Name: 準備とヒト以外の霊長造血幹・前駆細胞の遺伝子の改変 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 16 s
Description: 学ぶ ヒト以外の霊長類骨髄からCD34+細胞を分離し、レンチウイルスベクターで遺伝子改変する方法。48時間で自家輸注可能な細胞製品を調製し、遺伝子治療の効率と安全性を評価する前臨床モデルを提供します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者は、ヘレン ・ クロフォードがこの原稿、グラフィック デザインのためのジム Woolace とベロニカ ネルソン & Devikha チャンドラセ カラン プロトコルの開発に参加するための準備をありがちましょう。このプロトコルの開発は、NIH アレルギー研究所と感染症 (R01 AI135953 と H.P.K. を AI138329) と国立心臓、肺、血液研究所 (R01 HL136135、HL116217、P01 HL122173、U19 からの補助金によって支えられました。H.P.K. に HL129902)、NIH P51 OD010425 の一部と、NIH/NCI 癌センター、サポート助成金 P30 CA015704。H.P.K. はマーキー分子医学の調査官、細胞・遺伝子治療がん研究とフレッドのハッチ寄附のホセ ・ カレーラス/E. ドナル ・ トーマス寄付研究部門の就任の受け手としてサポートを受け取った。

<ol><li>Radtke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distinct+hematopoietic+stem+cell+population+for+rapid+multilineage+engraftment+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">A distinct hematopoietic stem cell population for rapid multilineage engraftment in nonhuman primates.</a> Science Translational Medicine. 9 (414), eaan1145 (2017).</li>
<li>Majeti, R., Park, C. Y., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+hierarchy+of+multipotent+hematopoietic+progenitors+in+human+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of a hierarchy of multipotent hematopoietic progenitors in human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 1 (6), 635-645 (2007).</li>
<li>Notta, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+single+human+hematopoietic+stem+cells+capable+of+long-term+multilineage+engraftment%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Isolation of single human hematopoietic stem cells capable of long-term multilineage engraftment.</a> Science. 333 (6039), 218-221 (2011).</li>
<li>Hoggatt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+mobilization+reveals+a+highly+engraftable+hematopoietic+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Rapid mobilization reveals a highly engraftable hematopoietic stem cell.</a> Cell. 172 (1-2), 191-204 (2018).</li>
<li>Chandrasekaran, D., Nakamoto, B., Watts, K. L., Kiem, H. P., Papayannopoulou, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+promising+nonmyeloablative+conditioning+regimens+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Modeling promising nonmyeloablative conditioning regimens in nonhuman primates.</a> Human Gene Therapy. 25 (12), 1013-1022 (2014).</li>
<li>Humbert, O., Peterson, C. W., Norgaard, Z. K., Radtke, S., Kiem, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nonhuman+primate+transplantation+model+to+evaluate+hematopoietic+stem+cell+gene+editing+strategies+for+beta-hemoglobinopathies.+Molecular+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+%26+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">A nonhuman primate transplantation model to evaluate hematopoietic stem cell gene editing strategies for beta-hemoglobinopathies. Molecular Therapy.</a> Methods & Clinical Development. 8, 75-86 (2018).</li>
<li>Peterson, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+impact+of+transplantation+on+peripheral+and+tissue-associated+viral+reservoirs%3A+Implications+for+HIV+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Differential impact of transplantation on peripheral and tissue-associated viral reservoirs: Implications for HIV gene therapy.</a> PLoS Pathogens. 14 (4), e1006956-e1006956 (2018).</li>
<li>Zhen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+persistence+and+function+of+hematopoietic+stem+cell-derived+chimeric+antigen+receptor+T+cells+in+a+nonhuman+primate+model+of+HIV%2FAIDS%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Long-term persistence and function of hematopoietic stem cell-derived chimeric antigen receptor T cells in a nonhuman primate model of HIV/AIDS.</a> PLoS Pathogens. 13 (12), e1006753(2017).</li>
<li>Moffett, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hit-and-run+programming+of+therapeutic+cytoreagents+using+mRNA+nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Hit-and-run programming of therapeutic cytoreagents using mRNA nanocarriers.</a> Nature Communications. 8 (1), 389(2017).</li>
<li>Burtner, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+injection+of+a+foamy+virus+vector+to+correct+canine+SCID-X1%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Intravenous injection of a foamy virus vector to correct canine SCID-X1.</a> Blood. 123 (23), 3578-3584 (2014).</li>
<li>Evans, D. T., Silvestri, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonhuman+primate+models+in+AIDS+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+HIV+and+AIDS%22%5BJournal%5D)">Nonhuman primate models in AIDS research.</a> Current Opinion in HIV and AIDS. 8 (4), 255-261 (2013).</li>
<li>Taraseviciute, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor+T+cell-mediated+neurotoxicity+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor T cell-mediated neurotoxicity in nonhuman primates.</a> Cancer Discovery. 8 (6), 750-763 (2018).</li>
<li>McGary, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CTLA-4%28%2B%29PD-1%28-%29+memory+CD4%28%2B%29+T+cells+critically+contribute+to+viral+persistence+in+antiretroviral+therapy-suppressed%2C+SIV-infected+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">CTLA-4(+)PD-1(-) memory CD4(+) T cells critically contribute to viral persistence in antiretroviral therapy-suppressed, SIV-infected rhesus macaques.</a> Immunity. 47 (4), 776-788 (2017).</li>
<li>Beard, B. C., Adair, J. E., Trobridge, G. D., Kiem, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+genomic+mapping+of+vector+integration+sites+in+gene+therapy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">High-throughput genomic mapping of vector integration sites in gene therapy studies.</a> Methods in Molecular Biology. 1185, 321-344 (2014).</li>
