Name: 金ナノ粒子を用いた蛋白質キナーゼ C デルタ阻害ペプチド製剤 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: 学ぶ金ナノ粒子ペプチドハイブリッドを用いた蛋白質キナーゼCデルタ阻害剤のドラッグデリバリー。低用量で虚血再灌流による急性肺損傷を効果的に軽減する革新的な治療法です。

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この作品は、カナダ最初研究の卓越性のプログラム、トロント大学でデザインによる医療とオンタリオ州の革新 (日時-08-029) 研究省健康の研究のカナダの協会 (PJT-148847) からの研究補助金によってサポートされます。Mingyao リューはジェームズと肺の損傷、修復、および再生のメアリー デイビー椅子です。

1. ペプチド溶液の調製
<ol><li>ペプチドを取得 (P2: CAAAAE, P4: CAAAAW、PKCδi: CSFNSYELGSL)-20 ° C のフリーザーと室温 (RT) 雪解けから。 注意: ボトル、ペプチドの凝縮から湿気を防ぐために閉じる。</li>
	<li>マイクロ スケールの各ペプチドが 0.01 g の重量を量る。各ペプチドを別の 50 mL の円錐管に入れます。</li>
	<li>P2 チューブに 18.74 mL 純水 (DI) を追加します。</li>
	<li>P4 チューブに純水の 16.93 mL を追加します。</li>
	<li>PKCδi 管を純水で希釈した 50% アセトニ トリル 8.21 mL を追加します。</li>
	<li>渦ペプチド ソリューションを簡単に。5 分超音波発生装置 (40 MHz) で 50 mL の円錐管を置きます。</li>
	<li>バイオ セーフティ キャビネットにペプチッド解決をもたらします。準備すべてのペプチッド解決は 1 mM をする必要があります。</li>
	<li>各ペプチド溶液 1 mL を新しい 50 mL の円錐管に転送します。P2 と P4 のチューブに DI 水 19 mL を追加し、各ソリューションを 50 μ M に希釈して、独自のチューブに格納されているように PKCδi チューブに 50% アセトニ トリルの 19 mL を追加します。</li>
</ol>2. 国民総生産/PKCi の定式化
<ol><li>ペプチドは、BSC で GNP のソリューションに追加する必要があります。</li>
	<li>15 mL チューブに P2 の 475 μ L、P4 の 25μL、δPKCi ソリューションの 500 μ L を追加します。同じ 15 mL チューブに 20 nm GNP ソリューション (7.0x1011粒子/mL) の 9 つの mL を追加します。</li>
	<li>安全キャビネットを終了します。アルミ箔で 15 mL チューブをラップします。RT でシェーカーに一晩置いておきます。</li>
	<li>キャビネット、バイオ セーフティにサンプルを返します。各 1.5 mL のマイクロ チューブに GNP/PKCi の分注 1 mL。</li>
	<li>4 ° C で 15,294 x g で 30 分間マイクロ遠心チューブを遠心分離します。</li>
	<li>バイオ セーフティ キャビネットの下で各チューブから上澄みを削除します。 注: GNP ペレットのままで吸気がないことを確保しながら上澄みを除去するように気をつけてください。</li>
	<li>再必要な濃度に応じて適切な溶媒中でペレットを中断します。該当する溶剤は、DI 水、PBS、および 0.9% 塩化ナトリウム。 注: は、GNP/PKCi の 1 mL から始まって、GNP ペレットは、製造元から提供された GNP 濃度に基づく 10 の11の粒子 x 6.3 を含まれています。1.3 0.9% の 500 μ L の 10 の12粒子を管理する, 塩化ナトリウム 0.9 %232 μ L を追加各 3 ペレットに塩化ナトリウム。一緒にそれらをプールした後我々 は、GNP/PKCi ソリューションを 500 μ l 添加を収集できます。 注: 混ぜる目的も GNP/PKCi ペレットを希釈する前に溶剤、そうでなければ GNP/PKCi 集計されます。</li>
</ol>3. ハンナラ党/PKCi ハイブリッド溶解性の評価
<ol><li>アクリル キュベットに GNP/PKCi 溶液 0.5 mL を注ぐ。紫外可視分光光度計のキュヴェット アクリルしピーク吸収15をテストします。</li>
</ol>

