Name: 光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍回転楕円体の縦断的形態学的および生理学的監視 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: 学ぶ光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍スフェロイドの縦断的形態学的・生理学的監視手法。ラベルフリーで死細胞領域を検出し、創薬プロセスの効率化に貢献する。

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この作品は、NSF によって支えられた IDBR (DBI-1455613)、PFI:AIR を付与-TT (IIP-1640707)、NIH 助成 R21EY026380、R15EB019704、R01EB025209、およびリーハイ大学スタートアップ基金。

著者は競合する利害を開示ないです。

腫瘍の活動は、その形態学的構造に関連性の高いです。2 D 細胞培養の特徴的な成長曲線を監視と同様に、3 D 腫瘍回転楕円体の成長曲線を追跡もです長期的な回転楕円体細胞進展挙動を特徴付けるための従来のアプローチ特に、我々 は腫瘍の低下や腫瘍の再成長成長曲線に直接反映を分析することによって薬剤反応を特徴付けることができます。したがって、腫瘍の 3 D 回転楕円体、サイズ、成長曲線を導出する、ボリュームなどの定量的評価は腫瘍回転楕円体のキャラクタリゼーションとの複合影響評価の非常に重要なのです。現在、明視野、位相コントラスト イメージング プラットフォームに基づいてまたはルーチンのイメージングおよび形態の解析や 3 D 腫瘍スフェロイド8,9,18の機能のための蛍光イメージングが設けられて 22。しかし、彼らは低解像度の深さ resolvability と同様、限られた深さの浸透のための全...

がんは世界1の死の 2 番目の主要な原因です。患者のための重大な重要性の癌をターゲットとする薬剤の開発です。ただし、新しい抗がん剤の 90% 以上が臨床試験2で予期しない毒性と有効性の不足のため開発段階で失敗することが推定されます。理由の一部は、化合物のスクリーニング、医薬品探索2の次の段階の化合物の有効性と毒性の限られた予測値と結果を提供するための単純な二次元 (2 D) 細胞培養モデルの使用に帰することができます。,3,4. 近年、三次元 (3 D) 腫瘍回転楕円体モデルは抗癌性の薬剤の発見3,4,5 の臨床的に関連する生理学的および薬理学的データを提供するために開発されています。、6,7,8,9,10、11,12,13,14、 15,16,17,18,19,20,21,22,23、 24,25。以来、これらの回転楕円体は、生体内で腫瘍の組織に固有のプロパティをまねることができる、栄養や酸素など薬剤抵抗19、これらのモデルの使用と同様に、グラデーション、低酸素のコア潜在的短縮できる薬の発見のタイムライン投資のコストを削減しより効果的に患者に新しい薬をもたらします。3 D 腫瘍回転楕円体開発化合物の有効性を評価する重要な方法の 1 つは、回転楕円体の成長と治療9,26再発を監視することです。これを行うには、その直径と高解像度の画像診断装置では、ボリュームを含む腫瘍形態の定量的な特徴づけが不可欠であります。
明視野、位相コントラスト7,9,22,24, 蛍光顕微鏡8,9,16など、従来の画像診断装置 18,22回転楕円体の直径の測定を提供することができますが、3 D 空間で回転楕円体の全体的な構造を解決することはできません。多くの要因は、回転楕円体; プローブ光の浸透を含むこれらの制限に貢献します。回転楕円体に蛍光染料の拡散励起蛍光染料中または強い吸収と散乱のため回転楕円体の反対側の面からの発光の蛍光信号これらの深さ resolvability 画像診断。これは多くの場合不正確なボリューム計測に します。回転楕円体の壊死性のコアの開発は、生体内で腫瘍6,10,15,19,25で壊死を模倣します。この病理学的機能は、2 D セル文化19,25,27,28で再現可能性があります。回転楕円体サイズの 3 層の同心円構造、直径 500 μ m よりも大きい増殖細胞の外側の層、中間層休止期の細胞の壊死性コアなどで観察できる回転楕円体6,10 ,,1519,25酸素や栄養素の不足のため。ライブとデッド細胞蛍光イメージングは、壊死性のコアの境界にラベルを付ける標準的なアプローチです。しかし、再び、これらの蛍光染料と可視光の両方の侵入は、実際の形でその開発を監視する壊死性コアにプローブする可能性を妨げます。
画像モダリティ別 3 D、腫瘍スフェロイドを特徴付けるため光コヒーレンストモグラフィ (OCT) を導入します。10 月までからラベル無料、非破壊の 3 D データを取得することができる生物医学イメージングは、1-2 mm 深さ生体29,30,31,32,33 、34。10 月サンプルのさまざまな深さからの後方散乱信号を検出する低コヒーレンス干渉計を採用しています、ミクロン レベルの水平および垂直方向の空間分解能で再建された深さ分解画像を提供しています。10 月は、眼科35,36,37および血管造影38,39で広く採用されています。以前の研究では、基底膜マトリックス (例えばマトリゲル) で腫瘍を回転楕円体の in vitroの形態を観察し、光線力学療法40,41への応答を評価する 10 月を使用しています。最近では、当社グループは体系的に監視し、ウェル プレート42で 3 D の腫瘍を回転楕円体の成長カイネティクスの定量化に高スループット OCT イメージング プラットフォームを設立しました。アプローチおよび回転楕円体の光減衰のコントラストに基づくラベル無料壊死検出を数えるボクセルを用いた 3 D 腫瘍回転楕円体の正確な体積の数量を示した。本稿では、OCT イメージング プラットフォームを構築して採用腫瘍回転楕円体の高解像度の 3 D イメージを取得する方法の詳細について説明します。回転楕円体の直径およびボリュームの正確な測定を含む 3 D 腫瘍の回転楕円体の成長カイネティクスのステップバイ ステップによる定量的評価を説明します。また、光減衰コントラストに基づいて、OCT を使用して壊死領域の非破壊検出の手法を提案します。

