Name: 建設と質間葉系幹細胞の骨分化を強化するため電気刺激室の使用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: 学ぶ電気刺激室の構築法と間葉系幹細胞の骨分化促進技術。低コストで再利用可能な装置を用いて、骨組織工学における細胞治療の成果向上に貢献する実験手法を解説します。

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この作品は、AO 財団創業助成金 (S-14-03 H)、ブランクフルトか本管、ドイツに拠点を置く Friedrichsheim 財団 (財団 Friedrichsheim) によって部分的に支えられました。

1. 電気刺激細胞培養室の建設
<ol><li>標準 6 も細胞培養皿; の 2 つの蓋を収集 EStim 室を構築するには99.99% プラチナ ワイヤ、60 cm の長さで直径 0.5-1 mm;シルバー コーティングされた銅線、0.6 mm の直径の長さ 70 cmペンチ。はんだごてキット;超伝導接着剤; の 1 つの管1 本のワイヤー ターミナル ブロック コネクタ、6 2.2 V Led の小型 (省略可能)。1 つの管の非腐食性シリコーン接着剤・塗装 (省略可能)。黒の絶縁テープ 1 巻標準、柔軟性、絶縁銅電線 (0.14 mm2)、2 m (材料表)。</li>
	<li>6 ウェル プレート蓋、マーク (〜 1 mm の直径) と、ドリル 2 つの穴で 25 mm 離れて、六つのそれぞれの外側の端近く井戸 (合計の 12 穴) の図 1 a, Bに示すように。</li>
	<li>白金線の 12 の 5 センチメートルの長さをペンチで切ったそれぞれの 1 つの端 3 センチを残して、L 字型に手動でワイヤーを曲げるし、他 2 cm。 2 つの 35 cm 長さにシルバー コーティングされたワイヤーをカットします。</li>
	<li>1 つの白金線の長い (3 cm) 曲がった終わりを挿入 (から内側から外側へ) 各穴に鉗子を使用してそれを曲げる、蓋の外側から突き出ている 1-2 mm を残してします。超伝導接着剤で蓋の穴に白金線を確保し、約 6 時間乾燥させておきます。</li>
	<li>(それが後で陰極として、図 1 aを参照してください) すべての 6 白金線の先端をはんだ銀被覆線のいずれかに蓋から突き出ています。シルバー コーティングされたワイヤーに (つまり、陽極となる後) 残り 6 プラチナ ワイヤをはんだ付け、同じ手順を繰り返します。<ol>
<li>(オプション) の実験中の機能を確認する六つの陽極と陰極の白金電極ペアのそれぞれの間の回路に Led を追加します。黒の絶縁テープ led (図 1) に培養皿の細胞を公開することを防止する LED それぞれの下の部分を配置します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>6 ウェル プレート蓋の左上隅にワイヤー ターミナル ブロック コネクタを接着し、両方のシルバー コーティングされたワイヤーを図 1に示すように、入力端子に接続します。</li>
	<li>(図 1 b、ふた Nr 2) 最初の蓋の端子台コネクタに合わせて 2 番目 6 ウェル プレート蓋の左上隅から 20 mm × 20 mm のセクションをカットします。最初のふたは、ふたを 2 つ目の電極を装備をカバー、粘着テープとテープします。<ol>
<li>2 つの蓋の接着を改善するために、シリコーン接着剤・塗装 (オプション) を使用します。シリコーン粘着剤の 3-5 mm の層で銀電極を用いた蓋をカバーし、12 時間乾燥して接着剤を許可する他のふたでカバーします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ワイヤ コネクタとバナナ オス コネクタ (4 mm) に他の端の出力端子に 2 つの標準的な絶縁銅線の片方の端を接続します。 注: これらのワイヤの長さは、電源、インキュベーター (図 1) の外に、セルが保持されます、インキュベーターの棚からの距離に依存します。</li>
	<li>投与量 (電圧) と DC 電源を調節することによって、細胞に配信 EStim のレジメンを調整します。<ol>
<li>前面パネルのオン/オフボタンを押して電源をオンに。ボタン1を押すと、チャンネル 1 をアクティブにします。</li>
		<li>ボタン Nr 4 (V セット) 電圧を設定するのにを押します。2、 .ボタンを押すと5 2.5 v. プレスEnterで負荷出力を設定します。</li>
		<li>2.5 V の負荷出力確認 (2,500 mV) 以下、簡略化された方程式によると 100 mV/mm、EStim に対応します。 VEStim = <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/59127/59127eq1.jpg"> ;または V = VEStim × d ここでは、 V = 電源電圧 (ミリボルト); 出力d = ミリメートル; で電極間距離VEStim刺激電圧の単位はミリボルト毎ミリメートル =。 注: この単純化は一定の直流電圧の場合にのみ適用されます。電極が、セルとの直接接触は、媒体とセル間の抵抗は無視代わりに、EStim は、媒体を介して細胞に配信されます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 間葉系幹細胞培養骨の中
