Name: 骨組織の再生にプレドニゾロンの効果を研究する大人のゼブラフィッシュ傷害モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-18T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: 学ぶ大人のゼブラフィッシュ傷害モデルを用いた骨組織再生におけるプレドニゾロンの効果。薬物暴露とイメージング技術で骨形成とミネラライゼーションを評価し、再生医療研究に貢献します。

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この調査は、グラントのドレスデン中心部再生療法 (「ゼブラフィッシュ モデルとしてステロイド性骨量減少メカニズムを解明する」)、またドイツ研究振興協会 (Transregio 67, プロジェクトの助成金サポートされました。387653785) FK に。彼らの指導と骨ひれ光線の研究と骨折の trepanation の実行支援を 1 月 Kaslin と Avinash Chekuru に非常に感謝しております。実験では、設計、実行と KG と FK によって解析されました。FK は、原稿を書いていた。また、カトリン ・ ランバート、ニコール Cudak、クノップとブランド ラボ テクニカル サポートや議論のための他のメンバーに感謝したいと思います。感謝は、マリカ Fischer および優秀な魚のケアのための Jitka Michling とアンリエット ・ クノップとジョシュ ・ カリー、原稿の校正のためにまた行きます。

<ol><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book.+A+Guide+for+The+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio)</a>. 385, (2000).</li>
<li>Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intubation-based+anesthesia+for+long-term+time-lapse+imaging+of+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish.</a> Nature Protocols. 10 (12), 2064-2073 (2015).</li>
<li>Kaufman, C. K., White, R. M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+genetic+screening+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Chemical genetic screening in the zebrafish embryo.</a> Nature Protocols. 4 (10), 1422-1432 (2009).</li>
<li>Paul, S., Crump, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+on+skeletal+cell+plasticity+from+studying+jawbone+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Bonekey+Reports%22%5BJournal%5D)">Lessons on skeletal cell plasticity from studying jawbone regeneration in zebrafish.</a> Bonekey Reports. 5, 853(2016).</li>
<li>Witten, P. E., Harris, M. P., Huysseune, A., Winkler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+teleost+fish+provide+new+insights+into+human+skeletal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Small teleost fish provide new insights into human skeletal diseases.</a> Methods in Cell Biology. 138, 321-346 (2017).</li>
<li>den Uyl, D., Bultink, I. E., Lems, W. F. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s11926-011-0173-y">Advances in glucocorticoid-induced osteoporosis.</a> Current Rheumatology Reports. 13 (3), 233-240 (2011).</li>
<li>Barrett, R., Chappell, C., Quick, M., Fleming, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+high+content%2C+in+vivo+model+of+glucocorticoid-induced+osteoporosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Journal%22%5BJournal%5D)">A rapid, high content, in vivo model of glucocorticoid-induced osteoporosis.</a> Biotechnology Journal. 1 (6), 651-655 (2006).</li>
<li>de Vrieze, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prednisolone+induces+osteoporosis-like+phenotype+in+regenerating+zebrafish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporosis+International%22%5BJournal%5D)">Prednisolone induces osteoporosis-like phenotype in regenerating zebrafish scales.</a> Osteoporosis International. 25 (2), 567-578 (2014).</li>
<li>Pasqualetti, S., Congiu, T., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alendronate+rescued+osteoporotic+phenotype+in+a+model+of+glucocorticoid-induced+osteoporosis+in+adult+zebrafish+scale%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Alendronate rescued osteoporotic phenotype in a model of glucocorticoid-induced osteoporosis in adult zebrafish scale.</a> International Journal Of Experimental Pathology. 96 (1), 11-20 (2015).</li>
<li>Geurtzen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Suppressive+and+Bone+Inhibitory+Effects+of+Prednisolone+in+Growing+and+Regenerating+Zebrafish+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Immune Suppressive and Bone Inhibitory Effects of Prednisolone in Growing and Regenerating Zebrafish Tissues.</a> Journal of Bone and Mineral Research. , (2017).</li>
<li>Geurtzen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+osteoblasts+dedifferentiate+in+response+to+traumatic+bone+injury+in+the+zebrafish+fin+and+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mature osteoblasts dedifferentiate in response to traumatic bone injury in the zebrafish fin and skull.</a> Development. 141 (11), 2225-2234 (2014).</li>
<li>Matthews, M., Varga, Z. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23382350">Anesthesia and euthanasia in zebrafish.</a> Institute of Laboratory Animal Resources Journal. 53 (2), 192-204 (2012).</li>
<li>Lee, Y., Grill, S., Sanchez, A., Murphy-Ryan, M., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf+signaling+instructs+position-dependent+growth+rate+during+zebrafish+fin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Fgf signaling instructs position-dependent growth rate during zebrafish fin regeneration.</a> Development. 132, 5173-5183 (2005).</li>
<li>Hirasawa, T., Kuratani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+vertebrate+skeleton%3A+morphology%2C+embryology%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Zoological+Letters%22%5BJournal%5D)">Evolution of the vertebrate skeleton: morphology, embryology, and development.</a> Zoological Letters. 1, 2(2015).</li>
