Name: 誘因とマウス実験近視モデルの評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-22T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: 学ぶマウスにおけるレンズ誘発近視の誘導と評価法。特製眼鏡を用いて屈折と眼軸長を測定し、標準化された手順で再現性のある結果を得る。この手法は近視の病態機序解明に貢献する。

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SDOCT、屈折、角膜曲率、M. 宮内; 立体骨組データを再現するため氏山椒魚の測定に関するアドバイス ・ f ・ Schaeffel についてのアドバイスありがとうティルソン ・ パルデューK. 坪田;裕一田中;近藤;C. 正田;M. 伊吹。Y. 美和。Y. 萩原;石田;祐富田;Y. 堅田;E. 四倉;高橋;泰王重要な議論のため。この仕事は科学研究 (科研費、数 15 K 10881) 文部科学省からトケラウ諸島に助成金 inAid によって支えられました。この作品は坪田研究所 (東京) から近視研究助成でもサポートされます。

すべてのプロシージャは、動物研究慶應義塾大学医学部の倫理委員会が承認した眼科と視覚に関する研究、慶應義塾大学で動物実験に制度のガイドラインにおける動物の使用の ARVO 声明を遵守大学、および動物の研究: 研究の動物の使用のためのレポートので生体実験 (到着) ガイドライン。
1. マウスの眼鏡を組み立てる
<ol><li>眼鏡 (図 1 a) の組み立てに必要なパーツを準備します。各マウスのすべて以下の準備: ヘッド マウント型ナイロン樹脂棒、1 つ大きく、1 つ低いチタン フレーム、1 プレーン、M1.4 ネジの 1 つのナット、1 つ M1.4 ネジ長さ 10 mm の実験の目的に応じて適切な力を持つ 2 つのレンズ0.3 mm の厚さで M1.4 ネジのワッシャーと 2 つの人工爪ヒント (材料表)。 注意: 異なる高さにフレームの 2 種類が存在します。1 つのマウスの 1 つの高いフレームと 1 つ下のフレームがセットとして使用されます。高いフレームは、ビジョンのフィールドを左右対称にするために低いものの上置いてください。フレームとレンズは特別に設計され、著者らの研究グループによって製造されました。これらは、この記事の対応する著者に連絡して利用できます。他の部分は、工具の小売店で見つけることが。</li>
	<li>右と左の目のフレームを個別に組み立てます。<ol>
<li>最高の保護効果を達成するために外方向に直面する爪の先端を配置します。爪の先端とフレーム マウス視界 (図 1 b) をマスキングを避けるために約 130 ° の間の角度を調整します。シアノアクリ レート系接着剤を使用してフレームに人工爪のヒントを遵守します。 注: 爪のヒントはマウスで引っかかれてからレンズを保護するために助けることができます。爪の先端の方向を反対にする必要があります高いフレームと下部フレームで使用されるため右目と左目それぞれ。</li>
		<li>接着剤を使用して爪の形を調整する爪切り、完全に乾燥をさせて、少なくとも 12 時間待機は 1 cm × 1 cm カットしてトリミングするヒントします。</li>
