Name: 行動追跡とメキシコの血脈の Neuromast イメージング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 58 s
Description: 学ぶメキシコ洞窟魚の行動追跡と神経芽細胞イメージング法。振動刺激による行動アッセイとDASPEI染色を用いて、進化生物学および生物医学研究のための高スループット解析システムを確立する。

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私たちはこの原稿で使用される実験魚の魚のケアのため N. チェトラーロ、N. サイモン、C. バルディーズ、c. Macapac、j. チョイ、L. Lu、j. グエン、S. Podhorzer、H. Hernandes、j. フォン、加藤淳子、I. 主を含む吉澤研究室のすべてのメンバーに感謝します。また、赤外線 CCD カメラを組み立てる私を訓練する p. Masek を含む A. キーン研究室メンバーを感謝いたします。最後に、ハワイ大学マノアの貴重なビデオ、特に B. スミス、j. ラムと S のホワイト メディア研究室 - 社会科学の大学 - 通信学校に感謝したいと思います。この作品は、ハワイのコミュニティ財団 (16CON 78919 と 18CON 90818) によって支えられたし、私に健康の日の出の国立研究所 (P20GM125508) を付与します。

<ol><li>Keene, A. C., Yoshizawa, M., McGaugh, S. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKeene%2C+AC+%22Biology+and+Evolution+of+the+Mexican+Cavefish.+Biology+and+Evolution+of+the+Mexican+Cavefish%22">Biology and Evolution of the Mexican Cavefish. Biology and Evolution of the Mexican Cavefish</a>. , Elsevier Inc. Amsterdam. (2015).</li>
<li>Mitchell, R. W., Russell, W. H., Elliott, W. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMitchell%2C+RW+%22Mexican+eyeless+characin+fishes%2C+genus+Astyanax%3A+Environment%2C+distribution%2C+and+evolution.Special+publications+the+museum+Texas+Tech+University%22">Mexican eyeless characin fishes, genus Astyanax: Environment, distribution, and evolution.Special publications the museum Texas Tech University</a>. (12), Texas Tech Press. Texas. (1977).</li>
<li>Wilkens, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+genetics+of+epigean+and+cave+Astyanax-fasciatus+%28Characidae%2C+Pisces%29+-+Support+for+the+neutral+mutation+theory%5BTitle%5D)+AND+%22Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Evolution and genetics of epigean and cave Astyanax-fasciatus (Characidae, Pisces) - Support for the neutral mutation theory.</a> Evolutionary Biology. 23, 271-367 (1988).</li>
<li>Fumey, J., Hinaux, H., Noirot, C., Thermes, C., Rétaux, S., Casane, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+late+Pleistocene+origin+of+Astyanax+mexicanus+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Evidence for late Pleistocene origin of Astyanax mexicanus cavefish.</a> BMC Evolutionary Biology. 18 (1), 1-19 (2018).</li>
<li>Yoshizawa, M., Gorički, S., Soares, D., Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+a+behavioral+shift+mediated+by+superficial+neuromasts+helps+cavefish+find+food+in+darkness%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Evolution of a behavioral shift mediated by superficial neuromasts helps cavefish find food in darkness.</a> Current Biology. 20 (18), 1631-1636 (2010).</li>
<li>Moran, D., Softley, R., Warrant, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eyeless+Mexican+cavefish+save+energy+by+eliminating+the+circadian+rhythm+in+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Eyeless Mexican cavefish save energy by eliminating the circadian rhythm in metabolism.</a> PloS One. 9 (9), e107877(2014).</li>
<li>Moran, D., Softley, R., Warrant, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+energetic+cost+of+vision+and+the+evolution+of+eyeless+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">The energetic cost of vision and the evolution of eyeless Mexican cavefish.</a> Science Advances. 1 (8), e1500363(2015).</li>
<li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Evolution+of+a+Series+of+Behavioral+Traits+is+associated+with+Autism-Risk+Genes+in+Cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">The Evolution of a Series of Behavioral Traits is associated with Autism-Risk Genes in Cavefish.</a> BMC Evolutionary Biology. 18 (1), 89(2018).</li>
<li>Riddle, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+in+cavefish+as+an+adaptation+to+a+nutrient-limited+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance in cavefish as an adaptation to a nutrient-limited environment.</a> Nature. 555 (7698), 647-651 (2018).</li>
<li>Protas, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+cavefish+reveals+molecular+convergence+in+the+evolution+of+albinism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of cavefish reveals molecular convergence in the evolution of albinism.</a> Nature Genetics. 38 (1), 107-111 (2006).</li>
<li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+genetic+architecture+underlies+the+emergence+of+sleep+loss+and+prey-seeking+behavior+in+the+Mexican+cavefish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Distinct genetic architecture underlies the emergence of sleep loss and prey-seeking behavior in the Mexican cavefish.</a> BMC Biology. 13 (1), 15(2015).</li>