<li>Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+of+neuroepithelial-like+and+radial+glia-like+progenitor+cells+in+cerebellar+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles of neuroepithelial-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration.</a> Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).</li>
<li>Knopf, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerates+via+Dedifferentiation+of+Osteoblasts+in+the+Zebrafish+Fin%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Regenerates via Dedifferentiation of Osteoblasts in the Zebrafish Fin.</a> Developmental Cell. 20 (5), 713-724 (2011).</li>
<li>van Eeden, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+affecting+somite+formation+and+patterning+in+the+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mutations affecting somite formation and patterning in the zebrafish, Danio rerio.</a> Development. 123, 153-164 (1996).</li>
<li>Walker, M. B., Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+two-color+acid-free+cartilage+and+bone+stain+for+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">A two-color acid-free cartilage and bone stain for zebrafish larvae.</a> Biotechnic & Histochemistry. 82 (1), 23-28 (2007).</li>
<li>Kyritsis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+inflammation+initiates+the+regenerative+response+in+the+adult+zebrafish+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Acute inflammation initiates the regenerative response in the adult zebrafish brain.</a> Science. 338 (6112), 1353-1356 (2012).</li>
<li>Oppedal, D., Goldsmith, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+screen+to+identify+novel+inhibitors+of+fin+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A chemical screen to identify novel inhibitors of fin regeneration in zebrafish.</a> Zebrafish. 7 (1), 53-60 (2010).</li>
<li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117 (4), e49-e56 (2011).</li>
<li>Spoorendonk, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+and+Cyp26b1+are+critical+regulators+of+osteogenesis+in+the+axial+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid and Cyp26b1 are critical regulators of osteogenesis in the axial skeleton.</a> Development. 135 (22), 3765-3774 (2008).</li>
<li>Gioia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chaperone+activity+of+4PBA+ameliorates+the+skeletal+phenotype+of+Chihuahua%2C+a+zebrafish+model+for+dominant+osteogenesis+imperfecta%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">The chaperone activity of 4PBA ameliorates the skeletal phenotype of Chihuahua, a zebrafish model for dominant osteogenesis imperfecta.</a> Human Molecular Genetics. 26 (15), 2897-2911 (2017).</li>
<li>Fiedler, I. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severely+impaired+bone+material+quality+in+Chihuahua+zebrafish+resembles+classical+dominant+human+osteogenesis+imperfecta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Severely impaired bone material quality in Chihuahua zebrafish resembles classical dominant human osteogenesis imperfecta.</a> Journal of Bone and Mineral Research. , (2018).</li>
<li>Fisher, S., Jagadeeswaran, P., Halpern, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiographic+analysis+of+zebrafish+skeletal+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Radiographic analysis of zebrafish skeletal defects.</a> Developmental Biology. 264 (1), 64-76 (2003).</li>
<li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+deformity+in+aged+zebrafish+is+accompanied+by+degenerative+changes+to+their+vertebrae+that+resemble+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spinal deformity in aged zebrafish is accompanied by degenerative changes to their vertebrae that resemble osteoarthritis.</a> PLoS One. 8 (9), e75787(2013).</li>
<li>Mitchell, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+tools+for+studying+osteoarthritis+genetics+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">New tools for studying osteoarthritis genetics in zebrafish.</a> Osteoarthritis Cartilage. 21 (2), 269-278 (2013).</li>
<li>Fleming, A., Sato, M., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+in+vivo+screening+for+bone+anabolic+compounds+with+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Screening%22%5BJournal%5D)">High-throughput in vivo screening for bone anabolic compounds with zebrafish.</a> Journal of Biomolecular Screening. 10 (8), 823-831 (2005).</li>
<li>de Vrieze, E., Zethof, J., Schulte-Merker, S., Flik, G., Metz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+osteogenic+compounds+by+an+ex+vivo+sp7%3Aluciferase+zebrafish+scale+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Identification of novel osteogenic compounds by an ex vivo sp7:luciferase zebrafish scale assay.</a> Bone. 74, 106-113 (2015).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