		<li>シアノアクリ レート系接着剤を使用して、フレームにレンズを接着します。手でフレームにレンズを入れて、フレームを水平に保持します。レンズの端からシアノアクリ レート系接着剤を注入し、表面張力によって接着剤の普及。 注:、接着剤がレンズをむしばむし透明度に影響を与える、とても接着剤はレンズの周辺部を触れるだけを確認します。近視を誘発するのに制御とレンズ マイナス 0 ディオプター (D) プラノ レンズを使用します。マイナス レンズ (–50 D、–10 D) のさまざまな力の効果はずっと4を他の場所で説明されています。近視の誘導を最大化、–30 D レンズを近視を誘発する推奨します。FDM は、ディフューザーとして 1.5 mL マイクロ チューブのキャップにレンズを変更するだけで、同じデバイスを誘起することができます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>一緒に棒の平らな側面からワッシャー ナイロン棒にネジを締めます。それぞれ眼鏡や、実験の前に棒を準備し、さらに使用 (図 1 c) の在庫します。 注: プロトコルはここで一時停止することができます。</li>
</ol>2. 屈折および AL のベースラインの測定。
<ol><li>瞳孔を散大させるのに 5 mg/mL トロピカミドと眼球の両側に 5 mg/mL フェニレフリン塩酸塩を含む mydriatic のエージェントの一滴を適用します。全身麻酔の前に少なくとも 5 分を待ちます。 注: [全般] 瞳孔を散大させる麻酔後の測定に影響を与えるリバーシブルの白内障の原因となります。常に全身麻酔瞳孔を散大させるし、少なくとも 5 分待ちます。一滴 (約 0.05 mL) mydriatic エージェントは、エージェントは次の手順に害をしないしながらマウス眼の瞳孔を拡大のために十分です。</li>
	<li>全身麻酔下にマウスを置きます。それは麻酔が完全にまで眼をぶつけてからマウスを保つためにそっとマウスの背中の皮膚を把握します。マウスは、テーブルの上で自由に置いたとき、は移動しない場合、十分にする麻酔の深さを判断します。 メモ: ミダゾラム (40 μ g/100 μ L)、メデトミジン (7.5 μ g/100 μ L) およびブトルファノール酒石酸 (50 μ g/100 μ L) の組み合わせは、0.01 mL/g 腹腔内投与のボリュームを持つマウスのため全身麻酔のためここで使用されます。一般的に、5 分以内で眠りに落ちるマウスが必要です。全身麻酔の長い時間は、低体温、徐脈を引き起こします。測定では、麻酔薬の注射後 10 分以内のすべての測定値を仕上げに全身麻酔の潜在的な影響を避けるためにお勧めします。麻酔薬のカクテルは、ブトルファノールは鎮痛効果が約 4 時間を提供します。全身麻酔のための適切なレシピは、機関によって異なる場合があります。</li>
	<li>赤外線 photorefractor4,9,14を使用してマウスの目の屈折率を測定します。瞳孔の中心に最初のプルキンエ イメージを維持し、光軸に沿って屈折を測定マウスの目の一つの方向を調整します。測定後反対側の目と同じ手順 (図 2 a) を測定します。 注: 屈折のため測定値は光軸に沿ってマウスの目の位置によって強く影響されます。瞳孔の中心から ± 3 度以内である最初のプルキンエ イメージを揃うようにします。スペクトル領域光干渉 (SD oct) システムのワークベンチは、屈折測定4生の方向の微調整に使用かもしれません。</li>
	<li>SD OCT システム4,15,16を使用してマウスの目のアルを測定します。角膜頂点から光神経 (図 2 b) に近い明るい境界までの距離として AL を定義します。 注: 屈折の測定と同様に、マウスの目の方向によって、アルを影響強く。角膜の頂点は、角膜の表面に点のようなリフレクションによって確認できます。網膜側の境界と光神経の時点で非常にぼんやりとなります。境界を測定するため十分に明確が光神経からあまり遠くないように少しの方向を調整します。</li>
</ol>3. マウス頭蓋にフレームの固定。
<ol><li>それぞれの目の乾燥を防ぐために 0.1% 精製されたナトリウム ヒアルロン酸目薬の一滴を適用します。 注: 点眼薬目の表面で屈折と軸の長さの測定値に影響します。すべての測定が終了するまで点眼麻酔後に使用しないでください。</li>
	<li>粘土製の斜面に麻酔下のマウスのあごを置くまたは頭蓋の先行のために枕が水平になるように、何かが使えます。</li>
