二本鎖 RNA と否定的な感覚の RNA のウイルス感染におけるパターン認識受容体の共焦点レーザー顕微鏡

二本鎖 RNA ウイルス RNA の複製中に生産は、生来の免疫応答を誘導するパターン認識受容体によって認識できます。否定的な感覚の RNA のウイルスの低レベルの dsRNA と PRRs の相互作用は不明します。アレナ ウイルス科 dsRNA と個々 の細胞における PRR を視覚化する共焦点顕微鏡法を行った。

従来の二本鎖RNA検出アッセイは、通常、陰性感覚RNAウイルス感染で形成された二本鎖RNAを検出するのに十分な感度ではない。したがって、二本鎖RNAと宿主パターン認識受容体との相互作用は、これらのウイルスにとってほとんど不可解なままである。このプロトコルを利用して、ウイルス核タンパク質、二本鎖RNA、陰性感覚RNAウイルスの単一細胞レベルでPRRをホストする間の相互作用を可視化し、特徴付けることができる。これは、個々の細胞における二本鎖RNAと2つのウイルスまたは宿主タンパク質標的の同時染色を可能にする多重アッセイである。RNA-FISHアッセイとは異なり、この技術はRNA配列に依存せず、通常はタンパク質標的の抗体検出と互換性があります。感染の24時間前に、200,000個のヒト肺上皮A549細胞をポリ-D-リジンコーティングガラスカバースリップに12ウェルプレートに播種し、37で成長させることで開始します。