Name: 腫瘍免疫プロファイル用のマウスおよび治療応答評価における扁平上皮癌細胞の粘膜接種 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: 学ぶ、マウスを用いた頭頸部扁平上皮癌のオルトトピックモデル構築法。腫瘍微小環境と治療抵抗性のメカニズムを解明し、ヒトと類似した臨床症状を再現する有用な研究ツールです。

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プロトコールに従った、承認機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) コロラド大学デンバー (プロトコル # 00250) の動物のすべてのプロシージャを行った。
1. 腫瘍細胞培養
注:B4B8、LY2 の細胞株は同所性同種各種腫瘍を生成に使用された: B4B8 腫瘍細胞が発がん性物質変換粘膜由来ケラチノ サイト (BALB/C マウス) から11から派生しました。LY2 腫瘍細胞は自発的に変換された BALB/C ケラチノ サイト ライン (Pam 212)12,13リンパ節転移から得られました。両方の細胞は、博士ナダラジャ Vigneswaran (UTHealth、ヒューストン、テキサス州、米国) によって提供された親切。
<ol><li>ダルベッコ変法イーグル培地 (DMEM) F/12 10% 牛胎児血清 (FBS) および細胞ライン メンテナンスのため 1% 抗菌試薬を添加したを使用します。37 ° C、5% CO2で無菌のインキュベーターでこれらの細胞株を維持します。セルは、15 箇所を超える前に接種に使用する必要があります。</li>
	<li>175 cm2細胞培養フラスコの 4 x 106セルに 2 × 106をプレートします。 注:セルが 90% 未満を確認ストレス反応の誘導を避けるために合流。</li>
	<li>インキュベーターからフラスコを削除し、洗浄セル 3 セルが 70% 合流 (~ 48 h) は、冷たいリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) と x。</li>
	<li>プレートの表面をカバーする十分な 0.25% トリプシンを使用してフラスコから細胞をデタッチします。<ol>
<li>これを行うには、70% コンフルエントの細胞を含む 175 cm2フラスコでトリプシンの 4 mL を分配します。37 ° C および 5% の CO2の携帯文化のインキュベーターで 3-4 分のトリプシンで細胞を孵化させなさい。</li>
		<li>細胞の剥離を確実に顕微鏡下で細胞を可視化します。</li>
		<li>トリプシン活性を中和するために政府短期証券を含む DMEM F/12 メディアの 12 mL を追加します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>細胞懸濁液を吸引し、50 mL の円錐管に配置。</li>
	<li>3 x-4 逆さにすることでセルを格納筒を振る x。</li>
	<li>細胞懸濁液の 10 μ L の因数を混ぜて 10 μ L の微量遠心チューブにトリパン ブルーや、診断のセルをカウントできます。セルの合計数からトリパン ブルー陽性細胞数を引いてセル実行可能性を決定する、セルの合計数で割ります。</li>
	<li>4 ° C で 5 分間 300 x gで細胞懸濁液を遠心分離します。</li>
	<li>1 x 10 の6セルがメディアの 50 μ L で存在するので、適切な音量での血清、抗生物質フリーの DMEM に細胞を再懸濁します。 注:(経験的に決定) 生体内での細胞ラインの積極性に基づき、マウスあたり注射部位ごとの 1 x 10 の6セルは B4B8、LY2 の細胞のために適切と判断されました。</li>
	<li>氷の上細胞懸濁液を含むバイアルを配置します。</li>
	<li>氷の上事前解凍基底膜マトリックスを配置します。 注:基底膜マトリックスは 4 ° C で一晩解凍しました。</li>
</ol>2. 細胞注入マウス
<ol><li>細胞: 基底膜マトリックス (各 50 μ L) の 1:1 の混合物を準備します。</li>
	<li>最初にセルを追加します。その後、徐々 にピペットの基底膜マトリックス。気泡を導入することは避けてください。混合物は動物の注入する直前に行ったことを確認します。長期間の基底膜マトリックス セルの追加は、細胞マトリックスの混合物は、混合物を厳密に振る困難の沈降で起因できます。これはマウスの腫瘍サイズでかなり変動をなります。</li>
	<li>優しく混ぜます。氷のマトリックスを含むすべての手順が実行されますを確認します。基底膜マトリックスは、常温で重合します。</li>
	<li>接種の注射器を準備します。</li>
	<li>セル/地階膜マトリックス液 100 μ L で 0.5 mL インスリンは注射器 (23 G) をロードします。</li>
	<li>基底膜マトリックス重合を避けるために氷の上の注射器を保ちます。</li>
	<li>イソフルランと酸素 (2.5%) 商工会議所にそれらを置くことによってマウスを麻酔します。</li>
	<li>マウスが深く (つま先ピンチに反応の欠如を確保する) で注射を実行する前に麻酔を確認します。</li>
	<li>右または左頬部に針を挿入します。これは口の両側に利用できるオープン スペースによって行われます。</li>
	<li>マウスの舌が方法ではないことを確認します。 注:舌腫瘍で起因するが、舌をつつくは簡単です。必要な場合は、舌を反対側に移動します。</li>
	<li>注射器を口腔内の頬部に平行に保つために。</li>
	<li>注入、注射器を引いて、ゆっくりと 10 ° の角度で注射器を挿入する準備ができたら。</li>
	<li>期間 5 のセル/地階膜マトリックス懸濁液 100 μ L を注入 s。</li>
