Name: 準備や髄脊髄小脳スライス培養の免疫染色 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: 学ぶ マウス小脳のオルガノタイプスライス培養と免疫染色による髄鞘形成・再髄鞘化機構の解析法。組織構造を保ちながら生細胞イメージングや創薬スクリーニングに応用可能です。

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原稿上の貴重なコメント、ショーン ・ フリーマン博士、博士ナタリー ゾル-Foulon と博士トーマス ・ ルーに感謝します。INSERM、ICM、ARSEP 補助金 R13123DD、(西暦) に ANR R17127DD FRM の交わり (西暦) に SPF20110421435 によって資金が供給されたこの仕事 (ティルソン) に FDT20170437332。セリスの細胞培養と icm に感謝しますクワント イメージング プラットフォーム。

動物を含むすべての作業は、制度政策と UPMC、INSERM、フランスと欧州共同体の理事会指令 86/609/EEC によって確立されたガイドラインを遵守しました。
1. 調製培と文化を挿入します (ハンズオン時間 ≈ 10-15 分)
注:無菌条件下で流文化フードでこの手順を実行します。
<ol><li>50% から成っている培養液 40 mL を準備 BME、25% ハンクの平衡塩溶液 (1 x)、熱不活化 25% 馬の血清、2 mM グルタミン誘導体、100 IU/mL ペニシリン-ストレプトマイシンと 4.5 mg/mL D-グルコースを添加しました。7.4 に pH を調整します。</li>
	<li>フィルター-50 mL プラスチック注射器に適応 0.22 μ m のフィルターを通しての滅菌培地。 注:培は、少なくとも 1 週間の 4 ° C で保存できます。</li>
	<li>6 子犬の標準的なごみの 2 つの滅菌 6 ウェル プレートを使用します。各プレートのカバーを取り外し、ウェルあたり培養液 1 mL を加えます。</li>
	<li>それぞれの個々 のウェルに滅菌ピンセットでプラスチックの端を保持することによって 1 つの文化の挿入を配置します。プレートに戻ってカバーを置きます。 注:1 匹の子犬 (6-8) から収集した小脳スライスは、2 つの膜 (膜挿入 1 回あたり 3-4 小脳スライス) に派遣することができます。</li>
</ol>2. 解離媒体の作製 (ハンズオン時間 ≒ 5 分)
注:無菌条件下で流文化フードでこの手順を実行します。
<ol><li>4.5 mg/mL D-グルコースと 1 x ペニシリン-ストレプトマイシン (100 IU/mL) を添加した Gey の平衡塩溶液から成っている解剖中の 100 mL を準備します。</li>
	<li>フィルター - 0.22 μ m のフィルター ユニットを培地を滅菌します。 注:郭清培地は、少なくとも 1 カ月の 4 ° C で保存できます。</li>
	<li>60 mm 細胞培養皿に冷たい郭清培地 5 mL を追加します。1 つ 60 mm 細胞培養ディッシュ切り裂かれるそれぞれの子犬を準備します。</li>
	<li>使用するまで氷の上郭清料理をしてください。</li>
</ol>3. 解剖材料の調製 (≈ ハンズオン時間 15 分)
<ol><li>100% エタノールでベンチをクリーンアップします。</li>
	<li>郭清のすべてのツール、かみそりの刃、組織チョッパーのプラスチック プラットフォーム 100% エタノールに殺菌します。</li>
	<li>組織チョッパーにかみそりの刃とプラスチックのプラットフォームを修正し、300 μ m の切断厚を調整します。</li>
	<li>解剖を開始する前にすべてのエタノールが蒸発したことを確認します。</li>
</ol>4. CerebellumDissection とセクション準備 (ハンズオン時間 ≈ 1 頭につき 15-20 分)
<ol><li>双眼顕微鏡の下で冷たい解剖媒体を含んでいる 60 mm 細胞培養皿の 1 つ配置し、トップ プレートを削除します。</li>
	<li>(動物の目に触れることを避ける慎重に) 70% エタノールでヘッドの毛皮を綿棒し、承認された手順に従って大きな鋭いはさみを使用して動物の首をはねます。 注:小脳のスライスは、任意の特定のセックスやひずみバイアスなし P9 P10 マウスから生成されます。</li>
	<li>マウス銃口にあがると、首から頭の正中線に沿って皮膚をカットするのにためのハサミを使用します。</li>
