Name: 腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するためのIn Vivo法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: 学ぶ腸血液関門透過性の直接測定法。ラットを用いた門脈血サンプリングにより、肝・腎機能の影響を受けずに生体内で腸血液関門の透過性と肝クリアランスを評価する革新的アプローチです。

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仕事は、ポーランド共和国高等教育科学省でサポートされて、ダイヤモンド許可なし: DI2017 009247。

実験は科学的な目的に使用される動物の保護に関する指令 2010年/63 EU によると雄 Wistar 京都ラットに対して行われ、私のワルシャワの地元倫理委員会で承認されました。
1. Intraintestinal 管理のための行の挿入
注:ここでカテーテルを使用してマーカーの intracolonic 管理を提案する.それは、経口投与または経口消化管など胃または十二指腸のさまざまなレベルで修正されるかもしれません。使い捨て外科衣類、手術ガウン、フード、手袋などを使用して、手順 1-6 中に手術(針等)で使用される鋭いツールに関連する安全上の注意に従うことを確認してください。
<ol><li>手順の前に夜通し高速動物。すなわち、眼瞼や角膜反射の欠如によって、つま先ピンチと尾ピンチによるウレタン 1.5 g/kg bw i. p. の査定の適切な anesthetization の注入によって得られる、全身麻酔中にすべての手順を実行します。</li>
	<li>大腸カテーテルとして小児のフォーリー カテーテル (10 階または 8 階) を使用します。コロン (約 8 cm) に挿入される部分を示すためカテーテルをマークします。</li>
	<li>コロンにカテーテルを挿入する前に、肛門領域や直腸内の便コンテンツを確認します。便が存在する場合、直腸部をマッサージすることで直腸を空します。</li>
	<li>カテーテルに潤滑剤 (例えばグリセリンやワセリン) を置きます。肛門と潤滑剤とその周辺を湿らせます。</li>
	<li>外肛門括約筋をガイド線約 8 cm カテーテルを挿入します。ゆっくり前後と円形の動きを作る。 注: にカテーテルを挿入しながら腹部の触診によってカテーテルの位置をチェックしてください。</li>
</ol>2. 下大静脈カテーテル
<ol><li>脚の付け根の毛を剃る。交互 3 回アルコールとポビドン ヨードで皮膚を消毒して、外科用ドレープで脚の付け根の領域をカバー.</li>
	<li>大腿動脈のパルスを感じるし、パルスの明白な場所に約 2.0 cm の長さの縦皮膚をカットしようとします。</li>
	<li>筋膜と神経血管束を視覚化する筋肉を解剖します。</li>
	<li>神経血管束から大腿静脈の解剖: 最初の神経そして大腿動脈および静脈。 注: は、大腿静脈の小さな枝が簡単に破損して、出血の生産以来神経血管束の解剖時に注意します。</li>
	<li>大腿静脈に 2 つの合字を置きます。まだ結び目を結ぶことはありません。針ホルダー付け近位の合字の両端をキャッチします。</li>
	<li>静脈近位部分の近くに上向きホルダー付き合端を慎重に引き出します。静脈は血液で満たされてまで待ち、遠位の結び目を作る。</li>
	<li>小さな切開 (約1 mm) 結び目と近位の合字の間静脈に顕微鏡下のはさみを使用して。湾曲の端をピンセットや針を使ってカテーテルを挿入します。 注: 静脈を穿刺し、カテーテル用針の曲がった先端をガイドとして使用します。カテーテルを挿入する際、近位の合字を緩めます。6 7.0 cm のカテーテルを挿入します。</li>
	<li>2 つの単一の外科ノットで大腿静脈にカテーテルを固定します。同様に近位の合字を結ぶ。</li>
	<li>注射器で血液を描画しようとして、カテーテルの開存を確認してください。0.3 ml のヘパリン生理食塩水 (100 単位/ml) カテーテルをすすいでください。</li>
	<li>単一の針の 2 つの層の手術創を閉じます。</li>
</ol>3. 門脈カテーテル