	<li>追加の 5 の場所に注射器を保持すべての材料を確保するための s を注入します。 注:制御 nontumor ベアリング マウスの腫瘍細胞なし、(前述) 血清無料メディアとマトリックスの混合物を注入すること。</li>
	<li>注射器をそっと引き出します。</li>
	<li>残りのマウスで上記の手順を続行します。</li>
	<li>腫瘍は肉眼的に表示を開始するまでの 1 週間は、(50-200 mm3 B4B8、LY2 のセル)。</li>
</ol>3. マウスを監視
<ol><li>腫瘍細胞の注入後 1 週間でノギスを使用して最初の測定を実行します。外部のキャリパーを使用して腫瘍体積を計算するために最大の縦径 (長さ) では最大横径 (幅) を決定し、変更された楕円体式14,15を使います。 <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/59195/59195eq1.jpg">
</li>
	<li>腫瘍体積 (1 x-2 x 毎週定期的に) の正規キャリパ測定を実行し続けます。</li>
	<li>餌に腫瘍の成長の効果を評価するために動物の体重を測定します。</li>
</ol>4. 腫瘍の収穫
<ol><li>実験的エンドポイントに達したとき適切な措置 (例えば、CO2窒息、斬首刑、または頚部転位) を使用して動物を安楽死します。 注:マウスが瀕死の状態となった場合における、エンドポイントに到達した (の減量 &gt; 初期重量、グルーミング、悪液質の欠如の 15%) および/または腫瘍径 1,000 mm3に達した場合。</li>
	<li>
首の地域で長い正中線切開を作成することによって動物を解剖を開始します。
	<ol>
<li>皮膚をつかみ、皮膚を切るにはさみを鋭い鈍い鉗子を使用します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>腫瘍を覆っている皮膚の下で軽くはさみを挿入し、皮膚にはさみを押すことによって空気のポケットを作成します。</li>
	<li>皮膚が十分に腫瘍から戸建、ドレイン リンパ節 (DLNs) を識別し、腫瘍リンパ節の存在によって混同を避けるためにそれらを切除します。 注:大きな腫瘍が達するか、DLN をカバーします。実行される分析の種類によってそのままリンパ節の分離はアッセイ結果が歪曲になります腫瘍への免疫細胞の流出を避けるために不可欠です。</li>
	<li>ボリューム全体を取り外すまで腫瘍の境界をカットします。</li>
</ol>5. 腫瘍下流のアプリケーションの処理
<ol><li>下流組織検査室温で 10% ホルマリンで腫瘍を配置します。Overfixation を避けるためには、70% エタノール、ホルマリンを交換してください。流れフローサイトメトリー解析のため下記のとおり腫瘍を処理します。 注:組織は、overfixation することができます染色の特定の種類の問題になる前に 72 h のホルマリンで保存できます。</li>
	<li>1-2 mm に腫瘍をカット-サイズの作品を剃刀や鋭いはさみを使用します。</li>
	<li>コラゲナーゼ III と 50 mL のコニカル チューブのカットの腫瘍部分を配置 (1 サンプルあたり 4,250 台)、DNase 私 (サンプルあたり 0.1 mg)、トリプシン ・ インヒビター (サンプルあたり 1 mg)。</li>
	<li>揺れ 10 分ごとに 30 分の 37 ° C で孵化させなさい。 注:サンプルは、ジッパーのついた袋、90% エタノールで殺菌し、携帯文化のインキュベーターで配置で配置できます。</li>
	<li>30 分後、ハンクの 20 mL 平衡塩溶液 (HBSS) と 300 x gで 5 分でスピンを追加します。 注:HBSS は、塩化カリウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ナトリウム リン酸水素、ナトリウムりん酸一、ブドウ糖で構成されます。</li>
	<li>上澄みを廃棄し、赤血球 (RBC) 換散バッファーの 2-3 mL にペレットを再懸濁します。厳密のピペットします。 注:RBC の換散バッファーは、塩化アンモニウム、炭酸水素ナトリウム、ナトリウムで構成されます。</li>
	<li>常温で 2 分間インキュベートします。 注:長い潜伏は他の細胞への毒性することができます。</li>
	<li>換散バッファーの効果を中和するために HBSS の 20 mL を追加します。</li>
	<li>300 x gで 5 分で遠心し、上清を捨てます。</li>
	<li>HBSS の 10 mL にペレットを再懸濁します。</li>
	<li>70 μ m ナイロン落を通じて解決策を渡すし、300 x gで 5 分間遠心上清を破棄します。</li>
	<li>5.8-5.10 の手順を繰り返し、任意の追加の残骸が懸濁液から取除かれるように 40 μ m ナイロン落を細胞懸濁液を渡します。</li>
</ol>6. 細胞染色およびデータ集録
<ol><li>HBSS の 1 mL の細胞ペレットを再懸濁します。</li>
	<li>1.7 の手順で説明するように診断または自動化された細胞カウンターを使用してセルをカウントします。</li>
	<li>
総細胞数と汚損のため適切な濃度を決定します。 注:流れの cytometry の汚損のための理想的な細胞濃度は 100 万の細胞。たとえば、96 ウェル プレートで染色が実行され、1000 万セルがある場合は、ウェルあたり 100 万の細胞の 1 つの mL とプレート 100 μ L のサンプルを再懸濁します。</li>
	<li>
FcγIII と FcγII 受容体の免疫グロブリンの nonantigen 的結合を防止するためには、1: 100 の濃度で Fc ブロック (CD16/CD32) を追加します。室温で 5 分間インキュベートします。
	<ol>
<li></ol></li><li><ol><li></ol></li><li><ol><li></ol></li></ol>

