Name: マウスの脳、青斑核の局在 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: 学ぶマウス脳切片における青斑核の正確な局在化プロトコル。免疫組織化学と金属イモージングを用いて、タンパク質発現と銅ホメオスタシスを解析し、神経疾患のメカニズム解明に貢献します。

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我々 はマウス コロニーの維持のための Abigael Muchenditsi を感謝します。アルゴンヌ国立研究所で高度な光子源の使用は、米国エネルギー省科学局オフィスの基本的なエネルギー科学、契約番号によって支えられた: デ AC02 06CH11357。ユーザー サポートや高度な光子源援助、オルガ Antipova と博士ステファン Vogt に感謝します。この作品は、SL に国立衛生研究所の助成金 2R01GM101502 で賄われていた。

動物の研究は、ジョンズ ・ ホプキンス大学動物ケアと (ACUC) を使用するプロトコル番号 M017M385 によって承認されました。
1. 脳スライス
<ol><li>固定、3% イソフルランのアプリケーションでマウスを麻酔します。<ol>
<li>イソフルランの滴でコットン ボールを浸すし、15 mL 遠心チューブ内に配置します。動物の鼻にチューブを置き、イソフルランを吸い込むことができます。つま先ピンチへの応答の欠乏によって麻酔の深さを確認します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>その裏に動物を置き、その腹部へのアクセスをしながら、T ピンでその四肢を固定することによってそれを固定します。</li>
	<li>腹部の皮膚から切り取り領域することによって手術ハサミで動物をカットし、胸部領域で皮膚をカットします。皮膚 T ピンを釘付けに。胸部まで腹膜の膜を破る。割れ胸腔内横隔膜を切断して、心臓を公開します。</li>
	<li>動物の外に流す血を許可する右房をカットします。左心室に 25 g 針、10 mL シリンジを挿入し、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 10 ml を灌流します。 注: これにより、ソリューションが全身循環と出口を通過する右心房を。</li>
	<li>10 mL 注射器を取り出し、60 mL の注射器に接続されている 25 ゲージの針を挿入します。50 ml の氷冷 4% パラホルムアルデヒド (PFA) の左心室を介して灌流します。<ol>
<li>H2O 10 %pfa 溶液を希釈し、4 ° C で最終 4 %pfa 溶液を低温の氷冷 4 %pfa 溶液を準備します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>マウスの頭を分離し、頭蓋骨から脳を削除します。<ol>
<li>首の皮膚をカットし、頭蓋骨を公開する目に向かって切り取ります。首、鼻を他に 1 つの眼球から頭蓋骨を割る。頭蓋骨の取り出しの皮をむき、脳全体を切除します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>4% で脳を孵化させなさい 4 ° C で 24 h の PFA</li>
	<li>30% ショ糖溶液の 25 ml、50 mL の円錐管に鉗子で脳を転送します。脳が管の底に沈むまで 4 ° C 48-72 時間でそれを維持します。</li>
	<li>中脳 (前の ~ 3 mm 前後) をマトリックス コロナ、成体マウス脳スライサーと脳をカットします。脳幹を含む脳のセクションを保ちます。 注: これは 2 つの脳のセクション-(カットの前部) 皮質と脳幹・小脳 (カットの後部) を含む 1 つの含んでいる最もになります。次の手順で脳幹セクションを使用します。</li>
	<li>囲まれた化合物の最適な切削温度 (OCT); 埋め込みの金型の下に置かれたカット表面と脳幹セクションを埋め込む-80 ° C のフリーザーに埋め込まれた脳を移動し、さらに使用するまで、少なくとも 12 時間-凍結します。</li>
	<li>クリオスタットで切断:; クライオスタットに年 10 月脳を含む金型埋め込み場所クリオスタットの頭脳のブロックの温度を調整して数時間用クライオスタットでそれを孵化させなさい。</li>
	<li>脳を含む 10 月のブロックを公開する埋め込み型をはがします。</li>
	<li>かみそりの刃を使用して、ブロックの面から脳に触れることがなく 10 月の超過分を削除します。</li>
	<li>正面に向かって脳の切断面を公開する、クライオスタットのチャックに 10 月のブロックをマウントします。</li>
	<li>それ、クリオスタットの razorblades に平行に配向するように脳の切断面を調整します。</li>
	<li>吻方 100 μ m のセクションをカット、延髄から始まる脳をトリムします。</li>
	<li>小脳と脳幹を 1 つの連続スライス カットまで吻方をトリミングします。50 μ m の厚みでスライスを収集を開始します。 注: 1 つの髄質から吻方トリム, 脳幹と小脳がカット 2 つの独立したセクションとして。吻側のセクションで、脳幹と小脳が 4th心室レベルで最終的にマージされます。4番目の脳室の横方向のエッジは、小脳と脳幹が 1 つの連続スライスとして出てくるだろうし、整形が。<ol>