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58456/58456fig1.jpg"> 図 1: ポータル カテーテル。ポータルのカテーテルから成っている針外径: 長さ約 25.0 mm [A]、柔軟性のあるポリウレタン製カテーテル外径 0.9 mm: 0.025」、全長約 100.0 mm [B]、カテーテル外径の柔軟なプラスチック製のヒント: 0.040」、約 15.0 mm 長い [C] プラグイン [D]。、及び長さ 100.0 mm [E] の結紮 3/0。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58456/58456fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<ol><li>図 1によるとポータルのカテーテルを準備します。<ol>
<li>針の切り口を挿入 (OD: 9 mm) ポリウレタン製カテーテル外径に: 0.025」。</li>
		<li>合字の 3/0 針とカテーテルの交差点を結ぶ。 注: は、合字の長い部分が 6 cm 以上長いであることを確認します。</li>
		<li>OD のカテーテルの先端を挿入: 0.025"ポリエチレン カテーテル外径に: 0.040」。</li>
		<li>金属またはプラスチック製のプラグでカテーテルを閉じます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>正中開腹<ol>
<li>腹部の毛を剃る、交互 3 回アルコールとポビドン ヨードと皮膚の消毒し、手術用ドレープを使用して領域をカバーします。</li>
		<li>おへそを縦胸骨の剣状から皮膚をカットします。</li>
		<li>白い線に沿って腹部壁の筋肉をカットします。</li>
		<li>剣の軟骨 2 つのカットの間、Y の形で吻方カットを展開します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>門脈の解剖<ol>
<li>生理食塩水で手術の綿棒を湿らせます。</li>
		<li>盲腸、昇順し横行結腸と小腸ループを外在します。腸間膜のルートを公開する左側に腸を置きます。 注: は、乾燥から腸を保護するために生理食塩水で湿らせたガーゼで腸をカバーします。</li>
		<li>門脈を公開するには、側面にまたは上向きに湿らせた綿棒で絞りに向けて慎重に肝葉に移動します。</li>
		<li>(肝門部、長さ約 5 mm) の腸間膜に覆われていない門脈の一部をローカライズし、門脈下合 3/0 (15 センチ) を渡します。 注意: 損傷から組織を保護する、合字を配置しながら、合字の生理食塩液を湿らせます。</li>
		<li>合字の両端を鉗子でクランプし、船を安定させるために優しくそれを締めます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>挿入とカテーテルの安定化<ol>
<li>門脈の無料部分の下ポータル カテーテルの合字の長い部分を渡すし、カテーテルは門脈のすぐ隣に位置するようにそれを引き出します。</li>
		<li>上腸間膜静脈・門脈のジャンクションの下から 3 mm 上腸間膜静脈に針を挿入します。30 ° の角度で、静脈に入力した後、針を保持、角度を減らすため、ほぼ水平、門脈に平行に針を進めます。 注: は、約 6-7 mm の長さの針を挿入します。安定の合字はカテーテルを挿入しながら優しく門脈を強化すべきです。</li>
		<li>組織接着剤、針が挿入される場所に 1-2 滴を適用します。肝臓をカバー綿棒を削除します。</li>
		<li>腸を腹腔内に戻します。</li>
		<li>ウォーム アップの生理食塩液を腸を湿らせ、湿らせた滅菌ガーゼでカバーします。</li>
		<li>カテーテルの開存を確認し、0.3 ml のヘパリン生理食塩水 (100 単位/ml) カテーテルをすすいでください。 注: 静脈血カテーテルで逆流自発的に。</li>
	</ol>
</li>
	<li>手術の終了<ol>
<li>5 分後、腸の蠕動運動の色をチェック、適切な腸間膜血流が維持されていることを確認してください。</li>
		<li>3 針と腹腔を閉じる: 壁の連続、吸収性縫合糸; - 腹壁筋の内側の層の腹膜腹壁 - 連続的な吸収性の縫合。 筋肉皮膚及び皮下組織の 1 つ、非吸収性縫合糸です。 注: は外在、へその周囲、カテーテルの遠位部です。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 門脈血サンプリング
<ol><li>使用する特定のテスト プロトコルに従って時サンプル門脈血表 1を参照してください。</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>短いプロトコル</td>
