Name: ロボット システムを使用して処理し、組織学的解析のため大腸マウス サンプルを埋め込む (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 33 s
Description: 学ぶロボットシステムを用いたマウス大腸組織の自動処理・パラフィン包埋法。組織学的解析の品質向上と標準化を実現し、炎症性腸疾患や大腸がんモデルの研究に応用可能です。

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我々 は動物飼育で IEO 動物施設支援のため、テクニカル サポートのためのミラノ IRCCS ポリクリニコ病院の病理を感謝します。

動物の手続き健康 (認証 127/15、27/13) イタリア省によって承認され、腫瘍 IACUC (制度的ケアおよび使用委員会) の欧州研究所の動物のケアのガイドライン
1. 慢性大腸炎反復的な DSS 投与による誘導
<ol><li>別年齢とセックス (H2O 対 DSS 処理, 実験群あたり少なくとも 5 マウス同腹子) 2 つのグループのマウスに一致。</li>
	<li>2.5% を管理 DSS (40 kDa) 治療グループに 7 日とコントロール グループに水を飲料水に。 注:このモデルでは、慢性的な貫壁性腸炎9を誘導します。</li>
	<li>7 日後 DSS 治療を中止し、14 日間の両群れに水を与えます。このプロセスを 3 回繰り返します。 注: DSS の反復的な管理は、密接に人間の IBD、すなわち、線維症9に似た大腸粘膜の変化を誘導します。</li>
	<li>CO2吸入によって、すなわち制度 IACUC によって承認の手順に従ってマウスを犠牲に。</li>
	<li>メスのマウスの腹腔と腹膜を開きます。 注:不妊が推奨されますが、必須ではありませんが。</li>
	<li>鉗子、ピンセット、小腸からコロンで区切ります。ピンセットや鉗子で大腸を切除します。 注:大腸の長さの測定 (図 1 a) は、DSS 投与マウスで大腸炎が発生したかを判断する方法です。</li>
	<li>リン酸バッファー生理食塩水 (PBS) x 冷 1 の 10 mL をシャーレにコロンをすすいで軽く押して糞便材料を削除します。</li>
</ol>2. マウス組織固定
<ol><li>10 mL の 10% に各マウスの結腸標本を浸す常温 (室温) 中性緩衝ホルマリン (NBF)。 注:不妊が推奨されますが、必須ではありませんが。</li>
	<li>室温 18-24 h のための組織を修正します。</li>
</ol>3. 大腸の区分およびティッシュの準備
<ol><li>小さなピンセットで NBF コンテナーから固定組織を削除し、シャーレに入れてください。小さなピンセットでセクショニング作業プレートにコロンを置きます。</li>
	<li>生殖不能のメスとフラグメント (0.3 cm 長さに 0.2 cm) にコロンをカットします。このフラグメントの長さは、カセットの厚さを超えないに最適です。</li>
	<li>小さなピンセット (図 2 a) で 1 つのコロンのセグメントを拾います。突き出た小さなピンセット (図 2 b) でカセットを埋め込み志向のパラフィンのヒント プラスチックの 1 つに 1 つのコロンのセグメントを挿入します。</li>
	<li>カセットごと追加 3 コロン セグメント操作 (3.2-3.3) を繰り返します。隣接する突出のヒントは、組織の重複を最小限に抑えるために、セグメントを挿入するを避けるため</li>
	<li>(図 2) の 4 つの端を慎重に押してカセットをしっかりと閉じます。組織の損傷を防ぐためにティッシュを絞るしないでください。</li>
	<li>プラスチック サポート フレーム グリッドに挿入します。サンプルを識別するサポート フレームにラベルを付けます。生物学的サンプルごとに繰り返します。</li>
</ol>4. ティッシュの処理
<ol><li>(図 3 a, 3 b) の電源ボタンを押すことで自動プロセッサを入れます。</li>
	<li>ウォーム アップに、パラフィン ワックスを溶融して 1 h。計測器は、専用のアイコン (図 3) の存在を観察することによって、パラフィンが完全に溶融を確認するまでを待ちます。</li>
	<li>自動化されたプロセッサ (図 3 D) によって提供される金属のバスケットに方向づけられたカセットの各 (組織標本を含む) 手動でを挿入します。バスケットの占有率を最適化するために他に 1 つの近くにそれらを並べることによってカセットを垂直方向に配置します。</li>
	<li>金属のバスケット (図 3E) を閉じます。</li>
	<li>レトルト (図 3 f) のカバーを開きます。レトルトはマシンにバスケットが挿入される場所です。バスケットをプロセッサ (図 3) の専用ハウジングに挿入します。レトルト (図 3 H) の蓋を閉じます。</li>
	<li>器コンピューターのタッチ スクリーンを使用すると、作業プロトコル (図 3 i) を定義できます。ソリューション、タイミングおよび表 1に提供スキームに従って実装する温度のシーケンスを選択します。</li>