	<li>髪の毛を殺菌し、耳と目の 70% エタノール綿棒を使用しての頭皮。</li>
	<li>耳と約 0.8 cm2外科はさみとピンセットを使用してために、頭蓋骨を公開するための目の間の皮膚をカットします。歯科用エッチング液と綿棒を使用して、骨膜を削除します。外科はさみとピンセット各マウスの手術の前に 70% エタノールで消毒します。 注: 髪の毛をクリッピングと滅菌手袋を着用して必要があります。 この手順の前に関連する動物の世話委員会の規定を確認してください。ほとんどの場合、歯科用エッチング液は自己治癒の歯科用接着システムでの添付ファイルの 1 つとして見つけることが。歯科エッチング液を使用できない場合は、代わりに 70% のエタノールを使用します。</li>
	<li>右の位置に棒を固定するためのレンズなしフレームのセットを組み立てます。マウスの頭の上にフレームを配置します。慎重に両方の目は空のフレームの真ん中にいるようにフレームの位置を調整します。</li>
	<li>自己を治す歯科用接着システムを使用して、マウスの頭の上にスティックを添付します。マウスの目に重要システムの流れの液体を聞かせしないように注意します。 注: 自己を治す歯科用接着システムを使用する方法は製品間で異なるです。慎重に指示を参照してください。 注意: 歯科用接着システムで試薬のいくつかは有害である可能性があります。</li>
	<li>約 5 分間待ってから、スティック (図 3 a) の位置を変更することがなく慎重にフレームとナットを取る。</li>
	<li>腹腔内にマウスを麻酔から回復するよりすばやく 0.75 mg/kg アチパメゾール塩酸を注入します。マウスを完全に回復するまで、個々 のケージに入れます。放置しないでください、マウスまでそれは胸骨の横臥を維持するために十分な意識を取り戻しました。プロトコルはここで一時停止することができます。</li>
</ol>4. 近視誘導やその後のメンテナンスの開始
<ol><li>マウスの麻酔から完全に回復させる手術後少なくとも 24 時間待ちます。棒を持ち、レンズとフレームをつけます。この時点 (図 3 b) で誘導を開始します。 注: 麻酔からの回復の間に不快感を最小化し、凝固する歯科用接着システムの十分な時間を与える、強くお勧めマウスは完全に麻酔から回復後、フレームにかける。接着システムのレジン セメントは完全に頭皮のカットをカバーします。したがって、感染の予防、手術後の痛みの改善のため特定の手術後の治療は必要ありません。フレームに置くことの最初の時間の直後にマウスがレンズの存在を意識している以上になるし、多くはそれを傷つけます。総行動は、数時間後普通に帰れます。レンズを持つマウスは通常のマウス同じ密度と保つことができます。</li>
	<li>フレームを取り外して、きれいなレンズと綿棒と指の爪のヒント、少なくとも週に 2 回レンズの透明度を維持するために。 注: 削除、フレームに入れて麻酔下マウスを置く必要はありません。苦痛を減らすことができる彼らと働いている間にハングそれらを持ってではなく、座ってマウスのためのサポートを提供します。<ol>
<li>中間測定が必要な場合、麻酔下マウスを置くし、前述したようにマウスを測定します。マウス麻酔からの回復の後の誘導を継続できます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>週に少なくとも 2 回、ケージをきれい。 注: このヘルプをレンズの透明度を維持するために。マウスと生ゴミを濾液にケージ下部の間ネットを置くこともできます。</li>
	<li>体重と総行動を監視します。実験全体のプロセス中にそのままマウスを年齢と同じ、それらを比較します。 注: いくつかの掻破行動を除いて体重を含む重要な変更はありませんでした未処理のねずみで実験マウス。</li>
</ol>