<li>Zonari, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+ex+vivo+engineering+and+expansion+of+highly+purified+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cell+populations+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Efficient ex vivo engineering and expansion of highly purified human hematopoietic stem and progenitor cell populations for gene therapy.</a> Stem Cell Reports. 8 (4), 977-990 (2017).</li>
<li>Doulatov, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+map+of+the+human+progenitor+hierarchy+shows+the+origin+of+macrophages+and+dendritic+cells+in+early+lymphoid+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Revised map of the human progenitor hierarchy shows the origin of macrophages and dendritic cells in early lymphoid development.</a> Nature Immunology. 11 (7), 585-593 (2010).</li>
<li>Fares, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cord+blood+expansion.+Pyrimidoindole+derivatives+are+agonists+of+human+hematopoietic+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cord blood expansion. Pyrimidoindole derivatives are agonists of human hematopoietic stem cell self-renewal.</a> Science. 345 (6203), 1509-1512 (2014).</li>
<li>Gori, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+promote+expansion+of+long-term+engrafting+marrow+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells promote expansion of long-term engrafting marrow hematopoietic stem and progenitor cells in primates.</a> Stem Cells Translational Medicine. 6 (3), 864-876 (2017).</li>
<li>Peterson, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+multilineage+engraftment+of+autologous+genome-edited+hematopoietic+stem+cells+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Long-term multilineage engraftment of autologous genome-edited hematopoietic stem cells in nonhuman primates.</a> Blood. 127 (20), 2416-2426 (2016).</li>
<li>Peterson, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+polyclonal+engraftment+of+Cal-1+gene-modified+cells+and+in+vivo+selection+after+SHIV+infection+in+a+nonhuman+primate+model+of+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy.+Methods+%26+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">Multilineage polyclonal engraftment of Cal-1 gene-modified cells and in vivo selection after SHIV infection in a nonhuman primate model of AIDS.</a> Molecular Therapy. Methods & Clinical Development. 3, 16007(2016).</li>
<li>Thompson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+in+patients+with+transfusion-dependent+beta-thalassemia%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Gene therapy in patients with transfusion-dependent beta-thalassemia.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (16), 1479-1493 (2018).</li>
<li>Eichler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem-cell+gene+therapy+for+cerebral+adrenoleukodystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem-cell gene therapy for cerebral adrenoleukodystrophy.</a> The New England Journal of Medicine. 377 (17), 1630-1638 (2017).</li>
<li>Paul, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+enrichment+of+gene-modified+primary+T+cells+via+CCR5-targeted+integration+of+mutant+dihydrofolate+reductase%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy.+Methods+%26+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">Efficient enrichment of gene-modified primary T cells via CCR5-targeted integration of mutant dihydrofolate reductase.</a> Molecular Therapy. Methods & Clinical Development. 5 (9), 347-357 (2018).</li>
<li>Levine, B. L., Miskin, J., Wonnacott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+manufacturing+of+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy.+Methods+%26+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">Global manufacturing of CAR T cell therapy.</a> Molecular Therapy. Methods & Clinical Development. 4, 92-101 (2017).</li>
<li>Masiuk, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+gene+therapy+efficiency+through+the+enrichment+of+human+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Improving gene therapy efficiency through the enrichment of human hematopoietic stem cells.</a> Molecular Therapy. 25 (9), 2163-2175 (2017).</li>
<li>Trobridge, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transduction+of+pigtailed+macaque+hematopoietic+repopulating+cells+with+HIV-based+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficient transduction of pigtailed macaque hematopoietic repopulating cells with HIV-based lentiviral vectors.</a> Blood. 111 (12), 5537-5543 (2008).</li>
<li>Beard, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+and+stable+MGMT-mediated+selection+of+long-term+repopulating+stem+cells+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Efficient and stable MGMT-mediated selection of long-term repopulating stem cells in nonhuman primates.</a> Journal of Clinical Investigation. 120 (7), 2345-2354 (2010).</li>
<li>Horn, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+lentiviral+gene+transfer+to+canine+repopulating+cells+using+an+overnight+transduction+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficient lentiviral gene transfer to canine repopulating cells using an overnight transduction protocol.</a> Blood. 103 (10), 3710-3716 (2004).</li>