	<li>(図 3J) 専用のコンピューター アイコンをクリックして、バスケットを含むレトルトで実行するプロトコルを割り当てます。[スタート] ボタン(図 3 L) をクリックしてプロトコルを起動します。</li>
	<li>楽器専用のアイコンの存在を観察することによって、マシンからアラーム音を聞くことによって、プロトコルの最後を確認するまでを待ちます。</li>
	<li>レトルトのカバーを開きます。プロセッサ (図 3 M) からバスケットを削除します。</li>
</ol>5. 組織の埋め込み
<ol><li>電源ボタン (図 4 a) を押すことで自動埋め込みソフトを入れます。</li>
	<li>ウォーム アップに、パラフィン ワックスを溶融して 1 h。楽器は、パラフィンが楽器の内部温度計によって示されるパラフィン浴の温度を観察することによって完全に溶融を確認するまでを待ちます。</li>
	<li>Embedder ラックにプロセッサ バスケットからすべての処理されたカセットを手動で転送します。各ラックは、最大 32 のカセットを含めることができます。(図 4 b 4 C)。</li>
	<li>主な端末カバー (図 4、 4 D、4 e) を開きます。</li>
	<li>ロボットに信号器コンピューターのタッチ スクリーンを使用システム ラックがされている挿入 (図 4 階)。</li>
	<li>入口住宅ふた (図 4) を開きます。入口ハウジング ラックに挿入します。各端末は、同時に最大 4 ラックを含めることができます (図 4 H、 4 i)。入口住宅ふた (図 4 j) を閉じます。</li>
	<li>表 2 (図 4 K) によると埋め込み手順を開始するのに器コンピューターのタッチ スクリーンを使用します。 注: 32 カセットの各ラックは、埋め込まれる 45 分かかります。</li>
	<li>楽器専用のアイコン (図 4 L) の存在を観察することによって、プロトコルの最後を確認するまで待機します。</li>
	<li>アウトレット ラック (図 4 M) を削除します。主な端末カバーを閉じます。</li>
	<li>ラックから (方向グリッドを含む) 埋め込みのブロックを削除します。ストレージの段ボール箱で埋め込まれたブロックを転送します。</li>
</ol>6 マイクロメートルの断面
<ol><li>ミクロトームの冷却板を入れます。-8 間温度設定、-10 ° C</li>
	<li>蒸留水 2 L を含む、ミクロトームの恒温水槽を入れます。42-45 ° c の水浴の温度を設定します。</li>
	<li>パラフィンの場所には、冷却プレート上のブロックが埋め込まれています。クールなブロックを許可するように少なくとも 5 分を待ちます。</li>
	<li>冷却板から 1 ブロックを取り出してミクロトーム ブロック ホルダーにします。</li>
	<li>10 μ m の厚みで 6 回を切断することによって膜厚を 10 μ m トリム ブロックをカット ミクロトームを設定します。</li>
	<li>10 μ m から 3 μ m カット 1 つ 3 μ m については、ヘマトキシリンとエオシン (H & E) 染色するミクロトームの太さの設定を変更します。</li>
	<li>
小さなブラシで 3 μ m のセクションを収集します。慎重に組織のしわを減らすために水の表面上に敷設、風呂の水で 3 μ m のセクションを置きます。風呂のサーモスタットに制御された水から単一のガラス スライドに組織切片を収集します。
	<ol>
<li>必要な場合は、追加のセクションをカットします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>サンプル id を書き込むことによってガラス スライドにラベルを付けます。</li>
	<li>少なくとも 10 分の 37 ° C のオーブンでスライドを置きます。</li>
	<li>ラック収納ボックス、即時解析のためにスライド ガラスを置きます。</li>
</ol>7. ヘマトキシリンとエオシン (H & E) 染色
<ol><li>電源ボタンを押すことで自動着色剤に切り替えます。楽器のモニターに読み込んでバーの変化を観察することによってロボットのアームの初期化を許可します。</li>
	<li>垂直方向に最大 30 スライドの挿入、テナー ラックにガラス スライドを挿入します。</li>
	<li>適切な無線周波数識別 (RFID) のプラスチック ・ タグとラックのラベルを付けます。RFID タグは、テナーのコンピューターに読み込まれる正しいの汚損のプロトコルを識別するシステムです。</li>
	<li>ラックをテナーに挿入します。自動的に読み込んで、RFID タグの認識によると汚損のプロトコルを起動するコンピューターを許可します。 注:H & E 染色プロトコルに記載されてテーブル 3.
</li>
</ol>8. 免疫組織化学的染色
<ol><li>免疫組織化学的および Mallory ヒアリン前述7染色法を実行します。</li>
</ol>

