Name: マウス萌芽期の神経幹細胞の分離と培養 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: 学ぶマウスE13胚の神経幹細胞分離法。神経節隆起からの微小外科的摘出と培養技術を習得し、神経発生と幹細胞生物学の研究に応用する。

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この作品は、ロワイヤン研究所によって支えられました。

すべての手術や動物に関する手続きは、ロワイヤンの所、テヘラン、イランの動物倫理委員会によって承認されました。
1. 手術用器具、洗浄バッファー (HEPES MEM)、細胞培養媒体および細胞培養皿の準備
<ol><li>オートクレーブ滅菌が日常の滅菌ガイドラインに基づいて手術ツール (ハサミ、メスのブレードのハンドルおよび鉗子) 滅菌します。</li>
	<li>HEPES メモリ バッファーの十分な容積を準備 (約 100 mL は各妊娠マウスのために十分です)。高濃度の抗生物質 (ペニシリン/ストレプトマイシン 10%) を HEPES メモリ バッファーに追加します。抗生物質のこの集中は、微生物汚染の危険性を減らすために必要です。<ol>
<li>HEPES メモリ バッファーを準備するには、MEM (最小値必要な媒体) 100 mL に HEPES 粉末の 0.5958 g を加え、よく混ぜます。7.3 7.4 に pH を調整し、0.22 μ m フィルターを使用してメディアをフィルターします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>NSC 媒体含んでいる neurobasal (NB) 媒体、20 ng/ml の EGF, 10 ng/mL bFGF 添加 1 %100 x N2 サプリメントや 1 %b27 サプリメント (ビタミン A)、なし 1 U/mL のヘパリン、1% 1% 1% 非必須アミノ酸 (NEAA)、L-グルタミン ペニシリン/ストレプトマイシンと0.1 mM β-メルカプトエタノール。</li>
</ol>2. 動物の外科手術、マイクロ郭清
<ol><li>妊娠 13 日目妊娠マウスの麻酔 (ここでは、使用 BALB/c ひずみ歳 4 ヶ月) ケタミン ・ キシラジンの腹腔内投与で 100 mg/kg および 10 mg/kg 体重それぞれ。<ol>
<li>動物の足の痛みを伴う刺激 (例えば鉗子でピンチ) を出すことによって深い麻酔を確認し、痛みの反射がない、頚部転位によって動物を犠牲にします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>清潔で消毒 70% エタノールを噴霧することにより腹部の皮膚。</li>
	<li>腹部の皮膚を制御し、腹腔内や子宮角を明らかにハサミで切って、皮膚や基本的な筋膜。<ol>
<li>はさみで胚を含む子宮角を削除し、25 mL の冷たい HEPES メモリ バッファーを含む 50 mL の円錐管にそれらを転送します。</li>
		<li>層流フードの下で円錐形のチューブを置き、フードの下でキャップを開きます。チューブと破片と血を除去するために新鮮な冷たい HEPES メモリ バッファーの十分なボリュームで 3 回すすぎから子宮の角を引き出します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>10 cm シャーレ 7-10 mL の冷たい HEPES メモリ バッファーを含む子宮組織に転送します。7-10 mL の冷たい HEPES メモリ バッファーを含む新しい料理に高級はさみと転送胚を使用して子宮角を開きます。今マイクロ郭清の操作のため解剖顕微鏡下で胚を 10 センチメートルの皿を置きます。</li>
	<li>鋼刃メスのブレードのハンドルで、その先端を押して 25 27 G 注射針の先端を曲げます。70-90 ° の角度で先端が曲がっているまでは、針の先端を曲げます。針の先端でベンドをして解剖顕微鏡下で針の先端を確認します。 注: 当然、胚皿の横の位置にあります。</li>
	<li>自分の位置を変えずに、微細鉗子で首と胚の体を保持して胚の頭の前頭部泉門に針の先端の曲がった部分を挿入します。小さな出血や血栓があるでしょう。<ol>
<li>針の先端を表面的に移動します。曲がった部分は、額に向かって、頭の後ろのふくらみの中は、皮膚や頭蓋骨をカットして、脳に損傷を与えることを確認します。</li>
		<li>脳を明らかにし、針を皮膚の外側から脳の下の領域に挿入する横方向に針先で皮膚を押してください。切り裂かれた頭蓋骨から出てくるそれを押すことによって、頭蓋骨から脳を削除します。</li>
		<li>脳をカーブタイプ鉗子を使用して安定した保持し、マイクロはさみを使用して神経節隆起を公開する各半球の皮質をカットします。</li>
		<li>脳を保持し、神経幹細胞培地を含む 15 mL 遠心管に切り裂かれた神経節隆起を配置します。神経節隆起、中央と外側部分が明確に表示されます。</li>
		<li>すべての脳の微小解剖がされるまで、この手順を繰り返します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>チューブの底に対してピペット先端を配置することによって切り裂かれた神経節隆起をカットします。上下に 5 回単一細胞懸濁液のための組織を分割する 4 懸濁液をピペットします。<ol>