<li>Adair, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semi-automated+closed+system+manufacturing+of+lentivirus+gene-modified+haematopoietic+stem+cells+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Semi-automated closed system manufacturing of lentivirus gene-modified haematopoietic stem cells for gene therapy.</a> Nature Communications. 7, 13173(2016).</li>
<li>Kutner, R. H., Zhang, X. Y., Reiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+concentration+and+titration+of+pseudotyped+HIV-1-based+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Production, concentration and titration of pseudotyped HIV-1-based lentiviral vectors.</a> Nature Protocols. 4 (4), 495-505 (2009).</li>
<li>Salmon, P., Trono, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+titration+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">Production and titration of lentiviral vectors.</a> Current Protocols in Human Genetics. 54 (1), (2007).</li>
<li>Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+lentiviral+vector+titration+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Comparison of lentiviral vector titration methods.</a> BMC Biotechnology. 6, 34(2006).</li>
<li>Kiem, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+gene+transfer+into+baboon+marrow+repopulating+cells+using+recombinant+human+fibronectin+fragment+CH-296+in+combination+with+interleukin-6%2C+stem+cell+factor%2C+FLT-3+ligand%2C+and+megakaryocyte+growth+and+development+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Improved gene transfer into baboon marrow repopulating cells using recombinant human fibronectin fragment CH-296 in combination with interleukin-6, stem cell factor, FLT-3 ligand, and megakaryocyte growth and development factor.</a> Blood. 92 (6), 1878-1886 (1998).</li>
<li>Morton, W. R., Knitter, G. H., Smith, P. M., Susor, T. G., Schmitt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternatives+to+chronic+restraint+of+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Veterinary+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Alternatives to chronic restraint of nonhuman primates.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 191 (10), 1282-1286 (1987).</li>
<li>Noser, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclosporine+increases+human+immunodeficiency+virus+type+1+vector+transduction+of+primary+mouse+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Cyclosporine increases human immunodeficiency virus type 1 vector transduction of primary mouse cells.</a> Journal of Virology. 80 (15), 7769-7774 (2006).</li>
<li>Uchida, N., Hsieh, M. M., Washington, K. N., Tisdale, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transduction+of+human+hematopoietic+repopulating+cells+with+a+chimeric+HIV1-based+vector+including+SIV+capsid%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Efficient transduction of human hematopoietic repopulating cells with a chimeric HIV1-based vector including SIV capsid.</a> Experimental Hematology. 41 (9), 779-788 (2013).</li>
<li>Cornetta, K., Anderson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protamine+sulfate+as+an+effective+alternative+to+polybrene+in+retroviral-mediated+gene-transfer%3A+implications+for+human+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Protamine sulfate as an effective alternative to polybrene in retroviral-mediated gene-transfer: implications for human gene therapy.</a> Journal of Virological Methods. 23 (2), 187-194 (1989).</li>
<li>Goerner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+granulocyte+colony-stimulating+factor+during+retroviral+transduction+on+fibronectin+fragment+CH-296+enhances+gene+transfer+into+hematopoietic+repopulating+cells+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The use of granulocyte colony-stimulating factor during retroviral transduction on fibronectin fragment CH-296 enhances gene transfer into hematopoietic repopulating cells in dogs.</a> Blood. 94 (7), 2287-2292 (1999).</li>
<li>Dao, M. A., Hashino, K., Kato, I., Nolta, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesion+to+fibronectin+maintains+regenerative+capacity+during+ex+vivo+culture+and+transduction+of+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Adhesion to fibronectin maintains regenerative capacity during ex vivo culture and transduction of human hematopoietic stem and progenitor cells.</a> Blood. 92 (12), 4612-4621 (1998).</li>
<li>North, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2+regulates+vertebrate+haematopoietic+stem+cell+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2 regulates vertebrate haematopoietic stem cell homeostasis.</a> Nature. 447 (7147), 1007-1011 (2007).</li>
<li>Goessling, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2+enhances+human+cord+blood+stem+cell+xenotransplants+and+shows+long-term+safety+in+preclinical+nonhuman+primate+transplant+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2 enhances human cord blood stem cell xenotransplants and shows long-term safety in preclinical nonhuman primate transplant models.</a> Cell Stem Cell. 8 (4), 445-458 (2011).</li>
<li>Booth, C., Gaspar, H. B., Thrasher, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treating+immunodeficiency+through+HSC+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Treating immunodeficiency through HSC gene therapy.</a> Trends in Molecular Medicine. 22 (4), 317-327 (2016).</li>
<li>Humbert, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+immune+reconstitution+of+SCID-X1+canines+after+G-CSF%2FAMD3100+mobilization+and+in+vivo+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">Rapid immune reconstitution of SCID-X1 canines after G-CSF/AMD3100 mobilization and in vivo gene therapy.</a> Blood Advances. 2 (9), 987-999 (2018).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

