Name: 台湾グリーン プロポリスの抽出と分析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 学ぶ エタノールを用いた台湾グリーンプロポリスの抽出・特性評価法。抗菌活性の解析と品質評価のための再現性のある手法を確立し、生化学・天然物研究に応用可能です。

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この原稿は、ウォレス学術編集することによって編集されました。

1. エタノール抽出化合物の調製
<ol><li>5 月から 7 月まで台湾でハチの巣から採取、冷凍の台湾緑プロポリスの 10 グラムの重量を量るし、スパイス グラインダーを使用してそれを挽きます。台湾グリーン プロポリスの全作品がなく任意の大きな粒子の細かい粉末状に地面であることを確認します。</li>
	<li>各種濃度のエタノール (60%、70%、80%、95%、99.5%) と別のフラスコと地面プロポリスの 10 g の各濃度をミックスに水 100 mL を追加します。</li>
	<li>25 ° C で、48 h の 250 rpm でフラスコを振る。</li>
	<li>エタノール抽出液 25 μ m 孔径のフィルター ペーパーをフィルター処理します。</li>
	<li>95% エタノール、メスフラスコを使用して、元のボリューム (100 mL) にろ液を再構築します。</li>
	<li>-20 ° C のエタノール抽出物を保存します。 注: プロトコルはここで一時停止することができます。</li>
</ol>2. エタノール抽出物の高速液体クロマトグラフィーのための準備
<ol><li>40 ° C 15 分で真空蒸着法によるエタノール抽出物の 10 mL を集中します。</li>
	<li>24 h 45 ° C で乾物を焼きます。</li>
	<li>95% エタノール 10 mL で乾物を再構成します。</li>
	<li>フィルター 1 mL のエタノールは、0.45 μ m 孔サイズの滅菌シリンジ フィルターを使用して抽出します。</li>
	<li>孔径 0.22 μ m の滅菌注射器フィルターを用いたエタノール抽出物を非します。濾液は、収集され、直接高速液体クロマトグラフィーを使用して分析することができます。</li>
</ol>3. 高速液体クロマトグラフィーを使用して Propolin コンテンツの分析
<ol><li>
Propolins の標準曲線の確立
	<ol>
<li>88.8:11.2 (v/v) メタノール: 水ソリューションの移動相の 1 L を準備します。</li>
		<li>準備 propolin のシリアル希薄標準 (C、D、F、および G) の濃度 (15.625 mg/mL、31.25 mg/mL、62.5 mg/mL と 125 mg/mL、それぞれ) 移動相溶液を溶媒として用いた。</li>
		<li>高濃度低濃度から順に、逆相カラムに propolin 標準的な濃度の 20 μ L を注入します。</li>
		<li>30 の ° C および 1 mL/分の流量で HPLC カラムを設定します。</li>
		<li>280 に UV 検出器の波長を設定 nm と 20 分時の記録。</li>
		<li>分析基準の少なくとも 3 x。</li>
		<li>プロット測定応答 (y 軸) の濃度 (x 軸) に対して計算を使用してソフトウェアをシートし、方程式と R 二乗値標準曲線を作成します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
解析エタノール抽出s
	<ol>
<li>逆相カラムに 2.5 ステップから得られるエタノール抽出物の 20 μ L を注入します。</li>
		<li>30 の ° C および 1 mL/分の流量で HPLC カラムを設定します。</li>
		<li>280 に UV 検出器の波長を設定 nm と 20 分時の記録。</li>
		<li>分析基準の少なくとも 3 x。</li>
		<li>各 propolin のピーク面積を使用するステップ 3.1.7 から得られる標準曲線の方程式を使って、エタノール抽出物の propolin の濃度を計算します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 最小発育阻止濃度と最小殺菌濃度分析
注: 台湾緑プロポリスからエタノール抽出した propolins の抗菌効果を評価する微量液体希釈法を使用します。
<ol><li>
試験菌の調製
	<ol>
<li>黄色ブドウ球菌と大腸菌、細菌の緊張を解凍し、文化にトリプシン醤油スープで栄養流体培養基、それぞれ、24 h の 37 ° C で。</li>
		<li>トリプシン大豆スープと 2 つの世代の栄養流体培養基を使用してE. 大腸菌を用いた黄色ブドウ球菌を通過し、その後、寒天版の個々 のコロニーをカウントすることによってコロニー形成単位を計算します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
調製されたエタノールの抽出抗菌活性試験
	<ol>
<li>40 ° C で真空蒸着法による 15 分間の 1.5 ステップから得られるエタノール抽出物を集中します。</li>
		<li>ジメチルスルホキシド (DMSO) で乾物を再構成し、12.8 mg/ml の抽出液の濃度を調整します。</li>
		<li>シリアル希釈を行う (濃度: 5、10、20、40、80、160、320、640 μ g/mL) エタノールの抽出スープを使用します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
最小発育阻止濃度テスト
	<ol>
<li>0.156 640.0 μ g/ml 96 ウェル プレートに至るまで希薄エタノール抽出液の 10 μ L を追加します。</li>
		<li>スープを使用すると、100 μ L にボリュームを調整し、すべての希釈液に 5 %dmso を維持します。</li>
		<li>96 ウェル プレートに培養 (1 x 106/mL) 100 μ L を接種します。</li>
		<li>各種濃度のエタノールを含む培養菌を 48 h の 37 ° C で抽出します。</li>
		<li>濁度と 590 で光学濃度 (マイクロ プレート リーダー) を使用してによると細菌の増殖を分析最小発育阻止濃度 (MIC) を決定する nm。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
最小殺菌濃度テスト
	<ol>
<li>寒天プレート上に増殖しないマイク テストの各ウェルから液体培養の 10 μ L を接種します。</li>
		<li>37 ° C 24 時間で孵化させなさい。</li>
		<li>目に見える細菌の成長を明らかに最低濃度を識別することによって殺菌作用を決定します。細胞の増殖を完全に排除する濃度は、最小の細菌濃度 (MBC) と見なされます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

