Name: 絶対数のシーケンス (Seq 歌姫) と手動並べ替えおよび二重の in Vitro転写を使用してマウスの蛍光に分類されたニューロンの単一細胞 RNA シーケンス (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: 学ぶマウス脳の蛍光ラベル付きニューロンを手動で分離し、in vitro転写を用いて高深度の単一細胞RNAシーケンスを行う方法。これにより、特定のニューロン集団の遺伝子発現パターンを詳細に解析できます。

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この作品は、(5R01MH094705-04 と R01MH109665-01 Z.J.H.) NIH からの補助金、(Z.J.H.) に CSHL ロバートソン神経科学基金、(兼) に NARSAD ドクトラル ・ フェローシップにサポートされていました。

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<li>Klein, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Droplet+barcoding+for+single-cell+transcriptomics+applied+to+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Droplet barcoding for single-cell transcriptomics applied to embryonic stem cells.</a> Cell. 161 (5), 1187-1201 (2015).</li>
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<li>Okaty, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-Scale+Molecular+Deconstruction+of+the+Serotonin+Neuron+System%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Multi-Scale Molecular Deconstruction of the Serotonin Neuron System.</a> Neuron. 88 (4), 774-791 (2015).</li>
<li>Poulin, J. F., Tasic, B., Hjerling-Leffler, J., Trimarchi, J. M., Awatramani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disentangling+neural+cell+diversity+using+single-cell+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Disentangling neural cell diversity using single-cell transcriptomics.</a> Nature Neuroscience. 19 (9), 1131-1141 (2016).</li>
<li>Crow, M., Paul, A., Ballouz, S., Huang, Z. J., Gillis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+single-cell+expression+to+characterize+co-expression+replicability%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Exploiting single-cell expression to characterize co-expression replicability.</a> Genome Biology. 17, 101(2016).</li>
<li>Crow, M., Paul, A., Ballouz, S., Huang, Z. J., Gillis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+the+replicability+of+cell+types+defined+by+single+cell+RNA-sequencing+data+using+MetaNeighbor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Characterizing the replicability of cell types defined by single cell RNA-sequencing data using MetaNeighbor.</a> Nature Communications. 9 (1), (2018).</li>
<li>Hrvatin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+of+experience-dependent+transcriptomic+states+in+the+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis of experience-dependent transcriptomic states in the mouse visual cortex.</a> Nature Neuroscience. 21 (1), 120-129 (2018).</li>
</ol>

著者は、競合する金銭的な利益がないことを宣言します。

プロトコルをソート マニュアルに適してまばら、人口マウス脳のラベルまたは現在のスループットの高いセルを用いた検討することですそれ以外の場合稀な細胞集団を代表しているニューロンのチャイルド RNA の塩基配列を解読並べ替えと増幅方法。通常 FACS を受ける細胞は ~ 9-14 psi、ノズルのサイズに応じての範囲で鞘とサンプルのライン圧力を受けるし、イベント レートを必要に応じています。さらに、ノズルから噴射されている時にセル上陸できるハード コレクション チューブまたは影響を与えるストレスを引き起こすサンプル バッファーでコーティングの井戸の表面に。手動並べ替え、中にこのような高圧は決して適用されるセルの毛細管ピペットに吸い込ま、そっとそれらを吹きガラス ピペットの先端を単に破壊して追放。歌姫 Seq プロトコルは細胞量が少ないと細胞から RNA 増幅に役立つ (< 8 μ L) と出発物質と一貫して検出可能な遺伝子 (8-10 K) の利回り多数低、ディープ シーケンスと相まって、時により詳細なセルの id8,13<...