LV ベクトル工学は遺伝子は CD34 など細胞の種類を変更する最も特徴付けられるメソッド+ HSPCs、その後移植生体内で。ここで説明されているプロトコルは、体内では、長期的な永続化遺伝子の HSPCs の数を最大化し、様々 な悪性、感染症、遺伝的疾患を持つ患者に臨床上の利益を提供する設計されています。遺伝子編集戦略は、過去 10 年間に浮上して、LV 変更セルが最高の in vitro、動物モデル、患者1,8,20,21,22で検討します。
このプロトコルは、純粋な CD34 の濃縮と豊富な経験に基づく+ HSPCs (すなわち、> CD34 の 80% 並べ替えセル製品における細胞の+ )...

幹細胞遺伝子治療は、人間の病理学の広い範囲に対処する強力な手段です。HSPC 遺伝子療法は i) 比較的容易 ii) 細胞表面形質に関すると ex vivo 文化パラメーターが利用できますし、フィールドとして展開、知識豊富な患者からこれらの細胞を収集のための特に魅力的なアプローチiii) それは興味の様々 な疾患に合わせた遺伝子変更戦略の増えツールボックスと科学者を提示します。我々 は積極的に、HSPC 生物学、インビボ モデルで臨床、遺伝子組み換え HSPCs の生着と関連する患者への応用の基礎科学を含めて、複数の角度から HSPC 遺伝子治療の方法を調査しています。私たちと他の人が機能的に異なる HSPC サブセット1,2,3動員、HSPC 収量と最小限に抑えながら生着を最大限ご利用いただけますレジメンの細胞表面形質を特徴します。毒性4、5、および遺伝子変更と幅広い悪性、遺伝、および感染症6,7,8、調整されている遺伝子編集の戦略 9,10。機能と遺伝子組み換え HSPCs の生着は、小型と大型動物モデル、マウス、犬、NHPs など数で評価できます。特に、人間・ NHP 細胞 CD34 など CD90、HSPC セル表面蛋白質のために特定の抗体など多く試薬をどちらも使用できますので、NHP モデルも有利。さらに、マウスと対照をなして NHPs など大型の動物を許可する遺伝子の改変の規模の近い近似臨床に必要です。最後に、NHPs HIV-1 感染11など人間の病理学のモデリングのためのゴールド スタンダードは、抗がん剤の候補者と反 HIV 免疫療法12,13の新興国のモデル系。
このプロトコルの目的は、NHP HSPC 注入製品の準備浄化、遺伝子の変更、およびメソッドの概要を説明することです。このプロトコルの範囲外は、以前、これらの製品はすべて造血系統を生じ、疾患モデル1の広い範囲の治療効果を提供すること、自家 NHP ホストで接がを示しています。また接が HSPCs のクローナリティの特徴して動態、人身売買、および個々 の HSPCs と彼らの子孫、次移植1,14の表現型を追跡するためのプラットフォームを構築します。紹介した方法は、以下の目標に開発されている: 非常に純粋な HSPCs および長期接が HSC サブセット、ii) ex vivo 文化の中に原始的な造血を維持し、iii) 効率的に遺伝子変更いずれかの一括 HSPCs を分離するには i) または長期的な接が HSC のサブセット。蛍光活性化セル (FACS)、表現型/機能的異なる HSPC 集団、多くのグループ2,15の方法に一貫性のあるを分離するための並べ替えだけでなく、磁気援用細胞選別 (MAC) を用いてください。 16。文化の原始の HSCs のメンテナンス (すなわち、リンパ性と骨髄性のサブセットを区別を生じさせる完全にコミットの前駆細胞にこれらの細胞の分化を最小限に抑える) ここで説明したプロトコルの重要な一面です。我々 は以前、原始的な表現型17,18, ここでは、そのまま HSPCs を展開するアプローチを特徴とが最小限 (48 h) 経由で造血を維持することに焦点を当てて、ex vivo 文化定義プロトコルについて述べる。
HSPCs と HSC の効率的な変更のサブセットはこのプロトコルの中心的な目標。報告したいくつかのアプローチの中で 2 つは、これまでで最も研究の臨床試験: LV を介した遺伝子の改変及びヌクレアーゼを介した遺伝子1,6,19を編集します。遺伝子編集戦略は特に興味の対象となる遺伝子を変更するヌクレアーゼ プラットフォームの数は 1 つを使用して、たとえば、C-C ケモカイン受容体は、治療のための HIV 感染症7,19または Bcl11A 治療のため 5 (CCR5) を入力赤血球の溶血6。ここでは、LV を介した遺伝子の改変、ゲノム1,8,20にで semirandomly、トランスジェニック貨物統合に着目します。LV のアプローチの主な利点は、(最大 8 または 9 の kilobases) 遺伝物質の大量に配信する機能です。遺伝子編集戦略は、ドナー相同組換え (HDR) によってのみ指定した軌跡で統合する興味の遺伝子をターゲットに開発されている、これらのメソッド必要がありますさらに in vitro および小さい動物モデルの開発。対照的に、LV ベクトル広く使用されている NHPs と患者21,22。重要なは、使用する下塗り開始 HSPC ソースとして BM、ここでは、説明されたプロトコル容易かつ広範に適応できます、たとえば、PBSCs を分離します。前述のように、我々 を活用 NHPs と人間両方の種に適用される試薬を使用しての間の遺伝的類似性が高いです。最後に、このアプローチは、すなわち T 細胞12,23,24; 他の造血のサブセットを変更するのに適応されています。効果的な T 細胞免疫療法アプローチの出現は、このプロトコルで利用される同じ LV プラットフォーム上大きく頼っています。これらのメソッドは、HSPC 生物学または LV を介した遺伝子の改変に興味がある研究者に適しています。たとえば、HSPC 浄化のプロトコルがここで紹介される可能性があります小説 HSC 濃縮サブセットを特徴付ける1,15,25を前述のよう。同様に、ここで示される方法は同様に可能性があります LV 伝達に適用およびさらに多数の他のセルタイプおよび両方生体外でそして生体内でモデルの実験の質問のために開発します。
要約すると、隔離および遺伝子 NHP HSPCs を変更する方法を提案する.これらのメソッドは、他の種と HSPCs の他のソースのために容易に適応することができます。この徹底的に吟味プロトコルは、多くの人間の病気の効果的な治療法のモデル化の大きい約束を示します。

