Name: 組み合わせてモノクロまたは Sugen 肺高血圧ラットのモデルとして左肺全摘 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: 学ぶラット左肺全摘術による肺高血圧症モデル構築法。Sugenまたはモノクロタリン併用でヒト患者と類似の叢状病変を再現し、治療薬開発や再生医療研究に応用可能です。

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この原稿は、NIH によって支えられた 7R01 HL083078 10 は、アメリカ心臓協会 AHA 17SDG33370112 と、国家機関の健康 NIH K01 HL135474 にあるから、国家機関の健康 R01 HL133554 オリジナル作品に助成金を与える

次の手順は、機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) シナイ山で、Icahn 医学部によって承認されています。すべてのラットは、シナイ山は、「ケアと実験動物使用ためのガイド」に準拠して人道的なケアを受けてください。
1. 手術のための準備
<ol><li>オートクレーブ クーリー-メイヨー曲線はさみ (大ばさみ) ストレート アイリスはさみ (ハサミ)、マクファーソン Vannas アイリスはさみ (バックはさみ)、Wangensteen 組織鉗子 (非外科的鉗子)、ジェラルド組織鉗子、プレーン ワイヤ鏡 (自己保持リトラクター) 小型船舶師、ガーゼ、ダブル エンド ・ プローブ、細い血管針ホルダー、マイクロ ジェイコブソン モスキート止血鉗子 (蚊)。</li>
</ol>2. 準備中とラットの気管挿管
<ol><li>6-8 週齢、雄 Sprague-dawley ラット、手術前に 30 分でブプレノルフィン鎮痛 (0.1 mg/kg の皮下注射を管理します。</li>
	<li>麻酔をかけられ正常ラットまでイソフルラン 4% および 3-4 分間酸素 (1 L/分) にさらされる商工会議所のラットを個別に配置 (すなわち、ゆっくり、呼吸、意識不明、タッチや音に応答しない)。</li>
	<li>
ラットの気管挿管
	<ol>
<li>商工会議所からラットを削除し、ボードの端に口と、その裏にネズミがきっかりようにテープで板にラット。首のままストレート フラット/2 つの前歯でラットを保持するための文字列を使用します。</li>
		<li>喉頭の上首の上ファイバー光ガチョウ光源を配置、リフト指で舌を押し声帯を視覚化する喉頭蓋を移動します。気管の声帯の後ろに明るく点灯します。気管が鮮やかになるまでは、ライトの位置を調整します。</li>
		<li>60 内喉頭に 16 G のカテーテルを挿入することで、ラットを挿管の彼らはすぐに目を覚ますように、商工会議所からラットを削除します。ラットは成功した挿管前に目を覚ます、ラットを戻すし、繰り返します。</li>
		<li>すぐにラットをイソフルランと酸素配達を再開する人工呼吸器に接続します。挿管カテーテルから呼気の湿気の凝縮を観察するコールド ミラーを使用してを確認します。動物はまだ胸の拡大によって呼吸を確認します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ラットを人工呼吸器に接続します。セット酸素 1 L/分の流量が設定換気量 0.35-0.45 の一回換気量と呼吸/分 70 mL。呼気終末陽圧 (PEEP) を 2-4 cm H2o. 削減イソフルラン 2-3% に設定します。</li>
	<li>37 ° C で加熱パッドで右側臥位で顕微鏡下でラットの場所下には、フロントの足をテープします。肋骨の終わりまでフロント脚の後ろに左胸部をバリカンで剃る。ガーゼと 10% ポビドン ヨード液、続いて 70% エタノール (3 回) と外科の領域をクリーンアップします。</li>