<ol><li>Gibson-Corley, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+Integration+of+the+Histology+Core+Laboratory+in+Translational+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+histotechnology%22%5BJournal%5D)">Successful Integration of the Histology Core Laboratory in Translational Research.</a> Journal of histotechnology. 35, 17-21 (2012).</li>
<li>Olivier, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+modified+species+in+research%3A+Opportunities+and+challenges+for+the+histology+core+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+histotechnology%22%5BJournal%5D)">Genetically modified species in research: Opportunities and challenges for the histology core laboratory.</a> Journal of histotechnology. 35, 63-67 (2012).</li>
<li>Gibson-Corley, K. N., Olivier, A. K., Meyerholz, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+for+valid+histopathologic+scoring+in+research%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+pathology%22%5BJournal%5D)">Principles for valid histopathologic scoring in research.</a> Veterinary pathology. 50, 1007-1015 (2013).</li>
<li>Stolfi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+interleukin-21+in+the+regulation+of+colitis-associated+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">Involvement of interleukin-21 in the regulation of colitis-associated colon cancer.</a> The Journal of experimental medicine. 208, 2279-2290 (2011).</li>
<li>Begley, C. G., Ellis, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+development%3A+Raise+standards+for+preclinical+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Drug development: Raise standards for preclinical cancer research.</a> Nature. 483, 531-533 (2012).</li>
<li>Peters, S. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPeters%2C+SR+%22A+Practical+Guide+to+Frozen+Section+Technique%22">A Practical Guide to Frozen Section Technique</a>. , New York, N.S.N.Y. (2010).</li>
<li>Rosai, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRosai%2C+J+%22Rosai+and+Ackerman%27s+Surgical+Pathology%22">Rosai and Ackerman's Surgical Pathology</a>. , Elsevier. (2011).</li>
<li>Blumberg, R. S., Saubermann, L. J., Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+mucosal+inflammation+and+their+relation+to+human+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Animal models of mucosal inflammation and their relation to human inflammatory bowel disease.</a> Current opinion in immunology. 11, 648-656 (1999).</li>
<li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature. 2, 541-546 (2007).</li>
<li>Kaser, A., Zeissig, S., Blumberg, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Inflammatory bowel disease.</a> Annual review of immunology. 28, 573-621 (2010).</li>
<li>Cribiù, F. M., Burrello, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implementation+of+an+automated+inclusion+system+for+the+histological+analysis+of+murine+tissue+samples%3A+A+feasibility+study+in+DSS-induced+chronic+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Implementation of an automated inclusion system for the histological analysis of murine tissue samples: A feasibility study in DSS-induced chronic colitis.</a> European Journal of Inflammation. 16, 1-12 (2018).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