			<td>長いプロトコル</td>
		</tr>
<tr>
<td>t0 -ベースライン (前 intracolonic 管理) に、</td>
			<td>t0 -ベースライン (前 intracolonic 管理) に、</td>
		</tr>
<tr>
<td>t1 -intracolonic 投与後 5 分</td>
			<td>t1 -intracolonic 投与後 30 分</td>
		</tr>
<tr>
<td>t2 -intracolonic 投与後 30 分</td>
			<td>t2 -intracolonic 投与後 60 分</td>
		</tr>
</tbody></table>表 1: ポータル血液サンプリング プロトコル腸の透磁率の評価のため。
注: 連続採血間隔テスト物質のバイオアベイラビリティと管理 (結腸、胃など) のサイトで主に依存します。
<ol start="2"><li>ポータル カテーテル プラグを開き、血液の流れを自由にできます。</li>
	<li>使用シリンジ (vol. 2 mL) および鈍い針外径: 0.9 mm。 0.7 mL 以上の血液を集めます。</li>
	<li>ヘパリン生理食塩水 (100 単位/ml) の 0.3 mL で洗い流してカテーテル プラグを閉じます。</li>
</ol>5. 下大静脈血サンプリング
<ol><li>使用する特定のテスト プロトコルに従って時サンプル下大静脈血表 2を参照してください。</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>門脈</td>
			<td>下大静脈</td>
		</tr>
<tr>
<td>t0 -ベースライン (前 intracolonic 管理) に、</td>
			<td>t0 -ベースライン (前 intracolonic 管理) に、</td>
		</tr>
<tr>
<td>t1 -intracolonic 投与後 30 分</td>
			<td>t1 -intracolonic 投与後 30 分</td>
		</tr>
</tbody></table>血肝クリアランス測定のためのサンプリングと腸ポータル血肝臓全身血経路の追跡のテーブル 2: プロトコル。
<ol start="2"><li>下大静脈カテーテル プラグを開き、血液の流れを自由にできます。</li>
	<li>以上 0.7 mL のシリンジを用いた血液を収集 (vol. 2 mL)、針の外径が壊れて: 0.9 mm。</li>
	<li>0.2 0.3 と洗い mL のヘパリン生理食塩水 (100 単位/ml) とカテーテル プラグを閉じます。</li>
</ol>6. 消化管透過性マーカーの管理
<ol><li>ガイドワイヤーし、滅菌水 (通常 1 mL ですが挿入する前にチェックの実際のバルーンのサイズ) の十分な量を使用して大腸のカテーテルのバルーンを膨らませます。 注: バルーン径が 1 cm を超えない。</li>
	<li>(傾斜約 15%) コロンから投与液の流出のリスクを最小限に抑えることをラットの頭を配置します。</li>
	<li>ゆっくりテスト物質を管理 (トリメチルアミンなど、100 mg/kg bw) 大腸カテーテルで排水ポートを使用します。 注: 管理ソリューションの 0.75 mL と肛門から投与液の流出を防ぐために 0.5 mL/分の送り速度の量を超えないようにします。</li>
	<li>10 分後に、カテーテルのバルーンをしぼませます。</li>
	<li>サンプルを使用する特定のテスト プロトコルによると門脈下大静脈から血液表 1 と表 2を参照してください。</li>
	<li>承認された方法で動物を安楽死させます。</li>
</ol>7. 肝クリアランスの計算
<ol><li>肝クリアランスは、門脈血の濃度 (1 - (下大静脈濃度に下大静脈の比、門脈血中濃度と下大静脈血中濃度の違いによって肝抽出として理解を表現します。/門脈濃度))。</li>
</ol>8. 試験物質濃度 n 血液サンプルの評価
<ol><li>被験物質と試験方法、に応じて適切な検査(遠心分離等)のサンプルを対象します。提案プロトコルでは、TMA/TMAO とトリプル四重極質量分析計、高速液体クロマトグラフィーを用いた SCFA 濃度を評価します。補足資料にメソッドの詳細な説明を見つけてください。</li>
</ol>