<ol><li>Dolgin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myopia+boom%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The myopia boom.</a> Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).</li>
<li>Ohno-Matsui, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathologic+Myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Asia-Pacific+Journal+of+Ophthalmology+%28Philadelphia%2C+Pa%29%22%5BJournal%5D)">Pathologic Myopia.</a> Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).</li>
<li>Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+deprivation+and+lens-induced+myopia%3A+are+they+different%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+%26+Physiological+Optics%22%5BJournal%5D)">Form deprivation and lens-induced myopia: are they different.</a> Ophthalmic & Physiological Optics. 33 (3), 355-361 (2013).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+murine+model+of+experimental+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A highly efficient murine model of experimental myopia.</a> Scientific Reports. 8 (1), 2026(2018).</li>
<li>Torii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Violet+Light+Exposure+Can+Be+a+Preventive+Strategy+Against+Myopia+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Violet Light Exposure Can Be a Preventive Strategy Against Myopia Progression.</a> EBioMedicine. 15, 210-219 (2017).</li>
<li>Smith, E. L. 3rd, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Long-Wavelength+Lighting+on+Refractive+Development+in+Infant+Rhesus+Monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of Long-Wavelength Lighting on Refractive Development in Infant Rhesus Monkeys.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (11), 6490-6500 (2015).</li>
<li>Gawne, T. J., Siegwart, J. T., Ward, A. H., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+wavelength+composition+and+temporal+modulation+of+ambient+lighting+strongly+affect+refractive+development+in+young+tree+shrews%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The wavelength composition and temporal modulation of ambient lighting strongly affect refractive development in young tree shrews.</a> Experimental Eye Research. 155, 75-84 (2017).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+quantitative+profiling+of+differential+retinal+protein+expression+in+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+using+fluorescence+difference+two-dimensional+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Early quantitative profiling of differential retinal protein expression in lens-induced myopia in guinea pig using fluorescence difference two-dimensional gel electrophoresis.</a> Molecular Medicine Reports. , (2018).</li>
<li>Schaeffel, F., Burkhardt, E., Howland, H. C., Williams, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+refractive+state+and+deprivation+myopia+in+two+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Optometry+and+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Measurement of refractive state and deprivation myopia in two strains of mice.</a> Optometry and Vision Science. 81 (2), 99-110 (2004).</li>
<li>Tkatchenko, T. V., Shen, Y., Tkatchenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+experimental+myopia+has+features+of+primate+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Mouse experimental myopia has features of primate myopia.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (3), 1297-1303 (2010).</li>
<li>Faulkner, A. E., Kim, M. K., Iuvone, P. M., Pardue, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Head-mounted+goggles+for+murine+form+deprivation+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Head-mounted goggles for murine form deprivation myopia.</a> Journal of Neuroscience Methods. 161 (1), 96-100 (2007).</li>
<li>Gu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Head-Mounted+Spectacle+Frame+for+the+Study+of+Mouse+Lens-Induced+Myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">A Head-Mounted Spectacle Frame for the Study of Mouse Lens-Induced Myopia.</a> Journal of Ophthalmology. 2016, 8497278(2016).</li>
<li>Siegwart, J. T. Jr, Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Goggles+for+controlling+the+visual+environment+of+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Goggles for controlling the visual environment of small animals.</a> Laboratory Animal Science. 44 (3), 292-294 (1994).</li>
<li>Tkatchenko, T. V., Tkatchenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine-xylazine+anesthesia+causes+hyperopic+refractive+shift+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Ketamine-xylazine anesthesia causes hyperopic refractive shift in mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 193 (1), 67-71 (2010).</li>
<li>Chou, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+elongation+of+eye+size+in+DBA%2F2J+mice+compared+with+C57BL%2F6J+mice%3A+in+vivo+analysis+with+whole-eye+OCT%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Postnatal elongation of eye size in DBA/2J mice compared with C57BL/6J mice: in vivo analysis with whole-eye OCT.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3604-3612 (2011).</li>
<li>Park, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+axial+length+measurements+in+mouse+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Optometry+and+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Assessment of axial length measurements in mouse eyes.</a> Optometry and Vision Science. 89 (3), 296-303 (2012).</li>
</ol>