単一細胞 RNA シーケンス (seq RNA) は、トランスクリプトーム研究を変えてきました。ほとんどのメソッドは、定義済みのセルの種類を並べ替えることはできませんさまざまな液滴1、2マイクロ3nanogrids4マイクロウェル5などの技術を使用して大規模な単一セル RNAseq を実行できます。遺伝的コード化の同時を発現します。選択セル人口を隔離するには、蛍光活性化セル (FACS) を並べ替えは単一セル モードでラベル付きセルを並べ替えるによく使用されます。ただし、FACS はいくつかの制限をあり、細心のサンプル処理手順が必要です。まず、入力セルの数が多いは通常、かなりの割合で (しばしば数百万セル mL あたり) を必要な (> 15-20%) ラベル付きの人口を含みます。第二に、細胞はグリア細胞分画、破片、およびノズルやフロー セルを詰まらせる可能性がありますそれ以外の場合細胞塊を削除する密度勾配遠心法手順を複数回を必要があります。第三に、FACS は通常染色と染め色ライブ/デッド (4 ′など6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)、ヨウ化 propidium (PI)、Cytotracker 染料) を染色、追加の時間をとるための手順を採用します。第四に、2 色 (DAPI、赤/緑の蛍光蛋白質 (GFP/RFP) など)、並べ替えの通常 2 つのサンプルの 1 つの親指のルールは、必要に応じて必要なマウスの緊張だけでなく処理されるラベルのないサンプルを必要とします。第五に、フィルタ リングが実行されるは、複数回する前に、サンプルは、FACS マシンで詰まったサンプル線を予防するために並べ替え中に頻繁です。第六に、初期化し流体流を安定させるし、液滴の調整を実行する最も一般的に使用される FACS 設定で時間を割り当てる必要があります。サンプルは通常、実際のサンプル コレクション、早めに 6 と 7 の彼らの自身の手順を実行いずれかゲートなどのユーザーの設定や必要補償行列、ダブレット除去をセットアップする前にシーケンスで実行、コントロール、並列で技術者の支援します。最後に、ポスト FACS、しばしば単一ラベルだけ細胞が各井戸に存在することを確認する手順がありますたとえばで高速プレート撮像素子など高コンテンツ スクリーニング セットアップのサンプルをチェックします。
上記の手順を回避して比較的短時間で容易に単一の蛍光に分類されたニューロンの小さい人口のシーケンスを対象に述べる選別高感度体外の 2 ラウンドに続いて手順マニュアル絶対数のシーケンス (Seq 歌姫) とダブルの生体外のトランスクリプションと呼ばれる増幅プロトコル。RNA 増幅と cDNA ライブラリを生成、Eberwineらから適応6 Hashimshonyら7、携帯電話より小さいボリュームを持つマウスの介在ニューロンに合わせて特定の変更さらに、興奮性錐体細胞に均等に有用であるまた発見しました。