<table><tbody><tr><td>カスタムスペクトルドメインOCTイメージングシステム</td><td></td><td></td><td>研究室で開発</td></tr><tr><td>スーパールミネセントダイオード(SLD)</td><td>Thorlabs</td><td>SLD1325</td><td>光源</td></tr><tr><td>2倍;2シングルモードヒューズファイバーカプラー、50:50分割比</td><td>ACフォトニクス</td><td>WP13500202B201</td><td></td></tr><tr><td><ストロング>リファレンスアーム</ストロング></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>レンズチューブ</td><td><ストロング>ソーラブス</ストロング></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アダプター</td><td><ストロングス>ソーラブス</ストロング></td><td></td><td></td></tr><tr><td>コリメートレンズ</td><td>ソーラブ</td><td>スAC080-020-C</td><td></td></tr><tr><td>フォーカシングレンズ</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>キネマティックミラーマウント</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ミラー</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1D 並進ステージ</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>連続減光フィルター</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>小児ポスト</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>クランプ フォーク</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sample Arm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lens チューブ</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アダプター</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>コリメート レンズ</td><td>Thorlabs</td><td>AC080-020-C</td><td></td></tr><tr><td>ガルバノメーター</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>リレー レンズ</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-100-C</td><td>望遠鏡のセットアップを行うための2つのリレーレンズ</td></tr><tr><td>トライアングルミラーマウント</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>ミラーThorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Objective</td><td>Mitutoyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pedestrial Post</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>クランプフォーク</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>偏光コントローラー</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30mmケージマウント</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ケージロッド</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stage</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3D電動翻訳ステージ</td><td>Beijing Mao Feng Optoelectronics Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>JTH360XY</tr><tr><td>2Dチルティングステージ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>回転ステージ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>プレートホルダー3D</td><td></td><td></td><td>プリント</td></tr><tr><td>分光計</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>レンズチューブ</td><td>Thorlabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アダプターThorlabs</td><td></td><td></td><td></td></tr>コリ<tr><td>メーティングレンズ</td><td>Thorlabs</td><td>AC080-020-C</td><td></td></tr><tr><td>グレーティング</td><td>ワサッチ</td><td></td><td>G = 1145 lpmm</td></tr><tr><td>F-θ レンズ</td><td>Thorlabs</td><td>FTH-1064-100</td><td></td></tr><tr><td>InGaAs ラインスキャン カメラ</td><td>センサー アンリミテッド</td><td>SU1024-LDH2</td><td></td></tr><tr><td>名前</td><td>Company</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>strong<>細胞培養 コンポーネント</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HCT 116 細胞株</td><td></td><td>ATCC CCL-247</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養フラスコ</td><td>SPL ライフサイエンス</td><td>70025</td><td></td></tr><tr><td>ピペット</td><td>フィッシャーブランド</td><td>14388100</td><td></td></tr><tr><td>ピペットのヒント</td><td>ソレンソンバイオサイエンス</td><td>10340</td><td></td></tr><tr><td>Gibco GlutaMaxDMEM</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>10569044</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清、認証済み、米国原産</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>サイエンティフィック 16000044</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質-抗真菌剤 (100X)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Corning 96-well Clear Round Bottom Ultra-Low Attachment Microplate</td><td>Corning</td><td>7007</td><td></td></tr><tr><td>Gibco PBS, pH 7.4</td><td>Thermo FisherScientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Trypsin-EDTA (0.5%)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Forma Series II 3110 Water-Jacketed CO2 Incubators</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3120</td><td></td></tr><tr><td>Gloves</td><td>VWR</td><td>89428-750</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipets</td><td>Globe Scientific</td><td>138080</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離</td>機 <td>エッペンドルフ</td><td>5702 R</td><td>15 mL チューブを遠心分離する</td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>NUAIRE</td><td>AWEL CF 48-R</td><td>96 ウェル プレートを遠心分離する</td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>名前</td><td>会社</td><td>strongカタログ番号</td><td>strongコメント</td></tr><tr><td>組織学&IHC</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>デジタルスライドスキャナー</td><td>Leica</td><td>Aperio AT2</td><td>高解像度の組織学的画像を取得</td></tr><tr><td>組織学サービス</td><td>Histowiz</td><td></td><td>腫瘍スフェロイドの組織学的および免疫組織学的染色のリクエストサービス スフェロイド</td></tr><tr><td>名前</td><td>会社</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>strong<>コマーシャルOCTsの一覧</td>strong<<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>>SD-OCTシステム</td><td>Thorlabs</td><td>Telestoシリーズ</td><td></td></tr><tr><td>SD-OCTシステム</td><td>ワサッチフォトニクス</td><td>WP OCT 1300 nm</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</strong</td><td>>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>データ分析用ソフトウェア</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>基本的な画像分析</td><td>NIH</td><td>ImageJ</td><td>Fijiも機能します。</td></tr><tr><td>3Dレンダリング</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Amira</td><td>商用ソフトウェア。オプション1</td></tr>:<tr><td>3Dレンダリングビット</td><td>プレーン</td><td>Imaris</td><td>商用ソフトウェア。オプション2.</td></tr><tr><td>C++でカスタム開発された</td>プロトコル<td>OCT取得ソフトウェア</td><td></td><td></td>で使用されます。</tr><tr><td>ステージコントロール</td><td>北京毛鳳光電子技術有限公司</td><td>MRC_3</td> C++でカスタム開発された<td>OCT処理ソフトウェア</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td>をカスタムOCT取得コードに組み込み<td>ました。GPUを活用します。カスタムOCT取得コードに組み込まれています。</td></tr><tr><td>MATLAB でカスタム開発された</td><td>形態学的および生理学的解析</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍回転楕円体の縦断的形態学的および生理学的監視