著者申告するものがあります。

研究報告ブラジル産プロポリス抽出17; 用のエタノールの濃度を使用して浸漬可能性があります。しかし、プロセスは、時間のかかる17でした。ブラジル産プロポリス17からフェノール含量などの生理活性物質を抽出するために少なくとも 10 日かかった。また、ブラジル産プロポリス19,21,22の抽出の 37 ° C、50 ° C、または 30 分の 70 ° C で加熱との組み合わせでエタノール抽出を提案されています。ブラジル産プロポリスの生理活性化合物がエタノール19の割合に応じて特異的抽出することが決定されました。プロポリスに含まれる生理活性化合物の抽出効率は、ブラジル産プロポリスと台湾緑プロポリスの化学組成の異なるため異なる場合があります。ここでは、台湾の緑プロポリス...

プロポリス蜂種セイヨウミツバチによって生成される天然樹脂混合物であります。プロポリスは、古来より民間療法で広く使用されています。研究は、最近そのプロポリスは微生物感染症と炎症1を防止するために有益な報告。プロポリスに含まれる主な生理活性物質は、フラボノイド、フェノール酸エステル、プレニルp多数の調査は示した-クマル酸と diterpenic 酸2,3。日には、台湾緑プロポリスから 10 プレニル フラバノン誘導体は高速液体クロマトグラフィー (HPLC)4,5,6,7を介して識別されています。これらの中で最も豊富な propolins C、D、F、および G5,7です。台湾グリーン プロポリスのかなり生物学的効果は、propolins8の高いコンテンツに関連付けられます。
プロポリスに含まれる生理活性化合物の濃度は季節やプロポリスの取得元となる地理的な場所によって大きく異なります。ヨーロッパのプロポリスには、フラボノイドのアグリコンとフェノール酸9主に含まれています。ブラジル産プロポリスに含まれる主な生理活性物質は、プレニルp-クマル酸、アルテピリン C10など。研究は、シーズンがグリーンプロ ポリス台湾11で合計 propolin のコンテンツを決定する重要な要因であることを示した。台湾グリーン プロポリスの propolin の内容は、冬11夏 (7 月) および最下位最高です。プロポリスの抗菌特性は、広く生物学的活性の指標となると考えられています。一般に、様々 な地域から採取したプロポリスのサンプルと同様の抗菌プロパティを展示してたとえば、それは一般的にほぼすべてのグラム陽性菌に対して有効であるし、グラム陰性菌10,12,13に対して限定的な抗菌効果を展示します。プロポリスに含まれるフラボノイドの相乗的相互作用は、抗菌効果14を持っている示した。同様に、台湾の緑プロポリスは15グラム陽性菌に対する抗菌効果があると報じられました。さらに、研究には、台湾産グリーンプロ8の propolins の相互作用により抗菌効果も識別されます。
プロポリスに含まれる生理活性化合物の性状は、その化学組成は、その元のソースによって異なりますので難しいです。したがって、台湾緑プロポリスの品質を決めるため可能で再現可能な方法を確立する必要があります。ただし、標準的な手順が確立されていない台湾緑プロポリス抽出とその後の機能分析のため。プロポリス抽出16,17,18,19,20いろいろ有機および無機溶剤を適用するいくつかの方法を提案されています。プロポリスは脂溶性の混合物、有機抽出は無機抽出8,18,19より研究が示しています。台湾グリーン プロポリスとその抗菌特性で合計 propolin 濃度は、台湾緑プロポリスの品質の重要な指標です。したがって、本研究の目的は溶媒としてエタノールを使用して抽出し、台湾緑プロポリスの抗菌特性を特徴付けるのためのプロトコルを提示します。