<ol><li>購入し、実験の日まで液体窒素で市販ラット MSCs (材料の表を参照) を格納します。また、プロトコルによると他の動物から隔離 MSCs 公開他実験動物の使用のためのローカル制度上の規則に従って7,8です。</li>
	<li>実験の日に液体窒素貯蔵から MSCs の 1 バイアル (1 x 10 の6セル) を削除し、すぐに (1 分) 以内雪解けの 37 ° C に予熱水浴のセル<ol>
<li>層流フードの無菌条件の下で 50 mL の隼の管にピペットのバイアル コンテンツと 1% と 10% 熱不活化ウシ胎児血清 (FBS) 37 ° c、ダルベッコ変法イーグル培地 (DMEM; 1 x) から成る prewarmed 通常媒体 (NM) の 9 つの mL を追加ペニシリン/ストレプトマイシン液。300 × gで遠心分離によって 5 分間細胞をペレットします。</li>
		<li>層流フードの上澄みを除去し、37 ° c. に prewarmed NM の 12 mL で慎重に細胞ペレットを再懸濁しますT-75 細胞培養用フラスコに再懸濁細胞を転送します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>37 ° C、5% CO25% O2細胞の培養 (約 3-5 日) 後 80%-90% の合流点に到達するまで。</li>
	<li>セルを通路します。 注: は、層流フードの遠心分離と無菌条件下でインキュベーションを除くすべての操作を実行します。<ol>
<li>80%-90% の合流点に達すると後、細胞剥離液で細胞を取得します。細胞培養培地を吸引洗浄 1 x リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) で 2 倍、細胞剥離液 x 1 の 5 mL を追加し、5 分のためのインキュベーターにセルを返します。</li>
		<li>セルを取り外したら、一度剥離ソリューションを不活化する培地の等しい量を追加します。50 mL の隼のチューブの細胞を収集し、300 x gで 5 分で、それらをスピンします。</li>
		<li>培地を除去し、通常培の 1 mL の細胞を再懸濁します。トリパン ブルー染色で生菌数を評価します。</li>
		<li>12 ml prewarmed NM の新しい T-75 フラスコの種子 1 x 106セル。80%-90% の合流点に到達するまで 37 ° C、5% CO25% O2の細胞を培養します。 注: セル継 (手順 2.4.1–2.4.4) 繰り返すことができます数回必要な細胞数が得られるまで。セル 8 の通路よりも古いを使用しないでください。</li>
	</ol>
</li>
	<li>シード 9 x 10 nm (10% 熱不活化牛胎児血清, 1% ペニシリン/ストレプトマイシン、DMEM) 6 ウェル培養プレートの各ウェルに 3 mL の細胞。1 日 37 ° C、5% CO25% O2のセルを孵化させなさい。</li>
	<li>次の日は、培地を吸引し、骨分化培地 (OM; 10-7 M デキサメタゾン、10 mM の β-グリセロリン酸、アスコルビン酸-2-リン酸 0.05 mM と通常の培) 3 mL を適用します。</li>
	<li>インキュベーター内細胞 6 ウェル プレートを置き、37 ° C、5% CO25% O2を一晩インキュベートします。</li>
</ol>3. EStim の MSCs の治療
<ol><li>30 分; 70% エタノール溶液に電極を滅菌 EStim で細胞を処理日その後、さらに 30 分間キャビネット安全の UV 光の下でそれらを乾燥します。</li>
	<li>層流フード カバー電極、電極が培地で完全に水中に沈むことを確かめる装備ふた付き培養 MSCs を含む 6 ウェル プレート (必要であれば追加中)。インキュベーターにセルで覆われて 6 ウェル プレート (EStim 室) を転送し、その線を電源装置に接続します。</li>
	<li>2.5 V 電源セットの出力を読み込むし、1 h3,9EStim で細胞を治療します。</li>
	<li>刺激後、電源を外し、インキュベーターから EStim 室。無菌条件下で標準的な 6 ウェル プレートふた付け電極装備ふたを交換します。</li>
	<li>インキュベーターにセルを返し、一晩おきます。電極、まず PBS とし、70% エタノール溶液をクリーニングします。目の細かいサンドペーパーで電極表面から蓄積された腐食生成物をクリーニングします。</li>
	<li>6 日間連続の 3.1 から 3.5 の手順を繰り返します。日 4、EStim を適用する前に、無菌条件下で 1.5 mL の培地を吸引し、prewarmed 新鮮な om 1.5 mL でそれを置き換えることにより培養培地を変更します。</li>
	<li>7 日間連続の EStim の後、交換の媒体ごとに 3-4 日さらに 7 日間、培養細胞を維持します。</li>
</ol>4. 骨分化誘導測定
<ol><li>顕微鏡下で細胞の形態変化を分析します。</li>
	<li>として EStim の MSC 骨分化誘導、メジャー カルシウム沈着、アルカリホスファターゼ活性および骨マーカー遺伝子発現に及ぼす影響を評価するために他の所で説明した3,9。</li>
</ol>