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

腫瘍回転楕円体は、がん研究・がん創薬における三次元 (3 D) 細胞培養モデルとして開発されています。しかし、現在、高スループットのモダリティをイメージング明るいフィールドまたは蛍光検出を利用したはない蛍光染料の拡散限られた光穿腫瘍回転楕円体の全体的な 3 D 構造を解決することができると深さ-resolvability。最近では、私たちの研究室は、光干渉断層計 (OCT)、ラベル無料、非破壊 3 D 96 ウェル プレートで腫瘍細胞スフェロイドの縦断的評価を実行するためのモダリティをイメージングの使用を認めた。10 月は約 600 μ m の高さにまで成長している腫瘍回転楕円体の 3 D の形態学的および生理学的な情報を得ることができます。この記事では、全体ウェル プレートをスキャンし、自動的に腫瘍回転楕円体の 3 D 10 月データを取得する高スループット 10 月 (HT OCT) イメージング システムを示しています。プロトコルで、HT OCT システム施工指針の詳細について述べる。3 D 10 月データから 3 D レンダリングと回転楕円体の全体的な構造を視覚化できます 1 つと直交スライス サイズとボリュームの形態学的情報に基づく腫瘍回転楕円体の縦断的成長曲線の特徴しの増加率を監視光減衰のコントラストに基づく腫瘍回転楕円体で死んだセル領域。HT 10 月を薬物スクリーニングと同様、biofabricated のサンプルの特性の高スループットのイメージ投射様相として使用できるを示します。