<ol><li>Yusen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+thirty-first+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report--2014%3B+focus+theme%3A+retransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-first adult lung and heart-lung transplant report--2014; focus theme: retransplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (10), 1009-1024 (2014).</li>
<li>Lee, J. C., Christie, J. D., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+graft+dysfunction%3A+definition%2C+risk+factors%2C+short-+and+long-term+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Respiratory+and+Critical%22%5BJournal%5D)">Primary graft dysfunction: definition, risk factors, short- and long-term outcomes.</a> Seminars in Respiratory and Critical. 31 (2), 161-171 (2010).</li>
<li>Chatterjee, S., Nieman, G. F., Christie, J. D., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear+stress-related+mechanosignaling+with+lung+ischemia%3A+lessons+from+basic+research+can+inform+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Shear stress-related mechanosignaling with lung ischemia: lessons from basic research can inform lung transplantation.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307 (9), 668-680 (2014).</li>
<li>Inagaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+protects+against+reperfusion+injury+of+the+ischemic+heart+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Inhibition of delta-protein kinase C protects against reperfusion injury of the ischemic heart in vivo.</a> Circulation. 108 (19), 2304-2307 (2003).</li>
<li>Lincoff, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+by+delcasertib+as+an+adjunct+to+primary+percutaneous+coronary+intervention+for+acute+anterior+ST-segment+elevation+myocardial+infarction%3A+results+of+the+PROTECTION+AMI+Randomized+Controlled+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Inhibition of delta-protein kinase C by delcasertib as an adjunct to primary percutaneous coronary intervention for acute anterior ST-segment elevation myocardial infarction: results of the PROTECTION AMI Randomized Controlled Trial.</a> European Heart Journal. 35 (37), 2516-2523 (2014).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((deltaV1-1+Reduces+Pulmonary+Ischemia+Reperfusion-Induced+Lung+Injury+by+Inhibiting+Necrosis+and+Mitochondrial+Localization+of+PKCdelta+and+p53%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">deltaV1-1 Reduces Pulmonary Ischemia Reperfusion-Induced Lung Injury by Inhibiting Necrosis and Mitochondrial Localization of PKCdelta and p53.</a> American Journal of Transplantation. 16 (1), 83-98 (2016).</li>
<li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derangements+of+post-ischemic+cerebral+blood+flow+by+protein+kinase+C+delta%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Derangements of post-ischemic cerebral blood flow by protein kinase C delta.</a> Neuroscience. 171 (2), 566-576 (2010).</li>
<li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+kinase+C+delta+modulates+endothelial+nitric+oxide+synthase+after+cardiac+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Protein kinase C delta modulates endothelial nitric oxide synthase after cardiac arrest.</a> Journal of Cerebral Blood Flow Metabolism. 34 (4), 613-620 (2014).</li>
<li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-tat+protein+is+a+heparin-binding+angiogenic+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">HIV-tat protein is a heparin-binding angiogenic growth factor.</a> Oncogene. 12 (2), 289-297 (1996).</li>
<li>Kim, H., Moodley, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TAT+cell-penetrating+peptide+modulates+inflammatory+response+and+apoptosis+in+human+lung+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery+and+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">TAT cell-penetrating peptide modulates inflammatory response and apoptosis in human lung epithelial cells.</a> Drug Delivery and Translational Research. 5 (3), 275-278 (2015).</li>
<li>Lee, D., Pacheco, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+effects+of+Tat+cell-penetrating+peptide%3A+a+multifunctional+Trojan+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Biological effects of Tat cell-penetrating peptide: a multifunctional Trojan horse.</a> Nanomedicine (Lond). 9 (1), 5-7 (2014).</li>
<li>Auffan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+definition+of+inorganic+nanoparticles+from+an+environmental%2C+health+and+safety+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Towards a definition of inorganic nanoparticles from an environmental, health and safety perspective.</a> Nature Nanotechnology. 4 (10), 634-641 (2009).</li>
<li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+delivery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li>
