Name: 宿主-病原体応答とマウスでワクチンの有効性の評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-22T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: 学ぶ マウスを用いたワクチン有効性評価法。病原体応答と免疫反応をin vivoで測定し、細菌負荷と宿主防御メカニズムを解析する信頼性の高い実験プロトコルです。

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この作品は、オハイオ州立大学から 1R01AI125560-01 とスタートアップの資金によって支えられました。

<ol><li>Tacken, P. J., Figdor, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+antigen+delivery+and+activation+of+dendritic+cells+in+vivo%3A+steps+towards+cost+effective+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Targeted antigen delivery and activation of dendritic cells in vivo: steps towards cost effective vaccines.</a> Seminars in Immunology. 23 (1), 12-20 (2011).</li>
<li>Kilgore, P. E., Salim, A. M., Zervos, M. J., Schmitt, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pertussis%3A+Microbiology%2C+Disease%2C+Treatment%2C+and+Prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Pertussis: Microbiology, Disease, Treatment, and Prevention.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 449-486 (2016).</li>
<li>Dorji, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bordetella+Pertussis+virulence+factors+in+the+continuing+evolution+of+whooping+cough+vaccines+for+improved+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Microbiology+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Bordetella Pertussis virulence factors in the continuing evolution of whooping cough vaccines for improved performance.</a> Medical Microbiology and Immunology. 207 (1), 3-26 (2018).</li>
<li>Feldstein, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Routine+Vaccination+Coverage%2C+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Global Routine Vaccination Coverage, 2016.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 66 (45), 1252-1255 (2017).</li>
<li>Cherry, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemic+pertussis+in+2012--the+resurgence+of+a+vaccine-preventable+disease%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Epidemic pertussis in 2012--the resurgence of a vaccine-preventable disease.</a> New England Journal of Medicine. 367 (9), 785-787 (2012).</li>
<li>Celentano, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resurgence+of+pertussis+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22The+Pediatric+Infectious+Disease+Journal%22%5BJournal%5D)">Resurgence of pertussis in Europe.</a> The Pediatric Infectious Disease Journal. 24 (9), 761-765 (2005).</li>
<li>McNabb, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Summary+of+notifiable+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report+p%22%5BJournal%5D)">Summary of notifiable diseases.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report p. 54 (53), 1-92 (2007).</li>
<li>Sealey, K. L., Belcher, T., Preston, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bordetella+pertussis+epidemiology+and+evolution+in+the+light+of+pertussis+resurgence%5BTitle%5D)+AND+%22Infection%2C+Genetics%2C+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Bordetella pertussis epidemiology and evolution in the light of pertussis resurgence.</a> Infection, Genetics, and Evolution. 40, 136-143 (2016).</li>
<li>Warfel, J. M., Merkel, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+baboon+model+of+pertussis%3A+effective+use+and+lessons+for+pertussis+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Reviews+of+Vaccines%22%5BJournal%5D)">The baboon model of pertussis: effective use and lessons for pertussis vaccines.</a> Expert Reviews of Vaccines. 13 (10), 1241-1252 (2014).</li>
<li>Jennings-Gee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adjuvant+Bordetella+Colonization+Factor+A+attenuates+alum-induced+Th2+responses+and+enhances+Bordetella+pertussis+clearance+from+mouse+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">The adjuvant Bordetella Colonization Factor A attenuates alum-induced Th2 responses and enhances Bordetella pertussis clearance from mouse lungs.</a> Infection and Immunity. , (2018).</li>
<li>Sukumar, N., Mishra, M., Sloan, G. P., Ogi, T., Deora, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Bvg+phase-dependent+regulation+and+combinatorial+role+in+pathogenesis+of+two+Bordetella+paralogs%2C+BipA+and+BcfA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Differential Bvg phase-dependent regulation and combinatorial role in pathogenesis of two Bordetella paralogs, BipA and BcfA.</a> Journal of Bacteriology. 189 (10), 3695-3704 (2007).</li>
<li>Stainer, D. W., Scholte, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+chemically+defined+medium+for+the+production+of+phase+I+Bordetella+pertussis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A simple chemically defined medium for the production of phase I Bordetella pertussis.</a> Journal of General Microbiology. 63 (2), 211-220 (1970).</li>
<li>Bordet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Le+microbe+de+le+coqueluche%5BTitle%5D)+AND+%22Annales+de+l%27Institut+Pasteur%22%5BJournal%5D)">Le microbe de le coqueluche.</a> Annales de l'Institut Pasteur. 20, 731-741 (1906).</li>
<li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCook%2C+MJ+%22The+Anatomy+of+the+Laboratory+Mouse%22">The Anatomy of the Laboratory Mouse</a>. , Academic Press. (1965).</li>
<li>Sutton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+Plate+Counts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Validation+Techniques%22%5BJournal%5D)">Accuracy of Plate Counts.</a> Journal of Validation Techniques. 17 (3), 42-46 (2011).</li>
<li>Conover, M. S., Sloan, G. P., Love, C. F., Sukumar, N., Deora, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bps+polysaccharide+of+Bordetella+pertussis+promotes+colonization+and+biofilm+formation+in+the+nose+by+functioning+as+an+adhesin%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The Bps polysaccharide of Bordetella pertussis promotes colonization and biofilm formation in the nose by functioning as an adhesin.</a> Molecular Microbiology. 77 (6), 1439-1455 (2010).</li>