マウス組織の病理組織学的解析のための準備の間に別の自動化された手順を利用します。このプロトコルは、最終的な病理組織学的評価の全体的な品質を高め、全体のプロセスの標準化し、再現性を高めるための技術的なヒントを提供することを目指しています。自動化された器械と準備をし、組織、人間標本の調査のため病理コア施設で日常的に使用の埋め込み法を実施しています。
このメソッドの潜在的な適用を示すためには、DSS 誘発大腸炎モデルと呼ばれる腸の炎症の慢性のマウス実験の設定をしました。この設定には、慢性の腸管炎症時に発生した組織アーキテクチャの深遠な変更を調査するための精巧な組織学的評価を必要とする、IBD 患者にみられる複雑な疾患の経過が似ています。完全に、これらのプロセスの組織学的評価が大幅増加し、サンプル準備品質ご利用。注意してこのプロトコルに適用できる他のマウスの組織 (すなわち、脾臓、リンパ節、肝臓、脳)、唯一の違いという指向のカセットは、内腔のない組織には必要ありません。
最も重要な観察だった手作業によるエラーの減少 (すなわち...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58654/using-robotic-systems-to-process-embed-colonic-murine-samples-for">Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses</a>.&#160; An author affiliation&#160;was updated.
The affiliation for Claudia&#160;Burrello and Federica Facciotti was updated from:
Department of Experimental Oncology, European Institute of Oncology
to:
Department of Experimental Oncology, IEO, European Institute of Oncology IRCCS

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58654/using-robotic-systems-to-process-embed-colonic-murine-samples-for">Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses</a>.&#160; An author affiliation&#160;was updated.

Erratum: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses

最後の十年では、人間の病気1,2につながる病原性のメカニズムを解剖するいくつか実験的なモデルが開発されています。疾患の重症度を評価するために研究者は治療の効果の評価、細胞学的・組織学的アーキテクチャのバリエーションや炎症3の量を研究する必要があります。それらの実験モデルに実行するには、多くの場合マウスと人間のサンプル4,5を比較詳細な病理組織学的解析が必要です。
また、ひと試料は一般的処理および病理コア施設で得点、を通して経験豊富な人間の病理病理組織学的基準・方法の標準化します。逆に、マウス組織は通常固定、埋め込まれ、病理組織学的プロトコルの限られた経験を持つ研究者によって分析しました。病理組織学的検査の信頼性と品質高品質ティッシュ セクションの準備から始まります。いくつかの要因は、固定、マクロを含む、最終的な分析の品質区分、処理、パラフィンの埋め込みと埋め込みサンプル6、7の増減に批判的に貢献します。
サンプルの操作を含むすべてのこれらの通路は、マニュアル サンプルの埋め込みなど、手作業によるエラーより少ない程度に、手動ミクロトーム切片および汚損にさらされます。現時点では、組織学的評価のためのマウスのティッシュの準備のプロセス全体は、マニュアルや研究室から研究室を異なるプロトコルに依存します。本研究の目的は、マウスの病理組織学的検査の変動とエラーを減らすために標準化された自動化されたプロトコルを実装することです。
我々 の知識を述べるここで完全に自動化された組織処理およびマウスの組織の組織学的評価のための埋め込みの最初のプロトコルこれらは日常的に病理単位で人体標本の分析に使用されます。メソッドの実行可能性の実用的な例として腸炎のマウスモデルが分析されて、すなわち, , 慢性大腸炎モデルによる飲料水8 デキストラン ナトリウム硫酸塩 (DSS) の反復投与、9。DSS 投与動物は、体重減少、軟便または下痢、そして線維症と同様、大腸の短縮など腸の炎症の兆候を示すので人間の炎症性腸疾患 (IBD)10のような密接にこの実験的設定8,9,11。人間の IBD 患者の観察、DSS 治療は複雑な病気のコースを生成します。この文脈では、精巧な組織学的評価は、組織アーキテクチャの深遠な変更を理解する必要があります。したがって、サンプル準備の質を高めるための説明のプロトコルの実装が組織学的の解釈に依存する研究者を受けることが、マウス実験的設定の免疫組織化学的解析。実験モデルマウスの組織構造変化を伴う疾患の細胞組織潜入やさまざまな組織、臓器 (腸、脳、肝臓、皮膚) の炎症の存在使用の品質が向上した、病理組織学的検査のための試料調製。

