Name: ゼブラフィッシュにおける磁界感度に人格の影響を評価します。 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-18T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 47 s
Description: 学ぶゼブラフィッシュの個性が水流や磁場などの環境刺激に対する方向反応に与える影響を評価する方法です。行動生態学と感覚生物学の研究に応用可能です。

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研究は物理学科の基本的な研究の創設とナポリ大学フェデリコ 2 世の生物学の部門によって支えられました。著者は博士クラウディア Angelini (研究所の微分積分学、Consiglio ナツィオナーレ ・ デッレ ・ ホリオカ [CNR]、イタリア) の統計的なサポートをありがちましょう。著者は、収集するデータ、および設計および実験装置の実現に、熟練した援助の部門技術者 F. Cassese、g. Passeggio、r. ロッコと彼らの技術的な助けのマルティナ Scanu とシルビアの Frassinet をありがとうございます。我々 はビデオの撮影中に実験を行っていただきローラ異邦人をありがちましょう。アレッサンドロ ・ Cresci のインタビュー文の撮影のためマイアミ大学からダイアナ ローズ Udel に感謝いたします。

次のプロトコルは、機関動物ケアとナポリ大学フェデリコ 2 世、ナポリ、イタリア (2015 年) の利用委員会によって承認されています。
1. 動物のメンテナンス
<ol><li>少なくとも 200 L のタンクを使用して、雌雄各タンクの少なくとも 50 個体の群れをホストします。 注:タンクの中の魚の密度は、一匹あたり 2 L 以下をなければなりません。これらの条件の下でゼブラフィッシュ正常浅水影響の動作が表示されます。</li>
	<li>以下の通りメンテナンス条件の設定: 27 ~ 28 ° C の温度電気伝導 &lt; 500 μ S;pH 6.5-7.5。ない3 &lt; 0.25 mg/L;10 h:14 h: 明暗日長。 注:同一保持条件は混合された人口と分けられた予防と対処の人口のために使わなければなりません。</li>
</ol>2 ゼブラフィッシュの性格選択
<ol><li>準備、メンテナンス タンクで使用したのと同じ水と静かな部屋 (図 3) 性格選択タンクを配置します。</li>
	<li>ビデオカメラやタンクの側面の上を配置します。地域にあるモニターでコンピューターにカメラを接続タンクとの視覚的接触がないです。</li>
	<li>選択 9 メンテナンス タンクから魚をランダム、無結節網を使用して人格選択タンクのダークサイドに転送します。 注:タンクと可能な限り時間の最低額に魚との対話を制限してください。ノイズや高速な動きを避けます。必要な場合は、少量輸送貯蔵タンクからの水が付いているタンク (約 2 L) で動物を譲渡します。動物の大気暴露を避けるためには、250 ml のビーカーを使用し、優しくビーカーを入力する動物を誘導します。キャプチャにかかる時間を最小限に抑えるため、それは動物に物理的な損傷を引き起こす可能性がありますストレスを増加させる要因としては、ネットで数秒以上の魚を保持しないと、複数の魚の収集を回避しようとします。魚は、アドリブ実験タンクに転送前に供給する必要があります。これは、食品を求める行動の異なる傾向が次実験22の中に、個人の行動に与える影響を制限します。同じ時刻に複製の実験を行います。これは、可能な概日リズム23による実験的グループの行動の可変性を最小限に抑えます。</li>
	<li>順化 1 h 後スライド式のドアを開きます。 注:10 分以内でタンクの明るい側面を探索、穴から終了者は、積極的な21と見なされます。</li>
	<li>10 分後優しくタンクから積極的な個人を削除し、プロアクティブ ・ メンテナンス タンクに転送。</li>
	<li>15 分後、反応21である暗いボックスに残る魚を収集し、反応性メンテナンス タンクに転送します。 注:10 分21後タンクの明るい側面に移動する魚を破棄します。必要な予防と対処の魚のセクション 5 で説明するテストに必要な数が収集されるまで、一度に 9 魚と性格テストを実行します。予防型と事後対応型の性格の一貫性は、同じアプローチを使用して定期的にチェックできます。</li>
</ol>3 1 次元磁場操作27磁気フィールドの設定します。
<ol><li>動力ユニット (図 2 a) に切り替えます。</li>
	<li>Rheotactic プロトコルがされる場所にコイル状のトンネルを配置実行されます (セクション 5) がそれはスイミング装置 (図 2 a) から切断してください。ガウス/Teslameter トンネル内で接続されている磁気プローブを配置し、トンネルの長軸に沿って磁気分野の値を取得する必要な電圧を確認します。 注:ソレノイドの磁気特性のためフィールドが合理的にトンネル内均一これは、水平方向および垂直方向にプローブをゆっくり移動することによってチェックできます。</li>
	<li>プローブを外し、スイミング装置フロー トンネルに接続します。</li>
	<li>Rheotactic プロトコル (セクション 5) を開始します。</li>
</ol>4. 三次元磁場と磁場のセットアップ操作27
<ol><li>CPU、DAC、およびコイル ドライバー (図 2 b) に切り替えます。</li>