<table><tbody><tr><td>Stemspam SFEM II ("HSPC") 培地</td><td>StemCell</td><td>09655</td><td></td></tr><tr><td>ハンクの平衡塩溶液</td><td>Gibco</td><td>14175095</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシ</td>ド <td>Sigma Aldrich</td><td>D2650-100</td><td></td></tr><tr><td>100% エタノール</td><td>デコン ラボ</td><td>M18027161M</td><td></td></tr><tr><td>シクロスポリン</td><td>Sigma</td><td>30024-25MG</td><td></td></tr><tr><td>500 mM EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575-038</td><td></td></tr><tr><td>熱不活化ウシ胎児血清</td><td>Sigma Aldrich</td><td>PS-0500-A</td><td></td></tr><tr><td>CH-296/ RetroNectin (2.5 mL, 1 & micro;g/&micro;L)</td><td>TaKaRA</td><td>T100B</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td></td><td>Σ A7906-100g</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td></td><td>Σ H9897</td><td></td></tr><tr><td>ラット抗マウス IgM 磁気ビーズ</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-047-301</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒト幹細胞因子 (SCF)</td><td>Peprotech</td><td>300-07</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒトトロンボポエチン (TPO)</td><td>Peprotech</td><td>300-18</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒトFMS様チロシンキナーゼ3(FLT-3)</td><td>Peprotech</td><td>300-19</td><td></td></tr><tr><td>硫酸プロタミン</td><td>Sigma</td><td>P-4505</td><td></td></tr><tr><td>14 mL ポリプロピレン丸底チューブ</td><td>コーニング</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>コロニーゲル 1402</td><td>ReachBio</td><td>1402</td><td></td></tr><tr><td>QuadroMACS セパレーター</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>MACS L25 カラム</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>10 mM PGE2</td><td>ケイマンケミカル</td><td>14753-5mg</td><td></td></tr><tr><td>TC 処理済み T-75 フラスコ</td><td>Bioexpress</td><td>T-3001-2</td><td></td></tr><tr><td>非 TC 処理済み T-75 フラスコ</td><td>サーモフィッシャー</td><td>13680-57</td><td></td></tr><tr><td>20 mL シリンジ</td><td>BD Biosciences</td><td>302830</td><td></td></tr><tr><td>16.5 G ニードル</td><td>BD精密</td><td>305198</td><td></td></tr><tr><td>シリンジチップキャップ</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>305819</td><td></td></tr><tr><td>QuickExtract DNA溶液</td><td>震源QE09050</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8チューブストリップキャップ PCRチューブ USA</td><td>サイエンティフィ</td>ック <td>1402-2708</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルサーモサイクラー</td><td>サーモフィッシャー</td><td>4375786</td><td></td></tr><tr><td>プレセパレーションフィルター</td><td>ミルテニーバイオテック</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>ストレーナー、セル;BDファルコン;不妊;ナイロンメッシュ;メッシュサイズ:70um;カラー:ホワイト;50/CS</td><td>fisher scientific</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Ultracomp ebeads</td><td>eBioscience</td><td>01-2222-42</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix チューブ ローテーター</td><td>Miltenyi</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>3 mL ルアーロックシリンジ</td><td>サーモフィッシャー</td><td>14823435</td><td></td></tr><tr><td>35 mm x 10 mm 細胞培養ディッシュ</td><td>コーニング</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>60 mm x 15 mm 細胞培養ディッシュ</td><td>コーニング</td><td></td><td></td>430196</tr><tr><td>150 mm x 25 mm 細胞培養皿</td><td>Corning</td><td>430599</td><td></td></tr><tr><td>非 TC 処理フラスコ</td><td>Falcon</td><td>353133</td><td></td></tr><tr><td>Qiagen DNA extraction</td><td>Qiagen</td><td>51104</td><td></td></tr><tr><td>PE Anti-Human CD90 (Thy1) Clone:5E10</td><td>Biolegend</td><td>328110</td><td></td></tr><tr><td>PE-CF594 Mouse Anti-Human CD34 Clone:563</td><td>BD horizon</td><td>562449</td><td></td></tr><tr><td>APC-H7 マウス抗ヒト CD45RA クローン: 5H9</td><td>BD Pharmingen</td><td>561212</td><td></td></tr><tr><td>V450 マウス 抗 NHP CD45 クローン: d058-1283</td><td>BD Biosciences</td><td>561291</td><td></td></tr><tr><td>自家血清</td> 自<td>家宿主から採取され、CD34+ HSPCs N/A</td><td></td> <td>の動員および収集前に凍結保存されました。ビアード、BC他。非ヒト霊長類における長期再増殖幹細胞の効率的かつ安定したMGMT媒介選択。臨床調査ジャーナル。120(7)、2345-2354、(2010)。</td></tr><tr><td>Virus-Conditioned Media (VCM)</td><td>Kiem Lab, FHCRC Co-operative Center for Excellence in Hematology (CCEH)</td><td>N/A</td><td>Beard, B. C. et al. 非ヒト霊長類における長期再増殖幹細胞の効率的で安定したMGMT媒介選択.臨床調査ジャーナル。120(7)、2345-2354、(2010)。</td></tr><tr><td>Anti-CD34 antibody, Clone 12.8</td><td>Kiem Lab</td><td>N/A</td><td>Beard, B. C. et al. 非ヒト霊長類における長期再増殖幹細胞の効率的で安定したMGMT媒介選択。臨床調査ジャーナル。120(7)、2345-2354、(2010)。</td></tr><tr><td>Lenti Fプライマー:AGAGATGGGTGCGAGAGCGTCA</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>N / A</td><td>Peterson、C. W. et al. AIDSの非ヒト霊長類モデルにおけるCal-1遺伝子改変細胞の多系統ポリクローナル生着とSHIV感染後の生体内選択。Mol Ther Methods、Clin Dev.、3、16007、(2016年)。</td></tr><tr><td>Lenti Rプライマー:TGCCTTGGTGGGTGCTACTCCTAA</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>N / A</td><td>Peterson、C. W. et al. AIDSの非ヒト霊長類モデルにおけるCal-1遺伝子改変細胞の多系統ポリクローナル生着とSHIV感染後の生体内選択。Mol Ther Methods、Clin Dev.、3、16007、(2016年)。</td></tr><tr><td>Actin Fプライマー:TCCTGTGGCACTCACGAAACT</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>N / A</td><td>Peterson、C. W. et al. AIDSの非ヒト霊長類モデルにおけるCal-1遺伝子改変細胞の多系統ポリクローナル生着とSHIV感染後の生体内選択。Mol Ther Methods、Clin Dev.、3、16007、(2016年)。</td></tr><tr><td>Actin Rプライマー:GAAGCATTTGCGGTGGACGAT</td><td>Integrated DNA Technologies</td><td>N/A</td><td>Peterson, C. W. et al. Multilineage polyclonal engrubberment of Cal-1 gene-modified cells and in vivo selection after SHIV infection in a nonhuman primate model of AIDS.Mol Ther Methods、Clin Dev.、3、16007、(2016年)。</td></tr></tbody></table>

