金ナノ粒子を用いた蛋白質キナーゼ C デルタ阻害ペプチド製剤

2つの特定の短いペプチドに20ナノメートルの金粒子を使用する当社独自の薬物送達システムは、生理学的溶液中の金ナノ粒子を安定化させ、細胞の取り込み性を高め、ペプチドベースまたは他の薬物を細胞に効果的に送達することができます。当社のGNPペプチドハイブリッドは、合成が容易で安定しています。薬物キャリアとして、金ナノ粒子ペプチドハイブリッドを使用することにより、ペプチド薬物を効果的かつ豊富に細胞に移すことができます。

肺の虚血再灌流傷害をGNP/PKCiハイブリッドで治療しました。GNPは、細胞質にPKC阻害剤ペプチドをもたらします.この送達方法は、他の送達方法よりもPKCiの低用量を用いてより重度の肺損傷を軽減することができた。

この手順を開始するには、マイナス20°Cの冷凍庫からペプチドを取り出し、室温で解凍します。マイクロスケールを使用して各解凍ペプチドの0.01グラムを秤量し、各ペプチドを別々の50ミリリットル円錐形チューブに移します。P2チューブに18.74ミリリットルの脱イオン水を加え、P4チューブに16.93ミリリットルの脱イオン水を加えます。

脱イオン水で希釈した50%アセトニトリルの8.21ミリリットルをPKCデルタ阻害剤チューブに加えます。ペプチド溶液を短くボルテックスする。その後、5分間40メガヘルツで超音波処理器にチューブを配置します。

この後、バイオセーフティキャビネットにソリューションを転送します。50 mLの円錐管を超音波処理器に5分間入れるのが重要です。このステップをスキップすると、GNP/PKCi は集計を形成します。

各ペプチド溶液の1ミリリットルを独自の新しい50ミリリットル円錐形チューブに移します。P2とP4を含むチューブに19ミリリットルの脱イオン水を加えます。そして、PKCデルタ阻害剤を含むチューブに50%アセトニトリルの19ミリリットルを加える。P2溶液の475ミリリットル、P4溶液の25マイクロリットル、PKCデルタ阻害剤溶液の500マイクロリットルを15ミリリットルチューブに加える。

その後、同じチューブに20ナノメートルGNP溶液の9ミリリットルを加えます。バイオセーフティキャビネットから結合溶液を取り出し、チューブをアルミホイルで包みます。チューブを一晩シェーカーの上に置きます。

翌日、サンプルをバイオセーフティキャビネットに返却します。GNP/PKCi溶液の1ミリリットルのアリコートを1.5ミリリットルのマイクロチューブに移します。マイクロチューブを15294倍gのマイクロ遠心分離機で、摂氏4度で30分間遠心分離します。

マイクロチューブをバイオセーフティキャビネットに戻し、各チューブからスーパーナテントを取り外し、GNPペレットが邪魔されないようにします。必要な濃度に応じて、所望の溶媒中の各ペレットを再懸濁します。GNP/PKCiハイブリッド溶解度を評価するには、GNP/PKCi溶液を見越キュベットに0.5ミリリットル注ぎます。

UV-Vis分光光度計にキュベットを置き、ピーク吸収をテストします。本研究では、プロテインキナーゼC-デルタ阻害剤を金ナノ粒子と共役し、GNP/PKCiハイブリッドを形成した。金ナノ粒子は溶媒中に凝集する傾向にあるため、ハイブリッドの生物物理学的性質を評価する際には注意が必要です。

ナノ粒子が凝集すると、溶液の色はピンクから紫に変化します。サンプルは高い感度で検出できるUV-Vis分光光度計で分析されます。ハイブリッドが凝集していない場合、吸収のピークは525ナノメートルでなければなりません。

GNPが凝集している場合、吸収のピークは右にシフトされます。見られるように、凝集体が形成されると、デルタ光学密度が低下する。GNPペプチドハイブリッドを配合する際には、GNP溶液に対するペプチドの比率を1~9個にする必要があることを覚えておくことが重要です。

このGNP/PKCi式は、肺以外の臓器系における虚血再灌流傷害に使用することができる。これらのペプチドがN末にシステイン残基を有する場合、任意のペプチドがGNPに結合することができる。これは、GNPペプチドハイブリッドを細胞内に他のペプチド薬物を輸送するために使用することができる意味。

合理的に設計されたペプチドは、それらの細胞内に特定のタンパク質とタンパク質の相互作用をもたらす新しい技術です。ここで開発されたこの技術は、新しいペプチド薬の送達や既存の薬剤の改変版に使用することができる。