Name: 2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-01T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: 学ぶマウス脳虚血・再灌流モデルによる脳卒中の病態生理学的メカニズム。右中大脳動脈と右総頸動脈の遠位結紮により虚血を誘導し、梗塞体積と免疫細胞浸潤を評価する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この作品は、省の科学と技術、台湾 (最も 106-2320-B-038-024, ほとんど 105-2221-E-038-007-MY3 と最も 104-2320-B-424-001) と台北医科大学附属病院 (107TMUH-SP-01) によって支えられました。この原稿は、ウォレス学術編集することによって編集されました。

制度上のアニマル ・ ケアおよび中央研究院、台北医科大学の使用委員会、実験動物の使用のためこのプロトコルを承認しました。
1. MCAO/再灌流モデル
<ol><li>手術までには、水と食事への無料アクセスとマウスを提供します。</li>
	<li>オートクレーブ手術ツールし、手術テーブルと 70% のエタノールを使用して機器を校正します。サージカル マスクと滅菌手袋を着用します。乾燥ビーズ滅菌器を使用して、複数マウス手術は 1 つの実験で行われます場合、手術器具を滅菌します。</li>
	<li>8-12 週齢マウスの麻酔 (質量: 25-30 g) 0.8% 水クロラール、腹腔内注射を介してを使用しています。麻酔下のマウスがないペダル反射 (テストとしてしっかりつま先ピンチを使用して)、anesthetization の後を確認します。</li>
	<li>麻酔下ではマウスの目の乾燥を防ぐために獣医軟膏を使用します。</li>
	<li>非観血的血圧測定システムを使用すると、マウスの血圧を監視します。</li>
	<li>その直腸温と動脈血液ガスを監視するのに生理学的モニタリング システムを使用します。36.5 ± で体温を維持 0.5 の ° c.</li>
	<li>予防的抗生物質 (25 mg/kg セファゾリン)8マウス皮下注入します。</li>
	<li>仰臥位加熱パッドの上にマウスを配置します。</li>
	<li>電気バリカンを使って、腹側頸部だけでなく、右目と右耳の間の領域でのマウスの毛皮を削って皮膚を公開します。</li>
	<li>脱毛クリームを使用してマウスの体内から毛皮をクリアし、交互に povidione ヨウ素と 70% エタノール scrbus 手術部位を消毒します。</li>
	<li>アイリスはさみを使用して、首に 1 cm 長い正中切開をカットします。</li>
	<li>アイリス鉗子を使用して、慎重に物理的な損傷を引き起こすことがなく迷走神経から無料の CCA を解剖します。</li>
	<li>5-0 絹糸を使用すると、CCA を分離します。</li>
	<li>右目と右耳の中間点で頭皮で 0.3 cm の切開を行います。</li>
	<li>刀を使用して、頬骨と squamosal 骨を公開する側頭筋をカットします。</li>
	<li>ステレオ解剖顕微鏡の下で、ドリルして右側に遠位 MCA の真上 2 mm 径の穴を作成します。</li>
	<li>10-0 縫合糸を使用して右側に遠位 MCA のトランクを縛る。</li>
	<li>非外傷性脳動脈瘤クリップを使用して右側に CCA をオクルードします。</li>
	<li>虚血の 10 または 40 分後動脈瘤クリップと MCA と CCA に血流を復元する縫合を削除します。</li>
	<li>頭に皮膚切開を密封するのに縫合クリップを使用します。</li>
	<li>縫合やステープル9首の皮膚を閉じることによって続いて縫合を用いた頚部皮膚切開をシールします。</li>
	<li>痛み救済9に対するブプレノルフィン (0.1 mg/kg) を皮下注入します。</li>
	<li>それは完全に麻酔から回復まで 36.5 ± 0.5 ° C 加熱パッドでマウスの体温を維持します。それは完全に回復するまで他の動物の会社に手術を受けた動物は返されません。それは十分な意識を取り戻すまで、無人すぎる動物は放置しないでください。</li>
	<li>自由に水をアクセスし、チョウは完全に回復した後、オートクレーブのケージにマウスを配置します。</li>
</ol>2. 塩化 2,3,5 トリフェニルテトラゾリウム染色
<ol><li>マウス腹腔内注射を介して 0.8% 抱水クロラールとの麻酔します。</li>
	<li>営業のはさみを使って、動物の首をはねます。</li>
	<li>頭の皮膚に切開を行いますにアイリスのはさみを使って頭蓋骨を公開します。</li>
	<li>前頭骨の前部をカットするはさみを営業に使用します。</li>
	<li>アイリスはさみを使用して、矢状縫合線に沿って頭蓋骨をカットします。</li>
	<li>骨 rongeur を使用して、前頭部および頭頂骨を押しのけて、脳を公開します。</li>
	<li>アイリス鉗子を使用して、脳を解剖します。</li>
	<li>マウス脳マトリックスとかみそりの刃を使用して 2 mm コロナ スライスを取得します。</li>
	<li>1 リン酸緩衝生理食塩水 x 2 %2,3,5 - 塩化トリフェニルテトラゾリウム) 37 ° C で 10 分間の脳切片を染色します。</li>
	<li>2 脳をリンス 10% ホルマリンで x。</li>
	<li>24 時間室温で 10% ホルマリンで脳を修正します。</li>
</ol>3. 梗塞サイズの測定
<ol><li>きれいなプラスチック スライドのセクションを配置し、吻側から尾側のセクションの向き。</li>
	<li>スキャナーを使用してスライドをスキャンします。メトリック定規を置き、スキャンした画像に表示されていることを確認します。スライドを裏返して裏面をスキャンします。</li>
	<li>ImageJ のソフトウェアを使用して各セクションの梗塞領域を計算します。<ol>
<li>イメージファイルを開き、イメージのスケールを設定します。</li>
		<li>フリーハンド選択範囲を使用して、領域の梗塞部位を選択します。</li>
		<li>利益 (率 ROI) マネージャーの領域を使用して、関心のある領域を測定します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>各セクションの梗塞領域を合計し、結果総梗塞体積を推定する切片厚を掛けます。</li>
</ol>4. 統計解析
<ol><li>グラフパッド プリズム 6 を使用して、学生のtの統計的有意性を決定するためのテストします。 注: バー グラフの誤差範囲 (SEMs) 平均値の標準誤差を表しています。</li>
	<li>使用 G * 電力 3.1 適切なサンプル サイズを計算し、電力解析10を実行します。</li>
</ol>