<table><tbody><tr><td>ERCC RNA Spike-In Control Mixes</td><td>Thermo Fisher</td><td>Cat# 4456740</td><td></td></tr><tr><td>SuperScript III</td><td>Thermo Fisher</td><td>Cat# 18080093</td><td></td></tr><tr><td>RNaseOUT 組換えリボヌクレアーゼ阻害剤</td><td>Thermo Fisher</td><td>Cat# 10777019</td><td></td></tr><tr><td>RNA fragmentation buffer</td><td>New England Biolabs</td><td>Cat# E6105S</td><td></td></tr><tr><td>RNA MinElute kit</td><td>Qiagen</td><td>Cat# 74204</td><td></td></tr><tr><td>南極ホスファターゼ</td><td>ニューイングランド バイオラボ</td><td>Cat# M0289</td><td></td></tr><tr><td>ポリヌクレオチドキナーゼ</td><td>ニューイングランドバイオラボ</td>ス <td>キャット# M0201</td><td></td></tr><tr><td>T4 RNAリガーゼ2、切り捨てられた</td><td>ニューイングランドバイオラボ</td>ス <td>キャット# M0242</td><td></td></tr><tr><td>アンプルXp 磁気&nbsp; ビーズ</td><td>ベックマンコールター</td><td>キャット# A63880</td><td></td></tr><tr><td>SPRIselect サイズ選択磁気ビーズ</td><td>サーモフィッシャー</td><td>Cat# B23317</td><td></td></tr><tr><td>DL-AP5</td><td>Tocris</td><td>Cat# 0105</td><td></td></tr><tr><td>CNQX</td><td>Tocris</td><td>Cat# 1045</td><td></td></tr><tr><td>TTX</td><td>Tocris</td><td>Cat# 1078</td><td></td></tr><tr><td>Protease from Streptomyces griseus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# P5147</td><td></td></tr><tr><td>Message Amp II kit</td><td>Thermo Fisher</td><td>Cat# AM1751</td><td></td></tr><tr><td>Carbogen</td><td>エアガス</td><td>Cat# UN3156</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# 761036</td><td></td></tr><tr><td>Illumina TrueSeq smallRNA kit</td><td>Illumina</td><td>Cat# RS-200-0012</td><td></td></tr><tr><td>Bioanalyzer RNA Pico chip</td><td>Agilent</td><td>Cat# 5067-1513</td><td></td></tr><tr><td>Bioanalyzer High Sensitvity DNA chip</td><td>Agilent</td><td>Cat# 5067-4626</td><td></td></tr><tr><td>Bioanalyzer 2100</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DIC光学系による蛍光および明視野照明を備えた解剖顕微鏡。(ライカモデルMZ-16F)。</td><td>ライカ</td><td>MZ-16F</td><td></td></tr><tr><td>型ガラスマイクロキャピラリー:ホウケイ酸キャピラリーチューブ500個/個 OD= 1 mm、ID = 0.58 mm、壁= 0.21 mm、長さ= 150 mm。</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>モデルGC100-15、注文#30-0017</td><td></td></tr><tr><td>キャピラリーピペットプーラー</td><td>サッターインスツルメンツ株式会社</td><td>P-97</td><td></td></tr>ビ<tr><td>ブラトーム</td><td>サーモマイクロム</td><td>HM 650V</td><td></td></tr><tr><td>ビブラトーム組織冷却ユニット</td><td>サーモマイクロム</td><td>CU 65</td><td></td></tr></tbody></table>

絶対数のシーケンス (seq 歌姫) と手動並べ替えおよび二重の in vitro転写を使用してマウスの蛍光に分類されたニューロンの単一細胞 rna シーケンス

Single-cell RNA Sequencing of Fluorescently Labeled Mouse Neurons Using Manual Sorting and Double In Vitro Transcription with Absolute Counts Sequencing (DIVA-Seq)

単一細胞 RNA シーケンス (seq RNA) 遺伝子発現を試金するため広く実装されているツールは、現在。市販の単一細胞 RNA シーケンス プラットフォームは無差別にすべての入力セルを処理します。時々、関心の特にラベル付きの人口を隔離する蛍光活性化セル (FACS) を並べ替え、上流に使用されます。FACS の制限は、収集およびマウス脳から希少またはまばらにラベル付けされた神経細胞集団をプロファイリングする非現実的です大幅ラベル付きの分数の入力セルの高数値の必要性です。ここでは、マウスの脳組織を分離した手動で収集スパースにたてから単一ニューロンを蛍光標識の手法について述べる。このプロセスにより、高純度と内生コピー比率を保持するの in vitro転写に基づく増幅プロトコルで統合単一標識細胞を取り込むため。ユニークな分子識別子 (Umi) を使用して個々 の mRNA の数を生成する二重線形増幅法について述べる。単一細胞あたりの遺伝子検出の高度の増幅結果の 2 つのラウンド。

上記プロトコルを使用して、gaba 作動性ニューロンが手動で並べ替えられます (図 1)、RNA 増幅し、cDNA ライブラリ (図 2) に、高深さ8シーケンスします。増幅された RNA (aRNA) 製品のレンジに 500 を少し超えるピーク分布のサイズで 200-4,000 bp 間 bp (図 3 a)。ビーズ精製 cDNA ライブラリはさらに小さい 200 より小さい断片を除去ビーズを用いた浄化の第 2 ラウンドでサイズ制限 (図 3 b 3 C) bp ~ 350 でピークと bp。一方より長いフラグメントより多くのスペース フロー セル合計出力の読み取りを削減 (mRNA 挿入なし、唯一のアダプターおよびプライマー シーケンス)、空の読み取...