	<li>頭を保持して頭蓋骨を公開するには、頭の下に腹側の皮膚を折り返し、指の間の皮膚の 2 つのひだをしぼりひねり。</li>
	<li>後頭に小さなはさみをゆっくり挿入を切り、頭蓋骨を 1 つ側に向かって切開を水平、すべて頭部の頭蓋骨の周りをカットすることによって。並列とは頭蓋骨に近い切断、脳組織の損傷を防ぐため、できるだけハサミの先端を維持します。</li>
	<li>罰金ストレート鉗子による頭蓋骨の背の部分を取得します。頭蓋骨の背の部分を慎重に持ち上げ、ながらカット (半透明灌漑膜周囲の脳組織) の付着の髄膜脳組織の損傷を避けるために小さなはさみで必要な場合。</li>
	<li>慎重に微細ストレート鉗子を紹介 (またはまたヘラを使用して) 腹側の頭蓋骨と脳の間優しく脳が狂うし、小さなハサミで光と三叉神経を切る。</li>
	<li>お皿のすぐ上、頭を逆さま回す冷たい解剖媒体を含んでいる 60 mm 細胞培養ディッシュに重力によってドロップする脳を助け、必要な場合、小さなハサミで最後の癒着をリリースします。</li>
	<li>微細鉗子を使用して、皿の底に横たわって腹側と背側研究者は、脳をオリエンテーションします。</li>
	<li>双眼顕微鏡の下で損傷を受けることができると前脳の側脳を固定し、菱脳は触れないでください罰金ストレート鉗子を使用します。脳 (前面 - と中脳、図 1Aaの回路図を参照してください) の残りの部分から別の菱脳微細ストレート鉗子を使用して。菱脳の残りの部分から小脳を区切るためには、小脳の下小脳脚をカットする微細鉗子を使用 (図を参照してください図 1Aa')。</li>
	<li>小脳が分離すると、慎重を離れて引き裂く罰金ストレート鉗子を用いた髄膜 (回路図を参照してください図 1Aa').
</li>
	<li>小脳を優しく良いカーブタイプ鉗子で保持し、チョッパーのかみそりの刃を垂直にプラスチックのプラットフォーム上を背側に配置 (図 1 bbの模式図を参照)。</li>
	<li>任意の過剰を吸引ピペット 1 mL で合わせられる生殖不能の薄い端のピペット チップを使用して小脳周囲郭清中の (図 1 bbの模式図を参照)。</li>
	<li>小脳がフラット、産むことを伸ばし、一度断面 (図 1 bbの図参照) 中に最適な矢状のスライスを取得するプラットフォームに配置を確認します。</li>
	<li>組織のチョッパーで小脳の 300 μ m 厚の矢状セクションをスライス (回路図を参照してください図 1 bb ')。力と刃の速度は、サイトに最適化しなければなりません。</li>
	<li>軽くスライスした小脳に解剖中のドロップを追加します。1 mL ピペットにワイドボア ピペット チップを使用して、ゆっくりとスライスした小脳を吸引し、冷たい解剖媒体を含んでいる 60 mm 細胞培養皿に転送 (の回路図を参照してください図 1 bb ')。</li>
	<li>各小脳スライス間 100% エタノール組織チョッパーのプラスチック製プラットフォームをクリーンアップします。プラットフォームに次の小脳を配置する前に蒸発させるエタノールができます。</li>
	<li>2 罰金ストレート鉗子 (または) を使用またはチタン針個々 のスライスを分離し、虫部から 6-8 スライスを選択 (図 1 ccの回路図を参照してください、 1 cc ')。</li>
	<li>文化を挿入して 6 ウェル プレートを取るし、1 mL ピペットで合わせられるワイド口径のピペット チップを使用して、いくつかの郭清媒体と一緒に 1 つの文化の挿入にまで 4 選択したスライスを転送 (の回路図を参照してください図 1 cc ')。</li>
	<li>プッシュすると右の場所にそれらを軽く引いて郭清培地または鉗子を使用して、互いに接触することを避ける文化挿入途中でスライスを配置 (図を参照してください図 1 cc ')。</li>
	<li>薄い端のピペット チップを使用してスライスを解剖中の任意の過剰を削除します。膜にスライスが平らになったことを確認 (図を参照してください図 1 cc ')。</li>
	<li>膜上のスライスを追加した直後にインキュベーターに 6 ウェル プレートを配置します。</li>
</ol>5 文化と脱髄をスライス (ハンズオン時間 ≈ 15-20 分)
注:無菌条件下で流文化フードでこの手順を実行します。
<ol><li>スライス標本後は 3 日おきに予め温めておいたとバッファーの新鮮な培養液の井戸あたり 1 mL に培養培地を置き換えます。</li>
	<li>脱髄、削除すべて培養液下に 6 日間の in vitro (DIV) 後文化を挿入し、事前に暖められた新鮮な培養液 0.5 mg/mL LPC を含むウェルあたり 1 mL を置き換えます。37 ° C、5% CO215-17 時間孵化させなさい。</li>