	<li>ラットの足にパルスオキシメータを置き、手術中の酸素飽和度と心拍数を監視します。心拍数は 200-500 bpm と酸素の飽和状態にする必要がある必要があります > 95%。</li>
</ol>3. 無菌環境の準備
<ol><li>顕微鏡下での外科領域を視覚化します。これは、顕微鏡は滅菌に環境が調整できませんのでで最初に行う必要があります。</li>
	<li>滅菌、手術用手袋を入れてください。滅菌機器、手術用ドレープ、ラットの体の外科領域以外は何も触れないでください。</li>
	<li>ラットの体の上と無菌環境を作成する計測器のトレイには、滅菌ドレープを配置します。</li>
	<li>滅菌手袋と滅菌器のトレイに滅菌器具を配置します。</li>
</ol>4. 左肺全摘術
<ol><li>手術用覆布に小さな穴をカットするのにクーリー マヨはさみとジェラルド組織鉗子を使用します。穴は約 2-3 cm 切開を完全に可視化するのにする必要がありますが、大きすぎるので皮膚を殺菌のみが公開されること。</li>
	<li>左胸部外科ブレードを使用してで 2 cm くらい横切開を行います。止血の出血/維持を管理するのにガーゼや電気焼灼ペンを使用します。クーリー マヨはさみを使用して、肋骨と肋間筋を露出するまで組織の各層をカットします。</li>
	<li>
肋間スペースを入力
	<ol>
<li>第 3 肋筋を通して穴を作るためには、蚊を使用します。</li>
		<li>ダブル エンド ・ プローブを使用すると、肺動脈を視覚化する方法のうち肺を移動します。調査官は、肺動脈にアクセスできない場合、別の肋間スペースを入力可能性があります。</li>
		<li>使用アイリスはさみと開く肋間筋に約 1-2 cm. マクファーソン Vannas アイリスはさみ (バックはさみ) は、任意の出血を止めるため電気焼灼ペンを使用します。</li>
		<li>小さな、肋骨を保持するリトラクターを自己保持し、筋肉を開きます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>左胸膜のみを開き、肺動脈と気管支へのアクセスを許可するように腹部の下下左肺に移動します。ライゲーティング クリップ アプリケータに媒体 hemoclip をロードします。</li>
	<li>
左主気管支と左主肺動脈の結紮
	<ol>
<li>肺動脈を公開する Wangensteen 非外科的鉗子で左肺の上の部分を慎重に持ち上げます。</li>
		<li>クリップと動脈周囲のアプリケータを閉じることによって肺動脈をクリップします。左奇静脈の破裂を閉じたりしないように注意します。固定しないでも強制的にそれ以外の場合、容器が破裂することができます。</li>
		<li>さらに筋線維を分離する扁桃を使用して切開を開きます。</li>
		<li>それは準備ができているのでライゲーティング クリップ アプリケータに別媒体 hemoclip をロードします。</li>
		<li>非外科的鉗子を使用して、左主気管支と左肺静脈を視覚化するまで切開から肺の下の部分を持ち上げます。非外科的鉗子をする必要がありますプル、切開から肺を移動するために使用します。肺が大きすぎる組織を引き裂くことがなく 1 つの動きで引き出されるので問題鉗子はし非外科的鉗子が慎重に使用されてより多くの肺を引き出す場所で肺を保持する必要があります。</li>
		<li>周りにアプリケータを閉じることによって一緒に左主気管支と左主肺静脈を結紮します。静脈、気管支も強制的にそれ以外の場合は固定しないで、容器が破裂することができます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ハサミで肺を削除します。カットまたはクリップを引き裂くように注意してください。滅菌ガーゼの小片を使用して、任意の血液を吸収し、出血がないことを確認します。</li>
	<li>
肋骨と肋間筋の閉鎖
	<ol>