	<li>3 つの軸 (x、y、および z) のそれぞれに磁気分野を設定します。</li>
	<li>ヘルムホルツのペアのセットの中心にトンネルを配置します。</li>
	<li>Rheotactic プロトコル (セクション 5) を開始します。</li>
</ol>5. 流れ区域のゼブラフィッシュの逆さ流れ走性のテスト
<ol><li>5 人に 1 人の魚を側面及び底面に隠されていると 2 L のタンクを使用してフロー トンネルに転送します。</li>
	<li>ポンプをオンにし、1.7 cm/s トンネルで流量を設定します。 注:このゆっくり動く水は酸素トンネルで水を保ち、動物の回復が容易になります。</li>
	<li>1 h のスイミング トンネルに順応する動物をしましょう。</li>
	<li>トンネルで魚の行動のビデオ録画を開始します。 注:リモート コントロール (例えば、Bluetooth) カメラ (李 4 K アクションなど) を用い, .mpg (30 フレーム/秒) として、ビデオを保存.</li>
	<li>(1.3 cm/秒; 本研究で選択した実験的プロトコルに従って流量の段階的増加を開始します。図 4)。 注:ゼブラフィッシュの 2.8 BL (体の長さ) 0 から範囲の低流量を使用しました、このプロトコル/s。これらの流れの速度は、ゼブラフィッシュ (3% – 15% 重要な遊泳速度 [Ucrit])24の連続的な指向スイミングを誘発する流量の下限です。低流量 (次のブレットのプロトコル25) の使用は、水の流れの存在下でこの種の特定の行動の特性にリンクされています。ゼブラフィッシュは、商工会議所、水の流量の存在下でも頻繁に回転の主要な軸に沿って泳ぐや上流と下流の両方24,26を泳ぐ傾向がある傾向があります。この動作は比較的高速で消える、水の流量を受けます (&gt; 8 BL/s)26、時動物は継続的に泳ぐ上流 (正 rheotactic 応答) に直面しています。縦と横の変位は非常にまれです。</li>
	<li>
形態の商工会議所で魚の写真でセックスと全体の長さ [TL]、フォーク長 [FL] (BL) 動物の形態計測を実行します。
	<ol>
<li>適切な画像を選択します。</li>
		<li>ImageJ で画像を開きます。</li>
		<li>動物のセックスの注意 (男性ゼブラフィッシュがほっそりと女性とより丸みを帯びた青と白の彩色を持つ傾向がある、黄色がかった、する傾向がある)。</li>
		<li>[ Analyze ] をクリックして &gt; セット参照としてトンネルの全体の横の長さを使用して、センチメートル単位のイメージのスケール、スケールを設定します。</li>
		<li>[ Analyze ] をクリックして &gt;測定して記録、動物の長さ。</li>
		<li>その体重 (帯域幅) を計算します。 注:BW は、ラボでビルド以前セックス FL BW 関係やメタデータから計算されます。全体の手順は、動物の操作ストレスを回避できます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. ビデオ追跡
<ol><li>トラッカー 4.84 ビデオ解析とモデリング ツール ビデオのファイルを開きます。 注:必要に応じて、視点と放射歪みを ﬁlters を使用してビデオの歪みを修正します。</li>
	<li>上部メニューの座標系をクリックし、センチと秒に時間の単位を長さの単位を設定します。</li>
	<li>クリックしてファイル&gt;インポート&gt;ビデオとトラッカー 4.84 で動画 1 つを開きます。</li>
	<li>「座標軸」をクリックし、、トンネルに沿って x 軸と時間をかけて魚の位置を追跡するための参照システムを設定します。下流(水コンセント) で壁を終了の低角に原点を設定します。</li>
	<li>トラックをクリックして &gt;新しい&gt;質量の点と 1 つの魚を一度に追跡開始。各流量で過ごした魚各ステップの最後の 5 分を追跡します。</li>
	<li>5 フレーム間隔でビデオを手動で進める (0.5 s) し、各上流と下流のターン (UDt;図5 赤ドット) で、各下流上流のターン (DUt;図 5では青い点) で時間と動物の位置をマークします。 注:魚の位置のための参照として魚の目の位置を使用します。トラック ポイント質量を使用して動物の位置です。追跡から除外する任意非指向スイミング (すなわち、操縦時間) の期間。</li>
	<li>追跡の各セッションの終わりには、x の値を選択し、ソフトウェア ウィンドウの右下隅のテーブルから値を時間します。データを右クリックし、[データのコピー ] をクリックして &gt;完全な精度。</li>
	<li>(Udt と Dut の間のすべての間隔の合計) 時間の合計上流下流時間の合計 (Dut と UDt 間間隔の合計) と値を計算するテンプレート スプレッドシート ファイルを時刻の値およびすべての回転の位置の x 値を保存します。(RI %) の割合で rheotactic インデックスの各フロー ステップ (図 5参照)。 注:魚は上流に直面して過ごす指向の時間の合計の割合で rheotactic の挙動を定量化 (水泳やほとんど凍結 [すなわち、彼らはトンネルの下でまだ滞在]27)。この割合は、RI % (図 5) として定義されます。 <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/59229/59229eq1.jpg">
</li>
</ol>