<li>Duboué, E. R., Keene, A. C., Borowsky, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+convergence+on+sleep+loss+in+cavefish+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Evolutionary convergence on sleep loss in cavefish populations.</a> Current Biology. 21 (8), 671-676 (2011).</li>
<li>Fernandes, V. F. L., Macaspac, C., Lu, L., Yoshizawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+developmental+plasticity+and+a+coupling+between+left+mechanosensory+neuromasts+and+an+adaptive+foraging+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Evolution of the developmental plasticity and a coupling between left mechanosensory neuromasts and an adaptive foraging behavior.</a> Developmental Biology. 441 (2), 262-271 (2018).</li>
<li>Pérez-Escudero, A., Vicente-Page, J., Hinz, R. C., Arganda, S., de Polavieja, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((idTracker%3A+tracking+individuals+in+a+group+by+automatic+identification+of+unmarked+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">idTracker: tracking individuals in a group by automatic identification of unmarked animals.</a> Nature Methods. 11, 743(2014).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nature Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li>
<li>Yoshizawa, M., Jeffery, W. R., Van Netten, S. M., McHenry, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sensitivity+of+lateral+line+receptors+and+their+role+in+the+behavior+of+Mexican+blind+cavefish+%28Astyanax+mexicanus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The sensitivity of lateral line receptors and their role in the behavior of Mexican blind cavefish (Astyanax mexicanus).</a> Journal of Experimental Biology. 217 (6), (2014).</li>
<li>Lee, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLee%2C+A+%22Virtualdub%22">Virtualdub</a>. , http://www.virtualdub.org/ (2014).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Cavallari, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blind+circadian+clock+in+cavefish+reveals+that+opsins+mediate+peripheral+clock+photoreception%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">A blind circadian clock in cavefish reveals that opsins mediate peripheral clock photoreception.</a> PLoS Biology. 9 (9), e1001142(2011).</li>
<li>Swimmer, B., Lang, H. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSwimmer%2C+B+%22Surface+Wave+Discrimination+between+Prey+and+Nonprey+by+the+Back+Swimmer+Notonecta+glauca+L.+%28Hemiptera+%2C+Heteroptera+%29%22">Surface Wave Discrimination between Prey and Nonprey by the Back Swimmer Notonecta glauca L. (Hemiptera , Heteroptera )</a>. 6 (3), Springer Stable. https://www.jstor.org/stable/4599284 233-246 (1980).</li>
<li>Montgomery, J. C., Macdonald, J. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMontgomery%2C+JC+%22Sensory+Tuning+of+Lateral+Line+Receptors+in+Antarctic+Fish+to+the+Movements+of+Planktonic+Prey%22">Sensory Tuning of Lateral Line Receptors in Antarctic Fish to the Movements of Planktonic Prey</a>. 235 (4785), American Association for the Advancement of Science Stable. https://www.jstor.org/stable/1698962 195-196 (1987).</li>
<li>Prober, D. A., Rihel, J., Onah, A. A., Sung, R. J., Schier, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypocretin%2Forexin+overexpression+induces+an+insomnia-like+phenotype+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hypocretin/orexin overexpression induces an insomnia-like phenotype in zebrafish.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (51), 13400-13410 (2006).</li>
<li>Zhdanova, I. V., Wang, S. Y., Leclair, O. U., Danilova, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+promotes+sleep-like+state+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Melatonin promotes sleep-like state in zebrafish.</a> Brain Research. 903 (1-2), 263-268 (2001).</li>
<li>Nussbaum-Krammer, C. I., Neto, M. F., Brielmann, R. M., Pedersen, J. S., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+Spreading+and+Toxicity+of+Prion-like+Proteins+Using+the+Metazoan+Model+Organism+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), e52321(2015).</li>
<li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRasband%2C+WS+%22Object+Tracker%22">Object Tracker</a>. , https://imagej.nih.gov/ij/plugins/tracker.html (2000).</li>
<li>Ferreira, T., Rasband, W. Create Shortcuts. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFerreira%2C+T+%22ImageJ+User+Guide%22">ImageJ User Guide</a>. , https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/146-31.html#sub:Create-Shortcuts... (2012).</li>
<li>Lochmatter, T., Roduit, P., Cianci, C., Correll, N., Jacot, J., Martinoli, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLochmatter%2C+T+%22SwisTrack%22">SwisTrack</a>. , https://en.wikibooks.org/wiki/SwisTrack (2008).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