<table><tbody><tr><td>無水エタノール</td><td>カルロ・エルバ</td><td>414605</td><td>試薬</td></tr><tr><td>アブソリュート ETOH</td><td>ハネウェル</td><td>02860-1L</td><td>試薬</td></tr><tr><td>硫酸アルミニウム カリウム</td><td>SIGMA</td><td>A6435</td><td>試薬</td></tr><tr><td>アニリンブルー</td><td>SIGMA</td><td>415049</td><td>試薬</td></tr><tr><td>カルボル フクシン</td> シ<td>グマ</td><td>C4165</td><td>試薬</td></tr><tr><td>CD11b (クローン M1/70)</td><td>とんぼバイオサイエンス</td><td>35-0112-U100</td><td>抗体</td></tr><tr><td>CD20 IHC (クローンSA275A11)</td><td>バイオレジェンド</td><td>150403</td><td></td></tr><tr><td>抗体 CD3 (17A2)</td><td>とんぼバイオサイエンス</td><td>35-0032-U100</td><td>抗体</td></tr><tr><td>CD4 (GK1.5)BD</td> バイオ<td>サイエンス</td><td>552051</td><td>抗体</td></tr><tr><td>CD45.2 (クローン 104)</td>バイオ<td>レジェンド</td><td>109837</td><td></td></tr><tr><td>抗体 CD8 (53-6.7)</td><td>BDBiosciences</td><td>553031</td><td>抗体</td></tr><tr><td>クエン酸緩衝液 pH 6 10x</td><td>SIGMA</td><td>C9999</td><td>試薬</td></tr><tr><td>Dab</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td>試薬</td></tr><tr><td>DPBS 1x</td><td>Microgem</td><td>L0615-500</td><td>試薬</td></tr><tr><td>DSS</td><td>TdB コンサルタント</td><td>DB001</td><td>試薬</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SIGMA</td><td>E9884</td><td>試薬</td></tr><tr><td>EnVision Flexペルオキシダーゼブロッキング試薬</td><td>DAKO</td><td></td><td>compreso in GV80011-2</td></tr><tr><td>EnVision Flex Substrate</td><td>DAKO</td><td></td><td>compreso in GV80011-2</td></tr><tr><td>EnVision Flex/HRP</td><td>DAKO</td><td></td><td>compreso in GV80011-2</td></tr><tr><td>EnVision Flex+ Rat Linker</td><td>DAKO</td><td></td><td>compreso in GV80011-2</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>VWR</td><td>1.09844</td><td>試薬</td></tr><tr><td>F4/80 (クローン BM8)</td><td>BioLegend</td><td>123108</td><td>抗体</td></tr><tr><td>ホルマリン</td><td>PanReac</td><td>2,529,311,215</td><td>試薬</td></tr><tr><td>氷酢酸</td><td>SIGMA</td><td>71251</td><td>試薬</td></tr><tr><td>ヤギ-抗ラット-HRP</td><td>アジレント</td><td>DAKO P0448</td><td>抗体</td></tr><tr><td>ヘマトキシリン</td><td>DIAPATH</td><td>C0303</td><td>試薬</td></tr><tr><td>ライカ ロータリー ミクロトーム (RM2255)</td><td>ライカ</td><td>RM2255</td><td>機器</td></tr><tr><td>Ly6g (クローン 1A8)</td><td>BD Biosciences</td><td>551459</td><td>抗体</td></tr><tr><td>マーキュリーII オキシド</td><td>SIGMA 203793</td><td></td><td>試薬</td></tr><tr><td>Omnis Clearify クリアリングエージェント</td><td>DAKO</td><td>CACLEGAL</td><td>試薬</td></tr><tr><td>Omnis EnVision Flex TRS</td><td>DAKO</td><td>GV80011-2</td><td>試薬</td></tr><tr><td>Orange G</td><td>SIGMA</td><td>O3756</td><td>試薬</td></tr><tr><td>パラフィン</td><td>Sakura</td><td>7052</td><td></td></tr>試薬 <tr><td>Peloris</td><td>LEICA</td><td></td><td>装置</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>SIGMA</td><td>P4937</td><td></td></tr>試薬 <tr><td>RPMI 1640 L-グルタミンなし</td><td>Microgem</td><td>L0501-500</td><td>試薬</td></tr><tr><td>STS020</td><td>ライカ</td><td></td><td>装置</td></tr><tr><td>Tissue-Teck Paraform Sectionable Cassette</td><td>SAKURA</td><td>7022</td><td>装置</td></tr><tr><td>Tissue-Tekの自動パラフィン包埋装置</td><td>さくら</td><td></td><td>装置</td></tr><tr><td>キシレン</td><td>J.T.Baker8080.1000</td><td></td><td>試薬</td></tr></tbody></table>