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<li>Gardiner, J. M., Atema, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sharks+need+the+lateral+line+to+locate+odor+sources%3A+rheotaxis+and+eddy+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Sharks need the lateral line to locate odor sources: rheotaxis and eddy chemotaxis.</a> Journal of Experimental Biology. 210 (11), 1925-1934 (2007).</li>
<li>Thorpe, J. E., Ross, L. G., Struthers, G., Watts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+Atlantic+salmon+smolts%2C+Salmo+salar+L.%2C+through+Loch+Voil%2C+Scotland%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fish+Biology%22%5BJournal%5D)">Tracking Atlantic salmon smolts, Salmo salar L., through Loch Voil, Scotland.</a> Journal of Fish Biology. 19 (5), 519-537 (1981).</li>
<li>Bottesch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+magnetic+compass+that+might+help+coral+reef+fish+larvae+return+to+their+natal+reef%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">A magnetic compass that might help coral reef fish larvae return to their natal reef.</a> Current Biology. 26 (24), R1266-R1267 (2016).</li>
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<li>Dingemanse, N. J., Kazem, A. J. N., Réale, D., Wright, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+reaction+norms%3A+animal+personality+meets+individual+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Ecology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Behavioural reaction norms: animal personality meets individual plasticity.</a> Trends in Ecology and Evolution. 25 (2), 81-89 (2010).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

