マイクロ ct 画像に基づく法病変を特徴と、小動物の脳に電極を配置

この方法は、病変を検証し、電極の位置を特定するためのより簡単で、エラーが起こりやすい、より定量的な方法を提供することによって、神経科学の分野における主要な質問に答えることができます。この技術の主な利点は、切除を必要とせずに脳全体の病変および電極部位の検証を可能にすることである。最終的な製品は、脳のデジタル3Dボリュームであり、複数の脳を並列に処理することができます。

この方法はラットで実証されるが、マウスやシマウマフィンチなどの他の生物にも適用することができる。一般的に, この方法に新しい個人は、いくつかのステップは、最良の結果を確保するために特定の注意を必要とするため、苦労します.まず、抽出した脳を50ミリリットルの円錐管に拡散液に入れる。

摂氏4度で穏やかに揺れながら、サンプルを2〜3日間保存します。オスミウムは、バッファーではなく、水で希釈されていることを確認してください。これは、水が中性洗剤として機能し、オスミウムが組織の奥深くに浸透することを可能にするためです。

2%オスミウム四酸化2%の50ミリリットルを二重蒸留水で調製します。その後、新しい50ミリリットル円錐形のチューブに脳を配置し、オスミウム四酸化溶液を追加します。チューブを閉じ、漏れを防ぐためにパラフィンフィルムで密封します。

密閉チューブを摂氏4度で2週間穏やかな揺れをして保管してください。チューブが水平に配置されていることを確認します。脳は非常に厚く、拡散によって移動する長い方法です。

チューブを水平に配置すると、オスミウムが組織の奥深くに移動できるようになります。サンプルを2週間インキュベートした後、二重蒸留水で5回洗浄し、結合していないオスミウム四酸化スメウムをサンプルから取り除きます。次に、サンプルを摂氏4度で30分間二重蒸留水で洗います。

二重蒸留水をエタノールの4つの希釈物と交換して、サンプルを脱水します。樹脂浸潤処理を開始するには、3つのアセトンと3つのアセトン樹脂希釈液を介してサンプルを移動し、その後、試料を室温で100%樹脂に浸漬し、浸潤処理を継続します。その後、サンプルを使い捨て金型に移します。

室温で4時間、新鮮な100%樹脂をサンプルに注入します。真空オーブンでサンプルを45°Cで15分間脱気します。その後、オーブンで60°Cで48時間サンプルを治します。

最後に、試料の硬化が終了したら、使い捨て金型を剥がして、マイクロCTマシンでスキャンします。従来の断面では、脳の向きはあらかじめ決められなければならない。このマイクロCT法を用いて、サンプル脳のデジタル体積を3次元で操作し、事実上あらゆる方向にスライスすることができる。

調製されたラット脳の走査型電子顕微鏡は、マイクロCTイメージングの目的で組織が著しく損傷していないことを確認する。シマウマフィンチ脳はまた、他の小さな動物の脳上のこの方法の有用性をテストするために、このプロトコルに従って準備され、スキャンされました。この技術は、脳内の深い病変だけでなく、脳内の表面病変を見つけるために使用することができます。

この技術は、その場での単一のテトロド、電解病変、電極トラック、その場でのテトロードアレイ、シリコンプローブの位置にも適用できます。この手順を試みている間, 脳が十分に長い間、十分な攪拌でインキュベートすることを忘れないようにすることが重要です.この手順に従って、光遺伝学および2光子イメージングのような他の方法は、異なる脳領域が異なる行動で果たす役割に関する追加の質問に答えるために行うことができる。

この技術は、神経科学の分野の研究者がラット、マウス、ソングバード、および他の小動物における脳と行動との間の構造機能関係をよりよく探求することを可能にする可能性がある。オスミウムでの作業は非常に危険であり、手袋を着用したり、真空フードで作業したりするなど、常にこの手順を実行する場合は注意が必要です。