	<li>インキュベーション後、予め温めておいた培養液 1 mL を含む 25 mm のペトリ皿にそれらを置くことによって挿入を洗います。 注:挿入は、媒体に接触するはずが、それによってカバーされません。</li>
	<li>すぐに新鮮な事前に暖められた培養液を含む新しい 6 ウェル プレートで文化挿入を転送します。</li>
	<li>スライス固定まで 2-3 日毎に予め温めておいた新鮮な培養液 1 mL に培養培地を置き換えます。</li>
</ol>6 免疫組織化学 (ハンズオン時間 ≒ 1:30-2 h)
注:6.1 の手順を実行します。6.3 に.下ヒューム フード。パラホルムアルデヒド (PFA) 博覧会を回避し、適切な操作と保護のための製品安全データシートを参照してください。
<ol><li>それぞれの文化を持ち上げる使用鉗子はプラスチックの端を保持することによって挿入し、膜挿入下に培養液を各ウェルから削除します。</li>
	<li>4 %2 mL を追加して 30 分間小脳スライスを修正 PFA 膜挿入に PBS pH 7.4 × 1 で。 注:固定の時点は、髄鞘形成研究の段階に依存: 4 DIV は完全に有髄のスライスに 7 部の髄鞘の発症に対応します。LPC 治療の場合 9 DIV は、脱髄、検査の発症に 11 の DIV と完全に remyelinated スライスに 14 の DIV のピークに対応します。</li>
	<li>3 回 10 分 2 mL の 1x PBS でスライスを挿入を洗います。</li>
	<li>優しく押してメスまたはブラシを使用して 25 x 30 倍の倍率を使用して双眼顕微鏡下膜挿入からスライスを区切ります。また、膜からそれらを切り離すにスライスの損傷のリスクを避けるためには、まだ接続されているスライスを膜をカットするのにメスを使用します。</li>
	<li>1x PBS、ブラシを使用してを含む 4 ウェル プレートのウェルにフローティングのスライスを転送します。</li>
	<li>各ウェルから PBS を吸引し、-20 ° C、15 〜 20 分で予冷の 100% エタノールでスライスを孵化させなさい。この手順は、有髄線維の抗体の浸透を促進します。</li>
	<li>100% エタノールを吸引し、簡単に室温で 10 分の 1 × PBS で 2 回し、PBS、× 1 で 1 回洗浄します。</li>
	<li>PBS の吸引し、1 × PBS、5 %ngs、室温で 0.3% 非イオン性洗剤非特異抗体固定サイトをブロックするを含む溶液で 30 〜 45 分のスライスを孵化させなさい。</li>
	<li>ブロッキング液を吸い出しなさい。洗濯は必要ありません。</li>
	<li>4 ° C でソリューションをブロックで希釈した一次抗体とスライスを一晩インキュベートします。小脳切片スライスのミエリンを視覚化する MBP (鶏、1/150 またはマウス IGg2b, Smi99、1/200) または PLP (ラット、ハイブリドーマを培養、1/5、1/10) を使用して、抗体。 注:同じスライスに 1 つ以上の抗原の発現を明らかにするダブルまたはトリプル汚損プロシージャを実行 (例として図 1を参照)。孵化を同時に実行するには、一次抗体が異なる種で作り出されるを確認します。異なる蛍光物質と結合した彼らの対応する二次抗体を使用して、(材料の表を参照してください節、パラノード マーカー18抗体)。</li>
	<li>2 日目、10 分の 1 × PBS で 3 回スライスを洗浄します。</li>
	<li>3 時間室温で暗闇の中で (1/500 希釈) ソリューションをブロックで希釈した二次抗体の孵化させなさい。 注:抗体希釈とインキュベーション時間の最適化は、ここで記載されているものよりも他の抗体を使用する場合に要求されるかもしれない。</li>
	<li>暗闇の中の 10 分の 1 × PBS の 3 回スライスを洗ってください。</li>
	<li>双眼顕微鏡、スライド ガラスの上にスライスをマウントします。スライド上の 1 × PBS 100 μ L を置き、ブラシを使用して PBS にスライスを転送します。必要な場合、スライスを展開し、スライドにそれらを平らにします。PBS の任意の過剰を削除します。膜にまだ接続されているスライスを反応を実行すると、場合に、スライド ガラスの膜で、coverslip に直面してスライスをマウントします。</li>
	<li>ガラス基板上に直接実装中のドロップを置き、スライスを優しくカバーします。マウントされたスライドは、暗闇の中で 4 ° C で数ヶ月保存できます。</li>
</ol>