<ol><li>Woodruff, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology%2C+treatment%2C+and+animal+and+cellular+models+of+human+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurodegeneration%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke.</a> Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11(2011).</li>
<li>Chamorro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immunology+of+acute+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Neurology%22%5BJournal%5D)">The immunology of acute stroke.</a> Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice+-+Middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2423(2011).</li>
<li>Lee, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+15+blockade+protects+the+brain+from+cerebral+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior%2C+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice%3A+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).</li>
<li>Wellons, J. C. 3rd, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+strain-related+susceptibility+in+two+murine+recovery+models+of+global+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia.</a> Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).</li>
<li>Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+hypoxic+stroke%3A+a+new+mouse+model+of+stroke+with+high+throughput%2C+low+variability+and+a+quantifiable+functional+deficit%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit.</a> Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).</li>
<li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia%3A+Distal+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).</li>
<li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+Permanent+Distal+Middle+Cerebral+with+Common+Carotid+Artery+Occlusion+in+Aged+Rats+to+Study+Cortical+Ischemia+with+Sustained+Disability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability.</a> Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106(2016).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%3A+The+Journal+of+the+American+Society+for+Experimental+NeuroTherapeutics%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li>
<li>Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolongation+and+enhancement+of+postischemic+c-fos+expression+after+fasting%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting.</a> Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).</li>
<li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).</li>
<li>Tachibana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+Reperfusion+After+Brain+Ischemia+Has+Beneficial+Effects+Beyond+Rescuing+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons.</a> Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).</li>
<li>Gan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+neurons+recruit+natural+killer+cells+that+accelerate+brain+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte-derived+interleukin-15+exacerbates+ischemic+brain+injury+via+propagation+of+cellular+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).</li>
<li>Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+architecture+underlying+variation+in+extent+and+remodeling+of+the+collateral+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation.</a> Circulation Research. 107 (4), (2010).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