ゼブラフィッシュは、多くの点で骨格の研究に役立っています。選択した突然変異体が骨形成不全症、変形性関節症23,24,25,26,27などのひと疾患の側面を模倣し、体重計と同様、幼虫に使用されています。小分子画面7,28,29骨同化化合物を識別します。ゼブラフィッシュ臨床適用される薬での治療は、さらに骨にたとえば、推定の副作用を勉強する最適です。この中で、急速に骨の再生の有無は薬物誘発性骨不足の基になるメカニズム解明のため有利です。ここでは、骨の組織に悪影響を与える一般的に使用される抗炎症薬、糖質コルチコイド プレドニゾロンの薬物治...

ゼブラフィッシュでは、脊椎動物の発生と疾患研究に強力な動物モデルを表します。これは、彼らは、非常によく繁殖小動物とそのゲノムは完全にシーケンス化された操作1に従うことという事実のためです。その他の利点には、生体内イメージング アダルト ゼブラフィッシュ2とゼブラフィッシュ幼虫3で高スループット薬物画面を実行する機能など、さまざまな段階での継続的なライブ イメージングを実行するためのオプションが含まれます。さらに、ゼブラフィッシュはさまざまな臓器や骨などの組織に高い再生能力を持っているし、骨疾患を勉強して4,5を修復する有用なシステムとして提供します。
ステロイド性骨粗鬆症 (GIO) は、グルココルチコイド、たとえば喘息や慢性関節リウマチの自己免疫疾患治療の過程で長期的治療に起因する疾患です。ジオを表しグルココルチコイド治療を受けた患者の約 30% で成長する、主要な健康上の問題6。したがって、非常に詳細に骨免疫抑制の影響を調査することが重要です。近年さまざまなジオの病態を扱うゼブラフィッシュ モデルが開発されています。グルココルチコイドを介した骨の損失は、ゼブラフィッシュの幼虫、たとえば、薬剤スクリーン7で骨量を増やす中和化合物の同定につながったに誘導されてきました。さらに、ステロイド性骨抑制効果に真似されているゼブラフィッシュ スケールの in vitroとin vivoの8,9。これらの試金は非常に説得力のあるアプローチ、特にに関して新規免疫抑制と骨の同化作用の薬の同定。しかし、彼らは部分的にしか内骨格を考慮し、再生のコンテキストで実行されていません。したがって、彼らは大人、再生骨の急速なモード中のグルココルチコイドを介した効果の調査を許さない。
ここでは、大人のゼブラフィッシュ骨再生を受けているグルココルチコイドを介した効果を研究する研究者を有効にするプロトコルを提案します。傷害モデル ゼブラフィッシュ尾びれ、スカルの穿頭およびひれ光線骨折 (図 1 a-1 C) の作成の部分の切断が含まれ、インキュベーション (図 1Eを介してグルココルチコイド露出と組み合わせて).最近フィンと頭蓋骨の骨10を再生成する大人のゼブラフィッシュの 1 つ一般的に規定する副腎皮質ステロイド薬のプレドニゾロンへの露出の結果を記述するこの議定書の部分を使いました。ゼブラフィッシュ、プレドニゾロン内服は減少した骨芽細胞増殖、不完全な骨芽細胞分化や単球/マクロファージ系統10におけるアポトーシスの急速な誘導につながります。このプロトコルでも述べる骨折が骨のシングルフィンの線のセグメント11に導入できる方法として破壊修復中にグルココルチコイドを介した骨発生効果を勉強して、このアプローチが役に立つかもしれません。紹介した方法は、急速に骨の再生の糖質コルチコイド作用機序を基になる更に対処するのに役立ち、ゼブラフィッシュ組織再生のコンテキストで全身薬物管理の他の設定に用いることもできます。