<li>110 x g で 5 分間削除の懸濁液上清を遠心し、0.05% トリプシン-EDTA の 1 mL の細胞を再停止します。</li>
		<li>10 分間、37 ° C の細胞懸濁液をインキュベートし、大豆トリプシンインヒビター (25 μ g/mL) のトリプシン処理を停止するのと同等のボリュームを追加します。トリプシンが完全に活性化されていることを確認してください、上下に細胞懸濁液をピペットします。</li>
		<li>5 分、上清を除去再中断完全 NSC 培地 1 mL のセルとセルの数をカウント、110 x g で細胞懸濁液を遠心します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>適当な大きさの組織培養のフラスコに NSC の中で細胞 (2 x 105セル/mL) をプレートします。T25、T75 し T175 フラスコに 40 mL 20 mL 5 mL に転送します。 注: 神経幹細胞が 5% CO2と加湿のインキュベーターで 37 ° C で 3 日間培養後表示されます。6-7 日後球は直径 150-200 μ m の間で測定する必要があり、サブカルチャーの準備ができています。7 日後 100 万プライマリ NSCs を育成することによって細胞の数は、300 万に拡大します。</li>
</ol>3. trypsinization と神経幹細胞の継
<ol><li>サブカルチャー、神経幹細胞、浮遊細胞の培地を遠心管に転送、5 分間 110 × g で遠心分離機および上澄みを廃棄します。0.05% トリプシン-EDTA の 1 mL を追加し、37 ° C、10 分間インキュベートします。<ol>
<li>優しくまで大豆トリプシンインヒビターとピペット、神経幹細胞を使用してトリプシンを不活化し、細胞を単一それらを作るために。</li>
	</ol>
</li>
	<li>110 x g で 5 分で細胞懸濁液を遠心分離機、上澄みを廃棄し、NSC の中の 1 mL の細胞を再度中断します。これらの細胞は次のサブカルチャーまたは Laminin のカルチャの準備ができているし、ポリ L-オルニチン コーティング高度な実験のための表面。</li>
	<li>次のサブカルチャーの新しいフラスコ (従ってください手順 2.8) NSCs を転送し、NSC 培地でそれらを文化します。神経分化誘導培養 NSCs NSC bFGF とラミニンおよびポリ L-オルニチンの EGF の不在中に誘導プレート (図 1 b) をコーティングしました。</li>
	<li>塗装手順の完全に薄めたポリ L-オルニチン (25 μ g/mL) の十分な量を細胞培養プレートに追加することによって細胞培養表面をコートし、37 ° C 2 時間で孵化させなさい。<ol>
<li>ポリ L-オルニチンを吸引し、PBS でよく 2 x をすすいでください。完全に文化表面を覆うとセルをメッキする前に 2 h. 吸引、ラミニンの 37 ° C で孵化させなさいまたは 4 ° c まで必要なプレートは保管 5 μ G/ml ラミニンの十分な量を追加します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 流れの Cytometry の試金
メモ: フロー フローサイトメトリー分析13NSCs、ニューロンとグリア細胞の特定のマーカーの発現を測定できます。プロトコルは、メノンら、マイナーな修正と13に基づいています。
<ol><li>神経幹細胞を分離またはそれらの単一セルを作成する trypsinization によってコーティング プレートから培養 NSCs をデタッチします。細胞懸濁液が (約 1 百万セルは、十分な染色を各抗体) の 100 μ L に固定バッファー (PBS で 2% パラホルムアルデヒド (PFA)) の 500 μ l 添加し 15 分間常温管をインキュベーションしています。</li>
	<li>110 x g で 5 分間遠心管に 1 mL の PBS を追加してセルを洗浄する上澄みを廃棄し、管内約 100 μ L を残して、細胞ペレットを再懸濁します。<ol>
<li>Tween 20 とセルを permeabilize (0.7 %pbs でトゥイーン 20) 細胞懸濁液を 100 μ l 添加するトゥイーン 20 バッファーの 500 μ L を追加することによって。軌道シェーカー (100 rpm) で 15 分間室温でチューブを孵化させなさい。</li>
	</ol>
</li>
	<li>遠心分離と PBS 洗浄を繰り返します。上清を完全に、チューブから削除して、ペレットだけを残してします。0.5%、10% 血清 (ヤギ血清) 1% ウシ血清アルブミンを含む希釈バッファーで希釈した一次抗体 (抗マウス βtub III、GFAP とネスチン抗体濃度 1: 200 でウサギ) の 100 μ L を追加トゥイーン 20 PBS と軽く混ぜてカップ刻んだ。軌道シェーカー上で 30 分間室温でチューブを孵化させなさい。</li>
	<li>PBS で 1 回洗浄し、上澄みチューブから完全に削除、ペレットだけを残してくださいします。<ol>