MCAO 灌マウス モデル採用して人間の一過性虚血を模倣する動物モデルであります。この動物モデルは、脳卒中の病態を検討するトランスジェニック、ノックアウト マウス系統に適用できます。プロトコルのいくつかの手順は、特に重要です。(簡単に MCA から出血を引き起こす不適切な行動で、頭蓋骨に穴を作成するときは、1) ドリルを慎重に使用する必要があります。(2) の MCA が破損していない必要がありますと結紮プロシージャの前後に出血回避する必要があります。MCA の損傷7脳虚血再灌流のレベルに影響を与えます。MCAO 後 MCA 再灌流状態を確認する必要があります。咬合と MCA に血流の回復は、レーザーのドップラーを使用して分析できます。(3) CCA は、CCA 分離中に出血する必要があります。(これは梗塞サイズと死亡率の確率を高めることができるので、4) 迷走神経を CCA 分離中に破損していない必要があります。(5) マウスの体温は、36.5 ± で維持されるべき 0.5 の ° c.温熱療法には、梗塞サイズと死亡率11の確率が増加します...

脳虚血・再灌流マウス モデルは、虚血性脳損傷1病態生理学を調査するための最も広く使用されている実験的アプローチの一つです。脳虚血・再灌流は、末梢の免疫系を活性化ため、末梢の免疫細胞は虚血性の脳に潜入し、引き起こす神経損傷2。したがって、脳虚血・再灌流を模したマウスの信頼性と再現性のあるモデルは、脳卒中の病態生理を理解する必要です。
C57bl/6 j (B6) マウスでは、遺伝的に操作する簡単にことができますストローク実験で最も一般的に使用されるひずみです。脳虚血再灌流の状態を模した MCAO/再灌流の 2 つの一般的なモデルがあります。最初のシリコン コーティング フィラメントを採用して巡って MCA; 血流を閉塞する近位の MCAO の腔内のフィラメント モデルです。遮蔽のフィラメントはその後血流3を復元する削除されます。閉塞期間が長い場合は、皮質と皮質下のエリアの梗塞を引き起こすに対し、短い閉塞期間は皮質領域の病変の結果します。2 番目のモデルは、管外結紮縫合と動脈瘤のクリップ4の取り外しによって後の血流が回復、MCA の血流を減らすために MCA と CCA を含む遠位 MCAO の結紮モデルです。このモデルで皮質野に、梗塞が生じるし、死亡率が低い。MCAO/再灌流モデルの結紮は頭遠位 MCA のサイトを公開する必要があるので、サイトを簡単に確認することができます、プロシージャ中遠位 MCA の血流が中断されるかどうかを調べることは簡単です。
B6 マウス展示; ウィリス動脈輪の解剖学にばらつき脳虚血・再灌流5,6、7の後梗塞ボリュームに影響を与える可能性があります。現在、遠位 MCA8の結紮によってこの問題を克服することができます。本研究では、MCA 血流を閉塞し、一定期間虚血後再灌流の方法を確立します。脳虚血-再灌流モデルの 2 血管閉塞は、虚血の一定の期間の後で復元の血流と右遠位 MCA と右の CCA の結紮による MCA 領域の一過性虚血を誘発します。この MCAO/再灌流モデルは、脳虚血-再灌流4後安定したサイズ、虚血性の脳と行動の赤字で脳浸潤の免疫細胞の一括の梗塞を誘発します。