<li>Cattelan, N., Jennings-Gee, J., Dubey, P., Yantorno, O. M., Deora, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperbiofilm+Formation+by+Bordetella+pertussis+Strains+Correlates+with+Enhanced+Virulence+Traits%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Hyperbiofilm Formation by Bordetella pertussis Strains Correlates with Enhanced Virulence Traits.</a> Infection and Immunity. 85 (12), (2017).</li>
<li>Andreasen, C., Carbonetti, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pertussis+toxin+inhibits+early+chemokine+production+to+delay+neutrophil+recruitment+in+response+to+Bordetella+pertussis+respiratory+tract+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Pertussis toxin inhibits early chemokine production to delay neutrophil recruitment in response to Bordetella pertussis respiratory tract infection in mice.</a> Infection and Immunity. 76 (11), 5139-5148 (2008).</li>
<li>Mills, K. H., Gerdts, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+and+pig+models+for+studies+of+natural+and+vaccine-induced+immunity+to+Bordetella+pertussis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Mouse and pig models for studies of natural and vaccine-induced immunity to Bordetella pertussis.</a> Journal of Infectious Diseases. 209, Suppl 1 16-19 (2014).</li>
<li>Dunne, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+TLR2+agonist+from+Bordetella+pertussis+is+a+potent+adjuvant+that+promotes+protective+immunity+with+an+acellular+pertussis+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">A novel TLR2 agonist from Bordetella pertussis is a potent adjuvant that promotes protective immunity with an acellular pertussis vaccine.</a> Mucosal Immunology. 8 (3), 607-617 (2015).</li>
<li>Denoel, P., Godfroid, F., Guiso, N., Hallander, H., Poolman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+acellular+pertussis+vaccines-induced+immunity+against+infection+due+to+Bordetella+pertussis+variant+isolates+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Comparison of acellular pertussis vaccines-induced immunity against infection due to Bordetella pertussis variant isolates in a mouse model.</a> Vaccine. 23 (46-47), 5333-5341 (2005).</li>
<li>Marr, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+activity+of+the+Bordetella+pertussis+BrkA+autotransporter+in+the+murine+lung+colonization+model%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Protective activity of the Bordetella pertussis BrkA autotransporter in the murine lung colonization model.</a> Vaccine. 26 (34), 4306-4311 (2008).</li>
<li>Feunou, P. F., Bertout, J., Locht, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-+and+B-cell-mediated+protection+induced+by+novel%2C+live+attenuated+pertussis+vaccine+in+mice.+Cross+protection+against+parapertussis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">T- and B-cell-mediated protection induced by novel, live attenuated pertussis vaccine in mice. Cross protection against parapertussis.</a> PLoS One. 5 (4), 10178(2010).</li>
<li>Mills, K. H., Ryan, M., Ryan, E., Mahon, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+in+which+protection+correlates+with+pertussis+vaccine+efficacy+in+children+reveals+complementary+roles+for+humoral+and+cell-mediated+immunity+in+protection+against+Bordetella+pertussis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">A murine model in which protection correlates with pertussis vaccine efficacy in children reveals complementary roles for humoral and cell-mediated immunity in protection against Bordetella pertussis.</a> Infection and Immunity. 66 (2), 594-602 (1998).</li>
<li>Higgs, R., Higgins, S. C., Ross, P. J., Mills, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+to+the+respiratory+pathogen+Bordetella+pertussis%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunity to the respiratory pathogen Bordetella pertussis.</a> Mucosal Immunology. 5 (5), 485-500 (2012).</li>
<li>Alving, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+selection+of+vaccine+adjuvants%3A+animal+models+and+human+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Design and selection of vaccine adjuvants: animal models and human trials.</a> Vaccine. 20, Suppl 3 56-64 (2002).</li>
<li>Ipp, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adverse+reactions+to+diphtheria%2C+tetanus%2C+pertussis-polio+vaccination+at+18+months+of+age%3A+effect+of+injection+site+and+needle+length%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Adverse reactions to diphtheria, tetanus, pertussis-polio vaccination at 18 months of age: effect of injection site and needle length.</a> Pediatrics. 83 (5), 679-682 (1989).</li>
<li>Fessard, C., Riche, O., Cohen, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+versus+subcutaneous+injection+for+hepatitis+B+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Intramuscular versus subcutaneous injection for hepatitis B vaccine.</a> Vaccine. 6 (6), 469(1988).</li>
<li>Bergeson, P. S., Singer, S. A., Kaplan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+injections+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Intramuscular injections in children.</a> Pediatrics. 70 (6), 944-948 (1982).</li>
<li>Zhang, L., Wang, W., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+vaccine+administration+modality+on+immunogenicity+and+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Vaccines%22%5BJournal%5D)">Effect of vaccine administration modality on immunogenicity and efficacy.</a> Expert Review of Vaccines. 14 (11), 1509-1523 (2015).</li>