ロボット システムを使用して処理し、組織学的解析のため大腸マウス サンプルを埋め込む

Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses

人間の病気の理解は、動物モデルの研究のおかげで大幅に拡張されています。それにもかかわらず、実験モデルの病理組織学的評価は厳格ひと試料に適用する必要があります。確かに、信頼性と正確な結論を導き出す、ティッシュ セクションの準備の質によって影響批判的に。ここでは、マウスのサンプルのパラフィン包埋する初期の準備から、手順の中にいくつかの自動化された手順を実装するマウス組織の病理組織学的解析のためのプロトコルについて述べる。自動化された手順から厳格なプロトコルの標準化、方法論的変数の削減は、マウスの病態解析の全体的な信頼性の向上に貢献します。具体的には、このプロトコル処理の自動化の使用率について説明します、ロボット システムを埋め込む日常的に使用ティッシュの処理、パラフィン包埋ひと試料の腸管炎症のマウス試験片を処理します。マウス組織の病理組織学的検査の信頼性が標準化と自動化技術の導入時に著しく増加することが分かった。

飲料水の DSS の反復投与による実験的慢性大腸炎は、密接に人間の IBD8,9に似た腸内の炎症のマウス モデルです。図 1大腸の短縮の (図 1 a)、DSS 誘発炎症の有無、大腸CXCL10 を含むプロ炎症性の遺伝子発現を獲得する広く使用されるパラメーターを含む DSS 治療の効果を説明します。、 tnfとmcp 1 (図 1 b)。炎症性細胞の浸潤は、DSS 治療、cytofluorimetry (図 1) を用いて、腸管粘膜の免疫応答の募集を表示によって大幅に強化されました。
<p class="jove_content" fo:keep-togeth...

マウスのティッシュの処理の標準化の欠如は、人体標本と比較するとマウスの病理組織学的解析の画質を低下させます。ここでは、炎症や uninflamed での処理とひと試料を埋め込むのため日常的にロボット システムの可能性を示すため大腸組織をマウスの病理組織学的検査を行うためのプロトコルを提案する.

The understanding of human diseases has been greatly expanded thanks to the study of animal models. Nonetheless, histopathological evaluation of ...