<table><tbody><tr><td>ボーンロンジャー</td><td>ディーナー</td><td></td><td>フリードマン</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td>Σ</td><td>B-044</td><td></td></tr><tr><td>セファゾリン</td><td>Σ</td><td>1097603</td><td></td></tr><tr><td>クロラール水和物</td><td></td><td>Σ C8383</td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ニコン</td><td>SMZ-745</td><td></td></tr><tr><td>電動クリッパー</td><td>ペットプロ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10%ホルマリン</td><td>シグマ</td><td>F5304</td><td></td></tr><tr><td>Germinatorドライビーズ滅菌器</td><td>Braintree Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iris Forceps</td><td>Karl Klappenecker</td><td></td><td>10 cm</td></tr><tr><td>Iris Scissors</td><td>Diener</td><td></td><td>9 cm</td></tr><tr><td>Iris Scissors STR</td><td>Karl Klappenecker</td><td></td><td>11 cm</td></tr><tr><td>Microdrill</td><td>Stoelting</td><td>FOREEDOM K.1070</td><td></td></tr><tr><td>マイクロハサミ-Vannas</td><td>HEISS</td><td>H-4240</td><td>刃 7mm、8cm</td></tr><tr><td>マウス脳マトリックス</td><td>ワールド精密機器</td><td></td><td></td></tr><tr><td>非侵襲的血圧システム</td><td>室町</td><td>MK-2000ST</td><td></td></tr><tr><td>手術ハサミ STR</td><td>カール・クラッペネッカー</td><td></td><td>14cm</td></tr><tr><td>生理モニタリングシステム</td><td>ハーバード大学装置</td><td></td><td></td></tr><tr><td>カミソリブレード</td><td>Ever-Ready</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stoelting げっ歯類ウォーマー</td><td>Stoelting</td><td>53810</td><td>加熱パッド</td></tr><tr><td>縫合糸クリップ</td><td>Stoelting</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ピンセット</td><td>IDEALTEK</td><td></td><td>No.3</td></tr><tr><td>Vetbond</td><td>3M</td><td>15672</td><td>外科用接着剤</td></tr><tr><td>10-0 縫合糸</td><td>UNIK</td><td>NT0410</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-トリフェニルテトラゾリウム塩化物</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td></td></tr></tbody></table>

2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

本研究では中大脳動脈 (MCA) 閉塞マウス モデルを用いて、脳虚血・再灌流を検討します。再現性と信頼性の高いマウス モデル、脳虚血・再灌流の病態を調査し、脳卒中患者の潜在的な治療戦略の決定に役立ちます。ウィリスの c57bl/6 マウスのサークルの解剖学の変化は、虚血性脳傷害後梗塞体積を影響します。研究は、その遠位部の MCA 閉塞 (MCAO) することができますこの問題を克服し、安定した梗塞サイズに示されています。本研究では、右 MCA への血流遮断による脳虚血・再灌流の 2 血管閉塞マウス モデルを確立します。我々 は遠位方向右 MCA と右総頚動脈 (CCA) を縛るし、虚血のある特定の期間後に血流を復元します。この虚血再灌流傷害は、安定したサイズと行動の赤字の梗塞を誘発します。末梢の免疫細胞は、24 h 浸透期間内虚血性脳を潜入します。また、皮質の領域で神経細胞の損失より長い再灌流時間の少ないです。したがって、この 2 血管閉塞モデルは脳虚血後再灌流期間中に免疫応答と神経回復の調査に適しています。

この MCAO/再灌流手順は、右 MCA 周辺皮質梗塞を生産し、行動の赤字の原因します。虚血性梗塞量 (図 1 a, B) と (図 1d) 神経細胞の損失の程度が異なるが結紮期間の増加を通じて右 MCA 領域の大脳皮質で作成されました。この MCAO/再灌流障害は、MCAO 灌 (図 2) 後 48 h で動物の自発運動を減少しました。末梢免疫細胞 (CD45高細胞) の一括は、虚血性脳 (同側半球) を潜入しても、脳虚血-再灌流後 (図 3)。また、MCAO モデルでこの 2 血管閉塞モデルを比較し、これらの 2 つのモデルの梗塞体積が大幅に異なる (図 4) でなかったことを発見しま...