準備とヒト以外の霊長造血幹・前駆細胞の遺伝子の改変

Preparation and Gene Modification of Nonhuman Primate Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

造血幹・前駆細胞 (HSPC) 移植白血病の基礎療法とほぼ半世紀、他の癌にされている、ひと免疫不全ウイルス (HIV-1) 感染の唯一の既知の治療法の基礎となるの巨大な約束を示していますベータサラセミアなど遺伝性疾患の治療。当社グループは、同じ試薬と診療所に適用される技術の多くを最適化するために科学者を許可する (NHPs)、霊長類におけるモデル HSPC 遺伝子治療プロトコルを開発しました。ここで、CD34 を浄化するための方法を説明+ HSPCs と発動を促された骨髄 (BM) から長期保存する造血幹細胞 (HSC) サブセット。他の HSPC のソース (例えば、動員末梢血幹細胞 [PBSCs]) の浄化のため、同一の手法を採用できます。説明は 2 日間プロトコルは、細胞精製、培養、レンチ ウイルス (LV) と変更され自己ホストに注入のために準備です。成功のキー読み出し CD34 の純度は、+ HSPC 人口、精製 HSPCs の能力が半固体のメディア、そして最も重要なは、遺伝子改造効率形態的に異なるコロニーを形成します。HSPC 遺伝子治療する主な利点は、あらゆる造血細胞に上昇を与える寿命の長い細胞のソースを提供する機能です。など、これらのメソッドは、がん、遺伝性疾患、感染症のモデルの治療に使用されています。それぞれのケースで異なる HSPC の子孫、赤色の血液細胞、T 細胞、B 細胞および骨髄性のサブセットを含むの機能を高めることによって治療効果が確立されます。分離、方法の変更、および HSPC の準備の製品が直接適用で変換可能な人間の患者で複数の疾患。

上記プロトコルを特定し遺伝子変更 NHP CD34 です+ HSPCs は、その後自己ホスト (図 1および図 2) に注入が可能です。このプロトコルに従うと、我々 通常最大 8 x 109総白血球はピグテール ニホンザルからプライム BM から入手し、時に、アカゲザルからその量を倍増します。両方の種、cd34 陽性数+を豊かに HSPCs、総白血球数 (図 3) の入力に比例します。前の調査結果はことを示す総 CD34+ HSPC 製品にはない true の場合、長期接が HSCs したがってセルが含まれています、我々 はフロー ベース フローサイトメトリー技術 (図 4) を開発した CFC アッセイ (図 5-6</strong...

このプロトコルの目標はヒト以外の霊長類 CD34 を分離、+細胞プライミング骨髄、レンチ ウイルスのベクトルでこれらの細胞の遺伝子変更および自己ホストの注入の製品を準備します。総プロトコルの長さは、約 48 時間です。

Hematopoietic stem and progenitor cell (HSPC) transplantation has been a cornerstone therapy for leukemia and other cancers for nearly half a century, ...