96 ウェル プレートに回転楕円体の高スループット光干渉断層イメージング
図 3は、HT 10 月の 3 日目の HCT 116 腫瘍スフェロイドの 96 ウェル プレートのスキャンの結果を展示します。全体の板の逐次スキャンを右下の井戸 (H12) から開始します。図 3 bは、HT OCT システムのソフトウェア実装のフローチャートを示しています。プレートを次に、待つ 〜 2 移動 1 つ回転楕円体のデータ収集し、処理後、残りの部分し、次の回転楕円体のデータを収集する回転楕円体を許可する s。各 10 月データから成る × 2.3 mm30.84 × 1.0 の実際の量に相当する 1024 画素 x 400 x 400。図 3は、処理後のデータから生成された...

光コヒーレンストモグラフィ (OCT)、3次元イメージング技術は、監視し、腫瘍細胞スフェロイドの成長カイネティクスを特徴付ける使用されました。アプローチ、およびラベル無料死んだ組織検出光減衰のコントラストに基づく回転楕円体を数えるボクセルを用いた腫瘍回転楕円体の正確な体積の数量を示した。

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

三次元腫瘍スフェロイドは、生体内の腫瘍の組織特異的特性を模倣することができ、単純な2D細胞培養よりも抗癌創薬に対してより臨床的に関連するデータを提供する。当社のイメージング技術である光学コヘレンス断層撮影は、数百ミクロンの大きさの単一の腫瘍神経の3D構造を容易に視覚化し、しばしば数秒以内にその形態および仕事の出没のより正確な特徴付けを提供することができる。3D球体モデルを使用すると、創薬のタイムラインを短縮し、コストを削減し、患者により効果的に新薬を提供することができます。腫瘍クラスターの球形を形成することは、実験の重要なステップの1つです。丸底の右の超低い取り付けプレート、およびセルシード後の適切な遠心分離速度を選択することが重要です。原稿に記載されているように培養フラスコで興味深い細胞を増殖させることによって、この実験を開始する。標準的な条件下でインキュベーター内の細胞を維持し、毎日その健康状態を監視します。必要に応じてメディアを更新します。マルチウェルプレートで3D細胞培養を行う場合は、まず、培養フラスコから培地を取り出し、細胞を殺菌して33度前温めたPBSで洗浄する。その後、トリプシンEDTAを1ミリリットル加えて細胞を再中断し、摂氏37度で3分間インキュベートします。トリプシンを希釈するために培養培地を3ミリリットル加えます。この細胞懸濁液を15ミリリットルの遠心分離管に移し、遠心分離機を500G、室温で5分間移動します。その後、上清を取り除き、あらかじめ温めた培養培地の4ミリリットルで細胞ペレットを再懸濁する。細胞濃度を決定するには、サンプルを1滴下してヘモサイトメーターにヒパチし、細胞を数えます。所望の播種濃度に希釈する。200マイクロリットルの細胞懸濁液を超低添付着体の各ウェルに、丸底マルチウェルプレートの各ウェルに、1ミリリットル当たり3,000細胞の濃度で、1ウェルあたり約600細胞を達成する。播種直後、室温で、7分間、利用可能な最低速度でプレート全体を遠心分離します。プレートを37°C、5%Co2でインキュベーターに入れ、3日ごとに培地をリフレッシュします。まず、本稿の回路図に従って、OCTシステムのリファレンスアームとサンプルアームを構築する。次に、キロメートル、グレーディング、F-Thetaレンズ、ラインスキャンカメラを含む分光計を構築します。プレートアダプターを使用して、マルチウェルプレートを固定位置に保持します。撮像前に、2D傾斜ステージを使用してマルチウェルプレートの傾きと回転を修正し、異なるウェルからの焦点面の変動を最小限に抑えるために遷移ステージに取り付けた回転ステージを修正します。次に、プレートのエッジがステージの動きの方向と平行になるように回転を調整し、井戸がOCT画像内で同じ水平位置にとどまるようにします。