<ol><li>Oryan, A., Kamali, A., Moshiri, A., Baghaban Eslaminejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Bone+Regenerative+Medicine%3A+What+Is+the+Evidence%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%2C+Tissues%2C+Organs%22%5BJournal%5D)">Role of Mesenchymal Stem Cells in Bone Regenerative Medicine: What Is the Evidence?</a> Cells, Tissues, Organs. 204 (2), 59-83 (2017).</li>
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</ol>

著者が明らかに何もありません。

ここでチャンバー、強化された骨分化誘導の結果 EStim による間葉系幹細胞を治療のための方法の構築について述べる.
提示 EStim セットアップ専門機器を必要としないし、若手研究者による標準的な幹細胞生物学・生化学研究室で実行できます。ただし、建物、EStim チャンバーを使って、特別な注意が必要、いくつかの重要なステップに。白金電極を処理するとき余分な注意が必要としてこの金属が非常に可鍛性、繊細です。鋼やタングステンなどの他の金属を使用できますが、彼らはことができる細胞13腐食に傾向がある、これらはいけません。また、電極とフタの洗浄/滅菌は、以来、このメソッドを何度もテストされており、汚染の問題をなくすために効果的なことが判明のプロトコルで説明として実行する必要があります。最後に、他にこの部屋を使用できますが EStim 敏感な細胞活動の足場の接着19、移行14,15</sup...