<table><tbody><tr><td>プレドニゾロン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6004</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルフォキシド (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>エチル-3-アミノ安息香酸メタンスルホン酸 (MS-222)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>鈍い鉗子</td><td>Aesculap</td><td>BD027R</td><td></td></tr><tr><td>細かい鉗子</td><td>Dumont</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>メス</td><td>ブラウン</td><td>5518059</td><td></td></tr><tr><td>アガロース</td><td>バイオザイム</td><td>840004</td><td></td></tr><tr><td>注射針 (0.3 mm x 13 mm)</td><td>BD Beckton Dickinson</td><td>30400</td><td></td></tr><tr><td>マイクロドリル</td><td>セル ポイント サイエンティフィック</td><td>67-1000</td><td>配布 例えば ハーバード 装置</td></tr><tr><td>によって 鋼のバリ (0.5 & マイクロ;m diameter)</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>19007-05</td><td></td></tr><tr><td>アルテミア ssp.</td><td>Sanders</td><td>425GR</td><td></td></tr><tr><td>パスツールピペット (プラスチック、パステット)</td><td>Alpha Labs</td><td>LW4111</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Alizarin red S powder</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5533</td><td></td></tr><tr><td>Alcian blue 8 GX</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5268</td><td></td></tr><tr><td>Calcein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0875</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7409</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>Leica</td><td>MZ16 FA</td><td>with QIMAGING RETIGA-SRV カメラ</td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>Olympus</td><td>MVX10</td><td>with Olympus DP71 or DP80 camera</td></tr></tbody></table>

骨組織の再生にプレドニゾロンの効果を研究する大人のゼブラフィッシュ傷害モデル

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

ゼブラフィッシュは切断後 (フィン) の付属肢を含む様々 な臓器を再生することができます。受傷後約 2 週間以内に復元する骨の再生が含まれます。さらに、ゼブラフィッシュ、スカルの穿頭後急速に骨を癒すし、ゼブラフィッシュ骨ひれ光線に簡単に導入することができます亀裂を修復することができます。これらの傷害アッセイは、急速に骨の形成に及ぼす投与薬をテストする実現可能な実験パラダイムを表現します。ここでは、これら 3 損傷モデルの使用と骨抑制と免疫抑制効果を発揮する全身性ステロイド治療との併用について述べる。アダルト ゼブラフィッシュにおける免疫抑制療法の準備、フィン切断、頭蓋骨の骨やひれ骨折の穿頭を実行する方法を示す、グルココルチコイドの使用で両方の骨の形成が与える影響について説明する方法でワークフローを提供します。骨芽細胞と骨の自然免疫の一部として単球/マクロファージ系統の細胞。

ここで提示されたプロトコルは、ゼブラフィッシュ フィンと頭蓋骨10、11,16の再生過程で急激な骨形成を誘導するために繰り返し使用されています。プレドニゾロン内服の提案手法と組み合わせて、骨再生中のプレドニゾロンの効果に関する研究を追求できます。たとえば、骨の形成と再生成するにおける鉱化作用に関する研究を実行できます。プレドニゾロン、他グルココルチコイド19,20アリザリンレッド尾鰭組織 (図 3 a) を固定に染色によって検出された骨形成を含む、フィンの再生の全体的な抑制に します。同様に、プレドニゾロン (頭蓋骨) 頭蓋骨損傷閉鎖アリザリン赤 (図 3 b</stro...

ここでは、3 アダルト ゼブラフィッシュ損傷モデルと免疫抑制薬の治療との併用について述べる。再生組織のイメージングに関するガイダンスをそこに骨石灰化を検出することに提供します。

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

この方法は、特に骨の組織再生に対する薬物の悪影響を研究するための免疫抑制治療介入の分野における重要な質問に答えるのに役立つ。この技術の主な利点は、ゼブラフィッシュの骨再生の過去のモデルと、負傷したゼブラフィッシュを薬物補充魚水に浸漬させることによって全身薬物暴露と組み合わせることです。手順を開始する前に、1つのアルミニウム箔がゼブラフィッシュあたり600ミリリットルビーカーを覆い、実験のために魚の水のガラス瓶の適切な数をカバーし、目的の実験的制御溶液で免疫抑制薬を調製する。切断傷害のために、鈍い鉗子を使用して、100ミリメートルのペトリ皿の逆蓋の側面に麻酔をかけたゼブラフィッシュを慎重に置き、メスを使ってフィンの50%を切断します。その後、適切な実験剤で補われた魚の水の300ミリリットルを含むオートクレーブビーカーに魚を置き、ゼブラフィッシュの脱出を防ぐためにホイルでビーカーをカバーします。フィン骨折の傷害を誘発するには、解剖顕微鏡の下でペトリ皿をコーティングした100ミリメートルアガロースの両側側に麻酔付きゼブラフィッシュを置き、ひびが現れるまで注射針を骨ひれの線セグメントにわずかに押し込みます。これは、大幅に安定性を損なう可能性があるため、フィンにあまりにも多くの骨折を導入することが重要です。その後、適切な実験剤を補充魚水の300ミリリットルを含むオートクレーブビーカーに魚を転送します。カルバリアの頭蓋骨の損傷を生成するには、解剖顕微鏡の下でカルバリアの骨が容易に視覚化されるように、直立した位置に麻酔ゼブラフィッシュを保持します。500マイクロメートルのドリルビットを備えた回転マイクロドリルを前頭骨の中央に配置し、骨にそっと触れてマイクロドリルバリの大きさの穴を作ります。損傷を生じながらドリルを横に動かせず、組織の抵抗力が低下したらすぐに停止することが重要です。さもなければ、脳は損傷を受ける。その後、適切な実験剤を補充した魚の水の300ミリリットルを含むオートクレーブビーカーに魚を置きます。ゼブラフィッシュと魚の水を適切な一時的な容器に移し、新鮮な薬物補充魚の水でビーカーを補充することによって、ビーカーの水を毎日交換してください。その後、そのビーカーにゼブラフィッシュを返すために魚網を使用しています。合計2日間持続する治療のために、ゼブラフィッシュを養わない。より長い実験の間に、ゼブラフィッシュに0.5〜1ミリリットルの孵化したアルテミアSSPを2日ごとに供給する。フィン傷害分析のために、細かいを収穫し、切り株の一端でフィンをつかむために細かい鉗子を使用する。フォースプスの2番目のペアを使用して反対側の切り株の端をつかみ、冷たい4%PFAを含む皿の底にティッシュを10〜20秒間わずかに押し付けます。必要に応じてフィン平坦化を繰り返します。フィンは今カーリ