次に、プレートが光学表に平行になるように傾斜ステージを調整し、ウェルが撮像用に同じ垂直位置にとどまるようにします。腫瘍回転楕円体画像化の日に、インキュベーターからマルチウェルプレートを取り除く。OCTイメージングシステムの下に転送し、プレートアダプタに置きます。プレートの高さを調整するには、変換ステージの Z 方向に沿ってプレートを移動します。カスタムイメージングソフトウェアでは、腫瘍回転楕円体全体をカバーするために目的のOCTスキャン範囲を設定し、その発達段階に応じて、設定を保存するためにパラメータを保存をクリックします。次に、腫瘍回転楕円体の最適化された XZ および YZ OCT プレビューを表示します。回転楕円体を含むプレートのすべてのウェルについて、腫瘍回転楕円体の3D OCT画像を1つずつ取得します。プレビューイメージを表示するには、プレビューボタンをクリックします。OCT画像を取得するには、取得ボタンをクリックします。OCT データ取得の全体的な段階移動プロセスを記録します。すべての腫瘍回転楕円体に最適な画質を確保するために、プレートアダプターを正確に調整する必要があり、中央値の体積は同じである必要があります。カスタム C+ 処理コードを使用して、腫瘍スフェロイドの 3D OCT データセットを処理して、OCT 構造画像を生成します。2D OCT 画像を 3 つの断面、XY、XZ、YZ 平面で回転楕円体の重心を横切って使用し、スフェロイド画像のコラージュを生成します。目的のソフトウェアを使用して回転楕円体の 3D レンダリングを取得するには、最初に SD OCT データをソフトウェアにロードします。[セルを超える] パネルをクリックし、新しいボリュームを追加して、3D レンダリングに使用するブレンド モードを選択します。表示角度を調整するには、マウスポインタを使用して画像をドラッグし、原稿の説明に従って定量化を進めます。HCT116細胞ラインスフェロイドの無化OCT画像のコラージュは、処理されたデータから生成され、他の2Dハイスループットイメージングシステムの画像と同等の結果が得られました。さらに、96のウェルから2次元断面スフェロイド画像のコラージュを生成し、スフェロイド高さを監視し、スフェロイドの不均一性を垂直方向に可視化した。3D レンダリングされた回転楕円体画像のコラージュは、事前に定義された角度から生成して、全体の 3D 形状を視覚化し、回転楕円体の丸さを評価できます。一般的なOCT後処理後、腫瘍スフェロイドの3D OCT構造像が得られた。OCTデータから、3D表面ポストとXZ、YZ、XY直交スライスを生成し、腫瘍回転楕円体の構造を任意の方向に可視化した。単一の腫瘍スフェロイドの縦方向モニタリングを行い、その直径、高さ、ボクセルベースの体積を特徴付け、21日間の開発中に大きさと体積の成長曲線を生成した。ここでは、11日目に回転楕円体が破壊され、21日目に完全に崩壊しました。縦方向追跡は、腫瘍スフェロイドにおける死細胞領域の増加を示した。腫瘍回転楕円体の3Dレンダリング画像は、赤で強調された壊死領域の増加によって示されるように、7日目から14日目までの死細胞領域の出現と成長を示した。壊死領域の割合が増加するにつれて、腫瘍回転楕円体は完全な形状を維持することができなかったため、崩壊した。このイメージングプラットフォームを使用すると、3Dイメージングモデル、広大なクリーチャーモデル、共培養モデルなど、他の複雑な腫瘍球モデルをさらに探索して、生体内腫瘍をよりよくシミュレートすることができます。当社のハイスループットOCTイメージングシステムは、がん創薬における薬物スクリーニングの代替アプローチを提供します。これはまた、様々な生物医学の適用のための3Dバイオファブリケートサンプルを特徴づけるものです。

longitudinal-morphological-physiological-monitoring-three-dimensional

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

我々は、コラーゲンベースを開発している...