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</ol>

著者が明らかに何もありません。

説明、直接、生体内で、GBB 透過性の測定方法を維持 closetophysiological 条件 (腸の血流を保持) 消化器系、肝臓や腎臓の機能に影響は事実上なかった。
この手法の重要なステップは、ポータルのカテーテルの挿入です。同時にこれがされる優しくそして断固とする必要があります。穏やかな、短い出血が正しく実行された; 門脈穿刺から生じるしかし、血管に針を挿入するときを停止します。持続する出血は、門脈が穿孔されてを示します。カテーテル挿入を容易にするにはも門脈を公開されている必要があります。Exteriorizing 腸後、腸間膜根はよく公開されると、上腸間膜静脈も表示するか (上腸間膜静脈は門脈に入る頭側)。門脈は通常側面に移動するが肝の葉で覆われています。また、ポータルのカテーテルの適切な安定化は、門脈破裂や出血、特に長い実験でカテーテルの動きが生じるので成功した手順は、重要です。カテーテルの追加の安定化は、組織接着剤で腸間膜に付着または 2 つの単一ステッチ (スレッド 6/0) を適用することによって腸間膜にカテーテルを接続することによって達成され...

腸血液関門 (GBB) とも呼ばれる腸のバリアは、栄養素1の吸収を可能にしながら有害化合物の通過を制限するために血流から腸の内腔を分ける複雑な多層システムです。3 つの主要な層で構成されています: 粘液層、上皮と粘膜固有層。
多くの要因は、GBB の整合性と機能2に影響があります。GBB が心血管疾患や代謝疾患3,4血流に腸内細菌代謝産物の増加通路につながる可能性がありますを含む消化管および管外病気で妨げられることが示されています。腸内細菌代謝産物の普及率の増加は、全体の生物の機能に影響があります。たとえば、最近の研究は循環器系機能5,6,7 インドール、H2S、短鎖脂肪酸 (SCFA)、トリメチルアミン n-オキシドなどの細菌代謝産物の影響を表示します。、8,9。最後に、GBB 透過性を増加可能性があります腸10の形態的, 機能的変化に関連付けられている心血管疾患や代謝疾患のマーカーとして使用することが提案されている.したがって、両方の基本的な臨床科学の興味の細菌代謝産物の腸ポータル血肝臓全身血経路を追跡可能性があります。
GBB の透水性評価法の一般的利用実験的実行は体外切除腸管粘膜、または人工膜11,12の断片を使用しています。これらのメソッドの精度が、GBB の適切な機能が一定の腸の血流を必要とするという事実によって損なわれます。その一方で、生体内で利用できる方法は、外因性マーカー13の血中濃度や尿の評価に基づいています。しかし、外因性化合物の末梢血中及び尿中濃度は腎機能、すなわち、糸球体濾過率と尿細管排泄および肝臓の代謝によって影響を受けて、すなわち、最初に代謝を渡します。両方のパラメーターは、GBB とは無関係の研究被験者間大幅に異なる場合があります。
本稿では、門脈血サンプリングを用いたラットの GBB 透磁率の直接測定について説明します。この体内メソッドは、腸の血流を維持し、肝・腎機能に左右されない事実上。説明の方法は通常使用されません、おそらくいくつかの方法論の難しさのため。門脈・肝静脈の合流点のすぐ上の下大静脈カテーテルについて詳細に述べる.門脈と下大静脈から血液サンプリングにより GBB の透磁率と肝クリアランスの評価だけでなく、腸内細菌の代謝物や薬など、興味の分子の腸ポータル血肝臓全身血経路の追跡ができます。私たちの研究室でテストされたメソッドのいくつかのアプリケーションを提案する.TMA、腸内細菌の代謝産物、TMA の肝クリアランスの評価、SCFA の腸ポータル血肝臓全身血経路の評価コロンの透過性の評価が含まれます。
腸血液関門の透過性を評価する次のプロトコル手順に従ってください、順序: 1 (intraintestinal 政権の行挿入)、 3 (門脈カテーテル)、 4 (門脈血サンプリング)、 6 (腸の透過性マーカーの管理)、 4。
肝クリアランスと腸ポータル血肝臓全身血経路を評価する次のプロトコルの手順に従ってください、順序: 1 (intraintestinal 政権の行挿入)、 2 (下大静脈カテーテル検査) 3 (門脈カテーテル)、 4 (門脈血サンプリング)、 5 (下大静脈血サンプリング)、 6 (腸の透過性マーカーの管理)、 4、 5、 7 (肝クリアランスの計算).