本研究では説明されたプロトコルにより水生生物など外部の 2 つの手がかり (水現在および地磁気分野) と動物の 1 つの内部要因の統合から生じる複雑な方向応答を定量化する科学者性格。全体的なコンセプトは、異なる性格の個体を分離し、個別に制御する、または同時に外部環境手がかり、その配向挙動を調査する科学者を可能にする、実験的なデザインを作成します。
Rheotactic インデックス (RI) の数学的な定義とともに、この研究で説明されたプロトコルは、ゼブラフィッシュ スイミング トンネルの挙動の予備的観察に続く設計されました。2 種類行動パターン、水の流量の有無の両方のトンネルに配置されて、これらの動物に表示: 水泳、操縦を指向します。指向の時間の大半を過ごす彼ら (通常、魚だったビデオの時間の 95% 以上を記録した) トンネルに沿って水泳 (すなわち、45 ° より低い角度で長い軸に沿った向き)、前後に回して近接端壁のしばしば sh接触 (すなわち、トンネルの壁に近いスイミング)27を負います。
<p class="jov...

現在の研究では、魚の水の流れや磁場などの外部方向キューに魚の遊泳方向応答に人格の役割の調査のスコープを持つ研究室の行動プロトコルについて述べる.
様々 な感覚情報を計量動物の配向の決定の結果します。意思決定プロセスの影響を受けて移動する動物の能力によって (例えばを選択し、方向を維持する能力) の内部状態 (例えば、摂食や繁殖必要性)、移動 (例えば、歩行バイオメカニクス) といくつかの追加の能力外部要因 (例えば、時間帯、同種との相互作用)1。
内部状態や配向挙動で動物の人格の役割はしばしば不十分と理解されてまたは2を検討していません。よく調整を実行し、偏光グループ運動動作3社会的水生種の配向に関する研究、新たな課題が生じます。
水の流れは、魚の配向過程で重要な役割を再生します。魚の方向電流と呼ばれる逆さ流れ走性4、肯定的な (すなわち、上流指向) することができます無条件の応答または否定的 (すなわち下流指向) を水との最小化に採餌に至るいくつかの活動に使用エネルギッシュな支出5,6。また、文献の成長するボディは、多くの魚種では、オリエンテーションとナビゲーション7,8,9の地磁気を報告します。
魚の逆さ流れ走性と水泳パフォーマンスの研究は通常フロー チャンバー (水路)、魚にさらされている流れの速度の段階的増加高速、低速から枯渇 (危険速度と呼ばれる)10、まで頻繁に実施します。 11。一方、以前の研究はまだ水12,13の競技場で動物の遊泳行動の観察を通して方向に磁場の役割を調べた。ここでは、水の流れと磁場の両方を操作しながら魚の挙動を研究に研究ができる研究室テクニックについて述べる。このメソッドは周囲の磁場の操作 (すなわち、最小限の水速度の rheotactic のしきい値を決定する結論につながる私たちの以前の研究で浅くゼブラフィッシュ (動脈分布) で最初に利用されました。オリエント上流の魚が遊泳)14。このメソッドは、地球の磁場強度の範囲内の水路磁気フィールドを制御するセットアップと組み合わせての遅い流れと水路区域の使用に基づいています。
利用してゼブラフィッシュの動作を観察するスイミング トンネルは図 1の通りです。(Nonreﬂecting アクリル シリンダー直径 7 cm と 15 cm の長さから成っている) トンネルが流れレート14の制御のためのセットアップに接続されます。このセットアップでは、トンネル内の流量の範囲は 0 ~ 9 cm/秒で異なります。
スイミング トンネルの磁場を操作するには、2 つの方法論的アプローチを使用: 最初は 1 次元と 2 番目が立体化。アプリケーションにこれらのメソッド操作固有の磁気条件水の定義済みのボリュームを取得する地磁気-したがって、本研究で報告された磁場強度のすべての値は、地磁気を含めます。
1 次元に関する15のアプローチ、(x 軸として定義) 水の流れの方向に沿って、磁場を操作スイミング トンネルを包んだソレノイドを使用しています。これが電源ユニットに接続されている、それは均一静磁場 (図 2 a) を生成します。同様に、3次元的アプローチの場合、電線のコイルを用いたスイミング トンネルを含むボリュームで地磁気を変更します。ただし、3 次元磁場を制御するコイル 3 つの直交ヘルムホルツのペア (図 2 b) のデザインであります。ヘルムホルツの各ペアは 3 つの直交空間方向 (x y、およびz) に沿った 2 つの円形コイルから成るし、閉ループ条件で働く 3 軸磁力計を装備しました。磁力計は、磁界地球の自然フィールドに匹敵して (スイミング トンネルがある) コイル セットの幾何学的な中心の近くにあります。
彼らは磁場16に対応方法を浅瀬を構成する魚の性格に影響仮説をテストする上記の手法を実装する.我々 は、水の流れや磁場にさらされるとき予防と対処の人格17,18を持つ個人が異なる対応仮説をテストします。これをテストするには、我々 を割り当てる」の方法論と予防型または反応性17,19,20,21グループ個人を用いたゼブラフィッシュを並べ替えます。その後、反応性個人のみから成るまたは提案するサンプル データとして磁気水槽タンクに積極的な個人だけから成る群れで泳いでゼブラフィッシュの rheotactic の挙動を評価する.
並べ替えの方法は、新規環境21を探索する予防型と事後対応型の個人の異なった傾向に基づいています。具体的には、我々 は、明るいと暗い側17,19,20,21 (図 3) に分かれてタンクを使用します。動物は、ダークサイドに慣れるが。明るい側へのアクセスは、オープンで積極的な個人に、すばやく反応性の魚は、暗い水槽を放置しないでください、新しい環境を探索するタンクの暗い半分を終了する傾向があります。