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<li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+radiosensitization+in+EphB4+receptor-expressing+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Enhancing radiosensitization in EphB4 receptor-expressing Head and Neck Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 6, 38792(2016).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+radiation+and+immunotherapy%3A+a+new+systemic+therapy+for+solid+tumors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Combining radiation and immunotherapy: a new systemic therapy for solid tumors?</a> Cancer Immunology Research. 2 (9), 831-838 (2014).</li>
<li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+radiotherapy+and+PD-L1+blockade+is+mediated+by+TIM-3+upregulation+and+regulatory+T-cell+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Resistance to radiotherapy and PD-L1 blockade is mediated by TIM-3 upregulation and regulatory T-cell infiltration.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li>
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腫瘍微小環境の特性を厳密な解析から腫瘍の進行・転移のメカニズムの理解と効果的な治療法の開発のための重要な戦略を表しています。頭頸部がんは頭頸部領域内の複数の解剖学的サイトから発信することができます複雑な病気です。疾患のメカニズムを理解し、療法を改善する最大の障害は、人間 HNSCCs の積極的な転移の性質のようなマウスのマウス細胞の不足をしています。さらに、多数のマウスモデルは皮下移植腫瘍血管密度が高く、広範なリンパ血管と粘膜の常在菌を含む頭頸部領域の重要な生理学的機能が無いを採用しています。
本研究では、マウスの各種の実験モデルを特徴とします。我々 はいくつかの理由、画像誘導、ノギス、粘膜の植物内での腫瘍の存在を使用して腫瘍の成長を評価する能力を必要とせず地域へ簡単にアクセスを含む腫瘍接種のサイトとして頬粘膜を選んだ、周囲のリンパ管の存在と再現性の容易さ。頬粘膜細胞の注入は簡単ですが、針と浸透深さの位置決め、皮膚から穿刺を防止し、細胞が皮下に注射していないことを確認重要です。頬の領域に完全に平行ですが、口腔内で針を挿入し、注入する準備ができたら、10 ° 以上の角度で傾斜をお勧め...