<table><tbody><tr><td>針外径:9 mm</td><td>ベクトン・ディキンソン&nbsp;S.A.</td><td>301300</td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレンカテーテルID:0.025 "、OD:0.040"&nbsp;</td><td>サイエンティフィック・コモディティーズ・インク</td><td>#BB520-40</td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレンカテーテルID:0.012 "、OD:0.025"&nbsp;</td><td>サイエンティフィック・コモディティーズ・インク</td><td>#BB520-25</td><td></td></tr><tr><td>C-フレックスチューブ、不透明ホワイト1/50 "ID x 1/12" OD&nbsp;&nbsp;</td><td>コール・パーマー・インストゥルメント・カンパニー</td><td>06424-59</td><td></td></tr><tr><td>小児用フォーリーカテーテル(10Fまたは8Fサイズ)&nbsp;</td><td>Sigmed</td><td>0000 80305</td><td></td></tr>外科<tr><td>用結紮糸3/0</td><td>Yavo Sp. Z o.o.&nbsp;</td><td>P48JE</td><td></td></tr><tr><td>吸収性外科用縫合糸 - ポリグラクチン 910 4/0</td><td>KRUUSE Polska Sp. Zo.o.</td><td></td><td></td>152336</tr><tr><td>ティッシュ接着剤 - ロックタイト454シアノアクリレート接着剤ロック</td><td>タイト&nbsp;</td><td></td><td></td>1370127</tr><tr><td>ポビドンヨウ素</td><td>EGIS Pharmaceuticals PLC</td><td>4449 11</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン - ヘパリニウム WZF&nbsp;</td><td>WZF Polfa S.A.</td><td>02BK0417</td>生理<td>食塩水で10倍希釈</td></tr><tr><td>グリセリン 86%</td><td>Laboratorium Farmaceutyczne Avena</td><td>5.90999E+12</td><td>結腸カテーテル法の潤滑剤として作用</td></tr><tr><td>キシロカイン 2%</td><td>アストラゼンカ&nbsp;</td><td></td><td></td>9941342</tr><tr><td>ウレタン</td><td>Sigma-Aldrich (メルク)&nbsp;</td><td>U2500-500G</td><td></td></tr><tr><td>トリメチルアミン溶液 45%</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)&nbsp;</td><td>92262-1L</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 2 mL</td><td>B.Braun Melsungen AG</td><td>4606027V</td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水 250 mL</td><td>Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o.</td><td>15LL707WL</td><td></td></tr><tr><td>外科用ハサミ、ストレート、長さ115 mm、4 1/2 "鈍い端</td><td>ブラウン</td><td>NS-010-115-PKM</td><td></td></tr><tr><td>動脈鉗子タイプ マイクロアドソン曲げ、長さ140 mm 5 1/2 "</td><td>ブラウン</td><td>KN-008-140-ZMK</td><td></td></tr><tr><td>解剖学的鉗子、長さ95 mm、3 3/4 "シャープ0.7x0.55</td><td></td>ブラウン<td>PO-001-007-ZMK</td><td></td></tr><tr><td>マイクロハサミタイプ バンナ&nbsp;ストレート、長さ85 mm、3 3/8 "ブレードの長さ6 mm</td><td>Braun&nbsp;</td><td>NO-010-085-PMK</td><td></td></tr><tr><td>タオルクランプタイプ バックハウス 長さ130mm、5 1/8"&nbsp;</td><td>ブラウン</td><td>HO-128-130-PMK</td><td></td></tr><tr><td>ニードルホルダー、長さ 150 mm、6" t=0.4 1/2&nbsp;</td><td>ブラウン&nbsp;</td><td>IM-927-150-PZMK</td><td></td></tr><tr><td>デリケートハサミ、長さ110 mm、ストレート、4 3/8 "シャープ&nbsp;</td><td>ブラウン</td><td>NO-052-110-PMK</td><td></td></tr><tr><td>解剖学的鉗子、長さ95 mm、3 3/4 "シャープ</td><td>ブラウン</td><td>PO-022-001-PMK</td><td></td></tr></tbody></table>

腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するためのin vivo法

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

腸血液関門 (GBB) は、血流に腸の内腔から栄養、細菌代謝産物や薬物の通過を制御します。GBB 整合性は、消化管、循環器・代謝疾患、血流に腸内細菌の代謝などの生理活性化合物の簡単にアクセス可能性がありますで妨げられます。したがって、GBB の透磁率および腸管外の疾患のマーカーがあります。さらに、細菌代謝産物の普及率の増加全体の生物の機能に影響があります。
GBB 透水性を研究するための一般的に使用されるメソッドは、実行前のヴィヴォです。これらのメソッドの精度には腸管の血流に依存、GBB の機能限界です。生体内で一般的に使用される方法が肝臓と腎臓の性能によってバイアスことがありますこれらのメソッドは、尿の評価に基づいているため、他の一方で、または/および外因性マーカーの血中濃度。腸管の血流を維持し、肝・腎機能によって事実上受けませんポータルの採血に基づく体内法を用いたラットの GBB 透水性の直接測定を紹介します。
門脈にポリウレタンのカテーテルが挿入され、肝のすぐ上下大静脈静脈の合流点。ベースライン時と消化管の必要な部分に選択したマーカーの投与後、血液をサンプリングします。ここでは、(1) TMA、腸内細菌の代謝産物、TMA の肝クリアランスの評価 (2) (3) 腸の腸ポータル血肝末梢血経路の評価コロンの透過性の評価を含むメソッドのいくつかのアプリケーションを提案します。細菌由来短鎖脂肪酸。さらに、プロトコルは、ポータル血圧の測定、消化管吸収と薬物の肝代謝を追跡するためにまた使用可能性があります。

我々 は正常にラットの TMA の GBB の透磁率と肝のクリアランスを測定しました。我々 は、正常血圧ラット (図 2)4と比較して TMA に増加コロン透水性がある高血圧ラットを実証しました。別の研究にその高い塩の取入口に TMA (図 3)14の GBB 透磁率および肝クリアランスは影響しませんを発見しました。
SCFA スツール, 門脈血および末梢血での濃度を測定、我々 は末梢血に腸から分子のパスをトレースします。これらの実験のための模範的な結果は表 3に掲載されています。
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栄養素、微生物叢代謝および循環に医薬品へのアクセスは、腸・血液関門 (GBB) によって制御されます。直接 GBB 透磁率、生体内で、一般的に使用される間接的な方法と対照をなして肝臓と腎臓の機能によって影響ほぼないされる測定法について述べる。

腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するためのIn Vivo法

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

腸管バリアは、栄養素、細菌代謝産物、薬物、および腸内腔から血流への他の外因性化合物の通過を制御する多層系である。私たちが知っているように、バリアの完全性は、胃腸だけでなく、心血管疾患およびいくつかの代謝性疾患において損なわれる可能性があり、腸内細菌代謝産物などの生物学的に活性な化合物の血流へのアクセスが容易になり、生物全体の機能に影響を与える可能性があります。したがって、腸管-血液バリアの透過性は、腸および腸外疾患の両方のマーカーであり得る。このビデオでは、消化管への試験物質の投与後に門脈血液サンプリングを用いたラットにおける腸血関透過性の直接測定を行う。我々は、肝静脈合流のすぐ上の門脈および下静脈の分類を詳細に記述する。門脈や下静脈から採取した血液は、腸管と血液のバリア透過性だけでなく、腸内細菌の代謝物や医薬品などの目的の分子の肝クリアランスと吸収経路を評価することを可能にする。この方法は、肝臓および腎臓機能の影響を事実上受け入れ、生体内およびインビトロ法で一般的に使用されるよりも強い利点である腸血流を保存します。動物は、手順の前に一晩断食する必要があります。全身麻酔中に全ての処置を行う。動物は実験後に安楽死させられます。我々の手順は、腸内投与のためのラインの挿入から始まります。ここでは、マーカーのコロン内投与を提案する。それは多分消化管の様々なレベルでの投与によって変更されます。.例えば、胃や十二指腸。しかし、胃腸管の上部にマーカーを投与しながら、蠕動の可変速度と酵素および胃酸との可能な相互作用を考慮に入れます。小児フォーリーカテーテルサイズ10 Fまたは8Fを大腸カテーテルとして使用してください。カテーテルをマークして、約8センチメートルの結腸に挿入される部分を示します。結腸にカテーテルを挿入する前に、直腸の肛門領域と便の数を確認してください。便が存在する場合は、直腸領域をマッサージして直腸を空にする。カテーテルに沿って潤滑剤を入れます。次に、潤滑剤でアヌスとその周辺を湿らせ。外付け肛門括約筋を通してガイドワイヤーでカテーテルを挿入します。ゆっくりと前進、後方、および円形の動きを行います。カテーテルを挿入しながら、腹部触診によってカテーテルの位置を確認し続けます。次のステップは、下の大静脈カテーテル法である。腸透過性研究でこの手順をスキップすることができます。.大腿動脈の脈拍を感じ、脈拍が触知可能な場所で約2センチメートルの長さで皮膚を縦方向に切断するようにしてください。筋膜と筋肉を解剖して神経血管束を可視化する。次に、神経血管束から大腿静脈を解剖する。最初の神経、次に大腿動脈、次に静脈。大腿静脈のいくつかの小さな枝が損傷しやすいので、バンドルの解剖中に注意してください。次に、大腿静脈に2つの合字を置きます。結び目はまだ結びないでください。針ホルダーで