マウスの眼鏡のデザインは、特許 (アプリケーション号 201741349) に適用されています。

このプロトコルのいくつかのステップは確実にマウスの頭に安定して固定するのに眼鏡を偉大な注意を払われる必要があります。骨膜は、歯科用接着システムを使用する前に完全に削除する必要があります。頭蓋骨には、血液も注意してクリーンアップする必要があります。接着剤のアプリケーションの直後に若干の調整は受け入れ、頻繁系接着剤が乾燥する前にスティックを移動しないでください。接着システムの指示を慎重に、特に最終的な混合物の各成分の比率。マウスをつかむとき、眼鏡や手術後のフォロー アップの測定のメンテナンス中を持たないで、マウスの本体とスティック一緒に。頭蓋骨と棒との間の相対運動は、棒の下の落下の最も多い原因です。適切な手術と把持力、スティック ドロップダウン個体数 20 個人を含む 3 週間実験で 1 未満になります。
毛および食糧スクラップは、目とレンズの間間隔に陥る可能性があります。レンズの透明度に影響を与えるだけでなく、潜在的角膜表面を物理的に損傷されます。保つためには、少なくとも 2 回の洗浄、レンズの透明度が、毎週が必要です。これはまたマウスを角膜に合併症の発生率を減らすために顔の手入れを...

近視の有病率が近年、その発症と進行のメカニズムはまだほとんど知りませんが1。近視の最も特徴的な表現型は、網膜の合併症や2も失明のリスクを増加させる軸長さ (AL) の伸びです。近視の病態を理解し、効果的な治療法の開発、堅牢な近視眼的な動物モデルと安定した表現型の評価が必要です。
動物で近視状態を誘導するため簡単に、2 つの方法が存在する: フォーム剥奪の近視 (FDM) とレンズによる近視 (LIM)3。前者は目の前にディフューザーを配置または近視の表現型の結果、眼球の正常な発展に影響を与えるイメージをあいまいにする眼瞼縫合糸します。後者の場所は、網膜の後ろに焦点を移動する目の前にレンズを引いた。網膜は、フォーカスのシフトを検出し、網膜とフォーカル ポイントを再配置する眼球の伸長します。FDM、まぶたが閉じているか、目の前にディフューザーを修正されています後ほとんどないさらにメンテナンスが必要です。林は、レンズがそれを透明に保つために洗浄するため取られる必要があります。したがって、FDM は誘導されることが技術的には比較的簡単です。FDM と LIM のメカニズムが異なるし、どの方法を模倣人間で近視よりはまだ議論3中。LIM の強みの一つは、FDM、少なくともマウス4の場合に比べてより強い表現です。
近視を誘導するために使用されている動物は、マウス4モルモット8、木ジネズミ目7サル6雛5に含まれます。繁殖のため低コスト、豊富なの入手可能な抗体遺伝子操作の可能性を考慮したマウスことができた最初の選択肢近視の動物モデルとして。しかし、他のより大きい動物と比較して、レンズまたはマウスの目の前にディフューザーを修正は比較的困難など若いマウスの特に離乳後。局所投与または複数の中間アイ測定を必要とする実験、またリムーバブル フレームに必要なとしてます。もう一つの課題は、洗練された技術とデバイスを評価する必要がありますマウスの眼球の小さな形態変化です。までに、異なる誘導と異なる研究チームで使用されるプロトコルを測定を比較し、研究所全体の結果を繰り返すは難しいです。詳細で標準的なプロトコルが必要です。
以前の作品は、レンズまたは接着する9、10とヘッド マウント型ゴーグル フレーム11,12のステッチなど、マウスの目の前にディフューザーを修正する複数の方法を説明します。我々 は堅牢で効率的なマウス実験近視を誘発する ameliorated プロトコルを開発する当社の新設計フレームと存在するヘッド マウント型ゴーグル テクニクス11,12,13を組み合わせます。プロトコルは、生後 21 (p21) 離乳後すぐに若いマウスに適用できます。我々 も屈折や AL などの表現型の安定性と正確な評価プロセスの最適化。我々 はこの標準化されたプロトコルは、近視眼的なマウスの近視研究のより簡単にアクセス可能なモデルを作成する助けることができる願っています。