<table><tbody><tr><td>エタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Whatman No. 4 濾紙</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>メタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>逆相 RP-18 カラム</td><td>Phenomenex Inc.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>黄色ブドウ球菌</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>大腸菌</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン性大豆ブロス</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>栄養ブロス</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシ</td>ド <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>スパイスグラインダー</td><td>Waring</td><td>WSG60K</td><td></td></tr><tr><td>マイクロプレート リーダー</td><td>分子デバイス</td><td>EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td>HPLC システム</td><td>Agilent</td><td>1200 シリーズ</td><td></td></tr><tr><td>真空蒸着</td><td>B&Uuml;CHI</td><td>ロタバポラリー R-215</td><td></td></tr></tbody></table>

台湾グリーン プロポリスの抽出と分析

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

台湾産グリーンプロ プレニル フラボノイドが豊富です、抗酸化、抗菌などの生物活性と抗がんものの広い範囲を展示します。台湾グリーン プロポリスの生理活性化合物、propolins、すなわち、C、D、F、および g.台湾グリーン プロポリスに含まれる propolins の濃度は、季節と地理的な場所によって異なります。したがって、台湾緑プロポリスの品質を決定するための標準および繰り返し可能な手順を確立する重要です。ここでは、台湾緑プロポリスの品質を特徴付けるに抗菌活性分析、高速液体クロマトグラフィー、エタノール ベースの抽出を使用するプロトコルを提案する.このメソッドは、95%、99.5% エタノール抽出が台湾緑プロポリス、抗菌特性を持つ propolins の最高濃度降伏から最大の乾物収量を達成することを示します。これらの調査結果によると現在のプロトコルは、信頼性と再現台湾緑プロポリスの品質を決めるのとみなされます。

エタノール抽出のための肯定的な代表的なデータは、表 1に掲載されています。台湾グリーン プロポリスから乾物収量はエタノール濃度と積極的に関連付けられました。95%、99.5% エタノール抽出物は、台湾緑プロポリスから得られる最高の乾物を持っていた。台湾グリーン プロポリスから最低乾物収量は、水抽出溶媒として使用したときに発生しました。エタノールなどの有機溶剤が台湾緑プロポリス抽出のためベストを実行することが示唆されました。C、D、F、および G の標準的な propolins の信号は識別され、高速液体クロマトグラフィー (図 1 a) を用いて定量化します。エタノール抽出物の propolins の信号は、個々 の propolin 標準および高速液体クロマトグラフィー (図 1 b) を使用して特徴付けられました。通常、台湾緑プロポリスに含まれる propolins (C、D、F、および G) の濃度は (<stro...