外傷や疾患による骨欠損の増加は、細胞治療や再生医療技術のさまざまな組み合わせを使用して扱われています。MSCs は、その比較的高い貪食、分離と拡張の効率と安全性1のため、そのような処置の選択のセルです。骨形成促進活動を最大化し、彼らの治療の有効性を最適化するため、(Mauney ら2がレビュー済み) として、これらの治療法での使用前に MSCs を操作するいくつかの方法を紹介されています。このような方法の 1 つは EStim MSC による骨分化培養3を強化し、生体内で4を治癒を促進するために示されています。EStim の MSCs の治療に着目した研究の数の増加、にもかかわらず EStim のプロ骨形成促進効果を最大化するための最適な療法を定義するが。
他体外法 EStim 利用塩橋金属電極5から細胞を分離培養液に浸漬します。この方法の利点は、塩橋を通じて EStim を提供する可能性があります細胞傷害性化学の副産物 (例えば、金属電極の腐食) の導入でなくなることです。この利点にもかかわらず塩橋は操作が、面倒と提供する EStim 異なる配信で生体内でモデル化、2 つのシステムを使用して得られた結果を関連付けることが困難します。細胞文化井戸内固定金属または炭素電極を介して EStim を提供のセットアップ (Hronik Tupaj とカプランの6によって再検討されました) よりシミュレート vivo; で使用されるデバイスただし、これらのデバイスが使用するクリーン/殺菌しにくい、実験ごとに学ぶことができるセルの数は限られています。これらの他の設定の制限を解決するためにここに提示 EStim チャンバーを考案しました。この EStim チャンバーを用いた経験のほとんど 2 D とされているが、骨髄や脂肪-組織由来 MSCs3,4を含む 3 D 文化、この商工会議所の主な利点は、それは汎用性で比較的マイナーな変更は、様々 な条件の下で他の細胞型を勉強する合わせることができます。
ここで EStim 細胞培養室の構造を説明します。その後、EStim と測定結果に及ぼす骨分化誘導の異なるレジメンで治療 MSCs によってその使用を示します。MSC による骨分化は、カルシウム沈着、アルカリホスファターゼ活性および骨マーカー遺伝子発現を介して評価されます。重要なは、過去のこのセットアップを使用する実験が見られました EStim 治療を中止した後にこれらのプロ骨形成促進効果が存続すること。

<table><tbody><tr><td>Estim製造</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>バナナコネクタ/ジャックアダプターPoppstars</td><td></td><td>1008554</td><td>2個</td></tr><tr><td>カッティングプライヤー</td><td>Knipex</td><td>78 03 125</td><td></td></tr><tr><td>DC電源(0-30V / 0-3A)</td><td>B&K Precision</td><td>Model 9130B</td><td>任意の類似モデルを使用できます</td></tr><tr><td>絶縁フレキシブル ワイヤー (0.14 mm2)</td> <td>Conrad Electronic International</td><td>604794、604093</td><td>2 個</td></tr><tr><td>非腐食性シリコーン ゴム</td><td>ダウ コーニング</td><td>3140 RTV</td> <td>*多くの店舗で購入できます</td></tr><tr><td>プラチナ ワイヤー (999,5/1000; 1mm &oslash;)</td><td>ユンカー・エーデルメタル</td><td>00D-3010</td><td>0.6 m 1 Estimチャンバーに必要</td></tr><tr><td>70% エタノール溶液</td><td>Estimチャンバーの任意の</td><td></td><td>滅菌</td></tr><tr><td>銀コーティングされた銅線 (0.6 mm &oslash;)</td><td>コンラッドエレクトロニックインターナショナル</td><td>409334 - 62</td><td>&asymp;1つのEstimデバイスに必要な70 cm</td></tr><tr><td>はんだごてセット</td><td>Conrad Electronic International</td><td>1611410 - 62</td><td>任意の類似モデルを使用できます</td></tr><tr><td>TPP 6ウェルプレート蓋</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z707759-126EA</td><td>Estimチャンバー用2</td></tr><tr><td>つの蓋 2.2V有線円形LED</td><td>Conrad Electronic International</td><td>599525 - 62</td><td>6個</td></tr><tr><td>UHU瞬間接着剤</td><td>UHU GmbH & Co. KG</td><td>n/a</td><td>*多くの店で購入できます</td></tr><tr><td>MSC培養</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&beta;-グリセロリン酸二ナトリウム塩水和物</td>シ<td>グマアルドリッチ</td><td>G9422</td><td>骨形成細胞培養</td></tr><tr><td>DMEM、低グルコース、GlutaMAXサプリメント、ピルビン酸</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>21885025</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>DPBS、カルシウムなし、マグネシウム</td>サー<td>モフィッシャーなし科学</td><td>14190144</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>デキサメタゾン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td>骨形成細胞培養</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>サーモフィッシャー Scientific</td><td>10500064</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>50ml ファルコンチューブ</td><td>Sarstedt</td><td>62,547,004</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>L-アスコルビン酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4544</td><td>骨形成細胞培養</td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>サーモフィッシャー 15140122</td><td></td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>Sprague-Dawley(SD)ラット間葉系幹細胞、骨髄由来</td><td>サイヤジェン</td><td>RASMX-01001</td><td>細胞</td></tr><tr><td>培養 細胞剥離液</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>A1110501</td><td>細胞培養、細胞剥離</td></tr><tr><td>TCフラスコ、T75</td><td>ザルスタット</td><td>833911302</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>TPP 6 ウェルプレート</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z707759-126EA</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>Trypan Blue Dye, 0.4% solution</td><td>Bio-Rad</td><td>1450021</td><td>細胞数</td></tr></tbody></table>