<li>肋間筋を閉じる前に第 7 肋と外科的切開から胸腔内に 16 G のカテーテルを挿入します。捜査官は、重要な臓器や血管を穿刺しないように針を可視化できることを確認します。</li>
		<li>場所にカテーテルを残して針をすぐに削除します。これは、胸管として使用されます。</li>
		<li>肋骨と肋間筋 4-0 プロレン縫合糸で閉じます。</li>
		<li>皮膚と実行して (材料表) の 5-0 縫合糸で皮下の領域を閉じます。</li>
		<li>肌と胸の周りの 5-0 縫合 (材料表) の場所管胸管が削除されると、穴が縛られるのでシャット ダウンします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>胸部の負圧を取り戻すためにカテーテルを 3 mL 注射器で、胸腔内から空気を避難させます。すぐに空気が胸腔内に戻るを防ぐために針ホルダー付きカテーテルをクランプします。すぐにカテーテルを外し、穴を閉じるに縫合糸を結ぶ。</li>
</ol>5. 術後の回復
<ol><li>胸骨の位置に動物を配置します。イソフルランをオフに、気管内チューブを介してラット酸素を与え続けます。放置しないでください動物はいつまでそれは歩き回るために十分な意識を取り戻したが、動物は、そのケージに安全に。</li>
	<li>滅菌リンゲル液の 2-3 mL を皮下管理します。</li>
	<li>モニター (≈200-500 bpm) の心拍数、酸素飽和度 (≥95%)、および動物を確認するための動物の色はよく呼吸します。</li>
	<li>動物自発呼吸の動きと首の動きを作り始めると、カテーテルを抜いて extubate 動物 (目拡大、移動、鼻耳音への対応など)、物理的な刺激に応答して人工呼吸器を外します。</li>
	<li>動物を他の動物の会社からの空ケージに戻ります。動物は、少なくとも 3 日間だけでする必要があります。</li>
	<li>疼痛コントロールのためには、3 日間のブプレノルフィンの 0.1 mg/kg、12 h に皮下を管理します。</li>
</ol>6. 管理」2 番目のヒット"の MCT または Sugen
<ol><li>皮下注射は、手術後 1 週間で 1 mL MCT (60 mg/kg) または 1 mL Sugen (25 mg/kg) を管理します。</li>
</ol>7. ターミナル収穫
<ol><li>MCT または Sugen 投与後 7 週間は、流れる酸素 (1 L/分) および 4% イソフルランの商工会議所に動物を配置します。</li>
	<li>動物を鼻の円錐形によって人工呼吸器に接続します。酸素の流れを維持し、2.5-3% にイソフルランを下げます。彼の背中とすべての手足をテープに動物を置きます。</li>
	<li>腹部全体に沿って動物を剃る。</li>
	<li>
胸を開く
	<ol>
<li>Xyphoid に鎖骨下の切欠きからメスで胸下切開を行います。</li>
		<li>組織鉗子を使用して、xyphoid を保持します。心臓や肺動脈が完全にアクセス可能になるまで、クーリー マヨはさみで胸骨を切ってください。出血を止めるため、電気メスを使用します。収縮筋で肋骨を開くを保持します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>肺動脈を特定します。必要に応じて、下にガーゼを追加することによって、心の向きを調整します。20 G IV カテーテルを肺動脈弁と肺動脈の分岐部と肺動脈を穿刺するのに使用します。のみ 20 G のカテーテルを動脈に進出し、針を削除します。1.2 Fr 遷音速圧カテーテルを肺動脈には IV カテーテルに進出します。PA 曲線が安定したは右心室の圧力を記録する手順の少なくとも 10 s. 繰り返しの圧力を記録します。</li>
	<li>心臓や肺を削除します。ホルマリン固定後パラフィン包埋してヘマトキシリンとエオシンで染色で肺の作品を配置します。</li>
</ol>