これらの提案手法は簡単にアクセスが、フリーウェア起源の性質を実行するために複雑にすることができます。したがって、試用版の試金および任意の実際の実験前に、解析を実行することを強くお勧めします。
データ生成の速度は、実験と解析のフレームワークを確立したら迅速に対応できます。いったん確立すれば、VAB の試金のための 7 分のレコードの 2 つの魚、活動・睡眠試金のための 24 h で 30 魚、イメージング、最終的なイメージをキャプチャする MS222 麻酔から始まって neuromast の 2.5 〜 3 分で 1 つ魚することが可能です。ビデオと画像解析の期間は使用するコンピューターの性能によってかなり異なります。4 コア CPU と 8 GB の RAM を持つ PC を使用して、VAB 分析が魚ごとの 5-7 分を取ることができる、活動・睡眠解析 30 魚のグループごとの 6-8 時間を取ることができる、neuromast 画像解析は、魚あたり 5 または 10 分を取ることができる (単一のイメージの両側、頭蓋領域、それぞれ)。市販ソフトウェア (材料表</...

メキシコのテトラ、アステュアナクス メキシコ(オキナヒメジ: 発音)、2 つの根本的に異なる代替モーフ - 発見、表面住居モーフといくつか異なるから成るブラインド、洞窟住居のモーフを持っていることのための魚の間で一意です人口1。異なる形態と生理学、彼らは、まだ interfertile2,3。これら interfertile モーフは、急速に進化している (~ 20,000 年)4がそれらの迅速な適応策の検討のための理想的なモデル システムに表示されます。血脈は味覚芽、シグナリング、多動性、振動刺激の特定周波数に合わせて採餌行動の増加数の密度増加を含む分岐形態および行動特性のスイートを持っている知られている、不眠。5採餌と暗いと食品スパース環境6、7のエネルギーの節約のための洞窟の暗闇の中で有利になるために示唆されたいくつかの可能性が高いが、同時に進化これらの動作の多くは。
多くの進化モデル システムでは、ほとんどの種は複雑な環境での連続的な勾配の間で配布されているので、環境への応答でどのように動物の形態と行動変化の統合の知識を習得することは困難です。ただし、洞窟と表面モーフアステュアナクス高コントラスト シャープ エコトーンで区切られた環境で進化した間の対照は、動物の進化を理解するアステュアナクスエクセレント モデルとして浮上しているにつながっています。遺伝子とアダプティブ特性と環境で選択の発達過程をより簡単にリンク可能です。さらに、アステュアナクスのこれらの特性の最近の医学研究は、これらの特徴が人間の症状8,9,10をパラレル可能性がありますを示しています。たとえば、社会性と眠りの損失と利得、反復的な行動、多動やコルチゾール レベルの自閉症スペクトル障害8の人間で観察されるものに似ています。
多くの行動や形質の複雑な共進化に対処するため、基になる遺伝学的および分子経路を強調するそれらの多くを試金するため有利です。アステュアナクスの表面、洞窟、およびハイブリッドのモーフの洞窟型行動表現型の程度の特性評価法は、ここに記載しました。表現型を特徴付けるために分析焦点の行動が洞窟に適応した採餌行動 (振動の魅力の動作、VAB と今後は呼ばれる)、および多動性/睡眠期間11,12。また発表は、VAB13に関連付けられている感覚システムのイメージング法です。最近では、行動実験を実行するための多くのオープン ソースのトラッキング ソフトウェア利用可能な14,15となっています。これらの作品も非常に長い 10 分未満の短いビデオのため。しかし、それは強烈な計算/追跡時間のため、ビデオが長い場合は問題になります。対応の市販ソフトウェアは高価なことができます。提示方法は主にフリーウェアを使用し、コスト ・高スループット方法とみなされます。また含まれている代表的な結果に基づいていますこれらのメソッド。