<li>希釈した二次抗体を 100 μ l 添加 (ヤギ抗うさぎ 1: 500 濃度共役 FITC) ミックス カップ刻んだ PBS 細胞ペレットに、穏やかに。暗闇の中でシェーカー上で 30 分間室温でチューブを孵化させなさい。</li>
		<li>サンプル 2 を洗う PBS とフロー バッファーで一度洗い x。遠心分離機し、流れの cytometer 分析フロー バッファーの約 150 μ L のセルを再度中断します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Navarro Quiroz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Signaling+in+Neuronal+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Cell Signaling in Neuronal Stem Cells.</a> Cells. 7 (7), (2018).</li>
<li>Choi, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Thrombin+Receptor+Restricts+Subventricular+Zone+Neural+Stem+Cell+Expansion+and+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The Thrombin Receptor Restricts Subventricular Zone Neural Stem Cell Expansion and Differentiation.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9360(2018).</li>
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<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+differentiation+from+human+neural+stem+cells%3A+A+novel+role+for+c-Src%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemistry+International%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte differentiation from human neural stem cells: A novel role for c-Src.</a> Neurochemistry International. 120, 21-32 (2018).</li>
<li>Palanisamy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+alters+cell+fate+selection+of+rat+neural+progenitor+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Oxytocin alters cell fate selection of rat neural progenitor cells in vitro.</a> PLoS ONE. 13 (1), e0191160(2018).</li>
<li>Llewellyn-Smith, I. J., Basbaum, A. I., Braz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+dynamic+synaptic+reorganization+after+GABAergic+precursor+cell+transplantation+into+adult+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Long-term, dynamic synaptic reorganization after GABAergic precursor cell transplantation into adult mouse spinal cord.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (3), 480-495 (2018).</li>
<li>Precious, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FoxP1+marks+medium+spiny+neurons+from+precursors+to+maturity+and+is+required+for+their+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">FoxP1 marks medium spiny neurons from precursors to maturity and is required for their differentiation.</a> Experimental Neurology. 282, 9-18 (2016).</li>
</ol>