有望で新しい遺伝子治療アプローチの効率と安全性を評価するためには、検証済みの前臨床インビボモデルにおける遺伝子改変細胞の包括的な試験が重要です。関連する細胞表面マーカーの試薬の交差反応性の保全、および非ヒト霊長類モデルに沿って患者に投与される同じ支持的な治療法を適用して臨床パラメータを密接に模倣する能力。私と一緒に手順を実証することは、ハンス・ピーター・キエム博士の研究室の研究技術者であるアナイ・ペレスです。健康な非ヒト霊長類ドナーから50ミリリットルの円錐形チューブに分離された骨髄の10〜12ミリリットルのアリコートを加えることで始めます。チューブの体積を50ミリリットルまで、浸透液で持ち込み、室温で最大7分間培養します。遠心分離によって細胞の破片を取り除き、上清の最後の2〜5ミリリットルを除いてすべてを吸引する。チューブをフリックして残留上清体積中のペレットを再懸濁し、骨髄懸濁液を70マイクロメートルの孔細胞ストレーナーを使用して新しい50ミリリットルチューブに移し、血栓を除去します。新鮮な血分解バッファーを追加して体積を最大 50 ミリリットルにし、遠心分離によって収集する前に室温でさらに 5 分間細胞をインキュベートします。上清のすべてを吸引し、最大バッファーの10ミリリットルで細胞を再懸濁します。別の70マイクロメートルの細孔ストレーナーを通して細胞懸濁液をろ過する前に、新鮮なバッファーの40ミリリットルでチューブをすすいで、細胞懸濁液で洗浄をプールします。標準的な磁気補助細胞選別プロトコルに従ってCD34陽性細胞を濃縮した後、ビード単離された細胞を最大50ミリリットルの新鮮な最大バッファーで洗浄し、HSPC培地中のペレットを再懸濁します。その後、培養した細胞の10〜20ミリリットルをベント組織にプレートし、T75フラスコを摂氏37度および5%の二酸化炭素インキュベーターで一晩培養処理した。骨髄の細胞サンプルの前および後の濃縮純度を評価するために、すべての事象散乱、CD34陽性、造血幹細胞、多能アンエリスロ骨髄性前駆細胞およびリンパ球骨髄性前駆腫の全てのゲートを示す適切なプロットおよび集団階層を有するフローサイトメトリープロトコルを作成する。次に、未染色の、前濃縮、白血球サンプルを実行して、前方および側面散乱パラメータの電圧を調整し、すべての蛍光チャネルに続いて単一の染色補償ビーズを使用して隣接するチャネル間の補償を調整する。次に、CD34濃縮効率を文書化するために調整および補償されたプロトコルで、残りの染色されていないサンプルおよび染色されたサンプルをすべて実行する。全ての補正が設定されている場合、CD34サブセットの並べ替え精製のための細胞ソーターをコロニー形成細胞アッセイに構成し、染色されたCD34濃縮サンプルチューブをサイトメーターにロードする。その後、2000 から 3000 のイベントを記録し、信号強度と目標集団に合わせてソート ゲートを微調整します。セットアップが完了すると、流量を毎秒500〜1000細胞に調整し、散乱から800〜1200細胞を選別し、CD34陽性、造血幹細胞、多能性のアンエリスロ骨髄前駆腫およびリンパ球骨髄前駆ゲートを1つのコロニー1個のチューブを含む別々のチューブに入れる。コレクションチューブのボルテックスの最後に、3つの無菌3.5センチメートルに1ミリリットルの細胞懸濁液を加え、非組織培養は、37°Cで10〜14日間のインキュベーションのために細胞集団あたり個々の15センチメートルのシャーレ内に設定されたペトリ皿を処理した。翌朝、10ミリリットルのピペットを使用して、各フラスコの底部からステキンドセルを滅菌HBSSで静かにすすいで、遠心分離によって採取した細胞を回収する。1x10で細胞を1x10から6番目の細胞に再懸濁します。そして、組み換えフィブロネクチンフラグメントの1ウェルにモックコントロール用の1ミリリットルの細胞を追加し、細胞培養インキュベーターで一晩インキュベーションするために12ウェルプレートをコーティングした。次に、残りの細胞の10ミリリットルのアリコートを組換えフィブロネクチンフラグメントに加え、T75フラスコをコーティングし、キャップをベントして細胞培養インキュベーターに30分間インキュベートする。インキュベーション解凍ウイルスコンディション培地サンプルの間に、価およびミリリットル当たりの感染性単位数に基づいて、添加するウイルスの量を計算する。培養器からフラスコを取り出し、各フラスコに適切な量のウイルス調節培地を加えてから、細胞を摂氏37度と二酸化炭素5%に戻します。翌朝、フラスコから細胞を個々の50ミリリットル円錐形チューブに移す。1回の洗浄で最大50ミリリットルのHBSSで細胞を洗浄し、このステップを最大3回繰り返して残留ウイルスを除去します。プロスタグランジンE2を補ったHSPC培地で細胞を2時間インキュベートする。その後、細胞を洗浄し、チューブあたり2%の自己血清を補ったHBSSの10ミリリットルで細胞を再懸濁します。その後、16.5ゲージ針を装備した20ミリリットルの注射器を使用して細胞懸濁液を吸引する。新鮮なHBSSプラス2%の自己血清でチューブの内側を洗浄し、注射器に吸引します。自己宿主に注入するまで氷の上に細胞溶液を置く前に、慎重に針キャップで注射器をキャップします。トランスデューセドされた細胞の遺伝子改変効率を決定するために、プレート1 x 10をHSPC培地のミリリットル当たり1ミリリットル当たり予約mockまたはトランスデュースした細胞を非組織培養処理プレートに投与した。2日目、5日目、12日目の転写後、細胞を収穫して数えます。2日目と5日目に、新鮮なHSPC培地中の細胞の33%を1x10から6ミリリットルの濃度で再プレートする。2日目、5日目、12日目に、定量的リアルタイムPCR用のDNA抽出バッファー内の細胞の33%を凍結し、標準的なプロトコルに従ってフローサイトメトリーによって細胞の最終33%を分析し、造血原生の表向き組成を評価する。流量サイトメトリーによってトランスジーン発現を定量化するには、3つの側面散乱対を追加する。トランスジーンプロット;とゲート造血幹細胞上の最初のプロット、多能性アンエリスロ骨髄性前駆腫の第2のプロット、およびリンパ筋骨髄性前駆体の第3のプロット、すべて対トランスジーン。その後、2000~3000のイベントを記録し、信号強度と目標集団に合わせてソートゲートを細かく調整します。このプロトコルを用いて、富化された非ヒト霊長類CD34陽性HSPCの数は、典型的には、入力総白血球数に比例する。これまでの知見によると、CD34陽性HSPC製品の合計には、真の長期および移植造血幹細胞ではない細胞が含まれていることが示されているように、これらのフローサイトメトリーベースおよびコロニー形成細胞技術は、長期間の造血幹細胞に富んだサブセットを確実に同定し、分化するために使用することができる。CD34陽性ヒト幹細胞濃縮細胞は、レンチウイルスベクターを用いて効率よく遺伝子改変することができる。12日間の液体培養アッセイ期間にわたって希釈されたベクターの非統合コピーを運ぶ細胞は、ゲノム中の安定的に統合されたベクターが子孫のすべてに渡される。コロニー形成細胞アッセイにおけるベクターの発現によって確認された。この前臨床方法は、遺伝子治療のための品質管理された非ヒト霊長類造血幹細胞および前駆細胞で遺伝子組み換え遺伝子組み換えに使用することができる。この方法は、他の種、造血幹細胞および前駆細胞の供給源、遺伝子治療ツールおよび疾患に容易に適応することができる。この徹底的に吟揚されたプロトコルは、多数のヒト疾患に対する効果的な治療法のモデリングに大きな約束を示しています。非ヒト霊長類組織で作業するには、個人用保護具を含む強化されたセキュリティ対策が必要です。