この自動化されたプロトコルは、ヒトのサンプルの処理と埋め込みに日常的に使用されるロボットシステムを用いて、マウス組織の組織病理学的調製を可能にし、サンプルの品質を大幅に向上させます。この手法の主な利点は、方法論的変数の数を減らし、手続き手順の標準化を改善することです。手順を実証し、フランチェスカ・ボッジョになります。フランチェスカ・ボッジョは私の研究室で働く病理学者です。小さなピンセットを使用して、固定されたマウス結腸組織サンプルを中性緩衝ホルマリンからペトリ皿の切断作業プレートに移すことから始めます。無菌メスを使用して結腸を0.2〜0.3センチメートルの断片に切断し、ピンセットを使用して、配向パラフィン埋め込みカセットの3つの隣接しないプラスチック突出先端のそれぞれに1つのセグメントを配置します。慎重にカセットを閉じ、プラスチック支持フレームにグリッドを挿入するために慎重に4つのエッジを押します。次に、支持フレームにラベルを付け、サンプルを識別し、カセットをグリッドに移します。処理の 1 時間前に、自動プロセッサを回します。パラフィンが溶けたことが計測器で示されたら、手動で金属バスケットを自動プロセッサに挿入します。カセットをすべて挿入したら、バスケットを閉じて、レトルトの蓋を開けます。バスケットをプロセッサの専用ハウジングに挿入し、レトルト蓋を閉じます。計測器コンピュータのタッチスクリーンを使用して、テーブルに記載されているスキームに従って実装する一連のソリューション、タイミング、温度を選択する作業プロトコルを定義します。専用のコンピュータアイコンをクリックして、カセットバスケットを含むレトルトにプロトコルを割り当て、スタートボタンをクリックします。機器が専用のアイコンとアラーム音でプロトコルの終わりを確認したら、レトルトの蓋を開けて、バスケットをプロセッサから取り外します。組織埋め込み前の1時間前に、自動埋め込み剤をオンにし、パラフィンが器具のパラフィンバス温度計で示すように完全に溶けるまで待ちます。処理されたカセットをプロセッサー・バスケットから埋め込み装置ラックに手動で転送し、メイン・埋め込み装置の蓋を開きます。タッチスクリーンを使用して、ラックが挿入されていることをロボットシステムに通知し、入口ハウジングの蓋を開けます。入口ハウジングに最大4つのラックを挿入し、入口ハウジングの蓋を閉じます。次に、タッチスクリーンを使用して、表に示されているとおりに埋め込み手順を開始します。装置が専用のアイコンでプロトコルの終わりを確認したら、コンセントラックを取り外し、メインの埋め込みカバーを閉じます。次に、組み込みブロックをラックからストレージボックスに転送します。大腸短調、およびプロ炎症性遺伝子の大腸発現は、デキストラン硫酸ナトリウムまたはDSS誘導炎症の存在をスコアリングするためのパラメータとして広く用いられている。腸内の炎症細胞の腸内層への浸潤は、DSS治療によっても大きく増強される。実証されているように、自動化によって処理された未処理サンプルのH&E染色は、DSS処理動物のサンプルと比較して、炎症性細胞の浸潤、上皮変化、粘膜アーキテクチャの変化を少なく示しています。自動器具によって行われるマウス組織の調製および埋め込みの品質は、CD20およびマロリートリクローム染色のための免疫組織化学的染色によってさらに確認することができる。特に、自動サンプル処理は、手動法で処理されるサンプルよりも、一貫して組織学的パラメータの高い割合の評価を可能にする。自動化されたプロセッサの準備が整うまで、組織をグリッドに正しく挿入し、パラフィンが完全に溶けるまで待つ必要があります。この方法は、人間の病理学者のマウスモデルで使用されるヒト組織学的サンプルの定性を用いて、任意のマウス組織の組織学的分析を行うために使用することができる。この技術は、炎症組織の炎症を研究するための研究に成功しており、大腸マウス癌のモデルを研究するのに役立ちます。このプロトコルで使用されるいくつかの試薬は危険であるとして、この手順を実行する際には常に保護手袋、ゴーグルおよび実験室のコートを着用することを忘れないでください。

using-robotic-systems-to-process-embed-colonic-murine-samples-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオでは、非肥満の糖尿病/重症複合免疫不全症(NOD/SCID)マウスにおける結腸直腸癌細胞の進行を研究するために、患者由来の同所異種移植片結腸直腸癌マウスモデルを生成するためのプロトコルについて説明しています。このマウスモデルは、原発腫瘍の成長と転移パターンを理解するのに役立ちます。...