利害の対立が宣言されていません。

神経幹細胞の適切なソースを使用しては、神経科学者に非常に重要です。神経幹細胞は胎児の脳の異なる領域から悪用される可能性が、ニューロンとグリア細胞の特定の種類を生成することができます。成熟したニューロンとグリア細胞を生成するように誘導する神経幹細胞の分化誘導方法はいくつかあります。特定のカルチャ条件および栄養要因の連隊の下ニューロン14、オリゴデンドロ サイト15,16 、およびアストロ サイト17体外を生成可能性がありますそれらを示す多数の報告があります。文学からのデータに基づいて、神経節隆起は抑制性と興奮性ニューロン gaba 作動性18とドーパミン19型などのさまざまな種類を生成する可能性のある神経幹細胞の良い情報源を提供しています。したがって、gaba 作動性ニューロンのレートの高速生成のこれらの NSCs ...

大人と胚の脳の異なる領域に存在する神経幹細胞 (NSCs) とニューロンとグリア細胞1のさまざまな種類を生成する傾向があります。2大人の哺乳類の脳の脳室下帯のゾーンと胚の脳神経節隆起は、NSC の豊富な地域の3です。発展途上の脳では、神経節隆起は皮質介在ニューロンと特に gaba 作動性介在ニューロンの3のほとんどを提供します。動物の需要を減らす誘導多能性幹細胞 (Ips) を使用または胚性幹細胞 (Esc) から神経幹細胞生成のため少ない侵襲的方法もあります。Esc または Ips から NSCs の生成が可能な4,5であるにもかかわらず、それは、いくつかの長所と短所、大人または胚脳6,7、神経幹細胞の分離と比較されます。 8。Esc と Ips の神経細胞への分化誘導のためのプロトコルは、常に時間とコストを消費し、成功 (70-80 %nestin 陽性細胞)5の率は低かった動物の頭脳 (から NSCs の直接分離以上 99 %nestin 陽性細胞)9。また、幹細胞は、いくつかの通路10,11の後遺伝的安定性と分化傾向を失います。NSCs に体細胞の直接の変換については、他の新しいレポートがあるにもかかわらずこれらの細胞は遺伝子組み換えし、は簡単にすべての演習12でアクセスできません。したがって、動物の脳からの神経の幹細胞の隔離のための大きな需要はまだあります。手術技術の向上によって動物の使用量を低減することが可能です。手術時間を短縮して、技術の向上により、損傷から細胞を維持し、それぞれの動物から NSCs の最高速度を取得することが可能です。
ここでは、E13胎児の脳の神経幹細胞の隔離のための簡体字で再現可能な手法を紹介します。

<table><tbody><tr><td>15 mLチューブ</td><td>ファルコン</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>50 mLチューブ</td><td>ファルコン</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>アドソン鉗子、12 cm、ストレート</td><td>WPI</td><td>14226</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Sigma</td><td>F0291</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>Σ</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>ディッシュ 10cm&nbsp;</td><td>ファルコン</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>ドレッシング鉗子、12.5 cm、ストレート</td><td>WPI</td><td>15908</td><td></td></tr><tr><td>デュモンピンセット、11 cm、ストレート</td><td>WPI</td><td>500342</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td></td></tr>エ<tr><td>タノール</td><td>メルク</td><td>100983&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>グルタミン酸</td><td>シグマ&nbsp;</td><td>G3291</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ抗ウサギ FITC 標識二次抗体</td><td>Sigma</td><td>AP307F</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>Σ</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン&nbsp;&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>h3149</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>シグマ</td><td>83264</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>シグマ</td><td>90909C</td><td></td></tr><tr><td>インスリンジネ25-27ゲージニードル付き&nbsp;</td><td>SUPAメディカル</td><td>A1SNL127</td><td></td></tr><tr><td>ラミニン</td><td>シグマ&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Sigma</td><td>M2279</td><td></td></tr><tr><td>N2 サプリメント</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>NB medium</td><td>Gibco</td><td>21103-31</td><td></td></tr><tr><td>非必須アミノ酸 (NEAA)</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>PBS without Ca and Mg</td><td>Gibco</td><td>20012050</td><td></td></tr><tr><td>Penicilin/ Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>5140122</td><td></td></tr><tr><td>ポリ-L-オルニチン</td><td>シグマ</td><td>&nbsp;P4957</td><td></td></tr><tr><td>ウサギ抗マウスβチューブリン-III抗体</td><td>Sigma</td><td>T2200</td><td></td></tr>ウサギ<tr><td>抗マウスGFAP抗体</td><td>Sigma</td><td>G4546</td><td></td></tr><tr><td>ウサギ抗マウス Nestin抗体</td><td>Sigma</td><td>N5413</td><td></td></tr><tr><td>メスハンドル #3</td><td>WPI</td><td>500236</td><td></td></tr><tr><td>ハサミカーブ</td><td>WPI</td><td>14396</td><td></td></tr><tr><td>ハサミ シャープストレート</td><td>WPI</td><td>14192</td><td></td></tr><tr><td>大豆トリプシン阻害剤</td><td>ロシュ</td><td>10109886001&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>組織培養フラスコ、T25</td><td>BD</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>組織培養フラスコ、T75</td><td>BD</td><td>353024</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Vannas はさみ、&nbsp; 8 cm、ストレート&nbsp;</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-メルカプトエタノール</td><td>ΣM6250</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