各種は全世界で 5 番目に多い悪性腫瘍で、600,000 以上の患者と毎年診断1。化学療法と放射線療法 (RT) を含む積極的な治療にもかかわらずヒトパピ ローマ ウイルス (HPV) 感染なし各種患者全体の生存 (OS) 率 50% 以下 5 年2後も残ります。これは主に起因する非常に複雑な腫瘍微小環境、頬粘膜、舌、口、鼻腔、口腔、咽頭の底を含む頭頸部領域内でいくつかの異なる解剖学的サイトから腫瘍が発生することも、中咽頭・下咽頭。また、頭頸部領域高度血管柄付きし、3体のすべてのリンパ節の約半分が含まれています。頭頸部腫瘍の生物学を調査し、研究の大半は、腹部の腫瘍モデルに依存します。このようなモデルは、腫瘍組み込みメカニズムに洞察力を提供できるが、ネイティブの頭頸部微小環境不足かなりそのような所見の並進の可能性に影響を与えます。口腔腫瘍を誘導するために使用されている方法の 1 つは、発がん性物質 9, 10-ジメチル-1, 2-benzanthracene (DMBA)4への暴露を介してです。ただし、このメソッドに関連付けられている長いプロセスは、ラットとハムスターではなくマウスで腫瘍を誘発する、結果として得られる腫瘍分化 Scc5,6の組織学的特徴の多くを持っていません。Carcinogen4-ニトロキノリン 1-オキシド (4-NQO)、水溶性キノロン誘導体、マウス口腔腫瘍口頭で適用されたときに起因したが、また長い露出時間 (16 週) および限られたに苦しんでの導入率内およびバッチ間を取るマウス7,8,9。臨床的に関連するモデルを開発するためには、いくつかのグループにはドライバーの癌遺伝子や癌抑制遺伝子、TP53、TGFB、KRA、HRAS、SMAD4 の10の操作を含む遺伝子組み換えモデルが利用されています。これらのモデルは既知のドライバー遺伝子を腫瘍に洞察力を提供することができますが、人間 HNSCCs の複雑な不均一性を要約するだろうではないです。
この作品では、マウスで扁平上皮癌細胞の粘膜接種を実行する実現可能性を実証します。接種した細胞は注入から 1 週間以内積極的な腫瘍に発展します。人間 HNSCCs と同様に、腫瘍はリンパ節に転移します。病気の組織学的および臨床的特徴を特徴付ける、腫瘍免疫微小環境への洞察を提供しています。各種のこの直交異方性モデルががん生物学、腫瘍免疫学と臨床研究でのアプリケーションを持っていることを提案します。免疫回避、腫瘍の進行や治療抵抗性転移のメカニズムは提案されたモデルを使用して対処することができます臨床的意義の領域を表します。

<table><tbody><tr><td>コラゲナーゼIII</td><td>:ワージントンバイオケミカルコーポレーション</td><td></td><td></td>LS004183</tr><tr><td>DNase I</td><td>ワージントン バイオケミカル</td><td></td><td></td>LS006328</tr><tr><td>FC Block (CD16/32)</td><td>BD Biosciences</td><td>553141</td><td>&nbsp;クローン2.4G2&nbsp;</td></tr><tr><td>フローサイトメトリー染色バッファー</td><td>eBioscience</td><td>00-4222-26</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14175079</td><td>カルシウム、マグネシウム、フェノなし</td></tr><tr><td>赤 Helois マスサイトメーター</td><td>Fluidigm</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>マトリゲル膜マトリックス</td><td>コーニング&nbsp;</td><td>CB-40234B</td><td></td></tr><tr><td>MRIスキャナー</td><td>Bruker</td><td>NA</td><td>7.4 Tesla</td></tr><tr><td>RBC 溶解バッファー</td><td>BioLegend</td><td>420301</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン阻害剤</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td></td><td></td>LS002830</tr></tbody></table>