<table><tbody><tr><td>9500 G メーター</td><td>FWBell</td><td>N/A</td><td>ガウスメーター、DC-10 kHz; プローブ分解能:&nbsp; 0.01 &mu;T&nbsp;</td></tr><tr><td>AD5755-1</td><td>アナログ・デバイセ</td>ズ <td>EVAL-AD5755SDZ</td><td>クワッド・チャンネル、16ビット、デジタル・アナログ・コンバータ</td></tr><tr><td>ALR3003D</td><td>ELC</td><td>3760244880031</td><td>DC ダブル安定化電源</td></tr><tr><td>BeagleBone Black</td><td>Beagleboard.org</td><td>N/A</td><td>シングル・ボード・コンピュータ</td></tr><tr><td>・コイル・ドライバ</td><td>市販</td>のOPに基づく<td>自家製N/A</td><td>アンプ (OPA544 by TI)</td></tr><tr><td>Helmholtzペア</td><td>家庭用</td><td>N/A</td><td>標準AWG-14ワイヤーで作られたコイル</td></tr><tr><td>HMC588L</td><td>ハネウェル</td>社製 <td>900405 Rev E</td><td>デジタル3軸磁力計</td></tr><tr><td>MO99-2506</td><td>FWBell</td><td>129966</td><td>単軸磁気プローブ</td></tr><tr><td>遊泳装置</td><td>M2Mエンジニアリング カスタム科学機器</td><td>N/A</td><td>蠕動ポンプとSMCによって構成された遊泳装置 デジタルフィードバック付きフロースイッチ流量計</td></tr><tr><td>TECO 278</td><td>TECO</td><td>N/A</td><td>サーモクライオスタット&nbsp;</td></tr></tbody></table>

ゼブラフィッシュにおける磁界感度に人格の影響を評価します。

Assessing the Influence of Personality on Sensitivity to Magnetic Fields in Zebrafish