preparation-gene-modification-nonhuman-primate-hematopoietic-stem

Research

JoVE Journal

Genetics

遺伝学

この手順では、マウス骨髄からプライマリ造血細胞培養を確立し、ジーンパルサーMXCellのエレクトロポレーションシステムを用いてトランスフェクションが続いている方法について説明します。...

エレクトロポレーションのためのマウス骨髄からの一次造血細胞培養の準備

ここで、提示ひと多能性幹細胞 (hPSC) 培養のプロトコル、CD34 に hPSCs を区別するために使用される+造血前駆細胞。このメソッドは、排他的に決定的なまたは原始的な造血プログラムのいずれかのセルを指定するカノニカル WNT...

ひと多能性幹細胞からプリミティブかつ決定的な造血前駆細胞の分化を監督

このプロトコルは、CD133 を変更する安全で効率的な手順を示しています+造血幹細胞。提示された非ウイルス性、磁気 polyplex...

成人骨髄由来造血幹細胞が細胞工学磁気ターゲッティングと結合を有効にするにマイクロ Rna の転送のためのプロトコル

ここで、ex は説明 cd34 陽性から造血幹細胞の体外増幅+臍帯血由来の細胞は、サイトカイン カクテルとバルプロ酸の併用治療します。このメソッドは、いずれかのプリミティブの HSCs...

ひと臍帯血由来 cd34 陽性造血幹細胞の体外増幅+細胞を用いたバルプロ酸

CRISPR/Cas9システムによるマウス造血幹細胞および前駆細胞(HSPC)の高効率ゲノム編集のためのプロトコルは、造血系特異的遺伝子改変を用いたマウスモデルシステムを迅速に開発する。...

疾患モデルにおける血化細胞の研究のためのレンチウイルスCRISPR/Cas9媒介ゲノム編集

遺伝子治療アプリケーションのための造血幹細胞および前駆細胞のCRISPR/Cas9遺伝子編集

造血幹細胞生物学および造血悪性腫瘍をよりよく研究するためには、造血幹細胞および前駆細胞(HSPC)の体細胞変異を忠実にモデル化するための新しい戦略が必要です。ここでは、CRISPR/Cas9とデュアルrAAVドナー形質導入の使用を組み合わせることにより、HSPCにおけるヘテロ接合機能獲得変異をモデル化するためのプロトコルについて説明します。...

ヒト造血幹細胞および前駆細胞における発癌性ヘテロ接合性機能獲得変異の改変

B細胞療法の研究のために、CRISPR/Cas9および組換えアデノ随伴ウイルス血清型6を用いて初代アカゲザルB細胞を培養および遺伝子編集する方法を紹介します。...

初代アカゲザルB細胞の遺伝子編集

本プロトコルは、ヒトおよび非ヒト霊長類の尿由来細胞を人工多能性幹細胞(iPSC)に単離、増殖、および再プログラムする方法、ならびに新たに生成されたiPS細胞のフィーダーフリー維持のための指示書を記載している。...

尿由来の霊長類人工多能性幹細胞の作製と維持

霊長類の大脳オルガノイドのエレクトロポレーションは、霊長類(病原)生理学的新皮質の発生に近いモデルシステムにおいて、異なる前駆細胞タイプおよびニューロンに一過性の遺伝子改変を導入するための正確かつ効率的なアプローチを提供します。これにより、神経発達および進化過程の研究が可能になり、疾患モデリングにも適用できます。...

霊長類脳オルガノイドの遺伝子改変のための標的マイクロインジェクションとエレクトロポレーション

学ぶ ヒト以外の霊長類骨髄からCD34+細胞を分離し、レンチウイルスベクターで遺伝子改変する方法。48時間で自家輸注可能な細胞製品を調製し、遺伝子治療の効率と安全性を評価する前臨床モデルを提供します。

準備とヒト以外の霊長造血幹・前駆細胞の遺伝子の改変

さらに動画を探す