腫瘍免疫プロファイル用のマウスおよび治療応答評価における扁平上皮癌細胞の粘膜接種

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

頭頸部扁平上皮癌 (各種) は、再発や治療の失敗の高い有病率と衰弱や致命的な病気です。良い治療戦略を開発し、治療抵抗性に貢献する腫瘍内微小環境因子の理解が重要です。疾患のメカニズムを理解し、療法を改善する最大の障害は、人間 HNSCCs の積極的な転移の性質のようなマウスの細胞の欠如をされています。さらに、マウス モデルの大多数は高血管密度や血管豊富なリンパ系、粘膜の常在菌を含む頭頸部領域の重要な生理機能を欠いている腫瘍の皮下した絵を採用しています。本研究の目的は、開発、各種の実験モデルの特徴です。我々 は 2 つの遺伝的に異なるマウスの細胞とマウスの頬の粘膜で確立された腫瘍を採用しています。我々 は、コラゲナーゼの消化法確立された腫瘍から単一セルの最適なリカバリを最適化します。紹介データは、リンパ節に転移する腫瘍は高度に血管をマウスに開発を示しています。単一セル多重質量フローサイトメトリー解析は、すべての免疫細胞の大半を表す骨髄細胞と多様な免疫集団の存在を示しています。本研究で提案するモデルは、がん生物学、腫瘍免疫学、新規治療薬の臨床開発のアプリケーションを持っています。ひと疾患の臨床的特徴を同所性モデルの類似性は強化された翻訳と患者のアウトカムを改善のためのツールを提供します。

LY2 と B4B8 の細胞増殖の in vitro における評価の結果、両方の細胞があると同様の 2 倍時間 (21 h と 23 h、それぞれ)。生体内で、両方の細胞 (図 1 a) 接種後 1 週間以内 1 つ、明白な質量を形成しました。LY2 腫瘍を有するマウスの顎は腫瘍の負担 (図 1 a) のための 3 週間によって転置されました。コントロール マウスの腫瘍細胞を受信しませんでしたが予想通りの腫瘍を開発していません。LY2 腫瘍は B4B8 腫瘍と比較して高率で成長しました。担癌マウスは 632 ± 10 mm3 162 ± 4 mm3 B4B8 腫瘍 (図 1 b) と比較して LY2 で 21 日に平均腫瘍体積。マウス顎変位を急速に出展は、摂食・嚥下 (図 1) による減量を開...

頭頸部扁平上皮癌同所性同種モデルマウスを開発するための再現可能な方法をご紹介します。腫瘍免疫の浸潤、リンパ節転移、貧しい分化壊死を含む病気の臨床的病理組織学的機能について示します。担癌マウスでは、嚥下障害、顎の変位、減量など臨床的に関連する症状を起こします。