自分の環境で彼ら自身を方向づける、動物は、さまざまな人格など、いくつかの内部要因と相互作用する外部の手がかりを統合します。ここでは、ゼブラフィッシュの人格の複数の外部環境の手がかり、具体的には水の流れと磁場の方向応答に及ぼす影響の研究のために設計された行動プロトコルについて述べる。このプロトコルは積極的かどうかを理解することを目的とまたは反応性のゼブラフィッシュは、異なる rheotactic のしきい値を表示 (すなわち、魚が遡上を開始する流れ速度) 周囲の磁場がその方向を変更します。性格が同じゼブラフィッシュを識別するために魚がタンクの半分は明るい半分に狭い開口部と接続されている暗闇の中で紹介しています。積極的な魚だけを探る小説、明るい環境。反応性の魚はタンクの暗い半分を終了しないでください。低流量でスイミング トンネルは、rheotactic のしきい値を決定するために使われます。トンネル内の地球の磁場強度の範囲で磁場を制御する 2 つの設定を述べる: 流れ方向 (1 次元) と磁場の 3 軸制御を可能にする磁界を制御する 1 つ。魚は異なる磁場下でトンネル内の流れの速度の段階的増加を体験しながら撮影しました。配向挙動データはビデオ追跡手順を通じて収集された、rheotactic のしきい値の決定を許可するロジスティック モデルに適用されます。ゼブラフィッシュを浅くから収集した代表的な結果を報告します。具体的には、これらは積極的な魚は磁場の変化に応答しない、その方向に磁場が変化する場合のみ反応、慎重な魚が rheotactic の閾値の変動を示すことを実証します。この方法論は、磁気感受性の研究と多くの水生種、両方の孤独を表示またはスイミング戦略を浅く rheotactic 動作に適用できます。

サンプル データとして結果予防と対処の浅水影響ゼブラフィッシュ16 図 2A (プロトコルのセクション 3 を参照) に示すようにセットアップを使用して水の流れの方向に沿って磁界制御を提案する.これらの結果は示してどのように記述プロトコルは、異なる個性を持つ魚の magnetic field への応答の違いを強調表示できます。これらの試験の全体的なコンセプトは、浅水影響ゼブラフィッシュ14で rheotactic のしきい値を水の流れを基準にして磁場の方向に影響の知見に依存します。このように、磁場の変化として、逆さ流れ走性を調節する、ゼブラフィッシュの磁場に対する応答は、予防型または対処型の人格28によると異なる場合を評価するためにこのプロトコルを使用することができます。
<p class="jove_content" fo:keep-together.withi...

ゼブラフィッシュの人格が電流と弱い磁場を水への対応をどのように影響するかを評価するために設計された行動プロトコルについて述べる。同じ個性を持つ魚は彼らの探索行動に基づく区切られます。さらに、スイミング トンネルの低流速率と磁気の異なる条件の下で彼らの rheotactic 配向挙動を観察します。

To orient themselves in their environment, animals integrate a wide array of external cues, which interact with several internal factors, such as ...