<table><tbody><tr><td>4-Di-1-ASP (4-(4-(ジメチルアミノスティリル)-1-メチルピリジニウムヨウ化物)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D3418</td><td></td></tr><tr><td>880 nm 波長ブラックライト</td><td>アドバンスドイルミネーション</td><td>BL41192-880</td><td></td></tr><tr><td>avfs</td><td>フリーウェア</td><td>バージョン 1.0.0.6</td><td>http://turtlewar.org/avfs/</td></tr> <tr><td>Avisynth</td><td>フリーウェア</td><td>バージョン 2.6.0</td><td>http://avisynth.nl/index.php/Main_Page</td></tr><tr><td>Cygwin</td><td>フリーウェア</td><td>バージョン2.11.0</td><td>https://www.cygwin.com/</td></tr> <tr><td>円筒形アッセイチャンバー(Pyrex 325 mlガラス皿)</td><td>Corning</td><td>3140-100</td><td>直径10 cm、高さ5 cm</td></tr>、<tr><td>Ethovision XT</td><td>Noldus Information&nbsp;テクノロジー、ワーヘニンゲン、オランダ</td><td>バージョン14</td><td>https://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt</td></tr><tr><td>魚水族館シリンダーソフトスポンジストーンウォーターフィルター、ブラック</td><td>ジャルディン(Amazon.com 経由)</td><td>NA</td><td>睡眠/多動記録システム用スポンジフィルター</td></tr><tr><td>グレードAブラインシュリンプエビ卵</td>ブ<td>ラインシュリンプダイレクト</td><td>BSEA16Z</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>フリーウェア</td><td>バージョン1.52e</td><td></td></tr> <tr><td>https://imagej.nih.gov/ij/ macro 1.8/12.5-75mm Cマウントズームレンズ</td><td>Toyo</td><td>NA</td><td>3DプリンターでプリントしたCマウントを使用してUSBウェブカメラに取り付け</td></tr>ます <tr><td>ニュートラルレギュレータ</td>ー <td>Seachem</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>光学キャストプラスチックIRロングパスフィルター</td><td>Edmund optics</td><td>43-948</td><td>USBウェブカメラのCCDに収まるように小さくカットします</td></tr><tr><td>pfmap</td><td>フリーウェア</td><td>ビルド 178</td><td>http://pismotec.com/download/ (「アーカイブのダウンロード"下部のリンク)</td></tr><tr><td>Reef Crystals Reef Salt</td><td>Instant Ocean</td><td>RC15-10</td><td></td></tr><tr><td>SwisTrack</td><td>フリーウェア</td><td>バージョン 4</td><td>https://en.wikibooks.org/wiki/SwisTrack</td></tr><tr><td>USB ウェブカメラ (LifeCam Studio 1080p HD ウェブカメラ)</td><td>Microsoft</td><td>Q2F-00013</td><td>フロントの 2-2.5 cm を切り取ります</td></tr><tr><td>WinAutomation</td><td>フリーウェア</td><td>バージョン 8</td><td>https://www.winautomation.com/ (無料のスタンドアロン)この手順のアプリ)</td></tr><tr><td>Windowsオペレーティングシステム</td><td></td>Microsoft <td>7、8、または10</td><td>https://www.microsoft.com/en-us/windows</td></tr><tr><td>x264vfw</td><td>フリーウェア</td><td>NA</td><td>https://sourceforge.net/projects/x264vfw/</td></tr></tbody></table>