建設と質間葉系幹細胞の骨分化を強化するため電気刺激室の使用

Construction and Use of an Electrical Stimulation Chamber for Enhancing Osteogenic Differentiation in Mesenchymal Stem/Stromal Cells In Vitro

間葉系幹/間質細胞 (MSCs) は、骨の組織工学的アプローチで治癒を促進するために広く使用されています。電気刺激 (EStim) は、MSC 骨分化誘導体外を高め、臨床現場で治癒を促進するために実証されています。ここで EStim 細胞培養室の構造を説明し、治療での使用ラット骨骨髄由来 MSC 骨分化誘導を強化します。分かった骨分化誘導の大幅な増加の結果 7 日間 EStim で MSCs を扱う重要なは、このプロ骨形成促進の効果続く (7 日) EStim は中止後に長い。骨の治療成果を工学を最適化し、したがって、彼らの完全治療の可能性を達成するためにそれらを助ける骨分化誘導を強化する EStim で MSCs を前処理のこのアプローチをされる可能性があります。このアプリケーションでは、に加えてこの EStim 細胞培養室とプロトコルも使用できます移行、増殖、アポトーシス、足場添付ファイルなど他 EStim 敏感な細胞の挙動を調査するため。

100 mV/mm EStim の MSCs EStim 3 細胞の骨分化誘導の効果を評価するには、7 と 14 日または未処理の (コントロール) の形態学的変化とカルシウム沈着 (図 2 を評価することによって培養 14 日目で分析しました。).4% パラホルムアルデヒド溶液中の細胞を固定、0.02% アリザリンレッド ソリューションとそれらを染色し、それらをイメージング、明るいフィールド顕微鏡 (形態変化) を使用してセルをイメージングこれは明視野顕微鏡 (カルシウム沈着による分析)。
骨マーカー遺伝子発現変動の詳細な分析は、3、7、および養殖 (図 3) の 14 日間で行われました。これは遺伝子RunX2の相対式、コラーゲン私、オステオポンチンと Rt-...

ここで各種電気刺激や間葉系幹細胞の骨分化誘導を強化への治療に使用するセルを公開するために設計された細胞培養室の建設のためのプロトコルを提案する.

Mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) have been used extensively to promote bone healing in tissue engineering approaches. Electrical stimulation (EStim) ...