<ol><li>Monje, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+Plasticity+and+Nervous+System+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Myelin Plasticity and Nervous System Function.</a> Annual Review Neuroscience. 41, 61-76 (2018).</li>
<li>Desmazières, A., Sol-Foulon, N., Lubetzki, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+at+the+nodal+and+perinodal+axonal+domains%3A+a+basis+for+multiple+sclerosis+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+Houndmills+Basingstoke+England%22%5BJournal%5D)">Changes at the nodal and perinodal axonal domains: a basis for multiple sclerosis pathology.</a> Multiple Sclerosis Houndmills Basingstoke England. 18, 133-137 (2012).</li>
<li>Waxman, S. G., Ritchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+dissection+of+the+myelinated+axon%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Molecular dissection of the myelinated axon.</a> Annals of Neurology. 33, 121-136 (1993).</li>
<li>Fünfschilling, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolytic+oligodendrocytes+maintain+myelin+and+long-term+axonal+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Glycolytic oligodendrocytes maintain myelin and long-term axonal integrity.</a> Nature. 485, 517-521 (2012).</li>
<li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendroglia+metabolically+support+axons+and+contribute+to+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Oligodendroglia metabolically support axons and contribute to neurodegeneration.</a> Nature. 487, 443-448 (2012).</li>
<li>Chang, K. -J., Redmond, S. A., Chan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+myelination%3A+implications+for+mechanisms+of+neural+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Remodeling myelination: implications for mechanisms of neural plasticity.</a> Nature Neurosciences. 19, 190-197 (2016).</li>
<li>Fields, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mechanism+of+nervous+system+plasticity%3A+activity-dependent+myelination%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A new mechanism of nervous system plasticity: activity-dependent myelination.</a> Nature Reviews Neuroscience. 16, 756-767 (2015).</li>
<li>Nave, K. -A., Werner, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+of+the+nervous+system%3A+mechanisms+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Myelination of the nervous system: mechanisms and functions.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 30, 503-533 (2014).</li>
<li>Nave, K. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+and+support+of+axonal+integrity+by+glia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Myelination and support of axonal integrity by glia.</a> Nature. 468, 244-252 (2010).</li>
<li>Baumann, N., Pham-Dinh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+oligodendrocyte+and+myelin+in+the+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Biology of oligodendrocyte and myelin in the mammalian central nervous system.</a> Physiological Reviews. 81, 871-927 (2001).</li>
<li>Kluver, H., Barrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+the+combined+staining+of+cells+and+fibers+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuropathology+and+Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">A method for the combined staining of cells and fibers in the nervous system.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 12, 400-403 (1953).</li>
<li>Meier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+observations+on+early+myelination+in+the+human+spinal+cord.+Light+and+electron+microscope+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Some observations on early myelination in the human spinal cord. Light and electron microscope study.</a> Brain Research. 104, 21-32 (1976).</li>
<li>Hori, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+SIMPLIFIED+ACID+HEMATEIN+TEST+FOR+PHOSPHOLIPIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+Technology%22%5BJournal%5D)">A SIMPLIFIED ACID HEMATEIN TEST FOR PHOSPHOLIPIDS.</a> Stain Technology. 38, 221-225 (1963).</li>
<li>Gallyas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+staining+of+myelin+by+means+of+physical+development%5BTitle%5D)+AND+%22Neurological+Research%22%5BJournal%5D)">Silver staining of myelin by means of physical development.</a> Neurological Research. 1, 203-209 (1979).</li>
<li>Dusart, I., Airaksinen, M. S., Sotelo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purkinje+cell+survival+and+axonal+regeneration+are+age+dependent%3A+an+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+An+Official+Journal+of+the+Society+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Purkinje cell survival and axonal regeneration are age dependent: an in vitro study.</a> Journal of Neuroscience An Official Journal of the Society of Neuroscience. 17, 3710-3726 (1997).</li>
<li>Birgbauer, E., Rao, T. S., Webb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysolecithin+induces+demyelination+in+vitro+in+a+cerebellar+slice+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Lysolecithin induces demyelination in vitro in a cerebellar slice culture system.</a> Journal of Neuroscience Research. 78, 157-166 (2004).</li>
<li>Zhang, H., Jarjour, A. A., Boyd, A., Williams, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system+remyelination+in+culture--a+tool+for+multiple+sclerosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Central nervous system remyelination in culture--a tool for multiple sclerosis research.</a> Experimental Neurology. 230, 138-148 (2011).</li>
<li>Rasband, M. N., Peles, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nodes+of+Ranvier%3A+Molecular+Assembly+and+Maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">The Nodes of Ranvier: Molecular Assembly and Maintenance.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 8, a020495(2015).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosciences+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> Journal of Neurosciences Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Hussain, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone+and+Nestorone+facilitate+axon+remyelination%3A+a+role+for+progesterone+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Progesterone and Nestorone facilitate axon remyelination: a role for progesterone receptors.</a> Endocrinology. , 3820-3831 (2011).</li>
<li>Wioland, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epsilon+toxin+from+Clostridium+perfringens+acts+on+oligodendrocytes+without+forming+pores%2C+and+causes+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Epsilon toxin from Clostridium perfringens acts on oligodendrocytes without forming pores, and causes demyelination.</a> Cellular Microbiology. 17, 369-388 (2015).</li>
<li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 8, 839-845 (2007).</li>
<li>Medina-Rodríguez, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoting+in+vivo+remyelination+with+small+molecules%3A+a+neuroreparative+pharmacological+treatment+for+Multiple+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Reports%22%5BJournal%5D)">Promoting in vivo remyelination with small molecules: a neuroreparative pharmacological treatment for Multiple Sclerosis.</a> Science Reports. 7, (2017).</li>
<li>Spassky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+early+steps+of+oligodendrogenesis%3A+insights+from+the+study+of+the+plp+lineage+in+the+brain+of+chicks+and+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">The early steps of oligodendrogenesis: insights from the study of the plp lineage in the brain of chicks and rodents.</a> Developmental Neurosciences. 23, 318-326 (2001).</li>
<li>Yuan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+green+fluorescent+protein+in+the+oligodendrocyte+lineage%3A+a+transgenic+mouse+for+developmental+and+physiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Expression of the green fluorescent protein in the oligodendrocyte lineage: a transgenic mouse for developmental and physiological studies.</a> Journal of Neuroscience Research. 70, 529-545 (2002).</li>
<li>Gibson, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity+promotes+oligodendrogenesis+and+adaptive+myelination+in+the+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity promotes oligodendrogenesis and adaptive myelination in the mammalian brain.</a> Science. 344, 1252304(2014).</li>
<li>Tomassy, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+profiles+of+myelin+distribution+along+single+axons+of+pyramidal+neurons+in+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Distinct profiles of myelin distribution along single axons of pyramidal neurons in the neocortex.</a> Science. 344, 319-324 (2014).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+sensitive+optical+coherence+microscopy+for+brain+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Letters%22%5BJournal%5D)">Polarization sensitive optical coherence microscopy for brain imaging.</a> Optics Letters. 41, 2213-2216 (2016).</li>
<li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+biomedical+imaging+with+high+sensitivity+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Label-free biomedical imaging with high sensitivity by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Science. 322, 1857-1861 (2008).</li>
<li>Lim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+imaging+of+Schwann+cell+myelination+by+third+harmonic+generation+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Label-free imaging of Schwann cell myelination by third harmonic generation microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U. S. A. 111, 18025-18030 (2014).</li>
<li>Schain, A. J., Hill, R. A., Grutzendler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+in+vivo+imaging+of+myelinated+axons+in+health+and+disease+with+spectral+confocal+reflectance+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Label-free in vivo imaging of myelinated axons in health and disease with spectral confocal reflectance microscopy.</a> Nature Medicine. 20, 443-449 (2014).</li>
<li>Arancibia-Carcamo, I. L., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+node+of+Ranvier+in+CNS+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologia.+%28Berlin%29%22%5BJournal%5D)">The node of Ranvier in CNS pathology.</a> Acta Neuropathologia. (Berlin). 128, 161-175 (2014).</li>
</ol>