<li>Ross, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+Contribution+of+Th1+and+Th17+Cells+in+Adaptive+Immunity+to+Bordetella+pertussis%3A+Towards+the+Rational+Design+of+an+Improved+Acellular+Pertussis+Vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Relative Contribution of Th1 and Th17 Cells in Adaptive Immunity to Bordetella pertussis: Towards the Rational Design of an Improved Acellular Pertussis Vaccine.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003264(2013).</li>
<li>Warfel, J. M., Zimmerman, L. I., Merkel, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acellular+pertussis+vaccines+protect+against+disease+but+fail+to+prevent+infection+and+transmission+in+a+nonhuman+primate+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+USA%22%5BJournal%5D)">Acellular pertussis vaccines protect against disease but fail to prevent infection and transmission in a nonhuman primate model.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 111 (2), 787-792 (2014).</li>
<li>Allen, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+protective+immunity+against+Bordetella+pertussis+nasal+colonization+by+intranasal+immunization+with+a+vaccine-adjuvant+combination+that+induces+IL-17-secreting+TRM+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sustained protective immunity against Bordetella pertussis nasal colonization by intranasal immunization with a vaccine-adjuvant combination that induces IL-17-secreting TRM cells.</a> Mucosal Immunology. , (2018).</li>
<li>Solans, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17-dependent+SIgA-mediated+protection+against+nasal+Bordetella+pertussis+infection+by+live+attenuated+BPZE1+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">IL-17-dependent SIgA-mediated protection against nasal Bordetella pertussis infection by live attenuated BPZE1 vaccine.</a> Mucosal Immunology. , (2018).</li>
<li>Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+murine+intranasal+dosing+efficiency+using+luminescent+Francisella+tularensis%3A+effect+of+instillation+volume+and+form+of+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Visualization of murine intranasal dosing efficiency using luminescent Francisella tularensis: effect of instillation volume and form of anesthesia.</a> PLoS One. 7 (2), 31359(2012).</li>
<li>Sato, Y., Izumiya, K., Sato, H., Cowell, J. L., Manclark, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aerosol+infection+of+mice+with+Bordetella+pertussis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Aerosol infection of mice with Bordetella pertussis.</a> Infection and Immunity. 29 (1), 261-266 (1980).</li>
<li>Warfel, J. M., Beren, J., Merkel, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airborne+transmission+of+Bordetella+pertussis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Airborne transmission of Bordetella pertussis.</a> Journal of Infectious Diseases. 206 (6), 902-906 (2012).</li>
<li>Scanlon, K. M., Snyder, Y. G., Skerry, C., Carbonetti, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+Pertussis+in+the+Neonatal+Mouse+Model+Is+Associated+with+Pertussis+Toxin-Mediated+Pathology+beyond+the+Airways%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Fatal Pertussis in the Neonatal Mouse Model Is Associated with Pertussis Toxin-Mediated Pathology beyond the Airways.</a> Infection and Immunity. 85 (11), (2017).</li>
<li>Martinez de Tejada, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neither+the+Bvg-+phase+nor+the+vrg6+locus+of+Bordetella+pertussis+is+required+for+respiratory+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Neither the Bvg- phase nor the vrg6 locus of Bordetella pertussis is required for respiratory infection in mice.</a> Infection and Immunity. 66 (6), 2762-2768 (1998).</li>
<li>Higgins, S. C., Jarnicki, A. G., Lavelle, E. C., Mills, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4+mediates+vaccine-induced+protective+cellular+immunity+to+Bordetella+pertussis%3A+role+of+IL-17-producing+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">TLR4 mediates vaccine-induced protective cellular immunity to Bordetella pertussis: role of IL-17-producing T-cells.</a> Journal of Immunology. 177 (11), 7980-7989 (2006).</li>
<li>Mahon, B. P., Brady, M. T., Mills, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+against+Bordetella+pertussis+in+mice+in+the+absence+of+detectable+circulating+antibody%3A+implications+for+long-term+immunity+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Protection against Bordetella pertussis in mice in the absence of detectable circulating antibody: implications for long-term immunity in children.</a> Journal of Infectious Diseases. 181 (6), 2087-2091 (2000).</li>
<li>Karlsson, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+ELISPOT+and+cytokine+flow+cytometry+assays+for+the+enumeration+of+antigen-specific+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of the ELISPOT and cytokine flow cytometry assays for the enumeration of antigen-specific T-cells.</a> Journal of Immunological Methods. 283 (1-2), 141-153 (2003).</li>
<li>Hagen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Multi-Donor+Study+of+IFNgamma+Secretion+and+Expression+by+Human+PBMCs+Using+ELISPOT+Side-by-Side+with+ELISA+and+Flow+Cytometry+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Comparative Multi-Donor Study of IFNgamma Secretion and Expression by Human PBMCs Using ELISPOT Side-by-Side with ELISA and Flow Cytometry Assays.</a> Cells. 4 (1), 84-95 (2015).</li>
<li>Raeven, R. H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+signatures+underlying+superior+immunity+against+Bordetella+pertussis+upon+pulmonary+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular signatures underlying superior immunity against Bordetella pertussis upon pulmonary vaccination.</a> Mucosal Immunology. 11 (3), 1009(2018).</li>
</ol>