<li>Yang, H., Fung, S. Y., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programming+the+cellular+uptake+of+physiologically+stable+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+with+single+amino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Programming the cellular uptake of physiologically stable peptide-gold nanoparticle hybrids with single amino acids.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50 (41), 9643-9646 (2011).</li>
<li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+delivery+of+a+rationally+designed+intracellular+peptide+drug+with+gold+nanoparticle-peptide+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Effective delivery of a rationally designed intracellular peptide drug with gold nanoparticle-peptide hybrids.</a> Nanoscale. 7 (29), 12356-12360 (2015).</li>
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<li>Boisselier, E., Astruc, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+nanomedicine%3A+preparations%2C+imaging%2C+diagnostics%2C+therapies+and+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in nanomedicine: preparations, imaging, diagnostics, therapies and toxicity.</a> Chemical Society Reviews. 38 (6), 1759-1782 (2009).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid-Dependent+Attenuation+of+Toll-like+Receptor+Signaling+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Amino Acid-Dependent Attenuation of Toll-like Receptor Signaling by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> ACS Nano. 9 (7), 6774-6784 (2015).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endosomal+pH+modulation+by+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+enables+potent+anti-inflammatory+activity+in+phagocytic+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Endosomal pH modulation by peptide-gold nanoparticle hybrids enables potent anti-inflammatory activity in phagocytic immune cells.</a> Biomaterials. 111, 90-102 (2016).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid+Structure+Determines+the+Immune+Responses+Generated+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+%26+Particle+Systems+Characterization%22%5BJournal%5D)">Amino Acid Structure Determines the Immune Responses Generated by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> Particle & Particle Systems Characterization. 30 (12), 1039-1043 (2013).</li>
<li>Pamies, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregation+behaviour+of+gold+nanoparticles+in+saline+aqueous+media%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nanoparticle+Research%22%5BJournal%5D)">Aggregation behaviour of gold nanoparticles in saline aqueous media.</a> Journal of Nanoparticle Research. 16 (4), (2014).</li>
<li>Perrault, S. D., Walkey, C., Jennings, T., Fischer, H. C., Chan, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediating+tumor+targeting+efficiency+of+nanoparticles+through+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Mediating tumor targeting efficiency of nanoparticles through design.</a> Nano Letters. 9 (5), 1909-1915 (2009).</li>
<li>Connor, E. E., Mwamuka, J., Gole, A., Murphy, C. J., Wyatt, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+are+taken+up+by+human+cells+but+do+not+cause+acute+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles are taken up by human cells but do not cause acute cytotoxicity.</a> Small. 1 (3), 325-327 (2005).</li>
<li>Kim, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entrapment+of+Hydrophobic+Drugs+in+Nanoparticle+Monolayers+with+Efficient+Release+into+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Entrapment of Hydrophobic Drugs in Nanoparticle Monolayers with Efficient Release into Cancer Cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (4), 1360(2009).</li>
<li>Sonavane, G., Tomoda, K., Makino, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+colloidal+gold+nanoparticles+after+intravenous+administration%3A+Effect+of+particle+size%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+and+Surfaces+B-Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of colloidal gold nanoparticles after intravenous administration: Effect of particle size.</a> Colloids and Surfaces B-Biointerfaces. 66 (2), 274-280 (2008).</li>
<li>Balasubramanian, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+gold+nanoparticles+and+gene+expression+changes+in+the+liver+and+spleen+after+intravenous+administration+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of gold nanoparticles and gene expression changes in the liver and spleen after intravenous administration in rats.</a> Biomaterials. 31 (8), 2034-2042 (2010).</li>
<li>Lipka, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+PEG-modified+gold+nanoparticles+following+intratracheal+instillation+and+intravenous+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of PEG-modified gold nanoparticles following intratracheal instillation and intravenous injection.</a> Biomaterials. 31 (25), 6574-6581 (2010).</li>
</ol>