作者が競合する利益または矛盾した興味あります。

ここでは、我々 の元を生成するプロトコル詳細公開メソッド15,16,19後続のミエリン以前からマウス小脳脊髄スライス培養に対応する生体モデルの適応これらの製剤の免疫染色。この戦略では、健康と病的状態の高分解能髄鞘成分を可視化する可能性を提供しています。
小脳脊髄スライス培養 10 日齢のマウスからの撮影がほとんどの解剖を再現することができます、髄鞘化と検査プロセスの基礎となる分子 · 細胞メカニズムを調査するための確立された実験モデルと明確に定義された細胞アーキテクチャも成熟タイムライン17の保存だけでなく体内の対応する組織の機能。さらに、小脳スライス 2 週間培養後保存建築組織がある(図 1).トランスジェニック PLP GFP ひずみは脱髄検査研究<st...

ニューロンは、その環境と生成と他の細胞に電気的な刺激の伝達を保証する軸索からの入力を受け取る樹状の区画を占める高偏極のセルです。急速な伝播と情報のタイムリーな配信は、神経系の適切な機能のために不可欠です。脊椎動物、それは軸索伝導速度1を増加できるの髄鞘によって促進されます。髄鞘は、すなわち中枢神経系 (CNS) におけるオリゴデンドロ サイトおよび末梢神経系 (PNS) にシュワン細胞髄グリア細胞によって生成される膜の圧縮された層によって形成された特殊な構造です。中枢神経系と、PNS の両方で、axoglial 相互作用ドライブ軸索の専門領域の形成: Ranvier のノードとその周辺のドメイン、paranodes、および juxtaparanodes2。髄鞘、節間、電位依存性ナトリウム チャネル (Nav) の濃縮小さな無髄ドメインに対応している Ranvier のノードと代替絶縁軸索のセグメントです。高濃度と Ranvier のノードで Navチャネルの急速な活性化、活動電位と一緒にミエリン鞘の絶縁の特性の再生、効率的かつ高速跳躍伝導を確保、3軸索に沿って神経インパルス。
神経インパルスの伝導速度を加速する上で、その役割のほか髄グリア細胞は軸索、その長期的な整合性を確保してその生存4,5に参加する代謝サポートを提供します。さらに、明らかになったで近年そのミエリンが動的に従っておそらく規制とさまざまな神経システム機能の可塑性に参加して、生涯変調します。分布、数、長さ、および軸索に沿って髄鞘の太さの調整可能性がありますつまりさまざまなネットワーク6,7、8を微調整する斬新な方法を表します。したがって、ミエリンの進化的獲得は感覚、運動および認知機能の重要なプロセスと軸索とグリアの相互作用摂動をますます発達への貢献として考慮するか神経を取得疾患9。
脂質 (70%) の割合が高いの特定の機能を持つ、ミエリン組成を特徴づけられています。タンパク質 (30%) と比較してください。対照的に他の細胞内膜系の10。しかし、ミエリン脂質とは異なりミエリン蛋白のほとんど、髄鞘、ミエリン塩基性タンパク質 (MBP)、ミエリンプロテオリピドタンパク質 (PLP)、2'、3' 環状ヌクレオチド 3'-ホスホジエステラーゼ (CNP)、ミエリン関連糖蛋白 (MAG) などに特化ミエリン オリゴデンドロ サイト糖タンパク質 (モグ)、PMP 22、P010。髄鞘を染色するさまざまな組織学的方法はルクソールの高速青11などの脂質組成スーダン黒い B12ベイカーの酸ヘマチン法13と同様、14を汚す銀に基づいて存在しています。それにもかかわらず、これらのアプローチでは、十分なコントラストと個々 の繊維を視覚化する解像度の常に許可しています。ミエリンを検出するための代替アプローチ ミエリン蛋白に対する免疫組織化学化です。様々 な抗体を高い特異性ミエリン特異的抗原をターゲットし、有髄の構造を検出する日常的に使用することができます。抗体抗原の相互作用はすることができます一次抗体に対して指示、適切な蛍光顕微鏡による可視化の蛍光体に結合された二次抗体を使用してさらに明らかにしました。ここでは、神経組織アーキテクチャのよい保存可能モデル ex vivo 小脳スライスのミエリンを染色する免疫プロトコルについて述べる。また、組織とプルキンエ細胞 (小脳の唯一の有髄ニューロン) のサイズは電気生理学的研究のための古典的なモデルをそれら、彼らは同様に固定またはライブ イメージングの研究を行うことが理想的。
小脳のスライスは、プルキンエ細胞髄鞘形成、ex vivo (DIV in vitro で 6-7 日)15の 1 週間によって大抵達成されるプロセスの早期発生に対応する時間を P9 P10 マウスから生成されます。このモデルは脱髄性疾患多発性硬化症 (MS) などを調査するため適応 myelinotoxic 複合リゾホスファチジルコリンにより (または、リゾレシチン、LPC)、小脳スライスで大規模な脱髄を誘起すること、さらに、自発的な検査16,17が続いています。内因性検査培地から LPC 除去後 2 日から行われます、ほぼ完全に週後の治療です。
このプロトコルの完了小脳スライス文化準備、脱髄のピークに達する 2 日続いて完全に有髄のスライスを取得する週彼らの完全に別の週に半日を含む approximatively 3 週間はかかる検査。さらに、免疫組織化学は、2 日間で完了できます。ここで説明されているプロトコルは、標準 6 マウスの子犬のくずに適応され、計画の実験に使用される動物の数に関する適応する必要があります。