ここでは、一般的な六壁培養プレートを用いて電気刺激室を構築する方法と、間葉系幹細胞における骨形成分化を刺激するためにどのように使用するかを示す。このチャンバーは、簡単で、構築するために高価ではない、と複数の実験で再利用することができます。私たちの部屋で電気刺激で前処理された後、間葉系幹細胞は骨組織工学の処置の結果を改善するために使用することができる。このチャンバーは、他の細胞タイプや、移動、増殖、膜電位の変化、アポトーシス、および慎重な付着のような電気感受性細胞の挙動を調査するためにも使用できます。6つのウェルプレート蓋でマークし、6つの井戸の外側の端の近くに25ミリメートル離れた直径の2つの直径の穴を掘削します。次に、プラチナワイヤーを12 5センチメートルの長いセクションに切ります。手動でL"形状に各5センチメートルのセクションを曲げ、一方の端は3センチメートル、残りの2センチメートルの長さを残します。その後、銀でコーティングされたワイヤーを2本の35センチメートルの長さに切ります。白金線の長い曲がった端を穴に入れ、蓋の外側から1~2ミリメートル突き出したままにします。鉗子を使用してそれを曲げる。その後、白金線を蓋穴に超伝導接着剤で固定し、約6時間乾燥させます。陰極を準備するために、蓋から銀でコーティングされたワイヤーの1つに突き出た6本のプラチナワイヤーの先端をすべてはんだ付けします。アノードを準備するには、残りの6本の白金線を他の銀で覆われたワイヤーにはんだ付けします。続いて、6つのアノード-カソード白金-電極ペアの間の回路にLEDを追加して、機能性を確認します。各 LED の下に黒い絶縁テープを置き、培養プレート内の細胞を LED ライトにさらさないようにします。次に、ワイヤー端子ブロックコネクタを6ウェルプレートの蓋の左上隅に接着し、両方の銀色で塗られたワイヤを入力端子に接続します。次に、2番目の6ウェルプレート蓋の左上隅から20ミリメートル20ミリメートルの正方形の断面を切り出し、第1の蓋に端子台コネクタを収容する。最初の蓋をカバーし、電極を装備し、2番目の蓋を取り付け、粘着テープでテープを貼ります。2 本の標準絶縁銅線の一方の端をワイヤ コネクタの出力端子に接続し、もう一方の端をバナナ オス コネクタに接続します。前面パネルのON-OFFボタンを押して電源をオンにします。ボタン1を押してチャンネル1をアクティブにします。その後、ボタン4を押して電圧を設定します。負荷出力を2.5ボルトに設定します。次に、Enter キーを押します。細胞をEステムで処理した日に、電極を70%エタノール溶液で30分間殺菌する。その後、安全キャビネット内のUV光の下で30分間乾燥させます。層流フードで、培養したMSCを含む6ウェルプレートに電極を装備した蓋を覆い、電極が媒体に完全に沈み込まないようにします。次に、覆われた6ウェルプレートを細胞と共にインキュベーターに移し、そのワイヤーを電源に接続します。次に、電源を2.5ボルトの負荷出力に設定し、セルをEステムで1時間処理します。刺激後、電源を外し、インキュベーターからEステムチャンバーを取り外します。滅菌条件下では、電極を装備した蓋を標準の6ウェルプレート蓋に交換します。続いて、細胞をインキュベーターに戻し、それらを一晩放置する。まずPBSで電極を洗浄し、次に70%エタノール溶液で洗浄します。次に、蓄積した腐食物を微細なサンドペーパーで電極表面から洗浄します。Eステム治療を6日間連続して繰り返します。4日目には、電気刺激を加える前に、滅菌条件下で、1.5ミリリットルの培地を吸引し、1.5ミリリットルの前温め、新鮮な骨形成分化培地に置き換えることによって培地を変更する。7日間連続して電気刺激を加えた後、さらに7日間培養中の細胞を維持し、3~4日ごとに培地交換を行う。治療が完了したら、細胞形態変化を顕微鏡で分析します。MSC骨形成分化に対する電気刺激の効果を評価するために、カルシウム沈着、アルカリホスファターゼ活性、および骨形成マーカー遺伝子発現を他の場所で説明するように測定する。MSC骨形成分化に対する1ミリメートル当たり100ミリボルトの電気刺激の効果を評価するために、3、7、および14日間の電気刺激で処理された細胞と非処理細胞を、形態変化およびカルシウム沈着を評価することによって培養14日目に分析した。細胞形態およびカルシウム沈着物の有意な変化は、7日間および14日間の電気刺激で処理された細胞で見られた。骨形成マーカー遺伝子発現変化の詳細な分析は、培養3日目、7日目、および14日目に行った。培養7日目、7日間電気刺激で処理した細胞においてRunX2発現が有意に高かった。一方、Colla1発現は7日間処理された細胞において有意に高かったのに対し、培養14日目で測定した。オステオポンチンの発現は、3日目、7日目、および14日目の培養において電気刺激細胞において有意に増加した。Osterix発現は、コントロール細胞に全ての時点で存在せず、電気刺激にさらされた細胞における培養の7日および14日でのみ見られた。電気刺激室は比較的容易に造る。ただし、白金線の取り扱い時や、電極の洗浄や滅菌の際には、特別な注意が必要です。私たちの部屋の電気に前処理された細胞は、単独で、または足場材料に座って、電気刺激の肯定的な効果が体外でどのように持続するかを研究するために、動物モデルに埋め込むことができます。この技術は、電気刺激が細胞機能を調節するメカニズムを研究するためのシンプルでありながら強力なツールを提供します。この知識は再生医療細胞で利用可能です。