脳虚血再灌流のマウス モデルを確立して、脳卒中の病態を調査します。我々 は遠位右中大脳動脈と右総頚動脈を結紮し、10 または 40 分間虚血後血流を復元します。

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

この2血管閉塞マウス脳虚血再灌流モデルは、脳卒中の病態生理を調べることができる。このモデルは虚血性脳の免疫細胞に浸透する脳の大部分の安定な梗塞容積を誘導し、脳虚血再灌流後の行動障害を引き起こす。このモデルでは、皮質領域に梗塞が起き、死亡率が低い。ライゲーションMCAO再灌流モデルは遠位MCAのサイズを露出させるために頭蓋開頭術を必要とするため、サイズを容易に確認することができ、そして処置の間に遠位MCAOの血流が中断されるかどうかの試験は簡単である。手術まで、マウスに水と食べ物への無料アクセスを提供します。手術用具をオートクレーブし、手術台および装置を消毒するために70%エタノールを使用する。8〜12週齢のマウスを麻酔した後、しっかりとしたつまみを使用してテストしたときにペダル反射がないようにしてください。マウスが麻酔下にある間、眼の乾燥を防ぐために獣医軟膏を使用してください。血圧を監視するには、まず髪を取り除き、次に非侵襲的な血圧システムと生理学的モニタリングシステムを使用して直腸温度および動脈血性ガスを監視する。予防的抗生物質でマウスを皮下注射する。次に、マウスを加熱パッドの上のスパイン位置に置きます。皮膚を露出するには、電気バリカンを使用して腹側首領域と右目と右耳の間の領域で毛皮を剃ります。動物の体から毛皮を上皮クリームで取り除き、70%エタノールで手術部位を消毒する。その後、虹彩はさみを使用して首に1センチメートルの正中線切開をカットします。虹彩鉗子では、身体損傷を引き起こすことなく、迷走神経から離れた一般的な頸動脈を慎重に解剖し、5-0シルク縫合糸を使用して動脈を分離する。次に、虹彩はさみを使用して、右目と右耳の中間点で頭皮に0.3センチメートルの切開を行います。マイクロハサミを使用して、側頭筋を切断して、頬骨とスカモサル骨を露出させる。マウスをステレオ解剖顕微鏡の下に置き、マイクロドリルを使用して、右側の遠位中大脳動脈の上に直接2ミリリットルの穴を作成します。10-0 縫合糸を使用して右側遠位 MCA のトランクをリゲートし、非外傷性動脈瘤クリップを使用して右側の CCA を閉塞させます。虚血の所望の持続期間の後、MCAおよびCCAへの血流を回復させるために縫合および動脈瘤のクリップを取り除く。縫合クリップを使用して、頭の皮膚切開を密封し、頸部皮膚切開部を外科用接着剤で密封します。痛みの軽減のために皮下にブプレノルフィンを注入します。.加熱パッドの36.5プラスマイナス0.5度で動物の体温を維持し、麻酔から完全に回復するまで放置したり、他の動物の会社に戻したりしないでください。最後に、マウスをオートクレーブケージに入れ、完全に回復した後に水や食べ物に自由にアクセスできるようにします。虹彩はさみを使用して、麻酔と首を切られたマウスの頭部の皮膚を切開

two-vessel-occlusion-mouse-model-of-cerebral-ischemia-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

ラットにおける虚血性脳損傷の外科的誘導は、脳卒中の研究に広く使用されているモデルです。ここでは、中大脳動脈の閉塞による局所脳虚血の誘導を示す。組織染色および磁気共鳴イメージングによる結果梗塞の可視化も示されている。...