<table><tbody><tr><td>BME媒体</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41010026</td><td></td></tr><tr><td>Hank'S Balanced Salt Solution (10x HBSS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14180046</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>35050038</td><td></td></tr><tr><td>Heat-inactivated Horse Serum</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin&ndash;ストレプトマイシン (10.000 IU/mL)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Gey's 平衡塩溶液</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G9779-500ML</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose Solution (45%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8769-100ML</td><td></td></tr><tr><td>リゾホスファチジルコリン (LPC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L4129-100MG</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド (PFA)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15714</td><td></td></tr><tr><td>無臭エタノール (100% エタノール)</td><td>VWR Chemicals</td><td>20821.330</td><td>-20°Cで冷却。C</td></tr><tr><td>トリトン&reg;X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>X100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>10% Normal Goat Serum (NGS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>500622</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffer Solution</td><td>EuroMEDEX</td><td>ET330-A</td><td>pH 7.4</td></tr><tr><td>Anti-GFP Antibody (Polyclonal, Chicken)</td><td>Merck Millipore</td><td>06-896</td><td>Dilution 1/300</td></tr><tr><td>Anti-Myelin Basic Protein (MBP) 抗体 (Polyclonal, Chicken)</td><td>Merck Millipore</td><td>AB9348</td><td>Dilution 1/150</td></tr><tr><td>Anti-Myelin Basic Protein (MBP) Antibody (Monoclonal, Mouse IgG2b)</td><td>Merck Millipore</td><td>NE1019</td><td>Dilution 1/200</td></tr><tr><td>Anti-PLP Antibody (Rat, Hybridoma)</td><td>Dr. K. Ikenakaからの贈り物;Okasaki, Japan</td><td></td><td>希釈液 1/5 から 1/10</td></tr><tr><td>抗ナトリウムチャネル, Pan 抗体 (monoclonal, Mouse IgG1, clone K58/35)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S8809</td><td>希釈液 1/150</td></tr><tr><td>抗 Caspr 抗体 (Polyclonal, Rabbit)</td><td>Abcam</td><td>ab34151</td><td>希釈液 1/500</td></tr><tr><td>ヤギ二次抗体 Conjugated to Alexa Fluor 488, 594, 647 or 405</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td>Dilution 1/500</td></tr><tr><td>フルオロマウント</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-20</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュチョッパー</td><td>McIlwain</td><td></td><td></td></tr><tr><td>カミソリ刃</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>大型ハサミ</td><td>F.S.T</td><td>14101-14</td><td></td></tr><tr><td>小型ハサミ</td><td>F.S.T</td><td>91500-09</td><td></td></tr><tr><td>細直鉗子</td><td>F.S.T</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>湾曲細鉗子</td><td>F.S.T</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養ディッシュ (60 mm および 100 mm)</td><td>TPP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-, 6-well 培養プレート</td><td>TPP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ミリセル培養インサート (0,4 & micro;m、直径30 mm)</td><td>Merck Millipore</td><td>PICM0RG50</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養インキュベーター</td><td></td><td></td><td>37°C;C、5% CO2</td></tr><tr><td>ファインエンドピペットチップ</td><td>ダッチャー</td><td>134000CL</td><td></td></tr><tr><td>ワイドボアピペットチップ</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>2079G</td><td></td></tr><tr><td>滅菌シリンジ</td><td>テルモヨーロッパ</td><td></td><td>20または50mL</td></tr><tr><td>滅菌シリンジフィルター</td><td>テルモヨーロッパ</td><td></td><td>0.22 &マイクロ;m</td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>Swann-Morton</td><td>0510</td><td></td></tr><tr><td>Brush</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope slides</td><td>RS France</td><td></td><td>76 mm x 26 mm x 1.1 mm</td></tr><tr><td>Glass coverslips</td><td>RS France</td><td></td><td>22 mm x 22 mm Kimtech</td></tr><tr><td>Sciences Tissue Wipers</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>5511</td><td></td></tr><tr><td>双眼顕微鏡</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

準備や髄脊髄小脳スライス培養の免疫染色

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

ミエリンは神経系、グリア髄によって生成された複合膜構造細胞、どの ensheathes 軸索と高速電気伝導を容易に。ミエリンの変質は、機能的障害に関連付けられているが、様々 な神経疾患で発生する示されています。ここで、元の詳細な説明は提供 vivo マウス脊髄小脳スライス、いくつかの数週間、さらにラベルを貼ってミエリンを視覚化するために文化で維持できるから成る。