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百日咳感染症ワクチン誘発される免疫を研究するここで説明した包括的なプロトコルも様々 な他の病原体に対するホスト評価が許可されます。プロトコルは、予防接種を提供、次のワクチンの有効性を確認する方法をについて説明します病原体の挑戦、そして免疫機能の並列の郭清。他の病原体を研究するために、プロトコルに適応させる、いくつかのパラメーターは変更する必要があります。これらが含まれますが、動物麻酔、ワクチン成分、投与量、投与経路のモードに限定されません。また、投与量および興味、収穫では、選択した組織の挑戦の病原体と免疫応答の下流の評価管理のルート興味の病原のため変更可能性があります要因もあります。
百日咳感染症のマウス モデルは広く使用されて、病態とワクチン学研究16,17,18,19,</sup...

ワクチンは 20 世紀の最も偉大な公衆衛生の成果の 1 つを表すけれども、私たちまだ理解していない完全に、成功したワクチンは、防御免疫を刺激するメカニズム。分子生物学の同定 (e.g、細胞の活性化マーカー、細胞亜型の拡大、遺伝子発現のパターン) 誘発後予防接種を予測し、効果を生成するための情報の茄多を提供しています。免疫応答。宿主-病原体応答の複雑さは、体外で細胞培養システム1を使用して適切にレプリケートできません。生体内でワクチンのモデルは、付随してホスト内で複数の免疫細胞の種類を評価する設計されています。これはワクチン抗原処理とプレゼンテーション、各種サイトカイン分泌と免疫細胞の拡大を特性評価する際の利点を提供します。ここで説明したプロトコルでは、局所および全身の免疫反応の評価と関心の組織における病原体の負担の定量化をワクチンの有効性を決定するための詳細な方法を提供します。ここで紹介されている例は、百日咳(百日咳) 病原体の実験的ワクチンの有効性をテストします。
百日咳は、呼吸器疾患百日咳 (百日咳)2,3の病因は、グラム陰性菌です。感染した人 (症候性または無症候性) と密接な接触は感染、植民地化および疾患につながります。にもかかわらず、重要なグローバル ワクチン報道4百日咳は世界中多くの国で復調病と見なされます、予防可能な小児死亡5,6,7,の主な原因は、8.、2015 年に百日咳と百日咳に含まれていた国立研究所のアレルギーおよび感染症 (NIAID) 新興感染病原体のリストを与えるより良いワクチンの開発の必要性を強調長寿命の防御免疫。
現在、百日咳復活を制御する研究の活発な領域は、新規アジュバントと抗原全体細胞によって誘発される免疫応答を模倣するための最適な組み合わせを持つ次世代の無細胞百日咳ワクチン (aPV) の開発百日咳ワクチン (wPV)9。説明されたプロトコルを使用して、我々 は最近、現在 FDA 承認 aPV ボルデテラ植民地化因子 A の新規アジュバントの添加による (BcfA) の変更が百日咳細菌負荷のより効率的な削減の結果を報告しました。マウス肺10,11。この保護は、保護/th17 細胞 Th1 免疫プロファイル10ミョウバン誘起の Th1 ・ Th2 免疫応答の傾斜を伴っていた。このプロトコルは、詳細かつ包括的、ホストおよび様々 な病原体に対する免疫応答の同時評価を通じて最大の情報を取得する研究者を有効にすることです。
ここで説明したプロトコル最適な宿主免疫応答を確保するため、図 1に示す、代表的なワクチン スケジュールに従います。