マウス萌芽期の神経幹細胞の分離と培養

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

神経幹細胞 (NSCs) は多能性、中枢神経系 (CNS) の 3 つの主要な細胞型に上昇を与えることができます。生体外で文化と NSCs の拡大は、ニューロンの機能を研究する神経科学者のための細胞との相互作用とグリア細胞の適切なソースを提供します。大人または胚の哺乳動物の脳からの神経の幹細胞の隔離のためのいくつかの報告されたテクニックがあります。胚の中枢神経系のさまざまな地域から NSCs を分離する顕微鏡の操作中にライブと拡張可能な幹細胞の最も高い比率を取得する脳細胞にダメージを軽減する非常に重要です。マウス胎児脳からこれらのセルの隔離中にストレス解消する方法は、手術時間の削減です。ここでは、E13マウス胚神経節隆起からこれらの細胞の迅速単離技術の開発を示します。手術は、頭蓋、神経節隆起を収穫するため分離脳のレーザーマイクロダイ セクションから脳を抽出、曲がった針の先端を持つ胚の前頭部泉門を切断、子宮から E13マウス胚を収穫解離の単一細胞懸濁液を得るために NSC 培地で収穫された組織と最後にめっき細胞懸濁培養神経幹細胞を生成します。

マイクロ郭清、電池隔離および文化 Neurosphere 。ここでは、迅速かつ効率的なマウス E13脳手術と神経幹細胞の分離法を提案します。この記事は、前頭泉門で細かい断裂を通じて E13マウス胚頭蓋骨から脳全体を削除することが可能だ示しています。この方法では、脳は以下のダメージを耐えるし、脳のさまざまな部分から細胞を分離することが可能です。収穫された細胞が bFGF と EGF, 存在下で NSC 中神経幹細胞を生成する、文化 (図 1 a) で 7 日後に直径 150-200 μ m サイズ。神経幹細胞解離し、単一細胞およびラミニン/ポリ-L-オルニチン-コーティング料理文化 bFGF と彼らは枝のような突起を拡張し、7 ~ 10 日後神経細胞形態を示すことを示した EGF の不在の 0.05% トリプシン/EDTA を使用して(図 1 b)。
<p class="...

E13マウス胚神経節隆起から顕微鏡下神経幹細胞の分離法を紹介します。

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

このビデオプロトコルの目的は、胚マウス神経幹細胞の分離と培養のためのソースと効率的なプロトコルを確立することです。こんにちは、私はマリアム・サデギ=ザデです。私は、ロワイヤン研究所の細胞分子生物学の修士課程です。今日、私と私の同僚は、13胚マウス神経節性エミネンスから神経幹細胞を収穫する方法を紹介したいと思っています。こんにちは、私はバハレ・アリザデ=ショオルェスタンです。私はロワイヤンバイオテクノロジー研究所の幹細胞学科で細胞分子生物学の修士課程を修了しました。こんにちは、私はレザ・デハニ・ヴァルナムハスティです。また、私は、ロワイヤン研究所で細胞分子生物学を勉強しています。外科的処置には、子宮から各13個のマウス胚を収穫することがある。頭蓋骨から脳を抽出する曲がった針の先端で胚のフォンタネルの前部を切断する。神経節性のエミネンスを収穫するために孤立した脳の微小解剖。単一細胞懸濁液を得るために神経幹細胞培地中で収穫された組織の解離。そして最後に、懸濁液培養中の細胞をめっきし、神経細胞を生成する。70%エタノールを噴霧することにより、腹部領域の皮膚を清潔に消毒する。皮膚の上腹部をコントロールし、腹腔と子宮の角を明らかにするためにはさみで皮膚と下線付きの顔を切ります。胚を含む子宮角をはさみで取り除き、25ml冷たいHEPES MEMバッファーを含む50mlの円錐状のチューブに移します。円錐管をラミナルフローフードの下に置きます。フードの下のキャップを開きます。チューブから子宮ホーンを取り出し、残骸や血液を除去するために新鮮な冷たいHEPES MEMバッファーの十分な量で3回すすいでください。子宮組織を7〜10mlの冷たいHEPES MEMバッファーを含む10cmシャーレに移します。細かいはさみを使用して子宮の角を開き、7〜10mlの冷たいHEPES MEMバッファーを含む新しい皿に胚を移します。今、マイクロ解剖操作のための解剖顕微鏡の下に胚と10cm皿を置きます。スチール製のメスの刃のハンドルに先端を押して、注射針の先端を曲げます。針の先端を、70~90度の角度で曲げるまで曲げます。解剖顕微鏡の下の針の先端をチェックして、針の先端の曲がっているのを見てください。当然のことながら、胚はこれに横位置を有する。位置を変えることなく、細かい鉗子で胚の首と体を保持し、針の曲がった部分を胚頭部のフォンタナネルの前部に深く挿入する。そこには小さな出血や血栓があるでしょう。曲がった部分が額に向かって膨らみの内側にある間、針の先端を表面的に動かし、次に頭の後ろに向かって動かします。皮膚と頭蓋骨を切断し、基礎となる脳に損傷を与えないようにしてください。針の先端で皮膚を横に押して脳を明らかにする。皮膚の側面から、皮膚の側面から脳の下の領域までのフレームの下に針を挿入します。そして、