<ol><li>Leopold, J., Maron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanisms+of+Pulmonary+Vascular+Remodeling+in+Pulmonary+Arterial+Hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanisms of Pulmonary Vascular Remodeling in Pulmonary Arterial Hypertension.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (5), 761(2016).</li>
<li>Gomez-Arroyo, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocrotaline+model+of+pulmonary+hypertension+in+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 302 (4), L363-L369 (2012).</li>
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<li>Cahill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiological+basis+of+chronic+hypoxic+pulmonary+hypertension+in+the+mouse%3A+vasoconstrictor+and+structural+mechanisms+contribute+equally%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">The pathophysiological basis of chronic hypoxic pulmonary hypertension in the mouse: vasoconstrictor and structural mechanisms contribute equally.</a> Experimental Physiology. 97 (6), 796-806 (2012).</li>
<li>Okada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hemodynamics+modify+the+rat+pulmonary+artery+response+to+injury.+A+neointimal+model+of+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hemodynamics modify the rat pulmonary artery response to injury. A neointimal model of pulmonary hypertension.</a> American Journal of Pathology. 151 (4), 1019-1025 (1997).</li>
<li>Happé, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumonectomy+combined+with+SU5416+induces+severe+pulmonary+hypertension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Pneumonectomy combined with SU5416 induces severe pulmonary hypertension in rats.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (11), L1088-L1097 (2016).</li>
<li>Tanaka, Y., Schuster, D. P., Davis, E. C., Patterson, G. A., Botney, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+vascular+injury+and+hemodynamics+in+rat+pulmonary+artery+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The role of vascular injury and hemodynamics in rat pulmonary artery remodeling.</a> Journal of Clinical Investigation. 98 (2), 434-442 (1996).</li>
<li>Nishimura, T., Faul, J. L., Berry, G. J., Kao, P. N., Pearl, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+surgical+aortocaval+fistula+on+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of a surgical aortocaval fistula on monocrotaline-induced pulmonary hypertension.</a> Critical Care Medicine. 31 (4), 1213-1218 (2003).</li>
<li>Linardi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+and+pulmonary+vascular+remodeling+induced+by+pulmonary+overflow+in+a+chronic+model+of+pretricuspid+shunt%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ventricular and pulmonary vascular remodeling induced by pulmonary overflow in a chronic model of pretricuspid shunt.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 148 (6), 2609-2617 (2014).</li>
<li>White, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plexiform-like+lesions+and+increased+tissue+factor+expression+in+a+rat+model+of+severe+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Plexiform-like lesions and increased tissue factor expression in a rat model of severe pulmonary arterial hypertension.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 293 (3), L583-L590 (2007).</li>
<li>Samson, N., Paulin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetics%2C+inflammation+and+metabolism+in+right+heart+failure+associated+with+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Pulmonary+Circulation%22%5BJournal%5D)">Epigenetics, inflammation and metabolism in right heart failure associated with pulmonary hypertension.</a> Pulmonary Circulation. 7 (3), 572-587 (2017).</li>
</ol>