<table><tbody><tr><td>2L 誘導チャンバー</td><td>Vet Equip</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>Fluriso</td><td>Vet One</td><td>V1 501017</td><td>どのブランドも適切です</td></tr><tr><td>Bordet Gengou 寒天基</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>248200</td><td></td></tr><tr><td>カゼイン</td><td>Sigma</td><td>C-7078</td><td></td></tr><tr><td>カサミノ酸</td><td>VWR</td><td>J851-500G</td><td>ストレーナー ショルテ (SS) メディアコンポーネント</td></tr><tr><td>L-グルタミン酸</td><td>研究製品 Int</td><td>G36020-500</td><td></td></tr><tr><td>L-プロリン</td><td>研究製品 Int</td><td>P50200-500</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>フィッシャー</td><td>BP358-10</td><td></td></tr><tr><td>リン酸カリウム 一塩基性</td><td>フィッシャー</td><td>BP362-1</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>フィッシャー</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>塩化マグネシウム六水和物</td><td>フィッシャー</td><td>M2670-500G</td><td></td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>フィッシャー</td><td>C75-500</td><td></td></tr><tr><td>トリスベース</td><td>フィッシャー</td><td>BP153-1</td><td></td></tr><tr><td>L-システイン HCl</td><td>フィッシャー</td><td>BP376-100</td><td>SS 培地供給</td></tr><tr><td>硫酸第一鉄七水和物</td><td>シグマ</td><td>F-7002</td><td></td></tr><tr><td>ナイアシン</td><td>研究製品 Int</td><td>N20080-100</td><td></td></tr><tr><td>グルタチオン</td><td>研究製品 Int</td><td>G22010-25</td><td></td></tr><tr><td>アスコルビン酸</td><td>研究製品 Int</td><td>A50040-500</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィック</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>シグマ</td><td>F2442-500mL</td><td>&nbsp;任意の米国源、非加熱不活</td></tr><tr><td>化ゲンタマイシン</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15710064</td><td></td></tr><tr><td>B-メルカプトエタノール</td><td>フィッシャー&nbsp;</td><td>BP176-100</td><td></td></tr><tr><td>15mL ダウンス ティッシュ グラインダー</td><td>ウィートン</td><td>357544</td><td>同様のブランドが適切です</td></tr><tr><td>コードレス ハンド ホモジナイザー</td><td>Kontes/Sigma&nbsp;</td><td>Z359971-1EA</td><td>類似のブランドが適切です</td></tr><tr><td>器具 - はさみ、カーブはさみ、鉗子、細かい鉗子、三角形のスプレッダー</td><td></td><td></td><td>任意のブランドが適切です</td></tr><tr><td>3mLシリンジ</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>15mLコニカルチューブ</td><td>フィッシャー&nbsp;</td><td></td><td></td>339651</tr><tr><td>1.5mLマイクロチューブ</td><td>Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>70umセルストレーナー</td><td>フィッシャー&nbsp;</td><td></td><td></td>22363548</tr><tr><td>60mm プレート</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>130181</td><td></td></tr><tr><td>48 ウェル組織培養プレート</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィック</td><td>08-772-1C</td><td></td></tr><tr><td>1mL インスリン シリンジ 28G1/2</td><td>フィッシャー サイエンティフィック/Excel Int.</td><td>14-841-31</td><td></td></tr><tr><td>マウスIFN-γ ELISA Ready-SET-Go!</td><td>キット Invitrogen / eBioscience</td><td>50-173-21</td><td></td></tr><tr><td>マウス IL-17 ELISA Ready-SET-Go!キット</td><td>Invitrogen / eBioscience</td><td>50-173-77</td><td></td></tr><tr><td>マウス IL-5 ELISA Ready-SET-Go!キット</td><td>Invitrogen / eBioscience</td><td>50-172-09</td><td></td></tr></tbody></table>