<table><tbody><tr><td>ネジ</td><td>NBK</td><td>SNZS-M1.4-10</td><td></td></tr><tr><td>ワッシャー</td><td>MonotaRO</td><td>42166397</td><td></td></tr><tr><td>ナット</td><td>MonotaRO</td><td>42214243</td><td></td></tr><tr><td>stick</td><td>DMM Make</td><td>どれも</td><td>オーサーが設計し、DMM Makeからレンタルした3Dプリンターで出力します。</td></tr><tr><td>フレーム</td><td>はDMM Make</td><td>のどれも</td><td>認証者が設計し、DMM Makeからレンタルした3Dプリンターで出力します。</td></tr><tr><td>レンズ</td><td>レインボーコンタクトレンズ</td><td>なし</td><td>マウス用にカスタマイズ 会社</td></tr><tr><td>シアノアクリレート接着剤</td><td>OK モデル</td><td>MP 20g</td><td></td></tr><tr><td>歯科用接着剤 樹脂 セメント</td><td>SUN MEDICAL</td><td>スーパーボンド</td><td>マウスの頭蓋骨の骨膜を除去するために使用されるエッチング液が含まれています</td></tr><tr><td>赤外線フォトレフラクター</td><td>Steinbeis トランスファーセンター</td><td>なし</td><td>T&uuml大学のFrank Schaeffel博士によって設計および提供されました。bingen</td></tr><tr><td>Spectral domain OCT</td><td>Leica</td><td>R4310</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution</td><td>Santen</td><td>Mydrin-P</td><td></td></tr><tr><td>midazolam</td><td>Sandoz (株)</td><td>麻酔薬</td>メデトミジン用<td>SANDOZ</td>コンポーネント</tr><tr><td>&nbsp;</td><td>オリオンコーポレーション</td><td>の酒</td>石酸ブトルファノール用<td>ドミトール</td>コンポーネント</tr><tr><td>&nbsp;</td><td>明治精華ファル</td>マ <td>Vetorphale</td><td>麻酔薬用成分</td></tr><tr><td>0.1% 精製ヒアルロン酸ナトリウム</td><td>参天</td><td></td><td></td></tr>製薬 <tr><td>アチパメゾール塩酸塩</td><td>ゼノアック</td><td>アンチセダン</td><td></td></tr></tbody></table>

誘因とマウス実験近視モデルの評価

Inducement and Evaluation of a Murine Model of Experimental Myopia

近視のマウスモデルでは、比較的簡単な遺伝的操作のため近視研究の強力なツールをすることができます。動物で近視を誘発する 1 つの方法は、週間 (レンズによる近視、LIM) 明確なマイナス レンズを目の前に置くことです。ただし、研究所から研究所する誘因と評価の現存するプロトコルによって異なります。ここでは、新たに設計を使用してマウスの LIM 眼鏡を誘導する、実践的な再現性のある方法について述べる。安定しながらマウスの目の前に、レンズにより、レンズ洗浄用または局所にメソッドの修正は薬剤管理です。表現型は、堅牢で効率的との差異は小さい。ここで説明した方法は、実験のため可能な限りの期間を拡張する離乳直後後のマウスに適用できます。我々 はまた与えた技術屈折と軸の長さの測定で再現性のある結果を達成するためのアドバイスします。ここで説明した手順のプロトコルと思います、詳しい記事は近視と近視実験をよりスムーズに行う研究室データに匹敵する研究者を助けることができます。

なら、すべての必要な部品 (図 1 a) で最初に、チェックしてください。図 1 bに組み立てられた眼鏡の部分の例を示します。フレームとナットが本体を除いて他のすべての部分、それぞれのマウスの使い捨て。図 1 cに完成した眼鏡のセットを示します。年齢別でマウスに合わせて 2 つのフレーム間の角度を変更します。
屈折測定の例を図 2 aに示します。これは p21 から始まって 3 週間-30 D レンズによるマウスの目です。マウスが9カメラの正面を見ているを意味する x と y の両方の軸で 0 度に近い視線を制御しなければならないことに注意してください。<strong ...