光学投影トモグラフィを用いたヒト乳癌検体とその分析の長期培養

出典: Huang, Y. et.al., 光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍スフェロイドの縦断的形態学的および生理学的モニタリング. J. Vis. Exp.

光干渉断層撮影法を用いた腫瘍スフェロイドの形態学的および生理学的モニタリング

粒子追跡マイクロレオロジーは、3D腫瘍モデルにおける細胞外マトリックスの機械的特性の変化を非破壊的に定量化し、空間的にマッピングするために使用できます。...

粒子追跡マイクロレオロジーを用いて3次元腫瘍モデルにおける細胞外マトリックス剛性の縦測定

我々は、明視野顕微鏡で画像化された三次元の腫瘍スフェロイドの大きさを測定するためのハイスループット画像解析ソフトウェアアプリケーションを提示する。このアプリケーションは、薬物スクリーニングにスフェロイドを使用したい研究者にとって有益であるスフェロイド、上の治療薬の効果を調べるために迅速かつ効果的な方法を提供します。...

腫瘍球の高スループット画像解析：自動的かつ正確にスフェロイドのサイズを測定するための使いやすいソフトウェアアプリケーション

周囲の正常組織への浸潤は、悪性腫瘍の決定的な特徴です。ここでは、進行したヒトがんの多くのモデルで例示されている天然の3Dバイオマトリックスへの浸潤のシンプルな半自動マイクロプレートアッセイを提供します。...

三次元（3D）腫瘍スフェロイド浸潤アッセイ

ここでは、スペクトル領域光干渉断層撮影(SD-OCT)を用いて、網膜変性、緑内障、糖尿病性網膜症、近視のモデルにおいて、in...

光コヒーレンストモグラフィーを用いたげっ歯類モデルにおける眼疾患のin vivo構造評価

ここで提示される、スフェロイドイメージング装置の製造のためのプロトコルである。この装置は癌細胞スフェロイドの動的または縦方向の蛍光のイメージ投射を可能にする。プロトコルはまた癌細胞の浸潤の分析のための簡単な画像処理手順を提供する。...

3Dスフェロイドモデルにおける時間分解蛍光イメージングとがん細胞浸潤解析

本プロトコルは、3D腫瘍凝集体内の迅速、非破壊的、かつラベルフリーの局所細胞密度および生存率測定のための画像ベースの技術を開発する。この知見は、細胞密度勾配を明らかにし、トラスツズマブで処理したHER2+凝集体では、凝集体の発生と主に末梢細胞死において、コア領域における細胞密度が外層よりも高いことを明らかにした。...

薬物治療後の腫瘍凝集体内の局所細胞密度の非破壊的評価

腫瘍スフェロイドは、腫瘍細胞と微小環境の相互作用および治療応答を評価するためにますます利用されつつある。本プロトコルは、迅速な光学的クリアリングを用いた3D腫瘍スフェロイドの半ハイスループットイメージングのための堅牢かつ簡単な方法を記載する。...

腫瘍スフェロイドの半ハイスループット分析のための迅速な光学的クリアリング

この記事では、3次元腫瘍スフェロイドを構築するための標準化された方法を示します。また、自動イメージングシステムを用いたスフェロイド観察と画像ベースの深層学習解析の戦略についても説明します。...

医薬品評価研究のための3D腫瘍スフェロイドの作製

生体内顕微鏡所見の翻訳は、組織への深さの浸透が浅いという課題があります。ここでは、生体内顕微鏡と臨床的に適用可能な画像モダリティ(CT、MRIなど)の同時登録を可能にし、直接的な空間相関を実現し、生体内顕微鏡所見の臨床翻訳を効率化する可能性のある背側窓室マウスモデルについて説明します。...

トランスレーショナルがん研究における生体内顕微鏡検査と磁気共鳴画像法の併用のための背側Skinfold Window Chamber腫瘍マウスモデル

学ぶ光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍スフェロイドの縦断的形態学的・生理学的監視手法。ラベルフリーで死細胞領域を検出し、創薬プロセスの効率化に貢献する。

光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍回転楕円体の縦断的形態学的および生理学的監視

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