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

頭頸部の癌は、ますます普及しつつある。しかし、この地域の腫瘍微小環境と治療抵抗のメカニズムに関する理解は限られています。この技術は、アクセス可能な方法で頭頸部腫瘍のネイティブ微小環境を再現するために使用することができ、ヒトに見られるものと同様の臨床症状を生成する。腫瘍細胞培養が70%の合流度に達したら、細胞を1回の洗浄で冷たいPBSで3回洗浄し、培養フラスコの底面を覆うのに十分な0.25%トリプシンで細胞を取り付ける。細胞培養インキュベーターで3〜4分後、軽い顕微鏡下で剥離を確認し、胎児ウシ血清を添加したDMEM F12培地の12ミリリットルでトリプシンを中和する。細胞懸濁液を50ミリリットルの円錐チューブに移し、反転によって細胞を3〜4回混合する。次いで遠心分離により細胞を採取し、血清中のペレットを再懸濁し、抗生物質を含まないDMEMを氷上の培地濃度の50マイクロリットル当たり6番目の腫瘍細胞に10回10回で再懸濁させる。注射の直前に、細胞を氷上の基質膜マトリックス比に懸濁させる腫瘍細胞を1個に1個に混合する。レシピエント動物1匹につき100マイクロリットルの細胞を備えた23ゲージの針を装備した1つの0.5ミリリットルの注射器をロードする。注射器を氷の上に置き、麻酔付きマウスのつまみへの応答の欠如を確認します。次に、口腔内にシリンジを平行に保ち、口腔内にシリンジを平行に保ち、5秒間にわたって細胞基膜マトリックス懸濁液の100マイクロリットル体積の完全な注入を容易にするために、口の両側の利用可能なオープンスペースを通して、右または左の頬領域に針を挿入する。注射器をそっと引き出す前に、すべての材料が注入されていることを確認するために、さらに5秒間シリンジを所定の位置に保ちます。腫瘍は約1週間でひどく見えるようになります。注射の1週間後、カリパーを使用して各腫瘍の長さと幅を測定し、週に1〜2回の腫瘍容積を決定する。そして、各動物の体重を測定して、腫瘍の増殖が摂食に及ぼす影響を評価する。適切な実験エンドポイントで、鋭いはさみと鈍い鉗子を使用して、首の正中線を通って皮膚を切開する。そして、腫瘍を覆う皮膚の下にそっとハサミを挿入し、はさみを横切って皮膚に押し込んでエアポケットを作ります。皮膚が腫瘍から十分に剥離したら、リンパ組織の存在によって腫瘍組織が混乱することを避けるために、排出リンパ節を切除し、全容が剥離するまで腫瘍の境界を切断する。下流の分析のために腫瘍を処理するには、腫瘍を1〜2ミリメートルの大きさに切り、コラゲラーゼ3、DNAs 1、トリプシン阻害剤を含む50ミリリットル円錐形チューブに入れる。腫瘍片を摂氏37度で30分間インキュベートした後、10分ごとに振盪し、20ミリリットルのHBSSをチューブに加え、70マイクロメートルを通してナイロンストレーナーを注ぐ。5ミリリットルのシリンジプランジャーを使用して、ストレーナーの腫瘍片をつぶし、ストレーナーを通してHBSSの10ミリリットルを追加します。遠心分離によって細胞をスピンダウンします。厳格なピペット処理で2〜3ミリリットルの赤血球リシスバッファーでペレットを再懸濁し、室温で2分後に新鮮なHBSSの20ミリリットルでリシスを中和する。その後、別の遠心分離のためにHBSSの追加20ミリリットルで細胞を再中断し、腫瘍細胞懸濁液から最終的な破片を除去するために40マイクロメートルの注ぎフィルターを介して細胞を緊張させる。LY2腫瘍はB4B8腫瘍と比較して、より高い割合で増殖する。そして、顎の変位を示すマウスは、嚥下障害のために急速に体重減少を発症する。また、LY2マウスの生存期間の中央値は、B4B8腫瘍を持つマウスに対して観察された半分以下である。腫瘍を持つマウスの磁気共鳴画像は、頬粘膜の内層に広がる十分に境界された腫瘍を示すが、舌または他の近くの器官には及んでいない。組織学的検査では、すべてのLY2腫瘍を持つマウスが分化不良の扁平上皮癌を発症し、B4B8腫瘍を有するマウスは適度に分化した扁平上皮癌を発症することを示している。すべてのLY2腫瘍を持つマウスも組織学的に確認された壊死を有し、大多数は中等度から重度の壊死を示す。本代表的実験では、LY2腫瘍を採取し、腫瘍細胞注射後3週間で処理した。CD45陽性免疫細胞は、腫瘍細胞集団全体の7.3%を表した。CD11b陽性骨髄細胞は、CD45陽性細胞の全ての37.8%を表し、その大部分はF480陽性マクロファージであると判断され、好中球および骨髄由来のサプレッサー細胞の集団も少ない。T細胞はCD45陽性免疫細胞集団の15.9%を占め、そのうち53.4%がCD4陽性FoxP3陽性調節性T細胞であった。ナチュラルキラー細胞は、すべてのCD45陽性細胞の2%未満で構成された。針とレシピエントマウスを保持し、動物の口を露出する自信と快適さを開発するために注射を練習することが重要です。処置が正常に行われると、腫瘍固有因子および微小環境因子の治療または評価に対する腫瘍応答の評価を含む実験が行われる。この技術は、頭頸部癌患者における放射線療法と抗PL1療法を組み合わせることの効果を評価し、研究者主導の臨床試験を設計する道を開いた。

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

のための免疫担当マウスにおける漿液性卵巣癌の同所性モデル in vivoで</em腫瘍免疫応答の>腫瘍イメージングとモニタリング

標識された細胞の多光子顕微鏡を通して舌内に口腔癌と腫瘍浸潤の定量的なモニタリングのマウスモデルの生成に関わる技術の包括的な概要が表示されます。このシステムは、抗浸潤化合物の分子の評価と薬効のための有用なプラットフォームとして機能することができます。...