脊髄小脳スライス プルキンエ細胞染色とともに PLP GFP トランスジェニック マウス (図 2 b) だけでなく、野生型 P9 P10 C57black6 (WT) (図 2 a) から得られる代表的な髄鞘 immunostainings の例です。小脳スライス白質から脳内を活性化、フォリアの外周に向かってスライスの領域を追跡、プルキンエ細胞の髄鞘形成が 6 に 7 後実現主事業部7 DIV で完全脱髄の誘導は LPC 治療 (図 2Ci-ii) を介して可能です。次の脱髄、スライス自発的に remyelinate が完全に remyelinated (図 2Ciii) 脱髄のピーク後 6-7 日とします。
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マウス小脳・髄鞘形成と中枢神経系検査のメカニズムを調査するため適切な免疫組織化学的染色ミエリン鞘からスライス培養切片を準備する方法をご紹介します。

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...

この方法は、細胞およびtissularレベルでの髄鞘化および再髄鞘の基本的なメカニズムを研究することを可能にする。この技術は、主要な文化とインビボアプローチの間の交差点にあります。それはティッシュの建築を維持する主な利点がある速く、アクセス可能なモデルである。この手順を実証するには、博士研究員のメリナ・テティオットと、私の研究室の博士課程の学生であるレミ・ロンツァーノです。まず、小さなはさみを奥マグナムにそっと挿入し、側面に向かって1つの横切開を行って頭蓋骨を切り、頭の頭蓋骨の周りを切ります。頭蓋骨の後ろ側部分を取り出すために、細かいストレートな鉗子を使用して頭蓋骨の後ろ側部分を慎重に持ち上げます。その後、慎重に腹側の頭蓋骨と脳の間の鉗子を導入します。脳をそっとひっくり返し、小さいはさみで視神経と三叉神経を切り取ります。次に、頭蓋骨の頭または背側部分を氷冷解離培地を含む60ミリメートルの細胞培養皿のすぐ上に逆さまにして、脳が重力によって低下するのを助けます。細かい鉗子を使用して、後側を上に向け、腹側を横たわって脳を向きます。双眼鏡顕微鏡の下で、細かいストレート鉗子を使用して、前脳側の脳を固定化します。その後、後ろの脳を脳の残りの部分から分離します。小脳の下の小脳のペダンクを切り取り、小脳を後ろの脳の残りの部分から分離する。小脳が隔離されたら、細かいストレートな鉗子を使って髄を慎重に引き裂きます。細かい湾曲した鉗子で小脳をそっと持ち、チョッパーカミソリの刃に垂直に、背側をプラスチックプラットフォームに上げます。次に、1ミリリットルのピペットに付着した無菌の薄いエンドピペットチップを用いて、小脳の周りの解剖媒体の任意のアクセスを吸引する。次いで、組織チョッパーを用いて、小脳の厚さ300マイクロメートルのたるみ部分をスライスする。次に、スライスした小脳に解剖媒体を少し加えます。次に、1ミリリットルのピペットに広いイノシシピペットチップを取り付けた状態で、スライスした小脳をゆっくりと吸引し、氷冷解剖培地を含む60ミリメートルの細胞培養皿に戻す。次に、2つの細かいストレート鉗子を使用して、個々のスライスを分離します。次に、1ミリリットルのピペットに広いイノシシピペットチップを取り付けた状態で、樹皮から最大4つの選択したスライスを、いくつかの解剖媒体と共に6つのウェルプレートの1つの培養インサートに移す。薄い端のピペットの先端を使用してスライスの周りの解剖媒体のアクセスを取り除きます。脱髄のために、6日後に培養インサートの下のすべての培養培地を取り除き、1ミリリットルLPCあたり0.5ミリグラムを含む予め温めた新鮮な培養培地のウェルあたり1ミリリットルに置き換える。5%の二酸化炭素環境で摂氏37度で15〜17時間インキュベートします。インキュベーション後、1ミリリットルの予温培養培地を含む25ミリリットルのペトリ皿に入れて、インサートを洗浄します。次いで、新しい6つのウェルプレートに培養インサートを直ちに移し、新鮮で、あらかじめ温めた培養液を含む。免疫検査を始めるには、まず鉗子を使って培養インサートを持ち上げ、その下の培養培地を取り除きます。次に、1x PBSに4%PFAの2ミリリットルを加え、ph7.4を膜に挿入して小脳スライスを固定する。30分後、スライスを1回10分間1倍PBSの2ミリリットルで3回洗います。次に、両眼顕微鏡下で、25倍から30倍の倍率を使用し、メスまたはブラシを使用して、膜インサートからスライスをそっと取り外します。次に、ブラシを使用して、浮遊スライスを4つのウェルプレートのウェルに移し、1x PBSを含んで抗体の消費を制限します。次に、各ウェルからPBSを吸引し、15〜20分間マイナス20度で予冷100%エタノールでスライスをインキュベートする。インキュベーション後、100%エタノールを吸引し、スライスを1x PBSで短時間洗浄します。その後、1回10分間PBSで室温で2回洗浄します。非特異的抗体固定部位をブロックするには、PBSを吸引し、1x PBS、5%NGS、および0.3%非イオン性洗剤を含む溶液中のスライスを30〜45分間インキュベートします。次に、ブロッキング溶液で希釈した一次抗体を加え、一晩で摂氏4度でスライスをインキュベートします。一晩のインキュベーションの後、スライスを1回10分間PBSで3回洗います。次いで、二次抗体を加え、ブロッキング溶液中で希釈し、1〜500希釈比で、室温でスライスを暗闇の中で3時間インキュベートする。二次抗体でインキュベーションした後、1回の洗浄を10分間暗闇の中で1x PBSで3回洗浄します。次に、双眼鏡顕微鏡の下で、スライドに1x PBSの100マイクロレターを置き、ブラシでスライスをPBSに移し、スライド上でそれらを平らにします。PBS のアクセス権を削除します。最後に、取り付け媒体を直接ガラスカバースリップに置き、スライスをそっと覆います。野生性小脳切片中のミエリン免疫染色は、出生後9日から10日にかけて得られた黒6型野生型マウスを、電圧ゲートナトリウムチャネルに富化したロンビアの節を有するインビトロで11日間で観察し、パラノダルアキソール接合ドメインに横たわった。PLP-GFPトランスジェニックマウスでも同様の結果が認められた。パーケンシー細胞の髄鞘化は、主に培養で1週間後に達成される。LPC治療は、自然に再髄化し、脱髄後6日間完全に髄鞘化されるスライスを完全に脱髄する。この手順は最大で 25 分かかります。それは本当に最も重要なポイントです。オルガノミピックスライス培養は、髄鞘化ダイナミクスのライブイメージング研究に適しています。また、薬物スクリーニング実験を標的にするために使用することができます。この技術は、髄鞘化および再髄化プロセスを研究するための簡単で定量的なアプローチを可能にする。実験者は、動物の福祉、過剰で鋭い髄鞘に適用される基本的な安全手順に従う必要があります。