著者は、このプロジェクトで明らかに何もありません。

適切な定式化を確保するため、δPKCi ソリューションが 1.6 で説明されている超音波処理ステップを経ることが重要です。ΔPKCi ペプチッド シーケンスには、50% アセトニ トリル溶液中 PKCi を溶解に役立ちます、超音波発生装置、疎水性の部分が含まれています。さらに、細心、手順 2.7 に示した溶媒を混合する非常に重要です。 23δPKCi ペプチドの凝集による手順が適切に行われていない場合、GNP/PKCi ハイブリッドはよくは配合できません。 
  GNP ベースの製剤は、いくつかの利点を提供します。数ナノメートルから 〜 100 に至るまでよく制御のサイズで GNPs を簡単に合成できる最初に nm。通常より小さい大きさで分類された GNPs ことができます薬を届けるセルに大きいものと小さいものがそのターゲット地域24に容易に拡散よりもより効率的に。 第二に、GNPs は、非毒性の in vitro および in vivo の25、それらに安全な薬物キャリアーを作るし...

肺移植は末期肺疾患1患者を保存します。ただし、肺移植後の重篤な合併症では、障害が残っています。肺移植初期段階で主な移植臓器機能不全は最も有害な合併症1で、その主な原因は虚血再灌流 (IR)-誘発急性肺傷害2。
低温保蔵下ドナー肺における代謝は非常に低いレベルに制限されます。しかし、活性酸素と一酸化窒素合成血流3の停止のためにアクティブ化されます。移植後血行が復元され、活性酸素種と冷たい虚血時に生成される酸化窒素を高める組織の損傷に伴う炎症や細胞死。
IR の傷害を防ぐためには、蛋白質キナーゼ c δ 阻害剤 (PKCδi) は、心、脳と肺4,5,6,7,8で使用されています。これらの研究は、PKCδi が、再灌流時に、炎症とアポトーシスを減少することを示した。それはまた肺の IR 損傷ラットおよび肺移植モデル6を許可していません。PKCδi は通常、細胞浸透性ペプチド、TAT の細胞内動態と共役系します。ただし、単独で TAT ペプチドが複数サイトカイン9,10,11の阻害、アポトーシス、血管新生の促進を含む非固有生物学的効果を持っていることが示されています。ナノ粒子、1 から 100 までの小粒子径12nm は薬配信13を容易に候補として検討されています。特に、金ナノ粒子 (GNPs) は無毒、非侵襲的にみなされます。そこで、ペプチド ベースの薬14,15薬配信キャリアとして GNPs を開発しました。
GNPs の表面は、分子認識16,17、化学センシング18、イメージング19、薬剤投与などの特定のアプリケーションを操作できます。20 nm GNPs と 2 つの短いペプチドを含む、ハンナラ党/ペプチド ハイブリッド システムを開発されている (P2: CAAAAE と P4: CAAAAW) GNPs の表面の特性を変更するのには、95:5 の比率で。P2 ペプチド、最後に、負荷電のグルタミン酸 (E) を水溶液中で GNPs を安定化し、最後に、疎水性トリプトファン (W) と、P4 のペプチドに役立ちます GNPs セル14への入口。これらのペプチドの N 末端のシステイン (C) 残基には、金表面14に共役することができますチオール グループが含まれています。このペプチド/GNP ハイブリッドはさらに PKCδi (CSFNSYELGSL) を提供する使用されました。PKCδi に P2:P4 の最適化のモル比は、47.5:2.5:50 です。GNPs PKCδi (GNP/PKCi) と共役安定蒸留水、0.9% の NaCl、牛アルブミンまたはウシ胎児血清14を含む PBS が。GNP/PKCi の静脈注射は、15肺の虚血再灌流障害を防ぐために示されています。この記事では、GNP/PKCi を定式化する方法の概要を説明し、ハンナラ党/PKCi の物理化学的特性を評価する方法について説明します。他のペプチド ベースの薬 GNP20,21,22に共役を策定する同じような方法を使いました。この記事がこの新規製剤細胞内薬物送達のためにもっと注目されると思います。

<table><tbody><tr><td>負に帯電したグルタミン酸ペプチド(P2)</td><td>CanPeptide</td><td></td><td>配列:CAAAAE-NH2 長さ:6aa 修飾:C末端アミド化<-br / >量:50mg 純度:>95%</td></tr><tr><td>疎水性トリプトファンペプチド(P4)</td><td>Canペプチド</td><td></td><td>配列:CAAAAW-NH2 長さ:6aa 修飾:C末端アミド化 量:50mg 純度: >95%</td></tr><tr><td>&デルタ;PKCiペプチド</td><td>CanPeptide</td><td></td><td>Seqeuence:CSFNSYELGSL-NH2 長さ:11aa 修飾:C末端アミド化 量:50mg 純度:>95%</td></tr><tr><td>コニカルチューブ(50ml)</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3582070</td><td></td></tr><tr><td>コニカルチューブ(15ml)</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3582096</td><td></td></tr><tr><td>アセトニトリル</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>271004-100ML</td><td></td></tr><tr><td>ソニケーター</td><td>・ブランソン・ウルトラソニックス・コーポレーション</td><td>ブランソン2510MTH</td><td></td></tr><tr><td>マイクロチューブ</td><td>Diamed.ca</td><td>AD150-N</td><td></td></tr><tr><td>金ナノ粒子溶液</td><td>テッドペラ</td><td>15705-5</td><td>粒子サイズは20nm</td></tr><tr><td>ロッキングプラットフォームシェーカーVWR</td><td>国際</td><td>40000-304&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ遠心分離機</td><td>Eppendorf</td><td>5417R</td><td></td></tr><tr><td>アクリルキュベット</td><td>SARSREDT</td><td>67.758</td><td></td></tr><tr><td>UV-Vis分光光度計</td><td>Agilent</td><td>Caty 60 UV-Vis</td><td></td></tr></tbody></table>