このプロトコルでは、高深度単一細胞 RNA 配列のため mRNA 転写に基づく増幅体外に続いて単一の蛍光に分類されたニューロンを分離するプロシージャを並べ替えマニュアルについて説明します。

絶対数のシーケンス (Seq 歌姫) と手動並べ替えおよび二重の in Vitro転写を使用してマウスの蛍光に分類されたニューロンの単一細胞 RNA シーケンス

Single-cell RNA sequencing (RNA-seq) is now a widely implemented tool for assaying gene expression. Commercially available single-cell RNA-sequencing ...

この方法は、単一ニューロンの分離とシーケンシングの分野における重要な障害を解決するのに役立ちます。ユーザー定義の脳領域から特定の集団または蛍光標識ニューロンの亜集団を収集することなど。この技術の主な利点は、それが目的の単一のニューロンが破片を汚染することなく捕捉されることを保証することです。また、比較的穏やかで、従来のFACS選別の流体圧力を受けるとすぐに死ぬ脆弱なニューロンタイプにとって重要です。キャピラリープーラーを使用して、10〜15ミクロンの出口径で引っ張られたガラスマイクロキャピラリを準備することによって開始します。目的の板の直径を得るために毛細血管の先端を切断するために細かいはさみを使用してください。次に、チューブコネクタを使用して、0.8ミリメートルの内径0.8ミリメートルの柔軟なシリコーンチューブの長さ120~150センチメートルを0.2ミクロンのPVDF膜シリンジフィルターと双方向チューブバルブに取り付けます。エアストーンを通して5%の二酸化炭素バランス酸素を泡立て、または溶液が完全にクリアされるまで500ミリリットルの冷蔵人工脳脊髄液またはACSFと酸素化物を調製します。ACSFの100ミリリットルを含む3つの150ミリリットルビーカーをそれぞれ準備します。1つに、アクティビティブロッカーのカクテルを追加します。もう一つには、プロテアーゼのストレプトコッカス分率を1ミリリットル当たり1ミリグラムの最終濃度に加える。最終的なビーカーに、FBSを1%の最終濃度に加え、エアストーンを通して5%の二酸化炭素バランス酸素を含む酸素化物を加えます。最後に、オープンフレームの上に転がすことによって出口径を減少させる3つの長い茎のパスツールピペットを作ります。小さなはさみで頭蓋骨を開き、皮質を損傷することなく細かい鉗子を使用して新鮮な脳を抽出することによって、安楽死させたマウスから脳を解剖する。切断の全期間の間に5%の二酸化炭素バランス酸素に取り付けられたエアストーンを残して冷蔵および酸素化されたACSFに脳を置く。ビブラートメチャックに脳を置き、300ミクロンの厚さのコロナまたは矢状切片を切断します。必要な数のセクションを収集して、最低 10 ~ 50 個のラベル付きセルを取得します。ビーカーの中に置かれた綿メッシュのスライスホルダーにスライスを置き、酸素化されたACSFを浴びるようにします。アクティビティブロッカーを備えたACSFを含むビーカーにスライスを移動し、エアストーンを使用して酸素をバブリングしながら室温で15〜20分間ブロックします。プロテアーゼ溶液を用いてACSFを含むビーカーにスライスを移動し、室温で軽度の消化を行います。消化後、活性ブロッカー溶液を含むビーカーにスライスを室温で5~10分間移動してプロテアーゼを洗い流します。酸素をバブリングし続けます。