著者は利害対立の可能性があります。

PAH の影響を受けた肺で新生内膜形成、肺動脈の閉塞血管の増殖結果重度の血行動態、右心不全、早期死亡率7,8。血管壁への変更は、動脈と右心室の圧力の増加、血流への抵抗を高めます。PAH の初期の段階で通常 MCT または Sugen、管理後 3 週間ラット開発された内側の肥大、外の肥厚や小動脈および細動脈の muscularization のような非特異的な所見。この変更は潜在的に可逆的です。後の段階で約 6-8 週間後 MCT または Sugen、管理するラットの肺がある新生内膜および網状血管を妨害し、媒体と肺小動脈、細動脈、細胞内膜増殖を消し去ると同心内膜の線維症。網状の病変は通常、血管内皮細胞と芽が並ぶチャンネルの叢で構成されます。多くの場合、これらの変更が間質浮腫および線維症、遠位肺小動脈血栓性筋肉血管の部分的な再疎通の血栓塞栓性閉塞に関連付けられて、フィブリノイド壊死12。
前述のように、他の PAH のモデ...

肺動脈高血圧症 (PAH) は肺血流量、血管抵抗の増加、炎症および肺の小さな血管1の改造の増加によって特徴付けられる進行と致命的な病気です。この改造は通常血管病変を妨害し、肺小動脈、血管収縮を引き起こし、右心室の後負荷2の増加を消し去ることで起因します。PAH のほとんどの成功した薬理学的治療法が存在しません。その結果、PAH 関連死亡のまま高.最近では、肺高血圧症の病態に関する研究のフォーカスに肺血流増加の役割は考慮した肺の開発の重要なトリガーとして血管血管増殖のメカニズムへ移動します。3,4を改造します。
肺高血圧症の動物モデルは、疾患の病態生理を説明し、薬、細胞、遺伝子、タンパク質配信のためのプラットフォームとして提供している、重要な洞察力を提供しています。従来、慢性低酸素血症による肺高血圧モデルと MCT 肺傷害モデルは、PAH の病態5を研究するために使用する主なモデルをされています。しかし、彼らは人間の患者に説明した差異と比較して改造の増加肺血流と新生内膜パターンを生成するのに十分ではありません。齧歯動物の慢性低酸素モデルは、小さな肺血管6の血管閉塞せず低酸素性血管収縮と血管壁の肥厚の結果します。さらに、低酸素状態は可逆的です。このように、低酸素血症モデルはまた重症 PAH を生成するのに十分ではありません。MCT 肺傷害モデルはいくつかの内皮機能不全を引き出すが、重度のプライマリ PAH を持つ人間で見つけられる複雑な血管のフェノタイプ病変ラット2では発症しません。また、MCT 投与ラットは PAH2からではなく、MCT による肺毒性、静脈閉塞性肝疾患、心筋炎から死ぬ傾向があります。最後に、肺全摘術だけでは時間の短い期間で新生内膜病変肺血管を生成するのに十分ではありません。全摘、術後後肺動脈圧7で最小限の標高があります。健康7対側の肺は、人間の肺全摘も容認されます。
ただし、それは肺血流増加を模倣し、結果肺血管リモデリング厳しい臨床 PAH に匹敵するので、MCT と Sugen 併用左肺全摘手順は有利。4 つ葉は、右ではなく、のみ 1 葉、左肺、肺の全摘術が実行されます。右の肺を削除した場合は、動物は呼吸不全を補正することになります。肺全摘術 MCT モデル改造の新生内膜パターンは扱われる運営動物7の 90% 以上で成長します。同様に、Sugen と肺全摘術の組み合わせによって重症 PAH、アンギオ フェノタイプの血管病変、増殖、アポトーシスおよび右心室機能不全の8によって特徴付けられます。左肺全摘手順は、PAH を誘発する他の外科手術と比較しても有利であります。以前大動脈, 下大静脈シャントまたは鎖骨下肺動脈吻合、肺への肺血流を増加するラットの説明モデルが含まれます。これらのモデルは、非常に複雑な7,9,10,11です。大動脈, 下大静脈シャントを行う動物の腹部が開かれます。シャント、肺だけではなくすべての腹部臓器への血流を増加腹部の大動脈に配置されます、PAH したがって、開発に長い時間がかかります。さらに、それは、全摘例の血流残存肺ダブルスに対し、シャントの血流を判断することは困難。鎖骨下肺動脈吻合では、多くの合併症もあります。静脈に動脈の血液の流れは、吻合部出血・血栓症につながることができます。大動脈下大静脈シャントのような吻合部の血流を判断することは困難です。さらに、血管外科のスキルを必要とする高価で難しい技術です。一方的な左肺全摘は血流と左肺内のせん断応力を 2 倍し、MCT や Sugen と組み合わせて、原因内皮細胞損傷8,である PAH の典型的な血行動態と病理組織学的所見12。
この原稿の目新しさは、左肺全摘ラットおよびこれらのモデルの技術と生理学的課題の議論の非常に詳細かつ包括的な外科手術で提示されます。このプロトコルが現在使用できないために、多くの研究者はモデルがあまりにも困難な使用と考えています。左肺全摘を行った者は、高い死亡率および動物、科学的評価を損なうことの不必要な損失に関連付けられている別の罹患率に直面しています。代わりに、多くは PAH を作成するのに MCT 注射、慢性的な低酸素症、またはちょうど肺全摘術などの古典的なモデルを使用します。ただし、これらのモデルは左肺全摘と MCT または Sugen の組み合わせよりもはるかに少ない効果的です。この記事の主な目的は、ラットの左一側肺全摘の最初詳細と再現性のある外科手術を提供し、PAH の最高の手術モデルを提供することです。この致命的な病気の病因を研究する重症 PAH のはるかに効果的な臨床的に関連するモデルを作成する研究者、MCT や SU5416 と左片側肺全摘のこのプロトコルを組み合わせることができます。

