CMHs は、さまざまなアプローチを使用して検出できます。最も広く受け入れられた方法次のとおりです: (1) 肉眼観察と (図 1、上部のパネルに示すように); 表面の CMHs の評価(赤い血液細胞 (図 2 a、下部のパネル) の換散に由来する 2) 彼は染色の赤血球 (図 2 aに示すように、上部のパネル) またはプロイセン検出鉄染色の検出(3) EB 倍増染色の BBB 漏れ (図 3、左右パネル) から派生した EB 蒸着の検出(4) MRI SWI CMHs 例信号 (図 4の左側のパネル) を検出します。
<img alt="Figure 1"...

誘発して思われる Sprague-dawley ラット LPS 注入による CMHs 活用将来的に CMHs の成因に関する研究調査を検出するためのプロトコルを提案します。

ラットにおけるリポ多糖投与による亜急性の脳 Microhemorrhages

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

この方法は、脳の微小出血の病因、分布、および脳微小出血の検出などの脳微小出血分野における重要な質問に答える助けとなります。この技術の主な利点は、LPS注射が安定して炎症を誘発することです。さらに、LPSの注入は非常に簡単で経済的で、費用効果が大きい。この方法は脳出血誘導に関する洞察を提供することができますが、うつ病、統合失調症、パーキンソン病、アルツハイマー病、プリオン病などの他の脳障害にも適用できます。腹腔内注射によって10週齢の雄のスプレイグ・ドーレーラットに体重1キログラムあたり1ミリグラムの用量でLPSを投与し、その後、ホームケージに各ラットを返す。6時間16時間後にLPS注入を繰り返します。1キログラムあたり1ミリグラムの用量でLPSでSDラットを注入すると、5%の死亡率をもたらすことに注意してください。死亡率は、若いラットまたは高齢のラットまたは妊娠中の女性ラットでさらに増加する可能性があります。LPS注射後にラットをケージに戻し、食べ物や飲み物へのアドリビタムアクセスを提供します。末期麻酔下では、各ラットに5〜8ミリメートルの深心穿刺を行う。穿刺点は、3番目と4番目の肋間空間で胸骨の左マージンに5ミリメートルでなければなりません。針を所定の位置に保持し、空のチューブをエバンスブルーを含むチューブに置き換えます。血液回復が観察されるまで待ってから、エバンスブルーを100グラムの体重当たり0.2ミリリットルの用量で左心室に注入する。免疫蛍光イメージングによって血液/脳関門を通るエバンスブルー漏れを評価する場合は、ラットを10分間のサイン位置に保ちます。0.9%の生理食塩水の氷冷200〜300ミリリットルを使用して心臓灌流を行い、脳血管系と脳をクリアします。氷冷4%パラホルムアルデヒドに切り替えて固定します。次いで、脳を単離した後、少なくとも6時間、または脳がチューブの底に沈むまでPBSで20%スクロースに浸す。溶液を30%スクロースに変更し、さらに6時間修正します。最後に、クライオスタットを使用して10ミリメートルの厚さの脳組織切片を準備します。スライドをそれぞれ5分間3回PBSで洗い、4、6'diamidino-2-フェニリンドールまたはDAPI溶液でスライドを室温で15分間インキュベートします。前と同様にPBSでスライドを洗浄した後、PBS-グリセロール溶液でスライドを取り付ける。蛍光顕微鏡で画像をキャプチャします。EB沈着は赤色蛍光によって示され、核は青色蛍光によって示される。蒸留水でスライドを洗ってH&E染色を開始します。その後、ヘマトキシリン溶液に8分間浸漬する。あるいは、ペル・プロイセンブルー染色の場合、フェロシアン化物と塩酸の等分混合物を10分間混合して反応液中に染色する。染色後、水道水を5分間洗います。1%のアルコールを30秒間分化します。水道水を1分間流して洗浄した後、0.2%アンモニア水または飽和炭酸リチウム溶液を30秒から1分間染色します。次に、水道水を5分間洗います。エオシン溶液を用いて30秒~1分間の抗染色剤。90%アルコール、95%アルコール、および各0.5〜2分間の絶対アルコールを脱水します。脱水後、キシレンで30秒間クリアします。取り付け後、明視野蛍光顕微鏡を使用してH&E染色を分析します。CmHの成分である血管から放出される赤血球は、H&E染色の下で赤オレンジ色に現れる。表面のCmHは、赤い矢印で示されるように総観測によって検出することができます。エバンスブルー染色は、エバンスブルー分子が負傷した血液脳関門から漏れた目に見える赤い蛍光を明らかにする。H&E染色は毛細血管の外に見られる赤血球を示し、プロイセン染色は赤血球のリシスに由来する鉄イオン点を明らかにする。この手順を試みる間、脳微小出血を誘導するLPSの用量は、パーキンソン病または統合失調症モデルで使用されるよりも大きいことを覚えておくことが重要です。したがって、動物の環境は、死亡率を減らすために清潔に保たれるべきである。この手順に従って、電子顕微鏡、磁気共鳴画像法、免疫蛍光イメージングなどの他の方法を行い、脳内脳小出血における血液脳関門の外構造の損傷、脳内の脳のパレンチマにおける脳内小出血の分布、ならびにグリア細胞活性化を決定することができる。