<li>鉗子で 10 月囲まれた脳スライスを収集し、それを満ちている PBS (図 2 a) 24 ウェル プレートのウェルに配置。小脳と下丘 ~-5.52 mm 前 (図 1 b) の後方で互いに会うとき、LC は最も著名ななります。 注: 小脳が完全に切断されている、もはや ~-5.34 mm 前 (図 1 c) の後部の下丘を囲む一度 LC の最も前方部分が表示されなくなります。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. ドーパミン β-水酸化酵素またはチロシン水酸化酵素 (図 2) の免疫組織化学
<ol><li>日 1<ol>
<li>PBS で 5 分間 3 回選択したスライスを洗います。</li>
		<li>4 ° C で洗剤 (PBSD) 0.5% リン酸緩衝生理食塩水で 24 時間を permeabilize します。<ol>
<li>125 μ L の PBS の 25 の mL の洗剤を希釈します。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>日 2<ol>
<li>0.5% で 5 分間 3 回スライスを洗う PBSD。</li>
		<li>1: 500 で 0.5% の希釈で一次抗体、抗 DBH またはアンチ-日 18 h を追加 4 ° C で PBSD</li>
	</ol>
</li>
	<li>日 3<ol>
<li>0.5% で 3 回 10 分間のスライスを洗う PBSD。</li>
		<li>0.5% で 1: 1000 希釈に必要な二次抗体 (488 蛍光グリーンのロバ反うさぎ) を追加 16 h の PBSD。</li>
		<li>アルミと 4 ° C の場所で 24 well プレートをラップします。</li>
		<li>0.5% で 5 分間 3 回スライスを洗う PBSD。</li>
		<li>PBS で 5 分間洗浄します。</li>
		<li>鉛筆ブラシでスライスを水容器に転送します。</li>
		<li>充電されたスライド上の水に浮かんでいるスライスをマウントします。</li>
		<li>(DAPI) なしメディアをゆるませたマウント Coverslip セクション。</li>
		<li>室温で 30 分間マウントされた脳のセクションを乾燥させます。</li>
		<li>適切な二次抗体蛍光波長からの信号を検出するための設定や共焦点蛍光顕微鏡でイメージ脳スライス。</li>
		<li>10 倍の倍率で 1 つの画像を取るし、脳スライスの焦点面に顕微鏡を調整します。</li>
		<li>脳スライスの可能な LC 地域を検索するには、4th心室を使用向き。ポンスと脳幹、小脳は心室の上にある、30以下発見されます。</li>
		<li>4th心室; の横方向のエッジに焦点を当てて、LC を見つけるには、4th心室と橋に向かってポイントの端に由来する LC/脳幹領域 (図 2 b, 2 c)。</li>
		<li>以下の画像と特定の脳のスライスで LC の局在, 4 ° C で脳切片を含むスライドを保存します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 脳スライスで LC の検出
<ol><li>LC を含む脳セクションを見つけます、前述のように、マウスの脳をスライスし、PBS のセクションを収集を図 2 aに示すように 24 よく料理をいっぱい。<ol>
<li>LC の適切な局在化を可能にするにあたり 1 つの脳のセクションに配置します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>脳あたり immunostained になる 48 の脳スライスの合計を収集します。 注:図 2 aに示すように 2 つの料理のすべての井戸には、1 つの動物から脳スライスが含まれています。</li>
	<li>Immunostain 胸高直径、または木のすべての第五のスライス好ましくは、試金されるそれらに隣接しているそれらの脳切片の免疫組織化学を実行 (x 線蛍光顕微鏡、XFM) を経由してさらに。 注: この手順により、最終的なアッセイのスライスで LC の厳密な局在化のため (図 2 a; 井戸間の数字の付いている)。</li>
	<li>彼らはセンターと、LC または概算だけのエッジの正確な位置を必要とするかどうかは、アプリケーションによっては、例えばimmunostained 脳スライスの数を調整します。</li>
	<li>免疫組織化学、次 4回心室 (図 2 b, 2 c) の両側の式の特徴的なパターンで LC を含む脳スライスを検出します。図 2 d, 2 e; 連続脳スライスの LC で DBH 信号の表示倍率が表示されます。TH を示すために染色は LC の拡大図 2 f.
</li>
	<li>金属レベル (図 3) を定量化する XFM の場合それら含む LC のさらなる研究のために隣接するセクションを使用します。</li>
	<li>XFM を実行すると、高分子薄膜、試料ホルダーにマウントされているし、できるシンクロトロンでイメージに 10-30 μ m (セットアップ) によって薄いコロナ脳スライスを収集します。</li>
	<li>常温 XFM の高分子薄膜に用意し、実行 XFM 脳スライスを保存します。</li>
</ol>4 XFM を介して lc 金属のイメージング
<ol><li>上記のように例のマウス脳をスライス LC を判断し、LC を含むこれらの脳のスライスから XFM を介して金属の濃度を測定します。</li>
	<li>ビームライン 2-ID-E 高度な光子源 (アルゴンヌ国立研究所、イリノイ州アルゴンヌ) での元素分布をイメージ。</li>
	<li>'オンザフライ' データを記録31を前述のよう。</li>
	<li>プログラム マップ32,33を使用して液晶を含む脳スライス中元素濃度を決定します。</li>
</ol>