宿主-病原体応答とマウスでワクチンの有効性の評価

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

ワクチンは、20 のth世紀の医学の驚異です。罹患率と死亡率に激減感染症によって引き起こされ、世界の寿命の顕著な増加に貢献しています。それにもかかわらず、課題のままワクチンの有効性を決定します。出現の証拠には、百日咳(百日咳) の現在の無細胞ワクチン (aPV) が最適ではない免疫を誘導することが示唆されました。したがって、主要な挑戦 (wPV) 全細胞ワクチンの副作用なし防御免疫を誘導する次世代ワクチンの設計です。ここで保護 Th1/th17 細胞表現型に対する免疫応答を傾けます、マウスの気道から百日咳チャレンジの良いクリアランスを促進する、有望な新規アジュバントの有効性のテストに使用したプロトコルについて述べる。この資料では、マウス免疫、細菌の接種や組織の採取、免疫応答の解析のためのプロトコルについて説明します。私たちのモデルの中でこのメソッドを使用して、次世代の有望な無細胞百日咳ワクチンによって誘発される重要なメカニズムを解明した正常に。このメソッドは、ワクチンの有効性を決定するために、伝染病のモデルに適用できます。

説明モデルは、宿主-病原体相互作用中にワクチンの効率性と免疫反応を評価する方法を示しています。図 1は、免疫マウスに感染して解析のためのティッシュを収穫に使用する代表的なワクチン スケジュールを示しています。図 2は、予防接種や細菌の乳酸菌を提供する捜査官を有効にするマウスを誘導するために用いられる麻酔システムのセットアップを示します。図 3は、例外径600測定とマウスに配信される 100 希釈菌の準備 1 OD 菌浮遊を達成するために計算を示しています。図 4感染症に使用される接種材料の準備を示しています、めっき方式連続希釈、CFUs の列挙に使用例の計算のシリアル希薄をめっきに基づいてマウスに配信。図 5は、抗原特異的リコール誘発刺激ワクチン抗原 FH...

ここで生体内でワクチンの評価のためのエレガントなプロトコルの有効性と宿主免疫応答を提示します。このプロトコルは、ウイルス、細菌、ワクチンのモデルまたは寄生病原体に対する適応ことができます。