大腸癌のPDOXマウスモデルの生成:マウスモデルにおける大腸癌の進行の研究

このビデオは、マウスで大腸鏡ガイド下ピンチバイオプシーを実行するためのプロトコルを示しています。この技術は、結腸の内腔を視覚的に分析し、詳細な研究のために組織サンプルを収集するのに役立ちます。...

マウスモデルにおける大腸内視鏡ガイド下ピンチ生検:マウス結腸から組織サンプルを視覚化および抽出する技術

過去数年間、新世代内視鏡は、ネズミ大腸炎および結腸直腸腫瘍を評価するための重要な診断研究助剤として浮上している。私たちはここに、マウスにおける炎症と大腸腫瘍の内視鏡的な評価だけでなく、大腸炎および大腸腫瘍の内視鏡的重症度を記録するために小数の識別子を使用して新たなスコアリングシステムのための詳細なプロトコルを提示する。...

検証済みの内視鏡スコアリングシステムを使用して、大腸炎および結腸直腸腫瘍の重症度を評価するためにマウスでの柔軟な大腸内視鏡検査

マウスの腸を切断して「転がす」ための簡単な装置の使用が説明されています。...

急速にマウス腸のホールマウントを準備するための簡単​​な装置

ここでは、空間的に異なるマウスの結腸上皮表面細胞を根底にある陰窩基部細胞から分離するための簡単な方法について説明します。...

マウス結腸粘膜の顕微解剖のための凍結切片法

腸の上皮幹細胞（のISC）は、パネート細胞と混在しています。これらの細胞は、のISCをサポートするISCの子孫を分化し、抗菌保護を提供しています。ここでは、我々はパネート細胞は腸管上皮を維持する上で重要な役割を果たしていることを確立するために、トランスジェニック条件付きマウスモデルを使用する方法を示します。...

条件を使用して、マウス腸の再生成にパネート細胞の役割を分析するためのプロトコル<em&gt;のCre-LOX</em&gt;マウスモデル

ここでは、マウスにおける大腸誘導ピンチ生検を誘導し、創傷閉鎖をリアルタイムで追跡する手順の詳細な説明を提供する。さらに、創傷床の組織学的、免疫組織化学的および分子的分析のための組織の調製方法が提供される。...

マウスにおける大腸誘導ピンチ生検の実施と、その後の組織変化の評価

この合理化されたプロトコルは、組織の固定から、その場で蛍光を伴う微生物の染色まで、複雑な組織サンプル 中の 細菌を検出し、画像化するワークフローを詳述しています。...

蛍光を介した蛍光による腸内微生物叢-宿主相互作用の可視化( Situ ハイブリダイゼーション、レクチン染色、イメージング)

小腸がさまざまなサイズの微粒子をどのように処理するかを研究するために、私たちは確立された in vivo...

管腔微粒子のマウス小腸メカノセンシングの研究

このプロトコルは、レーザーマイクロダイセクションを使用して組織学分解細胞集団を濃縮するための、染色された薄い組織切片画像から病理学的に確認された関心領域を人工知能駆動でセグメンテーションするためのハイスループットワークフローを記述します。この戦略には、関心のある細胞集団を示す境界をレーザー顕微鏡に直接転送することを可能にする新しいアルゴリズムが含まれる。...

腫瘍微小環境のマイクロスケールプロテオミクス分析のための工業化された人工知能誘導レーザーマイクロダイセクション

腸の操作によって生成された術後イレウスのマウスモデルについて説明します。胃腸トランジット機能、病理学的変化、および免疫細胞の活性化は、手術の24時間後に評価されました。...

術後イレウスマウスモデル

学ぶロボットシステムを用いたマウス大腸組織の自動処理・パラフィン包埋法。組織学的解析の品質向上と標準化を実現し、炎症性腸疾患や大腸がんモデルの研究に応用可能です。

ロボットシステムを使用して処理し、組織学的解析のため大腸マウスサンプルを埋め込む

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