金ナノ粒子を用いた蛋白質キナーゼ c デルタ阻害ペプチド製剤

Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles

蛋白質キナーゼ C デルタ阻害剤 (PKCδi) は、虚血再灌流による臓器損傷を防ぐために有望な薬剤です。通常、細胞透過性ペプチド、TAT の細胞内動態を活用します。しかし、TAT は、非固有の生物学的活性を示しています。金ナノ粒子 (GNPs) は、認識された毒性のない薬配信キャリアとして使用できます。したがって、我々 は PKCδi を提供する GNP/ペプチド ハイブリッドを使いました。2 つの短いペプチド (P2: CAAAAE と P4: CAAAAW)、95:5 の比率で GNP のサーフェスのプロパティを変更する使用されました。GNPs PKCδi (GNP/PKCi) と共役が蒸留水で安定して 0.9% 塩化ナトリウムとリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) ウシ血清アルブミンやウシ胎児血清を含みます。GNP PKCi の静脈注射は以前肺の虚血再灌流障害を防ぐために示されました。この資料では、GNP/PKCi を策定し、ハンナラ党/PKCi の理化学特性を評価するためのプロトコルについて説明します。ハンナラ党と他のペプチド ベースの薬を策定する同じような方法を使いました。この記事は、うまく行けばこの細胞内薬剤デリバリー技術とその応用を体内にもっと注意を引くでしょう。

ハンナラ党は、する傾向があるは、GNP/PKCi ハイブリッドの生物物理学的特性を評価する注意が必要溶媒中で集計。国民総生産を集約すると、ソリューションの色がピンクから紫 (図 1 a) に変更します。紫外可視分光光度計がより敏感に変化を検出することができます。GNP/PKCi が集約されていない場合吸収のピークは 525 でする必要があります (図 1 b) nm。国民総生産を集約すると、吸収のピークが右にシフトされます。分析、集計は ΔOptical 密度を形成しているときの代替手段として (ΔOD = 外径 525 nm - 440 で OD nm) が減少します。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58741/58741fig1v2.jpg">...

静脈内合成ペプチド、蛋白質キナーゼ C デルタ阻害剤は、虚血再灌流惹起急性肺傷害の減少を提供する金ナノ粒子のペプチド ハイブリッド以前使いました。ここで、製剤の詳細なプロトコルを示す.他の細胞内ペプチドは同様に定式化することができます。

金ナノ粒子を用いた蛋白質キナーゼ C デルタ阻害ペプチド製剤

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a ...