<table><tbody><tr><td>外科用ブレード</td><td>バード・パーカー</td><td>371215</td><td>切開</td></tr><tr><td>フォラン (イソフルラン、USP)</td><td>バクスター</td><td>NDC 10019-360-40</td><td>麻酔</td></tr><tr><td>BD 血管カテーテル 16 G</td><td>BD</td><td>381157</td><td>挿管チューブ、胸部チューブ</td></tr><tr><td>BD 1 mL インスリン注射器</td><td>BD</td><td>329652</td> 術<td>後ブプリネックスを投与</td></tr><tr><td>バイオゲル 外科医 手術用手袋</td><td>バイオゲル</td><td>30460-01</td><td>滅菌手術用手袋</td></tr><tr><td>Wahl BravMini +トリ</td><td>マーBraintreeサイエンティフィック</td><td>CLP-41590 P</td><td>シェービング手術部位</td></tr><tr><td>SU5416</td>ケイ<td>マンケミカル</td><td>13342</td><td>スゲン&nbsp;</td></tr><tr>挿<td>管用</td><td>光ファイバーイルミネーター</td><td>コールパーマー</td><td>EW-41723-02</td> ライト</tr><tr><td>Surgipro II 4-0 縫合糸</td><td>Covidien</td><td>VP831X</td><td>肋間筋を閉じる</td></tr><tr><td>ポリソルブ 5-0 縫合糸</td><td>Covidien</td><td>GL-885</td><td>皮膚を閉じる</td></tr><tr><td>ミディアムスライドトップ 誘導チャンバー</td><td>DRE 獣医</td><td>12570</td><td>酸素&イソフルラン送達</td></tr><tr><td>DRE コンパクト 150 げっ歯類麻酔器</td><td>DRE 獣医</td><td>373</td><td>酸素 & イソフルラン送達</td></tr><tr><td>小血管焼灼器キット</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>出血</td><td>を最小限に抑える</td></tr><tr><td>VentElite 小動物用人工呼吸器</td><td>ハーバード装置</td><td>55-7040</td><td>人工呼吸器</td></tr><tr><td>MouseSTAT Jr</td><td>Kent Scientific</td><td>MSTAT-Jr パルス</td><td>オキシメータ&心拍数モニター</td></tr><tr><td>マウスの足パルスオキシメータセンサー</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>SPO2-MSE</td><td>パルスオキシメータ&心拍数足センサー</td></tr><tr><td>PhysioSuite RightTemp</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>PS-02</td><td>温度パッド</td></tr><tr><td>PVP準備ソリューション</td><td>メドライン</td><td>MDS093944</td><td>手術部位の清掃</td></tr><tr><td>ポリライニングドレープ</td><td>メドライン</td><td>NON21002Z</td><td>カバー動物</td></tr><tr><td>3mLシリンジ</td><td>メドライン</td><td></td><td>術後の体液投与SYR103010</td></tr><tr><td>Microsurgical Kits, Integra&nbsp;</td><td>ミルテックス</td><td>95042-540</td><td>手術用具: プレーン ワイヤー スペキュラム、ダブルエンド プローブ、マクファーソン - ヴァンナス アイリス はさみ ストレート、ストレート アイリスはさみ</td></tr><tr><td>止血鉗子 - Micro-Jacobson-Mosquito</td><td>ミルテックス</td><td>17-2602</td><td>蚊</td></tr><tr><td>ブプレノルフリン HCl 0.3 mg/mL</td><td>パー ファーマシューティカル</td><td>NDC 42023-179-01</td><td>痛みの緩和</td></tr><tr><td>クーリー メイヨー カーブ ハサミ</td><td>ピリング</td><td>352090</td><td>大きなはさみ</td></tr><tr><td>ジェラルド組織鉗子</td><td>ピリング</td><td>351900</td><td>鉗子</td></tr><tr><td>Wangesnsteen組織鉗子</td><td>ピリング</td><td>342929</td><td>非外傷性鉗子</td></tr><tr><td>ピリング細い血管ニードルホルダー</td><td>ピリング</td><td>354962DG</td><td>ニードルホルダー</td></tr><tr><td>クロタリン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>C2401-1G</td><td>MCT</td></tr><tr><td>サーフラッシュ20 G IVカテーテル</td><td>テルモ</td><td>SR * FF2051</td><td>臓器摘出中の圧力読み取り用</td></tr><tr><td>ADVantage PVシステム、1.2 Frカテーテル</td><td>Transonic Inc</td><td>ADV500</td><td>肺動脈と右心室圧の記録</td></tr><tr><td>中型ヘモクリップ</td><td>Weck</td><td>523700</td><td>結紮血管</td></tr><tr><td>オープンライゲーティングクリップアプリケーター;中湾曲した</td><td>ウェックホライゾン</td><td>237081</td><td>ヘモクリップアプリケーター</td></tr><tr><td>手術顕微鏡</td><td>Zeiss OPMI MD</td><td>1808</td><td>倍率</td></tr></tbody></table>

組み合わせてモノクロまたは sugen 肺高血圧ラットのモデルとして左肺全摘

The Left Pneumonectomy Combined with Monocrotaline or Sugen as a Model of Pulmonary Hypertension in Rats

