Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses

Camille Bouillier; Vincent Rincheval; Delphine Sitterlin; Sabine Blouquit-Laye; Aurore Desquesnes; Jean-Fran&#231;ois El&#233;ou&#235;t; Elyanne Gault; Marie-Anne Rameix-Welti

doi:10.3791/59218

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Generation, Amplification, and Titration of Recombinant Respiratory Syncytial Viruses

世代、増幅、および組換え呼吸器合胞体ウイルスの滴定

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11:48 min

April 4, 2019

DOI: 10.3791/59218-v

Camille Bouillier¹, Vincent Rincheval¹, Delphine Sitterlin¹, Sabine Blouquit-Laye¹, Aurore Desquesnes¹, Jean-François Eléouët², Elyanne Gault^1,3, Marie-Anne Rameix-Welti^1,3

¹UMR 1173 Institut national de la santé et de la recherche médicale (INSERM),Université de Versailles St. Quentin, ²UR892 Institut national de la recherche agronomique (INRA), Unité de virologie et immunologie moléculaires, ³Assistance Publique–Hôpitaux de Paris (AP-HP), Hôpital Ambroise Paré, Laboratoire de Microbiologie

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生成する方法について述べる、RSVs の呼吸器合胞体ウイルス (RSVs) と最適化されたプラクの試金を変更遺伝子を増幅します。RSV レプリケーションの定量化しライブ RSV 封入体と顆粒の封入体のダイナミクスの分析、それぞれ 2 つの組換えウイルスを作成することによってこのプロトコルを示しています。

組換えウイルスの使用は、ウイルス複製メカニズムを解読し、ワクチンの開発プラットフォームを提供する強力な技術です。同様に、良質のウイルスストックの生成は、最も基本的な研究から応用研究まで、すべてのウイルス研究にとって非常に重要です。組換えウイルスの救出、最適な収穫、凍結、およびRSV株の滴定は、すべてのウイルス学的研究にとって重要な方法です。

彼らは伝統的と見なされるかもしれませんが、繊細なままであり、特定の専門知識を必要とします。トランスフェクションの前日、BSR-T7/5細胞を完全培地で1ミリリットル当たり0.5百万細胞で中断する。6ウェルプレートにウェルあたり2ミリリットルの細胞懸濁液を分配する。

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