口腔扁平上皮癌の同所性マウスモデルにおける腫瘍細胞の浸潤の多光子イメージング

この動画では、扁平上皮がん細胞株の粘膜内接種による同所性頭頸部がんマウスモデルを開発しています。この担がんマウスは、ヒト疾患の臨床的に関連する症状に類似しているため、がんの進行を研究し、新たな治療戦略を発見するために使用できます。...

マウスモデルにおけるがん細胞の粘膜内接種:同所性頭頸部がんマウスモデルを確立するための手順

このビデオは、細胞ベースの腫瘍ワクチン接種アッセイを示しています。腫瘍形成のためにB16-F10メラノーマ細胞を皮内注射したマウスに、発達した腫瘍の近くにFlt3Lサイトカインを分泌するB16-F10細胞をワクチン接種します。ワクチンから分泌されたFlt3Lは、樹状細胞の成熟と増殖を促進し、樹状細胞がリンパ節のT細胞に腫瘍抗原を提示し、標的を絞った抗腫瘍免疫応答を引き起こします。...

マウスモデルにおける腫瘍移植と腫瘍ワクチンの注射

免疫無傷のヒトMUC1トランスジェニックマウスにおける侵襲移行細胞膀胱癌の誘導：免疫療法の開発のためのモデル

このプロトコルは、雌のC57BL / 6Jマウスにおけるマウス同所性膀胱腫瘍の発生および腫瘍増殖の監視について説明します。...

マウス同所性膀胱腫瘍モデルおよび腫瘍検出システム

ここでは、マウス腫瘍モデルにおける腫瘍固有および末梢由来腫瘍浸潤リンパ球の特性評価のための腫瘍移植プロトコールを提示する。フローサイトメトリーによるレシピエント由来免疫細胞の流入の特異的追跡は、抗腫瘍免疫応答中のこれらの細胞の表現型および機能的変化のダイナミクスを明らかにする。...

マウスにおける腫瘍浸潤CD8+ T細胞の動態を評価するための腫瘍移植

生体内顕微鏡所見の翻訳は、組織への深さの浸透が浅いという課題があります。ここでは、生体内顕微鏡と臨床的に適用可能な画像モダリティ(CT、MRIなど)の同時登録を可能にし、直接的な空間相関を実現し、生体内顕微鏡所見の臨床翻訳を効率化する可能性のある背側窓室マウスモデルについて説明します。...

トランスレーショナルがん研究における生体内顕微鏡検査と磁気共鳴画像法の併用のための背側Skinfold Window Chamber腫瘍マウスモデル

本研究では、マウスモデルにおける発光性大腸がん細胞の in vivo...

抗腫瘍効果を評価するためのアチミックヌードマウスにおけるヒト結腸直腸癌細胞の皮下注射

口腔内に形成された口腔扁平上皮がん腫瘍を外科的に切除する独自の方法をここに示します。...

マウスの口腔扁平上皮細胞癌の前臨床モデルにおけるトランスレージ関連腫瘍切除モデル

腫瘍内免疫療法への関心が高まる中、利用しやすく実用的な腫瘍モデルの選択が不可欠です。皮下腫瘍は確立しやすいですが、可視化や操作は困難です。本プロトコルでは、視認性とアクセス性を向上させる皮内腫瘍の生成方法を説明しています。...

ミウリがん腫瘍内免疫療法研究における皮内腫瘍の着床モデル

学ぶ、マウスを用いた頭頸部扁平上皮癌のオルトトピックモデル構築法。腫瘍微小環境と治療抵抗性のメカニズムを解明し、ヒトと類似した臨床症状を再現する有用な研究ツールです。

腫瘍免疫プロファイル用のマウスおよび治療応答評価における扁平上皮癌細胞の粘膜接種

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