GC-MS熱脱着サンプリングのためのヘッドスペース揮発性収集技術を用いたフローラルフレグランス揮発性物質の迅速な収集

ここでは、非破壊サンプリング手順を用いて、花の香料揮発性物質を咲かせる花から集めるプロトコルを提示する。

花の香りは受粉者を引き付けるために重要であるため、この方法は、より良い理解または在来の花種の受粉を強化するために使用することができます。この方法では、フレグランス揮発性物質を、容易に輸送する機械で非破壊法を用いてサンプリングする。この方法論は、サンプリング時間を2時間から3時間から10分に短縮する、迅速なサンプリングを使用します。

これらの方法は、花によって生成された揮発性物質を迅速にサンプリングする方法を提供し、昆虫フェロモンなどの他の標本から揮発性物質をサンプリングするためにも使用することができます。開始するには、最初に開かれない花を選択し、フラグ付けテープで花をマークして、同じ花の繰り返しサンプリングを確実に行います。オーブン袋を水で30分間沸騰させ、残留プラスチック化合物を取り除きます。

乾かすには、175°Cでオーブンで60分間焼きます。袋が乾燥したら、オーブン袋の閉じた端の各コーナーにポリプロピレンバルクヘッドユニオンを追加します。75%エタノールですべての袋とチューブをすすいで空気乾燥させます。

その後、袋とチューブを低火でオーブンで焼き、74~85度の間で30分間焼きます。開花時間の持続時間に応じて、可能であれば、サンプルを採取するために開花後少なくとも24時間待つ。焼きオーブンバッグで選択した花をカバーします。

バッグに不要な空気が流れ込むのを防ぐために、花の下にプラスチック製のジップタイでしっかりと袋を締め付けてください。滅菌ネオプレン手袋を着用し、回収装置のエアアウトレットからチューブを取り付け、オーブンバッグのバルクヘッドユニオンの1つに接続します。他のバルクヘッドユニオンに、多孔質ポリマー吸着剤を含むガラスフィルターカートリッジを取り付けます。

真空入力の収集装置に2本目のチューブを取り付けます。2つ目のチューブの端部をガラス揮発性回収フィルタカートリッジに接続します。エアポンプと真空の両方を同時にオンにし、毎分0.05リットルに設定します。

花の周りのヘッドスペースは空気で満たされていますが、膨らみはありません。システムは袋からフィルターを通して空気を引っ張り、花の揮発性物質を捕獲する。マシンを 10 分間実行します。

そして、エアポンプと真空の両方をオフにします。チューブとガラスフィルターカートリッジを分解します。フィルターをガラスバイアルに入れ、キャップをねじ込みます。

PTFEパイプスレッドテープでバイアルをシールします。GCMS 分析まで、サンプルを冷凍庫に保管します。空のオーブンバッグでこのプロセスを繰り返し、コントロールとして空の空気サンプルを収集します。

同じ揮発性物質の一貫した複製のために、いくつかの花が一日の間に様々な香りのレベルを生成するので、毎日同じ時間にサンプル収集を繰り返します。まず、ガラスフィルターカートリッジを冷凍庫から取り出し、インジェクタポートのGCMSに入れます。吸着剤から多孔質ポリマー吸着剤に集められたヘッドスペース揮発性を放出するには、1分あたり1.2ミリリットルのヘリウムガスの流れの中で8分間、熱収集トラップを摂氏220度に加熱します。

収集した揮発性物質のクロマトグラムを比較して、一般的な再発ピークを特定します。ピーク揮発性物質を特定した後、Pherobaseを使用して、フローラルフレグランスに以前に記載されているかどうかを判断します。本研究では、GCMSからの代表的なデータがクロマトグラムとして示されている。

10分から15分のピークは花の揮発性物質です。収集された揮発性物質は、それらが以前に花の香りに記載されているかどうかを判断するためにフェロベースで参照されました。例えば、化合物数21は、保持時間が10.311のベンズアルデヒドとして同定されている。

ベンズアルデヒドは、植物群で編成されたすべての花種のリストを持つフェロベースで検索可能で、そこから香りの化合物が同定されています。蘭種は、ベンズアルデヒドが花の香りに存在すると判断されたこの種をここに示している。これまでの方法では、サンプルあたり2〜4時間かかりました。

フィルターからサンプルを除去するために溶媒を使用すると、GCMS上で溶媒ピークが生じる。これにより、化合物がゼロから3.5分に隠されます。この方法は、すべての化合物を見ることができます。