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このプロトコルの重要なステップは、供試体を正しく方向づけます。LC (小脳と下丘間の境界) を検索する脳の背側表面の解剖学的特徴を使用している我々 は、ためには、セクションが正しく位置合わせされることが重要です。マウス脳スライサー行列に脳を正しく設定に注意が必要です。核の欠落を回避する LC に前部と後部に 〜 500 μ m より多くの組織を切断をお勧めします。最も一般的な間違いは、LC の完全欠落した結果あまりにもいくつかのセクションをカットすることです。したがって、初めて 1 つの次のこのプロトコルは、必要とするよりより多くのセクションをカットすることをお勧めします。汚れる前に脳アトラスのイメージの注意深い研究は、非常に便利です。脳幹の外観の変化かなりすべての数百ミクロン、いくつかの経験を持つセクションがマクロスコ ピック出現によって単に汚す価値がある何を知ることは不可能です。
LC のローカライズの過程で、脳が断面中に配向がいかにうまくによって信号のバリエーションがあります。LC の中心を通って切断、信号は明るいし、に比べてはるかに小さい範囲に信号として表示されます、液晶の...

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Department of Neuroscience, Johns Hopkins University
to:
X-ray science division, Advanced Photon Source, Argonne National Laboratory

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Erratum: Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain

軌跡青斑核 (LC) は、脳幹とノルエピネフリン (NE) 生産1の主要なサイトで重要な地域です。LC 脳2全体の予測を大脳皮質、海馬、小脳3に送信し、概日リズム4、5注意と記憶6を含む主要な生理的プロセスを調節します。7、認知過程8、および感情9,10を強調します。LC の機能不全は、神経疾患、精神神経疾患11を含むパーキンソン病12,13,14アルツハイマー病1415 うつ病に関与しています。 ,16,17, 双極性障害18,19, そして不安20,21,22,23,24します。 これらの役割を考えると、LC の分析はその機能と機能障害を勉強することが重要です。
マウスは、生理学的および病態生理学的プロセスの研究に広く使用されます。サイズが小さいためマウス LC は ~ 300 μ m、構造を見つける難しさにつながるの平均直径を有する。脳の断面、中に、LC は、コロナや矢状のセクションで簡単に逃したことが。動物で LC の同定を記述する利用可能な研究は、ステップバイ ステップのプロトコルを提供していない非専門家が1,25を従うことができます。したがって、LC のローカリゼーションのためのガイダンスを提供するいくつかのアプリケーション (図 1, , 図 2図 3) マウス脳のこの領域を検出する開発したプロトコルについて述べる。プロトコルは、胸高直径26,27, または日24、注意深く制御された脳区分および免疫組織化学的検出 LC28の高濃縮両方の酵素を適用されます。LC を免疫組織化学で見つかったら、隣接する脳スライスはさらなる研究、形態および代謝解析、x 線蛍光顕微鏡 (XFM)29を介して金属のイメージング研究などに使用できます。このプロトコル (図 3) の例として XFM について述べる。

<table><tbody><tr><td>成体マウス脳スライサーマトリックス</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS001-1</td><td></td></tr><tr><td>抗ウサギ二次抗体、Alexa Fluor 488 (出典 - ロバ)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A-21206</td><td></td></tr><tr><td>荷電ガラススライド</td><td>Genesee</td><td>29-107</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>Zeiss</td><td>LSM 800</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Microm GmbH</td><td>HM 505E</td><td></td></tr><tr><td>クライオスタットカッティングブレード</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>MX35</td><td></td></tr><tr><td>シザース ミニ、9.5cm</td><td>Antech Diagnostcss</td><td>503241</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-10MG</td><td></td></tr><tr><td>ドーパミン &β;-ヒドロキシラーゼ (DBH) 抗体 - 自社生産 (出典 - ウサギ)</td> <td>B. Eipper</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>ドーパミン &β;-ヒドロキシラーゼ (DBH) 抗体 - 市販品 (出典 - ウサギ)</td><td>細胞シグナル伝達</td><td>8586</td><td></td></tr><tr><td>ファルコンチューブ、50ml</td><td>米国科学</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>フォラン (イソフルオラン)</td><td>バクスター</td><td>NDC 1019-360-60</td><td></td></tr><tr><td>鉗子マイクロ Adson</td><td>Antech Diagnostcs</td><td>501245</td><td></td></tr><tr><td>ハードセット 封入剤</td><td>EM sciences</td><td>17984-24</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>Pascal</td><td>LSM 5</td><td></td></tr><tr><td>マルチウェルプレート、24 ウェル</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>930186</td><td></td></tr><tr><td>最適な切断温度化合物 (OCT)</td><td>VWR/ tissue tech</td><td>102094-106</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド (PFA)/ホルマリン 10%</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>SF98-4</td><td></td></tr><tr><td>Peel-A-Way 使い捨て埋め込み金型</td><td>Polysciences Inc.</td><td>18646A</td><td></td></tr><tr><td>鉛筆ブラシ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>リン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>Life Tech</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>Razor blades</td><td>Amazon</td><td>ASIN:B000CMFJZ2</td><td></td></tr><tr><td>Sherulas</td><td>Antech Diagnostcs</td><td>14374</td><td></td></tr><tr><td>Tピン</td><td>オフィスデポ</td><td>344615</td><td></td></tr><tr><td>マウス脳定位固定座標、Paxinosおよびフランクリン、第3版</td><td>アマゾン</td><td>ISBN:978-0123694607</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100(PBSDを調製するため)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7949-500ml</td><td></td></tr><tr><td>チロシンヒドロキシラーゼ(TH)抗体(出典 - ウサギ)</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr>XRF <td>SPEXサンプル調製</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>用Ultralene薄膜広視野蛍光顕微鏡</td><td>Zeiss</td><td>Axio Zoom.V16</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスの脳、青斑核の局在

Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain

軌跡青斑核 (LC) は、ノルエピネフリン生理機能の数を調節する神経細胞の生産の主要なハブです。液晶の構造的または機能的な異常皮質、海馬、小脳などいくつかの脳領域に影響を与えるし、うつ病、双極性障害、不安、パーキンソン病、アルツハイマー病に貢献するかもしれない。これらの疾患はしばしば金属 misbalance に関連付けられている、lc における金属の役割は部分的にしか理解されています。LC の形態と機能の研究は、人間の病態と金属の貢献を理解する必要です。マウスは、広く使用されている実験モデル、マウス液晶が小さい (~0.3 mm 径) と非専門家を特定するは難しい。ここでは、マウスの脳で LC をローカライズする段階的な免疫組織化学ベースのプロトコルについて述べる。ドパミン-β-水酸化酵素 (DBH)、およびまた、チロシンヒドロキシラーゼ (TH)、両方の酵素を液晶で高発現は、脳切片での免疫組織化学的マーカーとして使用されます。X 線蛍光顕微鏡 (XFM) による詳細な分析、組織形態学的研究、代謝性のテストと同様の金属のイメージングを含む LC を含むセクションに隣接するセクションを使用できます。

(Cu、Fe、Zn, Mn) など金属恒常性の変化は、神経学的疾患、LC34,35の変化などで多く観察されます。したがって、脳内金属のレベルを決定する疾患のメカニズムを理解するために必要です。記述のプロトコルを使用して生成された脳のセクションは、Cu と LC で他の金属のレベルを定量化し、LC 以外の地域のレベルにそれらを比較する使用できます。(図 3)。例では、LC、リン酸、カリウム、カットされた脳スライスの塩化物および銅を測定しました。銅だけ具体的に、LC で上昇した.金属レベルの細胞内分布の検出のため高解像度 XFM イメージング (ここでは表示されません) が行えます。このプロトコルの応用の可能性が更に豊かさと細胞内分布、DBH (図 2 b、2 d、2 e)、TH (<strong class...

斑は、様々 な生理学的なプロセスに関わるニューロンの小さいクラスターです。ここでは、蛋白質やこの核で金属の研究のマウスの脳のセクションを準備するためのプロトコルについて述べる。

The locus coeruleus (LC) is a major hub of norepinephrine producing neurons that modulate a number of physiological functions. Structural or functional ...

