非アルコール性脂肪性肝炎 (NASH) の解像度を評価するためにマウスで存続可能肝生検の手順の定款

非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)を有するマウスにおけるこの生存可能な肝臓生検手順は、NASHを有さない動物の排除と介入に対する応答の正確な測定の両方を可能にする。この手順は、肝臓の治療後の病理と治療前の病理を比較し、薬物有効性のより正確な評価を可能にするNASH研究の臨床試験設計を密接に模倣する。肝臓の葉を露出することは、最初は難しいかもしれません。

最初に指または綿の先端のアプリケーターで組織を露出させ、あなたに最適なフィット感を見つける練習をしてください。足の指のピンチに対する応答の欠如を確認した後、1〜2センチメートル、縦方向腹部皮膚切開を直ちにxiphoidプロセスに、そして麻酔マウスの左側にわずかに尾を向ける。鉗子とはさみを使用して、腹壁が露出し、肝臓が筋肉組織の下に視覚化されるまで、皮膚を鈍く解剖します。

無菌メスの刃を使用して、腹壁に1〜2センチメートルの切開を行い、肝臓の左横葉を露出させ、左横葉の下に無菌綿棒を置き、切開部を通して露出する部分を穏やかに抽出する。露出した葉の下に無菌生理食糸に浸したガーゼを置き、滅菌はさみを使用して、抽出された肝臓から30〜50ミリグラムのくさび状の組織を切除します。肝臓のくさび片と同様の大きさの吸収可能なゼラチン圧縮スポンジをカットし、無菌鉗子を使用して肝臓の切断部分にスポンジを挿入します。

ゼラチンが肝臓の表面に付着し、肝臓生検を下流分析用の適切な容器に入れる前に、鉗子でスポンジを所定の位置に保持します。穏やかに腹腔に肝臓を戻し、スポンジを乱さないように気をつけて、そして、完全な正方形の結び目で始まり、終わり、5-0コーティングされた吸収可能な縫合糸で腹壁を縫合する。その後、7ミリメートルの巻きクリップで皮膚を閉じ、配置後に完全に閉鎖することを確認し、完全に回復するまで監視して加熱された表面のきれいなケージにマウスを戻します。

本代表的な実験では、118匹のマウスを、NASHを誘導するために脂肪、フルクトース、およびコレステロールの高いカスタム食事で29週間後に生検した。線維症およびステアトーシスのレベルは、次いで各生検のために採点された。マウスは、低または高線維症および異常な体重減少または創傷治癒に基づいて研究から除外され、残りのマウスは6週間の車両またはグルカゴン様ペプチド-1受容体アゴニストリラグルチドで治療した。

車両処理群では、1匹のマウスが線維症の増加を示し、4匹のマウスがNASH活性スコアの増加を示した。リラグルチド治療は線維症の全体的な改善に関連し、治療群の17%が改善し、83%が変わらなかった。同様に、リラグルチド治療はNASHスコア全体を改善し、グループの66%が改善されたNASH活性スコアを示し、33%は変わらなかった。

さらに、リラグルチド治療は炎症を改善し、グループの75%は治療後の炎症スコアが低く、一方で車両処理動物は炎症の増加を経験した。ステアトーシスはアゴニスト治療の影響を受けず、介入の前後の両方の群に変わらなかった。肝臓の切除片を過度に損傷しないように注意して、必要に応じて適切に分析できるようにしてください。

この手順は、NASH肝臓に対する新しい治療薬の治療前および後の効果を比較することによって、臨床試験の設計を模倣するために使用することができます。