抽出し抗菌活性を示す台湾産グリーンプロを特徴付ける溶媒としてエタノールを使用するためのプロトコルを提案します。

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

ここでは、抗菌活性を阻害する台湾のグリーンプロポリスを抽出し、特徴付ける溶媒としてエタノールを用いるプロトコルを紹介する。このプロトコルは、台湾のグリーンプロポリスの品質を決定するための信頼性と再現性の高い方法です。デモンストレーションの手順は、私の研究室の博士課程の学生であるチュンティン・チェンとYi'Uan Chienです。まず、台湾の緑のプロポリスの100グラムを計量します。スパイスグラインダーを使用して、プロポリスを粉砕し、大きな粒子を含まない細かい粉末に粉砕します。5つのフラスコをセットし、それぞれに水にエタノールの様々な濃度の100ミリリットルを追加します。各フラスコのエタノール溶液に10グラムのプロポリスを混ぜ、250RPMで48時間振ると摂氏25度でインキュベートします。この後、25マイクロメートルの細孔サイズのフィルターペーパーを使用してエタノール抽出物を濾過します。容積フラスコを使用して、95%エタノールで100ミリリットルの元の体積に濾液を再構成する。使用する準備ができるまで、再構成された抽出物をマイナス20°Cで保管してください。HPLC用の抽出物を準備する準備ができたら、真空蒸発を使用して、各抽出物を10ミリリットル摂氏40度で10分間濃縮します。乾燥した物質を摂氏45度で24時間焼きます。次いで、95%エタノールの10ミリリットルで乾燥物質の各サンプルを再構成する。0.22マイクロメータの細孔サイズのシリンジフィルターを使用して、各抽出物を再フィルタし、HPLCで直接分析するために濾液を収集します。標準曲線の確立を開始するには、88.8~11.2の比で水溶液に対する移動相メタノールの1リットルを調製します。移動相溶液を溶媒として使用し、テキストプロトコルで概説されているようにプロポリン標準濃度の逐次希釈液を調製する。各標準濃度の20マイクロリットルを、最も低い濃度から最高濃度まで順次逆相カラムに注入します。次に、HPLCカラムを摂氏30度に設定し、UV検出器の免除長を280ナノメートルに、流量を1分あたり1ミリリットルに設定し、レコーダー時間を20分に設定する。少なくとも3回は、規格を分析してください。この後、計算シートソフトウェアを使用して、測定応答を濃度に対して差し込み、その結果、決定された方程式とR-2乗値を持つ標準曲線を得る。抽出物の分析を開始するには、各抽出物の20マイクロリットルを逆相カラムに注入します。HPLCカラムを摂氏30度の温度に設定し、1分あたり1ミリリットルの流量を設定します。UV検出器の免除長を280ナノメートルに、レコーダー時間を20分に設定します。抽出を少なくとも3回分析する。次に、標準曲線を用いて、各エタノール抽出物中のプロポリンの濃度を決定する。試験生物とエタノール抽出物を調製した後、希釈エタノール抽出物を10マイクロリットル加え、1ミリリットル当たり0.156~640マイクログラムの範囲で96ウェルプレートのウェルに入れる。各ウェルのボリュームを100マイクロリットルに調整し、すべての希釈液に5%DMSOを維持するようにするために、スープを使用してください。次に、細菌培養物の100マイクロリットルを96ウェルプレートの各ウェルに接種する。摂氏37度で48時間培養。590ナノメートルのマイクロプレートリーダーを使用して、濁度に応じた細菌の増殖を分析し、最小阻害濃度を決定します。この後、寒天板上に成長を示した各ウェルから10マイクロリットルの液体培養液を接種する。摂氏37度で24時間インキュベートします。細菌の活性を決定するために、目に見える細菌の増殖を明らかにしなかった最も低い濃度を特定します。細胞増殖を完全に排除した濃度は、最小細菌濃度であると考えられる。本研究では、台湾の緑のプロポリスをエタノールで抽出した。高濃度のエタノールを使用すると乾燥物質の収率が最も高く、水を使用すると最低であると考えられる。これらの結果は、有機溶媒がこの抽出中に最も優れたパフォーマンスを発揮し、その収率がエタノール濃度と正に関連していることを示している。同様に、プロポリンの濃度は抽出時のエタノール濃度と積極的に関連していると思われ、95%および99.5%エタノール抽出物で得られるプロポリンの最高収率が得られる。次に、Sアウレウス及び大腸菌に対するエタノール抽出物の抗菌作用を調査する。Sアウレウスの平均最小阻害濃度は1ミリリットル当たり10〜20マイクログラムの間であると思われ、平均細菌濃度は1ミリリットル当たり20マイクログラムであると思われる。しかし、水抽出物は、Sアウレウスに対して抗菌性に影響を及ぼさなかった。水またはエタノール抽出物を使用した場合、大腸菌に対する抗菌影響は認められていません。重要な実験手順の1つは、粉砕中に台湾のグリーンプロポリスの均一性を取り入れる方法です。

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台湾グリーンプロポリスの抽出と分析

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