行動追跡とメキシコの血脈の neuromast イメージング

Behavioral Tracking and Neuromast Imaging of Mexican Cavefish

洞窟住居動物は、一連の絶え間なく暗くて食品スパース環境に適応する形態および行動の特性の進化しています。これらの特性の間で採餌行動は行動形質の進化の機能性に役に立つのウィンドウの 1 つです。魅力の振動挙動を分析するための更新方法は、ここに記載した (VAB: 適応の採餌行動) と洞窟に適応したテトラの関連するシグナリングのイメージングアステュアナクス メキシコ。さらに、一連の多動と睡眠の損失などを含む追加の血脈挙動の高速追跡手法を提示しました。血脈はまた asociality、反復的な行動とより高い不安を示します。したがって、血脈は進化した行動のための動物モデルとして機能します。これらのメソッドは、他の種類の動作に適用することができますフリー ソフトウェアとカスタム スクリプトを使用します。これらのメソッドは、市販のトラッキング ソフトウェアに実用的かつコスト効果の高い選択肢を提供します。

ここに記載した結果は、提示方法と取得することができるものの代表例です。したがって、結果は、血脈と実験条件によって表層魚群のここで示したものから少し逸脱できます。
魅力の振動挙動
図 3洞窟の表面魚 VAB の代表的な結果を見つけることが。表面の魚 (図 3 a; 血脈と共有属性) や振動棒 (図 3 b) に毒の強い魅力でエッジ次の動作に注意してください。ピークの魅力のレベルは、2 つのモーフの行動表現型の重要な違いを表す血脈 (図 3 D) がない表面魚 (<s...

ここでは、行動と生体染色、メカノセンシング メキシコの血脈のシリーズの高スループット研究の手法を提示します。これらのメソッドは、動作研究実用的かつコスト効果の高い方法を提供するフリー ソフトウェアとカスタム スクリプトを使用します。

行動追跡とメキシコの血脈の Neuromast イメージング

Cave-dwelling animals have evolved a series of morphological and behavioral traits to adapt to their perpetually dark and food-sparse environments. Among ...

洞窟フィッシュは、進化と生物医学的プロセスを理解するために素晴らしい動物の壁画として育てています。私たちは現在、これらの形質を人間の症状の平行線として使用して生物医学的調査を行っています。ここでは、進化研究と生物医学的研究の両方に使用できる行動アッセイと分析システムのバッテリーを示します。アッセイ振動が引き付け、行動を起こします, 振動ガラス棒は、暗闇の中で1匹の魚を含むガラスボウルに挿入されます.魚は、12、12光、暗いサイクルで条件付き水でアッセイの4日前に順応されます。アッセイの日の前日に、順応の3日後に、アッセイ室の水を新鮮な条件水に置き換えます。アッセイの日には、停止が振動に対する反応を変えるので、魚はアッセイが完了するまで食べ物を奪われます。40ヘルツにチューニングすることにより、振動放出装置を準備します。適切な記録パラメータ、ストック条件、および出力先ファイルを設定します。暗い部屋に赤外線バックライトで照らされた記録段階にアッセイシリンダーを置き、魚がステージに置かれた後3分間順応できるようにします。暗闇の中で3分間順応した後、3分30秒のビデオを記録します。録音の始まりに、直径7.5ミリメートルの振動ガラス棒を水柱に挿入し、深さ約5センチメートル。魚は小さな騒音や振動を感知することができるので、振動ガラスロッドを水中に配置しながら、騒音や振動を避けてください。ビデオ録画を開始してから 30 秒以内にこの手順を完了し、3 分以上の動作が記録されるようにしてください。avs_creatorダブルクリックしてバッチ ファイルを実行します。は、圧縮された AVI ビデオを ImageJ 用の読み取り可能な形式に変換します。マクロは、グラフィカルユーザーインターフェースシェルにドラッグアンドドロップするだけでロードできます。このマクロは、次の分析に特定のホットキーを有効にします。作業ディレクトリに新しいフォルダを作成し、Process_ImageJ名前を付けます。このフォルダは、次の分析の出力ファイルを自動的に格納するために使用されます。分析するAVSビデオファイルを右クリックし、クイックマウントを選択します。AVS ファイルを外付けドライブとしてマウントしたら、ImageJ で AVI ファイルを開きます。距離測定のスケールを設定するには、直線選択ツールを使用してチャンバを横切って直線を描いてアッセイチャンバーの直径を選択し、クリックして分析し、スケール機能を設定します。私たちの場合は、9.4センチメートルを入力します。次のすべてのビデオ分析でスケールを標準化するために、グローバルのラジオボックスをチェックします。楕円形選択ツールを使用してアッセイチャンバー領域をコピーし、右クリックして画像の複製を選択します。この時点で、さらなる解析のために保持する