遺伝子座の機能不全は、パーキンソン病、アルツハイマー病、うつ病、双極性障害、不安などの神経学的および神経精神疾患に関与している。これらの役割を考えると、遺伝子座のコエルールスの分析は、その機能と機能不全を研究するために重要です。マウスの脳の切断中に、座のコレリウスは、その小さなサイズのために、コロナまたは矢状のセクションのいずれかで容易に見逃すことができます。したがって、軌跡の局所化に関するガイダンスを提供するために、我々はいくつかのアプリケーションのためにマウスの脳内でこの領域を見つけるために開発したプロトコルを記述する。麻酔をかけたての脳を入れてから始め、50ミリリットルチューブの4%PFAにマウスを浸透させます。脳を摂氏4度で24時間インキュベートする。鉗子を使用して、30%スクロース溶液の25ミリリットルで満たされた50ミリリットルの円錐管に脳を移す。脳がチューブの底に沈むまで48〜72時間摂氏4度でインキュベートします。脳幹セクションを埋め込むには、その切断面を埋め込み型の底に置き、脳幹を囲むように最適な切断温度化合物を追加します。埋め込まれた脳をマイナス80度の冷凍庫で少なくとも12時間凍結し、さらに使用します。脳を持つ型をクライオスタットに入れ、数時間インキュベートして、その温度をクライオスタットの温度に合わせる。脳を含むOCTブロックを露出するには、カミソリの刃を使用して金型の4つのエッジを底まで切断し、そこから埋め込み型を剥がします。カミソリの刃を使用してブロックの表面から過剰なOCTを取り除き、脳に触れないようにします。その後、クライオスタットのチャックにOCTブロックを取り付け、脳の切断面を前面に向かって露出させます。脳を調整するには、クライオスタットのカミソリの刃に平行にカット面を向けます。標本を正しく向けるのは、このプロトコルの重要なステップです。脳の後ろ面の解剖学的特徴を用いて、小脳と下縁部の境界などのLCを見つけることが重要です。これは、適切にマウス脳スライサーマトリックスに脳を設定する上でケアを必要とします.髄質から始まる脳をトリミング, ロストリアル100マイクロメートルのセクションを切断.小脳と脳幹が第4心室のレベルで1つの連続スライスとして切断し始めたら、50マイクロメートルの厚さのスライスを収集し始めます。各脳スライスを収集し、PBSで満たされた24ウェルプレートの井戸に入れるには、鉗子を使用します。遺伝子座のコエリュラスは、小脳と下のコリカルがブレグマの約5.52ミリメートル後部でお互いに会うスライスで最も顕著になります。初日には、24ウェルプレートの脳スライスをPBSでそれぞれ5分間3回洗います。その後、洗剤で0.5%PBSを加え、摂氏4度で24時間透過させます。翌日、スライスを0.5%PBSDで5分間3回洗浄します。その後、0.5%PBSDで1〜500の希釈で一次抗体を加え、摂氏4度で18時間インキュベートします。3日目にスライスを0.5%PBSDでそれぞれ10分間3回洗浄し、0.5%PBSDで1~1000の希釈で二次抗体を加えます。プレートをアルミホイルで包み、摂氏4度で16時間インキュベートします。インキュベーション後、スライスを0.5%PBSDで5分間3回洗浄し、PBSで5分間洗浄します。DAPIを使用しないハードセットマウントメディアを使用してセクションをカバーします。ガラスカバーで覆い、室温で30分間乾燥させます。次に、設定を備えた共焦点顕微鏡を使用して、適切な蛍光波長から画像脳スライスまでの信号を検出します。顕微鏡を脳スライスの焦点面に調整した後、10倍の倍率を使用して1枚の画像を撮ります。小脳の下とポンと脳幹の上にある第4の心室を使用して、脳スライス内の可能なLC領域を見つける。第4心室の横縁に焦点を当て、LCは第4心室の端から始まり、ポンの脳幹領域を指し示す。LCで発現するタンパク質であるドーパミンβ-ヒドロキシラーゼの細胞内分布を、LC形態および神経密度を研究するためにこのプロトコルを用いて評価した。LCで発現する別のタンパク質は、チロシンヒドロキシラーゼ、また、LCを含む脳スライス中の強い緑色蛍光シグナルを示し、この例のLC.Inの変化を含む、神経学的障害においてしばしば観察され、LCを介して切断された脳スライスをリン酸塩、カリウム、亜鉛、および銅について測定した場合、銅だけがシグナルの特異的な増加を示した。核を失わないように、約500ミクロン以上の組織前部と後方の組織をLCに切断し、特にこのプロトコルを初めて実行する場合は、必要以上のセクションを切断することをお勧めします。染色前の脳アトラス画像の慎重な研究は非常に有用である。LCが免疫組織化学によって配置されると、隣接する脳スライスは、形態学的および代謝分析、ならびにX線蛍光顕微鏡による金属イメージング研究を含むさらなる研究に使用することができる。記載されたプロトコルを用いて生成された脳の切片は、LC内の銅および他の金属のレベルを定量化し、疾患メカニズムの理解に必要なLC外領域のレベルと比較するために使用することができる。このプロトコルのさらなる応用として、ドーパミンβ-ヒドロキシラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、およびLCで個別に発現する他のタンパク質、または共染色アッセイにおいて、LC形態および神経密度の研究の豊富および細胞内分布の検出が挙げられる。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

我々は経心臓的マウスの灌流、脳の除去と切片だけでなく、免疫ペルオキシダーゼ染色、樹脂の埋め込み、および脳切片の切片極薄のためのプロトコルについて説明します。これらの手順が完了すると、免疫染色の材料は、透過型電子顕微鏡による検査のための準備ができています。...