このプロトコルでは、詳細に説明して正しい手順と必要な予防措置を正常に左肺全摘を行いモノクロ (MCT) の追加投与によるラットの PAH を誘発するまたは SU5416 (Sugen)。我々 はまた他の PAH のモデル研究でよく使用されるこれら 2 つのモデルを比較します。ここ数年で PAH の動物モデルのフォーカスに肺血流増加の役割は考慮した重度の開発の重要なトリガーとして肺の網状病変の angioproliferation のメカニズムを勉強へ移動します。血管リモデリング。肺血流の増加の最も有望な齧歯動物モデルの 1 つは、MCT の Sugen「2 番目のヒット」と組み合わせて片側左肺全摘術です。左の肺の除去は、増加および乱流の肺血流と血管リモデリングに します。現在、ラットの肺全摘手術の詳細な手順はありません。ここでは、肺全摘手術と雄 Sprague-dawley ラットの術後ケアの手順プロトコルについて詳しく説明します。簡単に言えば、動物の麻酔し、胸を開きます。左肺動脈、肺静脈、気管支を視覚化でき、それらが組み合わされて、左の肺が削除されます。胸が閉じられます、動物が回復しました。血液は右肺のみで循環させるとしています。この血管内圧の亢進は、進歩的な改造と肺小動脈の閉塞に します。MCT の Sugen 2 番目のヒットは、内皮機能不全を誘発する使用 1 週間後の手術です。肺と内皮機能不全の増加血流の組み合わせは、重症 PAH を生成します。この手順の主な制限は、一般的な手術技能が必要なことです。

受け入れられている分類体系では、肺高血圧症は、正常肺動脈圧 (すなわち、25 mm Hg) の上限を超える平均肺動脈圧 (mPAP) によって特徴付けられます。肺全摘術 + MCT グループでは、重症 PAH は日 21 増加 mPAP (図 1) によって開発されました。MPAP の式で計算されます。
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収縮期と拡張期の RV と PA の圧力と活用太陽光発電システムに接続されている主肺動脈の圧カテーテルを用いて測定しました。平均肺動脈圧 (mPAP) は上記の数式を使用して計算されます。コントロール群 (n = 20)、PA の平均圧力は 18....

齧歯動物左肺全摘術は、肺高血圧症研究の貴重な手法です。ここでは、ラット肺全摘術の手順と最小限の罹患率と死亡率を確保するため術後のケアについて説明するためのプロトコルを提案する.

組み合わせてモノクロまたは Sugen 肺高血圧ラットのモデルとして左肺全摘

In this protocol, we detail the correct procedural steps and necessary precautions to successfully perform a left pneumonectomy and induce PAH in rats ...