次に、室温で1%FBSのACSFを含む100ミリメートルのペトリ皿を準備し、マイクロディセクションのために個々のセクションをディスクに移動します。蛍光解剖スコープでは、1対50の細胞を有する対象領域および層を微細解剖するために、一対の細い鉗子を使用します。パスツールピペットを使用して、マイクロ解剖した部分をACSF溶液中の約0.8ミリリットルの1%FBSを含む2ミリリットルのマイクロ遠心分離管に移します。マイクロフュージチューブ内の解剖組織を室温で硝子化する。最大で始まり、最小の出口直径で終わる炎上したパスツールピペットのそれぞれで約10ストロークを実行します。解約した細胞を酸素化したACSFを含む100ミリメートルのペトリ皿に分配し、細胞が徐々に沈着するまで5〜7分待ちます。GFPとRFP信号を解剖顕微鏡で観察します。明視野照明の下で形態を調べることによって破片を識別する。小さな破片を含む細胞の領域が特定されたら、毛細血管を使用し、チューブに取り付けて、チューブバルブの端部を舌でブロックして細胞を選びます。次に、毛細血管を細胞の近くに置きます。毛細血管のブロックを解放し、すぐにキャピラリーアクションを使用して細胞をキャプチャするために再びブロックします。新鮮な酸素化されたACSFで100ミリメートルのペトリ皿に毛細管を移動し、蛍光光学の下で毛細血管先端を観察しながらチューブに穏やかに吹き込み、細胞を皿に分配します。100~150個の細胞が収集されるまで収集手順を繰り返し、デブリなどの汚染物質が明視野差干渉コントラスト光学で最小限に抑えられるようにします。最後に、新鮮なマイクロキャピラリーピペットを毎回使用して、単一のセルを選択し、プライマー付きサンプルコレクションバッファーの1マイクロリットルを含む0.2マイクロフュージチューブに0.5マイクロリットル以下で排出します。マイクロフュージチューブのピペットチップを破って、セルがコレクションバッファに残っていることを確認します。ドライアイスにチューブを置くことによって細胞を凍結します。RNA増幅のための処理までマイナス80°Cの冷凍庫で保管してください。GABAERG性ニューロンは、マウス脳の帯状皮質から単離された。手動で選別されたニューロンから増幅されたRNAは、500塩基対をわずかに上回るピーク分布を有する200〜4,000塩基対の間の範囲となった。ビード精製後、cDNAライブラリは、ビーズを使用して2回目の精製によりさらにサイズが制限され、200塩基対未満の断片を排除し、約350塩基対でピークを迎えます。シーケンスは、5番目の中央値に10倍、または6.9倍の10倍の10倍の平均マッピングされた読み取り1細胞当たりの読み取りを示した。UMIを使用してRNAを重複除去した後、各単一の細胞は5番目の中央値に1.0倍、または1.4倍の10〜1細胞当たりの平均ユニーク読み取り1.4回を持っていました。各単一細胞外部RNA制御コンソーシアムにおいて、RNAのスパイクを内部制御として使用し、サンプルに添加された分子の絶対数を計算した。0.92の傾きと0.94の調整されたR二乗で観測されたカウントに対する入力の線形関係があった。この手順を使用して、1つのニューロンあたり平均約10,000個の遺伝子が検出され、6,000以上の遺伝子を検出する単一細胞の95%以上が検出されました。その開発後、この技術は、分子生物学者が明確に特徴付けられたマウス皮質インターニューロンのトランスクリプトームを探索する道を開き、細胞アイデンティティをコードする責任のある選択された遺伝子カテゴリを同定した。