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神経科学

このビデオでは、マウス胎児の開発皮質からneuroprecursorsの単離に使用方法を説明します。皮質組織を解剖、子宮から胚を取り外す手順、および分離された大脳皮質を消化することが示されている。...

マウス神経幹細胞の前駆体の文化

このビデオプロトコルは、胚14日目マウスの脳の神経節隆起から神経幹細胞の単離と拡大のためのニューロスアッセイのアプリケーションを示しています。...

ニューロスフェアのアッセイを使用してマウス胎児神経幹細胞培養の確立

脊髄から、マウス胚性運動ニューロンを分離する別の方法が説明されています。方法は、考慮にレクチンが低親和性神経成長因子受容体p75NTRにバインドすることができるという事実を取ります。このレクチンベースpreplatingはp75NTRに対する特異的抗体を持つと同様の精製が可能になります。...

マウス胚の運動ニューロンのレクチンに基づく分離と文化

神経管から胚の神経堤の分離の使用を容易に...

胎児マウス神経管から神経堤細胞の単離および培養

このビデオは、マウスの脳のサブカロサルゾーンから神経幹細胞を分離して培養するプロセスを示しています。これには、組織を解剖し、酵素で解離し、分化因子で培養して成熟した神経細胞に成長させることが含まれます。...

マウスの脳梁下ゾーンからの成体神経幹細胞の単離と培養

このビデオでは、マウス胚性幹細胞(mESC)から神経前駆細胞(NPC)をin...

マウス胚性幹細胞から神経前駆細胞を作製する技術

このビデオでは、出生後のマウス小脳から幹細胞を分離し、神経細胞に分化させる方法を紹介しています。単離された細胞懸濁液からの幹細胞は、抗体被覆磁気ビーズを用いて精製され、培養されてニューロスフェアが形成されます。その後、ニューロスフェアを分化培地に保持して神経細胞を生成します。...

出生後マウス小脳からの幹細胞の単離と神経細胞への分化

ここでは、脳室下帯と個々の成体マウスの歯状回から、付着性単層またはニューロスフェアのいずれかとして、神経前駆細胞培養を同時に生成するための詳細なプロトコルを記述します。...

マウスを一回、二つの文化：個々のマウスの二つの神経原性のゾーンから成体神経幹細胞の単離および培養

このプロトコルは、無血清単層法を使用して胚性幹細胞から神経前駆細胞を生成する方法を詳細に説明しています。これらの前駆細胞は、成熟した神経細胞タイプの誘導や神経仕様のプロセスの研究に使用でき、化合物スクリーニングのためのマルチウェルフォーマットスケーリングに適しています。...

無血清単層培養中のマウス胚性幹細胞の神経分化

成体神経幹細胞(aNSC)の増殖のための培養システムを確立することで、aNSCの検査と治療への応用が可能になります。脳梁下領域(SCZ)は、最近、成体マウスの新規神経芽細胞形成領域として認識されています。ここでは、SCZ-aNSCの単離、拡張、および分化の方法について説明します。...

マウス梁下ゾーンから成体神経幹細胞の単離および培養

学ぶマウスE13胚の神経幹細胞分離法。神経節隆起からの微小外科的摘出と培養技術を習得し、神経発生と幹細胞生物学の研究に応用する。

マウス萌芽期の神経幹細胞の分離と培養

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