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

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自家条件で間葉系幹細胞の培養および配信：整形外科アプリケーションのためのスマートなアプローチ

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軟骨再生のための3次元磁気幹細胞凝集およびバイオリアクター成熟

このプロトコルを記述するように導電性高分子足場の in...

導電性足場を調節して幹細胞を提供するには

ここで心臓の生理学をエミュレートする電気的・機械的刺激を用いたセル人口をトレーニングするためのプロトコルを提案する.この電気刺激は扱われた細胞の cardiomyogenic...

細胞の Cardiomyogenic の可能性を高めるに同時電気的・機械的刺激

このプロトコルは、生物学的組織を刺激するために使用される電気および磁気刺激装置の両方を構築するためのステップバイステップのプロセスを記述する。このプロトコルには、計算上の電界と磁場をシミュレートし、刺激装置の製造をシミュレートするためのガイドラインが含まれています。...

生体組織の刺激のための電界・磁場装置

間葉系幹細胞から作製した人工軟骨組織を移植して軟骨内骨化術を行う骨治療は、従来の治療法の欠点を回避できる可能性があります。ヒアルロン酸ハイドロゲルは、均一に分化した軟骨移植片のスケールアップや、 in...

間葉系幹細胞を用いた In vivo 軟骨内骨化による統合骨形成

我々は、3次元再構成人間の角膜のような上皮（RHCE）組織モデルを利用した眼刺激性試験を開発しました。テストは、眼刺激性及び腐食性物質（GHSカテゴリー1と組み合わせた2）とラベル（GHSなしカテゴリ）を必要としないものとを区別することができます。...

再構成ヒト角膜上皮様（RHCE）組織モデルを使用して眼刺激性化学物質の有害性の同定のための眼刺激性試験（EIT）

学ぶ電気刺激室の構築法と間葉系幹細胞の骨分化促進技術。低コストで再利用可能な装置を用いて、骨組織工学における細胞治療の成果向上に貢献する実験手法を解説します。

建設と質間葉系幹細胞の骨分化を強化するため電気刺激室の使用

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