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

このプロトコルは、様々な病原体およびワクチン製剤に対する宿主応答の評価を可能にする。この技術の主な利点は、それが可含性動物モデルを使用して、生体内の細菌の負担および免疫応答の評価を可能にすることである。この手順を実証するのは、私の研究室の大学院生であるKacy Yountです。免疫のために、麻酔を受けた6〜12週齢のマウスのつま先ピンチに対する応答の欠如を確認し、関心のあるワクチンの0.1ミリリットルを有する28.5ゲージ針を備えた1ミリリットルのインスリン注射器をロードする。45度の角度で注射器を保持し、ベベルを上に向けて、針をマウスの三角に約5ミリメートル挿入し、ワクチンを注入する。針を筋肉に挿入して5~10秒間留め、注射器を180度回転させて、ベベルが下を向いてシールを作成し、ワクチンの漏れを防いでから注射部位からゆっくりと針を引き込みます。その後、完全に回復するまで、監視を使用して、そのケージにマウスを戻します。ブーストから約2週間後、免疫マウスに感染する。背胸部の擦り傷、肩甲骨と首の後ろで麻酔をかけたマウスをつかみ、マウスを直立して鼻にアクセスします。200マイクロリットルピペットチップを用いて、対象の細菌接種物の20~25マイクロリットルを動物の各ナレにゆっくりと塗布し、接種物全体が吸入されるまでマウスを保持する。次に、陰性対照として1群のマウスに等量の無菌PBSを送達する。適切な実験終点で、感染したマウス腹側を解剖板の上に置き、手足を固定します。70%エタノールで体を濡らし、骨盤の中央の腹部の下の皮膚を留め込むために鉗子を使用する。鋭利なはさみを使用して、下顎まで垂直に切り取り、腹壁から皮膚を解剖する。皮膚を死体の側面に移動して、無菌臓器収穫のための妨げられない畑を作り、肝臓またはその近くの胸部の下の無傷の腹胸を把握する。胸部に向かって腹膜を切って下消化管を露出させ、結腸を左に動かして脾臓を明らかにする。曲がった鉗子を使って脾臓をつかみ、はさみで結合組織を解剖する。次に、3ミリリットルのRPMIを含む15ミリリットルの円錐管に脾臓を入れ、氷の上に5%の胎児ウシ血清を入れる。鉗子を使用して、xyphoidプロセスで胸部を安定させ、ダイヤフラムを切開します。肺は収縮し、背骨に向かって落ちる必要があります。胸当てを取り除くために側面の胸部を切り開き、肺動脈と静脈を切って右肺の上葉を分離して取り除く。10%中性緩衝ホルマリンの15ミリリットル円錐管に少なくとも24時間固定し、左右の肺の残りのローブを分離する。その後、氷の上のPBSで1%カゼインの2ミリリットルを含む15ミリリットルの円錐管にローブを入れる。チップ付きの1ミリリットルのピペットマンを使用して、胸腔を満たす血液を採取し、血液を氷上の事前ラベル付き1.5ミリリットルマイクロ遠心チューブに移します。気管を覆う耳下腺、顎下腺、および顎下腺およびリンパ節を取り除き、気管を取り巻く保護膜を開いて取り除きます。細かい鉗子とはさみを使用して、気管を食道から慎重に分離し、他の結合組織は鎖骨の上から下顎骨の底まで慎重に分離する。気管を保持するために鉗子を使用し、鎖骨の上部に気管を切断します。気管を引き下げて弾力性を最大限に引き出し、下顎の底部の気管を喉頭のすぐ上に切り、約1センチメートルの組織を単離する。その後、PBSの氷の上に1%カゼインの0.3ミリリットルを含む、事前にラベル付けされた1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブに臓器を入れる。今、鼻への明確なアクセスのためにマウスを回し、70%エタノールで頭をスプレーします。手動で頭蓋骨の真後ろに動物をつかみ、鼻の底から始まり、上に移動し、鼻の柔らかい肉を切り取るためにはさみを使用しています。鼻の周りから毛皮、皮膚、ウィスカーを取り除き、曲線を下向きにしてナレスにハサミの先端を挿入します。目に向かって鼻の通路を切り開き、V状の形成を作り出す。次いで、微細な鉗子を使用して鼻中隔を採取し、軟部組織を形成内に集め、PBSの1%カゼインの0.3ミリリットルを含む1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離チューブに、氷の上に組織を入れる。肺組織を処理するために、肺サンプルチューブの内容物全体を無菌15ミリリットルのDounceホモジナイザーに移し、害虫を使用して組織を均質化する。組織の大きな粒子が残らないまで試料を解体し、均質化懸濁液を元の15ミリリットルチューブに戻す。コロニー形成ユニットをめっきする0.3ミリリットルのアリコートを取り除き、残りのホモジネートを遠心分離により回収する。アリコート0.5ミリリットルの上清を、イライザによるサイトカイン発現分析まで摂氏20度で貯蔵するための事前ラベル付きマイクロ遠心チューブに入れた。次いで、希釈1回当たり0.9ミリリットルの無菌PBSで均質化された肺懸濁液を確保した0.1ミリリットルのアリコートを連続的に希釈し、滅菌三角スプレッダーを使用して、事前にラベル付けされた10%ボルデット・ゲンゴウプラスストレプトマイシンプレートに各経験的に選択した希釈液の0.1ミリリットルをプレートする。ここで、代表的な光学密度600の測定および計算は、細菌懸濁液の1つの光学密度を達成し、マウスに送達される100倍の希釈細菌接種を調製し、図示される。ワクチン抗原刺激の7日後、併用ワクチン群から免疫化された脾臓細胞はインターフェロンガンマを産生し、IL17は、IL5を大幅に調節する一方で、Tヘルパーを促進し、B百日感染時の免疫応答の17分極化を促進する。B百日症感染マウスの気道の問題から回収された細菌のコロニー形成ユニット列挙体は、対象となるワクチンの保護効果を評価するために使用することができる。組織壊死を避けるためにできるだけ迅速かつ効率的に作業し、回収された細菌の生存率を維持するために氷の上に単離された組織を保存します。ELISpotフローサイトメトリー、DNAおよびRNAの単離を行い、免疫細胞、分析物の産生を評価し、エピジェネティックおよびトランスクリプト分析を可能にします。ボルデテラpertussisなどの感染因子と協力する場合は、適切なPPEを着用し、病原体の伝染を防ぐために認定バイオセーフティキャビネットで作業することを忘れないでください。このプロトコルは、気道、特に鼻咽頭からのCFU列挙を詳述する。ワクチンおよび感染症分野における、鼻の細菌コロニー形成を標的にすることについての質問に取り組む。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオでは、マウスの百日咳菌感染に対する無細胞性百日咳ワクチンの有効性をテストするためのプロトコルについて説明します。ワクチン接種後、マウスを感染させ、その組織ホモジネートを培養して、ワクチン誘発性防御免疫の読み出しとして細菌コロニーを分析しました。...