an-vivo-method-for-evaluating-gut-blood-barrier-liver-metabolism

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

術後イレウス（POI）が増加し、罹患率および長期の入院期間につながる腹部手術の合併症である。予防的または治療的戦略が激化研究を欠いているので必要です。そこで我々は、POIの病態生理を調査し、潜在的な治療の選択肢を研究するために標準化され、実行可能なマウスモデルを確立した。...

げっ歯類における腸運動と腸壁の炎症の機能評価：腸管操作の標準化されたモデルで分析

出典:カラタユド・アロヨ、M.ら。In vitro 腸内宿主-微生物界面における合成細菌コンソーシアムの存続可能性の評価。J. Vis. Exp.(2018年)。このビデオでは、細菌の生存可能性を研究するためのin...

細菌の癒着と内部化を評価するためのin vitro腸モデル

このプロトコルは、腸バリア機能のex...

ex vivoで腸嚢は、胃腸疾患のモデルに粘膜透過性を評価するために

2 つのメソッドは、腸管のバリア機能を決定するここで掲載されています。上皮メーター (ボルト/オーム) は、組織培養の井戸に直接培養上皮細胞の上皮電気抵抗の測定に使用されます。マウスで FITC...

腸管上皮細胞の透磁率を決定する体外と体内アプローチ

ここでは、胃腸管の生理的条件をシミュレートするバイオリアクターの一連を使用して体外のコロン,の腸内細菌を培養するためのプロトコルを提案する.

体外養殖人間の腸内細菌を研究する技術を適用する高度な

腸と肝オルガノイドを有する微小生理学的システム(MPS)をアセトアミノフェン(APAP)に曝露した。本稿では、MPSにおけるオルガノイド産生法およびAPAP薬物動態学的および毒性学的特性評価法について説明する。また、結果を検証するために必要な組織機能分析についても説明します。...

薬物薬物動態および毒物学的評価のための腸/肝臓微生理学的システム

生体内顕微鏡を利用して、ここで提示される方法は、生きている動物の腸上皮細胞脱落のリアルタイム視覚化を可能にする。従って、麻酔化マウスの局所染色された腸粘膜(アクリフラビン及びローダミンB-デキストラン)は、共焦点顕微鏡を用いて単細胞分解能まで画像化される。...

腸透過性と上皮細胞流れ性能を評価する生体内顕微鏡ベースのアプローチ

調節不整合な腸上皮バリア機能および免疫応答は、生理学的モデルの欠如のために十分に調査されていない炎症性腸疾患の特徴である。ここでは、生体内での粘膜透過性および白血球の採用を研究するために、十分に血管化され、外装された腸セグメントを採用したマウス腸管ループモデルについて述べている。...

標準化腸ループモデルを用いたマウスにおける腸透過性と好中球経上皮移動の機能評価

本稿では、新しい腸器官培養システムを用いて、 生体 実験を行うホストとマイクロバイオームの相互作用を分析する独自の方法を紹介する。...

宿主-微生物叢相互作用を解析するための腸腸器官培養システム

本研究では、フルオレセインイソチオシアネート標識(FITC)デキストラン を経口強制 投与してマウスに投与し、 in vivo...

フルオレセインイソチオシアネート標識デキストランを用いたマウスの腸バリア完全性の評価

学ぶ腸血液関門透過性の直接測定法。ラットを用いた門脈血サンプリングにより、肝・腎機能の影響を受けずに生体内で腸血液関門の透過性と肝クリアランスを評価する革新的アプローチです。

腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するためのIn Vivo法

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