preparation-immunostaining-myelinating-organotypic-cerebellar-slice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このメソッドは、器官小脳文化の世代と異なる小脳の細胞型の生存率に一定のアポトーシス刺激の効果を説明します。...

器官小脳文化：アポトーシス課題と検出

私たちは、器官小脳スライス培養で増殖させ、個々のプルキンエ細胞の樹状突起の形態を表示して、定量的にロバにすることを可能にするプロトコルを提示。このプロトコルは、プルキンエ細胞の樹状突起の発達のメカニズムに関する研究を推進することを意図している。...

器官切片培養におけるプルキンエ細胞の樹状突起の形態分析

このビデオでは、マウスの小脳から組織切片を生成する方法を説明しています。小脳切片は、器官型培養に使用でき、髄鞘形成ダイナミクスを含む神経発達メカニズムに関する洞察を得ることができます。...

小脳解剖とスライス調製:マウス小脳から組織スライスを生成する方法

このビデオは、マウスの子犬の脳から小脳器官型のスライスを取得し、栄養素と成長因子を添加した培地でスライスを培養して、in...

器官型小脳スライス培養におけるプルキンエ細胞生存率の解析

前脳と小脳のスライス培養システムを使用してNG2細胞とオリゴデンドロサイトを研究する技術が説明されています。...

オリゴデンドロサイトダイナミクスと髄鞘形成を研究するための器官型スライス培養

ここでは、器官型スライス培養技術を用いて海馬の出生後の神経新生を研究するための技術が記載されている。この方法では、成人の神経新生のin vitro操作を可能にし、培養海馬への薬理学的薬剤の直接適用することができます。...

生後神経発生の研究のための器官型スライス培養

出生後の小脳の発達中に、胚帯に由来する未熟な顆粒細胞は、最終目的地に到達し、ニューロンネットワークを確立するための明確な移動の様相を示します。このプロトコルでは、小脳スライスの準備と、ニューロンの移動を調節する要因を調査するために使用される共焦点巨視的アプローチについて説明します。...

共焦点肉眼検査を使用した生後小脳顆粒細胞の移動のex vivoイメージング

核膜タンパク質は、多くの基本的な生物学的プロセスにおいて中心的な役割を果たしており、さまざまなヒトの病気に関与しています。...

細胞特異的にLINC複合体を破壊するマウスモデルの検証

小脳外顆粒層は、脳の発達で最大のトランジット増幅のサイトです。ここでは、胚の14日目のニワトリ胚からex vivoでエレクトロポレーションおよび小脳スライスの文化を使用して、増殖のピーク時にこの層に遺伝子改変をターゲットにするプロトコルを提示します。...

チック小脳スライスと顆粒細胞前駆体の空間的にターゲットを絞ったエレクトロポレーションの ex vivo培養

オルガノイトスライス培養は、神経発達または変性/再生プロセスを研究するための強力なツールです。ここでは、マウス小脳スライス培養におけるプルキンエ細胞の神経発達死をモデル化するプロトコルについて説明する。この方法は、神経保護創薬の研究に役立つ可能性があります。.

オルガ鼻記小脳スライス培養におけるプルキンジェ細胞生存

学ぶ マウス小脳のオルガノタイプスライス培養と免疫染色による髄鞘形成・再髄鞘化機構の解析法。組織構造を保ちながら生細胞イメージングや創薬スクリーニングに応用可能です。

準備や髄脊髄小脳スライス培養の免疫染色

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