それは肺動脈性高血圧のための最良のモデルを生成するので、このプロトコルは重要です。他のモデルは、ヒトPAH患者に見られる神経叢病変を産生しない。主な利点は、右肺と肺動脈の血液の流れを2倍にし、内皮損傷を引き起こし、肺が2倍の硬い働きを強いられることです。我々のグループは、治療を開発するために肺動脈性高血圧症の非常に効率的なモデルを開発しました。肺動脈高血圧症に加えて、この方法は再生医療に役立ち、先天性心不全や肺切除後の患者のような肺流れの増加を伴う他の疾患に関する洞察を与えることができる。このテクニックを一度も行ったことがない人にとって、私のアドバイスは、プロトコルに正確に従い、外科医が彼らが何をしているのかを正確に見ることができるようにすることです。ラットを4%イオブルランで麻酔した後、動物は気管を照らす光ファイバーグースライトを使用して挿管されます。16ゲージのカテーテルを喉頭に挿入し、冷たい鏡を使用してカテーテルからの息を吐き出して、挿管を確認します。ラットを人工呼吸器に接続し、ラットを顕微鏡下の37°Cの加熱パッドの右の褥瘡の位置に置きます。前肢をテープで固定し、クリッパーを使用して前脚の後ろから胸部の端まで左胸部を剃ります。3つの連続した10%ポビドンヨウ素溶液と70%エタノールワイプで露出した皮膚をきれいにし、ラットの足にパルスオキシメーターを置き、手術中の心拍数と酸素飽和度を監視します。さて、顕微鏡を調整し、焦点に外科ビューをもたらします。次に、ラットの体と計器トレイの上に滅菌ドレープを置き、滅菌環境を作り出します。そして最後に、滅菌器具を滅菌器トレイに置きます。左肺切開術を行う場合は、クーリー・メイヨー・ハサミとジェラルド組織鉗子を使用して外科用ドレープの穴を2~3センチカットし、外科用ブレードを使用して左胸郭に2センチの横切開を行います。クーリーメイヨーは、肋骨と肋間筋が露出するまで組織の各層を切断するために使用します。蚊を使って、第3肋間空間の筋肉に穴を開けます。ダブルエンドプローブを使用して、肺を動かして肺動脈を視覚化し、マクファーソン・ヴァンナスアイリスはさみを使用して肋間筋を約1〜2センチメートルの幅に開きます。小さな自己保持レトラクターを左胸膜に入れ、肋骨と筋肉を開いたままにし、左肺を腹部の下に動かして肺動脈と気管支へのアクセスを可能にする。左主気管支および肺動脈の結紮のために、まず、中程度のヘモクリップを合字クリップアプリケーターにロードし、ワンゲンスティーンの外傷性鉗子を使用して、左肺の上部を慎重に持ち上げて肺動脈を露出させる。左アジゴス静脈を閉じたり破裂させたりしないように注意して、動脈の周りのクリップとアプリケーターを閉じます。扁桃を使用して切開をさらに開き、筋線維を分離する。別の媒体ヘモクリップを合字クリップアプリケーターにロードした後、非外傷性鉗子と標準的な組織鉗子を使用して、左の主気管支および左肺静脈が視覚化されるまで、肺の下部を切開から持ち上げる。左側の主気管支と肺静脈を第2のヘモクリップと一緒に慎重にリゲートし、はさみを使用してクリップを切断または引き裂くことなく肺を取り除きます。次に、任意の血液を吸収し、任意の出血を止めるために滅菌ガーゼの小片を使用しています。針ホルダーと4-0のプロレン縫合糸を使用して、肋骨と肋間筋を閉じます。肋間筋を閉じる前に、外科的切開から離れた胸腔に16ゲージのカテーテルを挿入し、第7肋間空間に挿入し、すぐに針を取り除き、カテーテルを所定の位置に残します。胸管が取り除かれると穴が閉じ、縫合糸を結んで肋骨を閉じるように、5-0縫合糸を皮膚と胸管の周りに置きます。5-0縫合糸で皮膚と皮下空間を閉じ、3ミリリットルの注射器を使用して胸郭の正常な負圧を回復させるために、胸膜腔を通して胸膜腔から空気を避難させます。針ホルダーを使用して、空気が胸腔に戻るのを防ぐために、カテーテルをすぐにクランプします。カテーテルを取り外し、縫合糸を結んで穴を閉じます。肺炎切除術および単crotaline群では、重度の肺高血圧症は、未処理の恥動物を制御するのと比較して平均肺動脈圧の増加によって証明されるように、21日目までに発症する。肺切除とSugen群では、平均肺動脈圧は対照群の3倍高い。右心室収縮期圧は、対照群と比較して、モノクロータリンおよびスゲン処理動物の両方ではるかに高い。ヘマトキシリンとエオシン染色された正常ラット肺組織切片では、肺胞と肺胞構造の間の空間が明らかであり、血管は明確で正常な厚さである。肺動脈性高血圧肺には、改造、血管壁の肥厚、血管の重度の収縮、炎症および焦点肺動脈炎の証拠がある。動物は肺を失うことを補う必要があるので、回復期間中に忍耐することが重要です。バイタルサインを監視し、必要に応じて追加の酸素または肺の体積を与えます。Sugenは、肺動脈性高血圧の臨床的関連徴候である内皮アポトーシスを作成します。げっ歯類の左肺切除術モデルは、科学者が流れの異常を研究し、肺動脈性高血圧の新しい治療法を開発する道を開いた。このモデルでは、イオブルラン、スーゲン、および/またはMCTを使用しているため、個人用保護具は常に着用する必要があります。

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組み合わせてモノクロまたは Sugen 肺高血圧ラットのモデルとして左肺全摘

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