マウスモデルにおける細菌感染に対するワクチン誘導性免疫の評価

病原体感染に対する宿主の免疫応答が厳密に調節されたプロセスである。マウスにおけるリポ多糖肺露光モデルを利用し、それは疾患の病因に関連付けられている複雑な機構の高解像度の評価を実施することができる。...

マウスにおける宿主の免疫応答を評価する口腔咽頭気管内PAMP管理および気管支肺胞の活用

動物モデルは、慢性炎症の発展に貢献宿主および病原体特異的なメカニズムを定義する上で非常に貴重なツールであることが分かっている。ここでは、ローカルおよび全身の部位での炎症の進行を評価するために、ヒト病原体ポルフィロモナス·ジンジバリスとディテールの方法論で経口感染のマウスモデルを記述する。...

局所および全身所における病原体により誘導される慢性炎症のためのマウスモデル

ここでは、マウスモデルにおけるBCGによる鼻腔内および皮下免疫によって誘発される防御効果と肺免疫応答を比較するための方法論について詳しく説明します。私たちの結果は、肺ワクチン接種の利点を示しており、ワクチン誘発性防御におけるIL17媒介反応の役割を示唆しています。...

防御効力および肺免疫応答は、マウスに皮下および鼻腔内BCG投与後の

このプロトコルは、 リステリア・モノサイトゲネスのEGD株と（リステリア菌）を C57BL / 6Jマウスに接種すると、ナチュラルキラー（NK）細胞、ナチュラルキラーT（NKT）細胞によるインターフェロンγ（IFN-γ）反応を測定する方法を説明しますそして、適応Tは、感染後のリンパ球。このプロトコルは、病原体の改変されたLD 50用量での感染後のマウスの生存の研究を実施する方法について説明します。...

と実験感染<em&gt;リステリア菌</em&gt;ホストインターフェロンγ応答を研究するためのモデルとして、

インフルエンザ A ウイルス (IAVs) は、重要な人間の呼吸器病原体です。IAVs の病原性を理解して新しいワクチン接種のアプローチの臨床テストを実行するには、人間の生理を模倣した動物モデルが必要です。ここでは、IAV...

感染症のマウスモデルでの A 型インフルエンザ ウイルス研究

標準的な免疫学的技術のアプリケーションをご紹介 (CFSE 染色 OT-私増殖) 急速に補助を介した細胞傷害性 T リンパ球 (CTL) の生成をモニターするつもり体内。CTL...

急速なIn Vivo評価補助の細胞傷害性 T リンパ球生成機能のワクチン開発のため

皮膚が負傷したに生得の免疫反応のリアルタイム検出とマウスの黄色ブドウ球菌感染症のためのアプローチを説明します。比較する LysM EGFP でマウス (蛍光好中球を所有) する LysM EGFP...

マウスのモデルを評価する生得の免疫反応黄色ブドウ球菌感染症

本論文では、インフルエンザウイルス感染のマウスモデルにおけるTfhおよびGC...

マウスにおけるインフルエンザAウイルス感染時のT濾胞ヘルパー細胞と胚葉センター応答の評価

ここでは、独自に設計された加温/抑制装置を用いたげっ歯類の尾静脈注射に対する効果的かつ効率的な方法を提示します。血管拡張の開始を合理化し、プロセスを抑制することによって、このプロトコルは、最小限の苦痛を伴う動物の大規模なグループの正確かつタイムリーな静脈注射を可能にする。...

マウス真菌敗血症モデルにおける効率的な尾静脈注射のための現代的な温暖化/抑制装置

本プロトコルは、新規ナノエマルジョンアジュバントワクチンの物理的特性、免疫応答、および インビボ...

メチシリン耐性 黄色ブドウ球菌 (MRSA)感染に対するナノエマルジョンアジュバントワクチンの免疫応答の評価

学ぶ マウスを用いたワクチン有効性評価法。病原体応答と免疫反応をin vivoで測定し、細菌負荷と宿主防御メカニズムを解析する信頼性の高い実験プロトコルです。

宿主-病原体応答とマウスでワクチンの有効性の評価

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