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Research

JoVE Journal

Behavior

行動

我々は、自由に同期して、感覚の内部に特別に設計された水槽の両方で正確かつ確実に、動物の電気器官吐出​​タイミング、上体位置姿勢を測定することにより、長時間にわたって弱電気魚の水泳の自発的挙動を研究するための技術のセットを記述隔離室。...

自由水泳弱電気魚の長期的な行動の追跡

このプロトコル我々 はアステュアナクス メキシコ大人を繁殖、幼虫を上げる手順をデモンストレーションし、表面の表現型を比較し、型の洞窟後仔魚にホール...

Post-larval 表現型解析およびホール マウント免疫組織化学のためメキシコ テトラアステュアナクス メキシコの調達

進化系アステュアナクス メキシコで遺伝子を操作するためのアプローチについて述べる。3 つの方法を示します: メダカ Tol2 を介した遺伝子導入、CRISPR/Cas9、および morpholinos...

メキシコの血脈遺伝子機能の操作

このプロトコルは、胚のアステュアナクス血脈遺伝子発現可視化を実現。 にします。このアプローチは非特異染色を最小限に抑えながら遺伝子式信号を最大の目標としてきた.

In Situ ハイブリダイゼーションアステュアナクス胚の Wholemount

このプロトコルは、歩行動作とメキシコの血脈睡眠を定量化するための方法論を詳しく説明します。前の分析は、これら社会的収容魚の動作を測定するため拡張されています。このシステムは、睡眠と他の魚種の活動に関する研究に広く適用できます。...

睡眠とメキシコの血脈の自発運動の自動測定

体外受精は、ラボ集団を維持し、下流アプリケーション用に同期胚を生成するために、様々なモデル生物と一般的に使用される技術です。ここでは、メキシコのテトラ魚、アスティアナックスメキシコの異なる集団のためにこの技術を実装するプロトコルを提示します。...

アスティアナックスメキシコのガメテコレクションと体外受精

この記事では、発達および進化研究の新たなモデルであるメキシコの四元...

アスティアナックスメキシカンスにおける最大繁殖と産卵の昇温温度変化

ホームケージ環境でのマウスの長期化と総合的なモニタリングが脳疾患のマウスモデルにおける異常な行動のより深い理解を提供しています。本論文では、現代的な行動分析の重要な構成要素として統合行動ステーション（INBEST）について説明します。...

統合された行動ステーション（INBEST）を有するマウス疾患モデルの行動表現型

このプロトコルは、研究者が条件付けられた場所の好みと自発運動行動感作アッセイを使用して、依存症のこれらの側面をテストするように設計された実験を行うことを可能にすることを目的としています。...

コカイン誘発性行動感作の評価とマウスにおける条件付け場所嗜好

人間の精神運動警戒試験（PVT）のラットのバージョンは、このようなパフォーマンスの精度、モータの速度、応答時期尚早、と注意で失効としてのヒト警戒の側面を含め、人間PVTを用いて測定したものと同様の注意の側面を測定することが記載されています。...

げっ歯類精神運動警戒試験（rPVT）：ラットとマウスの神経行動のパフォーマンスを評価するための方法

学ぶメキシコ洞窟魚の行動追跡と神経芽細胞イメージング法。振動刺激による行動アッセイとDASPEI染色を用いて、進化生物学および生物医学研究のための高スループット解析システムを確立する。

行動追跡とメキシコの血脈の Neuromast イメージング

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