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JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

動脈瘤性くも膜下出血（SAH）は時動脈瘤破裂くも膜下腔に発生する出血です。このイベントの罹患率と死亡率が改善された治療アプローチのために減少傾向にあったが、くも膜下出血後の脳血管攣縮のリスクは、それが数年前と同じであり続けている。脳血管攣縮の開始事象を識別するために、包括的かつ再現可能な動物モデルを確立することの重要性は、バリーが1979年に実験的脳血管攣縮モデルにおけるラットの最初の使用以来、研究の焦点となっている...

実験的くも膜下出血後の脳血管攣縮遅延を評価するための低死亡率のラットモデル

脳内出血（ICH）の臨床的に関連する動物モデルは、出血性脳卒中の知識を拡張し、新たな治療戦略を検討するために必要とされる。そこで本研究では、記述し、マウスの大脳基底核（線条体）に自家全血または細菌コラゲナーゼのどちらかの一方的な注射を実装した2つのICHのモデルを比較検討する。...

マウスにおけるモデリング脳出血：自己血または細菌性コラゲナーゼの注入

このビデオは、リポ多糖(LPS)を使用してラットモデルで血液脳関門(BBB)の破壊と脳微小出血を誘発するプロセスを示しています。これは、BBBの透過性の増加とそれに続く脳組織の損傷につながる免疫応答の配列を強調しています。...

リポ多糖を用いたラットモデルにおける脳微小出血の誘導

このビデオでは、ラットモデルで脳微小出血(CMH)を検出するアッセイを実演しています。CMHは、血液脳関門の破壊による脳出血であり、漏出した赤血球(RBC)によって特定されます。ラットモデルでは、固定された脳組織を凍結保護し、切片化し、赤血球のヘマトキシリン-エオシンで染色することで、CMHの顕微鏡観察を可能にします。...

ラットモデルにおける脳微小出血の検出

脳内出血の前臨床モデルは、臨床疾患の特定の側面を模倣するために利用されます。したがって、損傷のメカニズムと潜在的な治療戦略を探求することができます。このプロトコルでは、脳内出血の 2 つのモデル、自家血液またはコラゲナーゼの線条体内 (大脳基底核)...

脳内出血のマウスモデルとして、自己血やクロストリジウムコラゲナーゼの線条体内注入

未熟児の脳症は、早産による損傷に関連する中枢神経系の異常を包含します。...

ラットにおける羊膜内リポ多糖で出生前低酸素性虚血を使用した未熟児のモデル化脳症

ここで提示されるプロトコルは、成人雄のダークアグーチラットにおける両方の皮質半球の広範な灰色物質脱髄の再生を可能にする。この方法は、カテーテルの脳内移植、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質に対する非臨床的免疫、および移植されたカテーテルを介した炎症性サイトカイン混合物の脳内注射を含む。...

炎症性サイトカインの脳内注射による広範囲にわたる大脳皮質脱髄のラットモデル

我々は、自己の血液の二重注入を介してラットに大規模なポンチン出血モデルを確立するためのプロトコルを提示する。...

自家血液の二重注射による巨大なポンチン出血

くも膜下出血は、ヒトにおける死亡率および罹患率の高い負担を負い続けている。状態とその病態生理学のさらなる研究を容易にするために、交叉前の単回注射モデルが提示されます。...

ラットモデルにおける実験的くも膜下出血を誘発するための自己血の交叉前単回注射

未熟児の出血後水頭症(PHHP)は、絨毛膜羊膜炎と脳室内出血を組み合わせることにより、新生児ラットでモデル化できます。これらの出生前と出生後のイベントの組み合わせは、生涯を通じて、大頭症、脳室拡大、頭蓋内圧の上昇など、PHHPの臨床的特徴を正確に再現します。...

ラットにおける未熟児の出血後水頭症のモデリング

本研究では、非侵襲的な気管内挿入技術が、基本的な喉頭鏡を用いてラットでALIを発生させることが示され、肺へのLPSの正確な供給が保証されています。LPSは喉頭鏡を用いた気管内チューブ から 点滴されます。肺損傷の規模は複数の時点で評価されます。...

齧歯類の急性肺損傷を誘発するための非侵襲的気管内リポ多糖投与

学ぶ LPS投与による脳微小出血誘導法。Sprague-Dawleyラットを用いて炎症性メカニズムと血脳関門障害を評価し、神経変性疾患研究の基盤となる実験モデルを確立します。

ラットにおけるリポ多糖投与による亜急性の脳 Microhemorrhages

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