免疫電子顕微鏡のためのマウスの脳組織の準備

出典: Xavier, ALR, et al.げっ歯類のマグナ槽へのカニューレ移植J. Vis.

マウスモデルにおけるシスターナマグナへのカニューレ移植

このビデオは、マウス脳の両側M2領域からの局所電界電位(LFP)のin...

マウス脳の両半球からの局所電界電位の記録

このプロトコルは、マウス脳切片の青斑核領域を特定するための免疫組織化学の使用について概説しています。ドーパミンβ-ヒドロキシラーゼを緑色蛍光色素標識抗体で標的とすることにより、ノルエピネフリン産生ニューロンは顕微鏡下で緑色蛍光として可視化されます。...

マウス脳切片における座骨髄領域を同定するための免疫組織化学

このビデオは、マウス脳切片のMeynert領域の基底核におけるコリン作動性線維の免疫組織化学的染色を示しています。切片をブロックし、一次対コリンアセチルトランスフェラーゼで処理し、続いてビオチン化二次抗体で治療します。アビジン-ビオチン-ペルオキシダーゼ複合体が添加され、これが二次抗体に結合し、続いて発色基質が添加されます。その後、切片を脱水してマウントし、顕微鏡で視覚化します。...

マウス脳のMeyner基底核における神経線維の免疫組織化学的染色

ここで組織をクリア、蛍光標識と、それによって、大脳新皮質の細胞型の三次元組織の可視化を可能にするマウスの脳組織の大規模なイメージング手順をについて説明します。...

マウス大脳皮質における細胞組織の大規模三次元イメージング

マウスの二次運動皮質(M2)における局所電位電位(LFP)の生体内電気生理学的記録を提示し、半球横化を評価するために適用することができる。今回の研究では、WTコントロールと比較して、APP/PS1マウスにおける左右のM2間の同期レベルの変化が明らかになった。...

マウスの二次運動皮質における二国間局場電位記録による半球横化の評価

認知能力に対する三叉効果が遺伝子座のコエルール活動を伴うかどうかを検証するために、咀嚼によって誘発されるパフォーマンスとタスク関連の瞳孔サイズ変化との間の可能な相関関係を評価することを目的とした2つのプロトコルが提示される。これらのプロトコルは、遺伝子座のコエルールの寄与が疑われる条件に適用され得る。...

三叉刺激によって引き起こすローカス・コエルールス媒介性覚醒における瞳孔結合変化の評価

特定の神経集団や脳領域の光遺伝学的操作により、自由に動く動物の高い時間的および空間的分解能で行動を修正することができる。慢性に埋め込まれた光ファイバーと組み合わせて異なる光遺伝学的ツールを使用することにより、さまざまな神経変調および行動検査を行うことができます。...

自由に動くマウスの行動を調節する神経活動の光遺伝学的操作

マウスの脳部位を標的とする定位手術は、一般に頭蓋骨を介したアクセスを含み、頭蓋骨のランドマークによって導かれる。ここでは、脳幹のランドマークの直接可視化に依存する大槽 マグナを介して...

マウスのCisterna Magna を介して 尾側脳幹および上部頸椎脊髄をマイクロインジェクションする定位的外科的アプローチ

このプロトコルは野生型マウスの皮質をそのまま残している間2光子の顕微鏡検査との単一ニューロンの活動をイメージ投射すること、および部分皮質の突然変異体のマウスの広視野顕微鏡検査が付いている全体のSCをイメージ投射することを含む目がさめているマウスの優秀なcolliculus (SC)のカルシウム応答を、イメージ投射するためのプロシージャを詳述する。...

マウス上結腸におけるカルシウムイメージング

学ぶマウス脳切片における青斑核の正確な局在化プロトコル。免疫組織化学と金属イモージングを用いて、タンパク質発現と銅ホメオスタシスを解析し、神経疾患のメカニズム解明に貢献します。

マウスの脳、青斑核の局在

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