ラット中大脳動脈の血管縫合閉塞による局所脳虚血モデル

中大脳動脈の糸状閉塞は、マウスでは虚血性脳卒中を研究するための一般的なモデルです。...

マウスにおけるモデリングのストローク - フィラメントモデルと中大脳動脈閉塞

脳卒中の病態生理学を理解するためには、信頼性のあるモデルを使用することが重要です。この論文は、マウスにおいて最も頻繁に使用される脳卒中モデルのいずれかを説明する、中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルと呼ばれる再潅流と（また腔内フィラメントまたは縫合モデルと呼ばれます）。...

マウスの中大脳動脈閉塞再灌流誘発性の脳卒中のための外科的アプローチ

私たちは、シリコーンコーティング縫合糸を使用して、中大脳動脈の閉塞によって誘発される脳卒中のマウスモデルを記述します。このプロトコルは、永久的な閉塞または一時的な虚血を誘発し、続いて再灌流を誘発するために適用することができます。...

梗塞エリアの中央動脈閉塞技術と可視化を使用したマウスにおける虚血性脳卒中および虚血 - 再灌流の誘導

腔内フィラメント中大脳動脈閉塞症は、齧歯動物で実験的ストロークの生体内で最も頻繁に使用されるモデルです。一般的な頚動脈修復が可能にする手術方法は、総頸動脈の再灌流と中大脳動脈領域に完全再灌流が可能ここでは、実行されます。...

マウスにおける一般的な頸動脈の修理で再灌流を許可する中大脳動脈閉塞

このプロトコルは、中型の梗塞と優れた生存率を持つユニークなマウスストロークモデルを示しています。このモデルにより、脳卒中前臨床研究者は虚血期間を延長し、高齢マウスを使用し、長期的な機能的転帰を評価することができます。...

高齢マウスの脳卒中転帰を研究するための修正経頭蓋中大脳動脈閉塞モデル

このプロトコルは中間の大脳の動脈のintraluminal閉塞によってマウスの一時的な焦点の大脳の虚血のモデルを記述する。さらに、磁気共鳴画像法と行動テストを使用した結果評価の例が示されています。...

脳卒中の一過性中大脳動脈閉塞モデル

ここでは、C57BL/6Jマウスの経頭蓋電気凝固術による遠位中大脳動脈閉塞(dMCAO)モデルを確立し、その後の神経学的行動と組織病理学的特徴を評価するためのプロトコルを提示します。...

遠位中動脈閉塞法を用いたマウスにおける急性虚血性脳卒中の誘発

現在のプロトコルは、損傷を引き起こすことなく脳血管の解剖学的構造を保存する中大脳動脈閉塞/再灌流のラットモデルを記述しています。...

脳血管の解剖学的構造を損なうことなく中大脳動脈閉塞・再灌流のラットモデル

このプロトコルは、研究者が修正されたLonga外部頸動脈法を使用してマウスで中大脳動脈閉塞手順を実行するためのステップバイステップのガイドを提供します。この記事で紹介する変更は、中大脳動脈閉塞の精度を高め、完全な再灌流を確保することを目的としています。...

完全再灌流のためのLonga中大脳動脈閉塞法の最適化

このプロトコルは、総頸動脈を介した中大脳動脈閉塞再灌流の準備プロセスを説明しています。...

中大脳動脈閉塞再灌流のための修正モデル調製

学ぶマウス脳虚血・再灌流モデルによる脳卒中の病態生理学的メカニズム。右中大脳動脈と右総頸動脈の遠位結紮により虚血を誘導し、梗塞体積と免疫細胞浸潤を評価する。

2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル

さらに動画を探す