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

ゼブラフィッシュの成体の神経新生と再生の細胞的および分子的メカニズムを明らかにするために、ゼブラフィッシュの成体終脳に機械的損傷を引き起こす侵襲的手術と、その後の免疫組織化学またはin...

ゼブラフィッシュ成体終脳の刺し傷傷害：脊椎動物の脳神経発生·再生を調査する方法

ここでは、ゲンタマイシン注射による急性腎障害を誘発することにより、成人の腎臓再生を研究するための信頼性の高い方法を紹介します。損傷はゲンタマイシンの投与量と環境温度に依存することを示し、in situハイブリダイゼーションを使用してlhx1a...

ゲンタマイシン誘発性損傷によって大人ゼブラフィッシュにおける腎再生

ここでは、ゼブラフィッシュの骨格筋と胎児性横紋筋肉腫(ERMS)の細胞移植のプロトコルを、成体の免疫不全rag2E450fsホモ接合型突然変異ゼブラフィッシュに移植するためのプロトコールを紹介します。このプロトコルにより、筋肉細胞の再生と悪性形質転換の効率的な分析が可能になります。...

免疫低下アダルトゼブラフィッシュへの正常および悪性筋細胞移植

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成体ゼブラフィッシュにおけるシスプラチンによる急性腎損傷モデル

骨格筋再生は、筋ジストロフィーなどの多くの筋疾患で障害を受ける組織常駐筋幹細胞によって駆動され、筋肉が再生できないことが生じる。ここでは、筋疾患のゼブラフィッシュモデルにおける筋再生の検討を可能にするプロトコルについて述べる。...

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私たちは、成人ゼブラフィッシュのマルマルー重量降下モデルを変更し、鈍力外傷性脳損傷(TBI)とその後の神経再生の基礎となるメカニズムに続く幅広い病理を調べた。この鈍力TBIモデルはスケーラブルであり、軽度、中等度、または重度のTBIを誘導し、ヒトTBIで観察された傷害の不均一性を再現する。...

成虫ゼブラフィッシュにおける鈍力損傷の影響を研究するスケーラブルモデル

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ゼブラフィッシュの鱗の再生 TOTO および Ex Vivo の鱗の培養

このプロトコルは、成体ゼブラフィッシュにおけるいくつかの尾側筋腫の深刻な損傷を誘発するための凍結損傷モデルについて説明しています。この方法は、非哺乳類脊椎動物の重度の組織喪失後の骨格筋再生を研究するための新しいアプローチを提供します。...

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ゼブラフィッシュのカイガラムシの細胞動態を研究するためのin vitro培養技術

このプロトコルは、ゼブラフィッシュの幼生で実施される 2 光子レーザー アブレーション...

ゼブラフィッシュ幼生の発育中の骨芽細胞の2光子レーザー媒介アブレーション

学ぶ大人のゼブラフィッシュ傷害モデルを用いた骨組織再生におけるプレドニゾロンの効果。薬物暴露とイメージング技術で骨形成とミネラライゼーションを評価し、再生医療研究に貢献します。

骨組織の再生にプレドニゾロンの効果を研究する大人のゼブラフィッシュ傷害モデル

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