このプロトコルはマウス実験近視モデル新たに設計を使用してマウスで誘導眼鏡と眼のパラメーター測定の安定性と再現性のある結果を達成するために必要な技術の完全なプロセスをについて説明します。

Murine model of myopia can be a powerful tool for myopia research because of the comparatively easy genetic manipulation. One way to induce myopia in ...

この方法は、マウスにおけるレンズ誘発近視の誘導と評価に関する重要な質問に答えるのに役立ちます。レンズの安定化方法など。この手法の主な第 1 段階は、すべてのステップが最適化され、標準化されており、ラボ全体で正確で再現可能で同等の結果を得られるということです。一般的に、この方法に新しい人は、何の練習もなくマウスの頭に眼鏡を安定して接着することは非常に困難であるため、苦労しています。マウスごとに、以下の準備を行います。ヘッドマウントナイロンスティック1個。1つの高い、1つの下のチタニウムフレーム。実験の目的に応じて適切な力を持つ2つのレンズ。10mm長M1.4サイズのネジ。M1.4サイズのネジ用のナット1本。厚さ0.3ミリメートルのM1.4サイズのネジ用の1プレーンワッシャー。そして、2つの人工指の爪のヒント。右の眼鏡フレームを組み立てるには、最良の保護効果を達成するために外側の方向に向かって指の爪の先端を配置します。また、マウスビジョンフィールドをマスクしないように、爪の先端とフレームの間の角度を約130度に調整します。シアノアクリル酸接着剤を使用して、人工指の爪の先端をフレームに接着し、接着剤を12時間完全に乾燥させます。爪切りを使用して、完全に付着した爪の先端を約1センチメートルの形状にトリミングし、レンズをフレームに配置します。水晶体の端からシアノクリレート接着剤を注入し、表面張力によって広がらせます。接着剤が乾いたら、ネジをスティックの平らな側からワッシャーと一緒にナイロンスティックに締めます。次に、右フレーム先端の反対方向に角度を付けて指先を使用して、同じ方法で左枠を準備します。軸方向の長さの屈折のベースライン測定のために、ミリリットルトロピックアミドあたり5ミリグラム、眼球の両側に5ミリグラムのフェニレフリン塩酸塩を含む無量の薬剤を1滴塗布して瞳孔を拡張する。全身麻酔の前に少なくとも5分間待ち、赤外写真屈折器のファインダー内の目の方向を調整して、最初のPurkinje画像を瞳孔の中央に配置し、光軸に沿って屈折を測定します。同じように他の目を測定した後、スペクトル領域の光学コヒーレンス断層撮影システムにマウスを置き、角膜渦から光神経近くの最も明るい境界までの距離として軸方向の長さを定義します。以前に準備したゴーグルフレームをマウスに固定するには、まず0.1%精製したヒアルロン酸ナトリウムアイドロップを各目に1滴塗布し、麻酔をかけたマウスの顎を傾斜した表面に置き、頭蓋骨の前頭面が水平になるようにします。70%エタノールを浸した綿棒を使用して、耳と目の間の髪と頭皮を殺菌し、耳と目の間の皮膚に0.8平方cmの切開を行い、頭蓋骨を露出させます。綿棒の歯科エッチング液を使用して骨膜を取り除き、レンズのないフレームのペアを使用してスティックを正しい位置に固定し、

inducement-and-evaluation-of-a-murine-model-of-experimental-myopia

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このビデオは、マウスモデルで眼表面の炎症とマイボーム腺の機能障害を誘発する方法を示しています。免疫原を用いてマウスの免疫系を刺激し、その後、同じ免疫原で再刺激すると、眼表面の炎症が促進され、好中球が産生するaggNETを介してマイボーム腺分泌が詰まり、ドライアイ疾患を引き起こします。...