2つの特定の短いペプチドに20ナノメートルの金粒子を使用する当社独自の薬物送達システムは、生理学的溶液中の金ナノ粒子を安定化させ、細胞の取り込み性を高め、ペプチドベースまたは他の薬物を細胞に効果的に送達することができます。当社のGNPペプチドハイブリッドは、合成が容易で安定しています。薬物キャリアとして、金ナノ粒子ペプチドハイブリッドを使用することにより、ペプチド薬物を効果的かつ豊富に細胞に移すことができます。肺の虚血再灌流傷害をGNP/PKCiハイブリッドで治療しました。GNPは、細胞質にPKC阻害剤ペプチドをもたらします.この送達方法は、他の送達方法よりもPKCiの低用量を用いてより重度の肺損傷を軽減することができた。この手順を開始するには、マイナス20°Cの冷凍庫からペプチドを取り出し、室温で解凍します。マイクロスケールを使用して各解凍ペプチドの0.01グラムを秤量し、各ペプチドを別々の50ミリリットル円錐形チューブに移します。P2チューブに18.74ミリリットルの脱イオン水を加え、P4チューブに16.93ミリリットルの脱イオン水を加えます。脱イオン水で希釈した50%アセトニトリルの8.21ミリリットルをPKCデルタ阻害剤チューブに加えます。ペプチド溶液を短くボルテックスする。その後、5分間40メガヘルツで超音波処理器にチューブを配置します。この後、バイオセーフティキャビネットにソリューションを転送します。50 mLの円錐管を超音波処理器に5分間入れるのが重要です。このステップをスキップすると、GNP/PKCi は集計を形成します。各ペプチド溶液の1ミリリットルを独自の新しい50ミリリットル円錐形チューブに移します。P2とP4を含むチューブに19ミリリットルの脱イオン水を加えます。そして、PKCデルタ阻害剤を含むチューブに50%アセトニトリルの19ミリリットルを加える。P2溶液の475ミリリットル、P4溶液の25マイクロリットル、PKCデルタ阻害剤溶液の500マイクロリットルを15ミリリットルチューブに加える。その後、同じチューブに20ナノメートルGNP溶液の9ミリリットルを加えます。バイオセーフティキャビネットから結合溶液を取り出し、チューブをアルミホイルで包みます。チューブを一晩シェーカーの上に置きます。翌日、サンプルをバイオセーフティキャビネットに返却します。GNP/PKCi溶液の1ミリリットルのアリコートを1.5ミリリットルのマイクロチューブに移します。マイクロチューブを15294倍gのマイクロ遠心分離機で、摂氏4度で30分間遠心分離します。マイクロチューブをバイオセーフティキャビネットに戻し、各チューブからスーパーナテントを取り外し、GNPペレットが邪魔されないようにします。必要な濃度に応じて、所望の溶媒中の各ペレットを再懸濁します。GNP/PKCiハイブリッド溶解度を評価するには、GNP/PKCi溶液を見越キュベットに0.5ミリリットル注ぎます。UV-Vis分光光度計にキュベットを置き、ピーク吸収をテストします。本研究では、プロテインキナーゼC-デルタ阻害剤を金ナノ粒子と共役し、GNP/PKCiハイブリッドを形成した。金ナノ粒子は溶媒中に凝集する傾向にあるため、ハイブリッドの生物物理学的性質を評価する際には注意が必要です。ナノ粒子が凝集すると、溶液の色はピンクから紫に変化します。サンプルは高い感度で検出できるUV-Vis分光光度計で分析されます。ハイブリッドが凝集していない場合、吸収のピークは525ナノメートルでなければなりません。GNPが凝集している場合、吸収のピークは右にシフトされます。見られるように、凝集体が形成されると、デルタ光学密度が低下する。GNPペプチドハイブリッドを配合する際には、GNP溶液に対するペプチドの比率を1~9個にする必要があることを覚えておくことが重要です。このGNP/PKCi式は、肺以外の臓器系における虚血再灌流傷害に使用することができる。これらのペプチドがN末にシステイン残基を有する場合、任意のペプチドがGNPに結合することができる。これは、GNPペプチドハイブリッドを細胞内に他のペプチド薬物を輸送するために使用することができる意味。合理的に設計されたペプチドは、それらの細胞内に特定のタンパク質とタンパク質の相互作用をもたらす新しい技術です。ここで開発されたこの技術は、新しいペプチド薬の送達や既存の薬剤の改変版に使用することができる。

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

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68ガリウム標識D-ペプチドPETトレーサーの開発によるプログラム死リガンド1発現イメージング

この記事では、ジブロック共重合体を用いたポリマーをベースとしたナノ粒子を合成するナノ析出の方法を説明します。私たちは、ジブロックの合成共重合体、ナノ析出技術、及び潜在的なアプリケーションについて説明します。...

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学ぶ金ナノ粒子ペプチドハイブリッドを用いた蛋白質キナーゼCデルタ阻害剤のドラッグデリバリー。低用量で虚血再灌流による急性肺損傷を効果的に軽減する革新的な治療法です。

金ナノ粒子を用いた蛋白質キナーゼ C デルタ阻害ペプチド製剤

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