single-cell-rna-sequencing-fluorescently-labeled-mouse-neurons-using

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このビデオは、マウスの脳から蛍光標識されたニューロンを分離する方法を示しています。...

マウス脳からの蛍光標識ニューロンの単離

高品質の総RNAは、70%エタノールでAzure Bで脊髄部を染色した後、レーザー捕捉マイクロ解剖によってマウス脊髄運動ニューロンの細胞体から調製された。3,000~4,000個の運動ニューロンから十分なRNA(約40~60...

レーザー捕捉マイクロ解離によるマウス脊髄運動ニューロン細胞体からの転写解析のためのRNAの生成

私たちは、成体マウスの脳の脳室下ゾーン(SVZ)から神経幹細胞(NSC)とその子孫を単離するための蛍光活性化細胞選別(FACS)ベースの方法を報告します。蛍光ユビキチン化細胞周期インジケーター(FUCCI)トランスジェニックマウスに適用することで、ライブイメージングによる細胞周期の進行を研究することができます。...

セル成体マウス脳室下帯から神経幹細胞および前駆細胞の選別とその細胞周期ダイナミクスのライブイメージング

パーキンソン病（PD）では、黒質（SNC）ドーパミン作動性ニューロンは、運動機能障害につながる、退化します。ここでは、チロシンヒドロキシラーゼ（TH）プロモーター配列によって駆動されるeGFPを発現するマウスから腹側中脳の神経細胞を培養する培養物から個々の蛍光ニューロンを収穫し、RNA-seqのを使用して、それらのトランスクリプトームを測定するためのプロトコルを報告しています。...

RNA配列決定およびTH-プロモーター駆動EGFP発現を使用して中脳培養における生活ドーパミン作動性ニューロンの信頼性の高い同定

ここでは、単離の前、およびその後の単一細胞転写物の特徴付けのために、ニューロン細胞タイプを分類するためのコンビナトリアルアプローチを提示する。このプロトコルは、RNAシーケンシング（RNA-Seq）のためのサンプルの調製を最適化し、細胞多様性の強化された理解のために特別に設計された方法論を記載する。...

網膜神経節細胞の定義されたサブセットの単一細胞RNA-Seq

成体マウス脳半球の異なる解剖領域からミクログリアを分離するためのプロトコルを提供し、続いて全長転写物の深い単一細胞RNAシーケンシングのための半自動化ライブラリ製剤を提供する。この方法は、健康と疾患におけるミクログリアの機能的不均一性を解明するのに役立ちます。...

ディープシングルセルRNAシーケンシングのための1つの成人マウス脳半球からの領域特異的ミクログリアの分離

ここでは、マウス胚組織における遺伝子発現をプロファイルする多重化単一細胞mRNAシーケンシング法を提示した。多重化戦略と組み合わせた液滴ベースの単一細胞mRNAシーケンシング(scRNA-Seq)法は、複数のサンプルから単一細胞を同時にプロファイルできるため、試薬コストを大幅に削減し、実験的なバッチ効果を最小限に抑えることができます。...

マウス胚細胞の多重化単細胞mRNAシーケンシング解析

初期マウス胚におけるマイクロRNAのプロファイリング手法について述べます。このプロトコルは、低細胞入力と小さなRNA濃縮の課題を克服します。このアッセイは、初期マウス胚の異なる細胞系統におけるmiRNA発現の経時変化を分析するために使用することができる。...

初期マウス胚からのシーケンシングのための小型RNAライブラリーの調製

ここでは、マウス歯状回から単離された単一の核を配列決定する方法を紹介し、蛍光活性化核(FAN)ソーティングによってほとんどのニューロンを除外します。このアプローチは、高品質の発現プロファイルを生成し、神経幹細胞などの希少な集団を含む、ニッチに代表される他のほとんどの細胞タイプの研究を容易にします。...

海馬神経原性ニッチを研究するための単一核RNAシーケンシングと組み合わせたニューロンの蛍光活性化核ネガティブソーティング

この論文は、原腸陥入マウス胚の単一細胞および核のシーケンシングのための高品質の単一細胞および核懸濁液のパイプラインを確立します。...

変異体全マウス胚のシングルセルRNAシーケンシング:胚盤葉上から胃腸終末まで

このプロトコルは、フローサイトメトリーとシングルセルRNAシーケンシングを組み合わせて、出生後早期マウス脳の小脳におけるミクログリア細胞の状態を単離し、特徴付けます。酵素解離、パーコール遠心分離、免疫染色を使用してミクログリアの不均一性を明らかにし、小脳の発達と疾患におけるミクログリアの役割の理解を深めます。...

出生後早期マウス脳発生におけるミクログリア活性化を特徴付けるためのフローサイトメトリーと単一細胞解析

学ぶマウス脳の蛍光ラベル付きニューロンを手動で分離し、in vitro転写を用いて高深度の単一細胞RNAシーケンスを行う方法。これにより、特定のニューロン集団の遺伝子発現パターンを詳細に解析できます。

絶対数のシーケンス (Seq 歌姫) と手動並べ替えおよび二重の in Vitro転写を使用してマウスの蛍光に分類されたニューロンの単一細胞 RNA シーケンス

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