マウスモデルにおける眼表面炎症の誘導法

このビデオでは、麻酔をかけたラットが、磁場下で前房に磁気ビーズを注入して虹彩角膜の角度をブロックする眼科手術を受けています。この閉塞は、海綿網を閉塞し、房水の排出を妨げ、眼圧の上昇を引き起こし、網膜神経節細胞と視神経を損傷します。これにより、緑内障のような状態が発症します。...

マウスモデルにおける虹彩角膜角閉塞による実験的緑内障誘発

出典:Jiang, X., et al.実験的近視のマウスモデルの誘導と評価。J. Vis. Exp.

レンズ誘起焦点ぼけによるマウスモデルにおける近視の発症

慢性高眼圧症は、マウスの目に小柱網のレーザー光凝固を使用して誘導される。眼圧（IOP）は、レーザー治療後数ヶ月上昇する。視力と実験動物のコントラスト感度の低下は微細運動テストを使用して監視している。...

ビジュアル欠陥を特徴づけるために慢性高眼圧症のレーザー誘起マウスモデル

私たちは、緑内障をモデル化するために、ラットの眼に磁気マイクロスフィアを注入することにより、眼圧(IOP)の上昇を誘発する方法を提示します。これにより、強い圧力が上昇し、広範なニューロン死につながります。このプロトコルは、実施が簡単で、繰り返しの注入を必要とせず、安定した長時間の眼圧上昇を実現します。...

磁気マイクロスフェアの眼注射によって誘発実験緑内障

私たちは、軸方向伸長のウサギの眼にリボフラビンおよびUVAと強膜架橋の効果を実証します。軸方向の伸びは、その右目のまぶた（瞼板縫合）を縫合することによって13日齢のニュージーランドウサギ（オスとメス）で誘導されました。...

強膜ウサギモデルで軸性近視の予防のためのリボフラビンおよび紫外線A放射線を用いて架橋

ここでは、マウスレーザー誘導性脈絡膜新生血管(CNV)プロトコル、つまり血管新生加齢黄斑変性症(AMD)の血管特性を再現する実験モデルを紹介します。習得すれば、CNVをモデルシステムとして確実かつ効果的に誘導し、さまざまな実験手段を試験することができます。...

レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

ここでは、緑内障に観察される網膜神経節細胞の損失をもたらすマウスの眼の高眼圧症を誘発するためのプロトコルを提示します。磁性マイクロビーズは、前房に注入し、房水の流出を阻止するために磁石を使用して、虹彩角膜角に引き寄せられます。...

磁気マイクロビーズ閉塞モデルマウスにおける緑内障高眼圧症依存誘導すること

慢性的な高眼圧症は、ラットおよびマウス、緑内障と網膜神経節細胞の構造と機能の劣化につながる circumlimbal...

ラットおよびマウスの Circumlimbal 縫合による緑内障のモデル

ここでは、スペクトル領域光干渉断層撮影(SD-OCT)を用いて、網膜変性、緑内障、糖尿病性網膜症、近視のモデルにおいて、in...

光コヒーレンストモグラフィーを用いたげっ歯類モデルにおける眼疾患のin vivo構造評価

眼表面の炎症は眼の表面組織に害を及ぼし、眼の重要な機能を損ないます。本プロトコルは、マイボーム腺機能不全(MGD)のマウスモデルにおいて眼の炎症を誘発し、損なわれた組織を収集する方法を記載する。...

眼表面炎症の誘導と関与組織の収集

学ぶマウスにおけるレンズ誘発近視の誘導と評価法。特製眼鏡を用いて屈折と眼軸長を測定し、標準化された手順で再現性のある結果を得る。この手法は近視の病態機序解明に貢献する。

誘因とマウス実験近視モデルの評価

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