このプロトコルは、ゼブラフィッシュの内部状態または性格が、水流や磁場などの環境から来る手がかりに対する配向応答にどのように影響するかを調べることができる。この技術は、内部要因と環境の手がかりの両方がゼブラフィッシュの向きにどのように影響するかを観察するために使用されます。しかし、それは、実験計画の広い様々なに適用することができます。この方法は、センサー生物学研究の行動生態学に関する洞察を提供することができる。そして、それは積極的に泳ぐ任意の水生動物に適しているので、柔軟な種です。実験を行うと、使用する動物の行動や動物のストレスを最小限に抑える方法に精通することをお勧めします。ゼブラフィッシュの性格選択のために転送タンクにそれらを移動し、人格選択タンクの暗い側に魚を転送するためにネットで250ミリリットルビーカーを使用して個々の魚を収集します。順応の1時間後にスライドドアを開け、穴から出る個人がタンクの明るい面を10分間探索できるようにします。探査期間の終わりに、穏やかに2つの分離された容器に魚を収集し、明るい側から積極的な魚を収集し、さらに5分後に暗い箱から反応性魚を収集します。1次元の磁場操作で磁場を設定するには、トンネルを開いたままにして、電源ユニットと磁力計をオンにします。トンネル内のガステスラメーターに接続された磁気プローブを配置し、トンネルの長軸に沿って選択した磁場値を得るために必要な電圧を確認します。次に、プローブを取り外し、フロートンネルを水泳装置に接続します。3 次元の磁場操作で磁場を設定するには、コンピュータをオンにして、デジタルからアナログ変換器に、コイル ドライバで、選択した磁場を x、y、z 軸に設定します。その後、ヘルムホルツペアセットの中央にトンネルを配置します。その選択が設定された磁場が設定されたら、レオタクティックテストのために1〜5匹の魚を選択します。トンネル内で魚を移動し、トンネル内の流量を毎分4.5リットルに設定し、ポンプをオンにします。水でトンネルを感じる前に出口弁を閉じ、魚を転送し、床を右に設定する前にそれを開いてください。動物が1時間水泳トンネル内に順応した後、トンネル内の魚の挙動を記録し始め、選択された実験プロトコルに従って流量を上げるステップを開始する。コイルを取り外した同じ水泳トンネルは、ヘルムホルツペアセットの中央に配置することができる。解門実験の終わりに、アモルファスメートルチャンバーで個々の魚の写真を撮り、画像J.ノートに動物の性別を公開します。オスのゼブラフィッシュは細身で黄色がかった傾向があり、メスはより丸みを帯びており、青と白の着色を持つ傾向があります。次に、[分析] をクリックしてスケールを設定します。カメラスケールを基準として、セグメント化された線ツールを選択して、画像のスケールをセンチメートル単位で設定するには、スナッチップからコドルペンタクルに線を引き、標準の長さを測定するか、全長の尾端に描きます。次に、[解析]をクリックして、動物の長さをセンチメートル単位で測定して記録します。トンネル内のゼブラフィッシュのアクティビティを追跡するには、適切なビデオ分析およびモデリングソフトウェアプログラムを開きます。[ファイル]、[読み込み]、[ビデオ] をクリックし、ビデオの 1 つを開いて座標系をクリックして、長さの単位をセンチメートルに、時間単位を秒に設定します。座標軸をクリックし、トンネルに沿った x 軸で魚の位置を経て追跡する基準系を設定し、水出口の壁の低い角に原点を設定します。一度に1匹の魚の追跡を開始するには、キャリブレーションで新しいトラックをクリックしてスケールを設定し、新しいインポイントから質量にトラックします。ビデオを半秒、5フレーム間隔で手動で進め、各上流下流ターン時および下流の各上流ターンで動物の時間と位置をマークしました。各トラッキングセッションの最後に、テーブルからXと時間の値を選択します。データを右クリックし、データを完全にコピーをクリックします。次に、テンプレートスプレッドシートファイル上のすべての回転位置の時間値とx値を保存します。アップストリーム時間とダウンストリーム時間の合計、およびレオタクティクス指数の値と各フルステップのパーセンテージを計算します。本代表的実験では、実例通りトンネル内で1時間順応した後、一度に1つのショーが水中のトンネル内で泳いでいる間に録画されたビデオを、7段階の流量の段階的な増加とともに加速した。これらの試験の間、磁場は一次元で制御された。追跡時間の間に、各流量の各魚の用語が強調表示され、各フルスピードで各魚のレオタクティク指数を計算するための基準点として使用されました。レオタクティブ指数が50%を超え、上流水泳の有病率に対応する正のレオタクチック応答を有することを示す場合、50%と有意に異なっていないレオチック指数は、レオチック応答の欠如を示す。この実験における5匹の魚の平均レオタクティクス指数パーセント値のアークサイン変換は、水速が上昇するとレオタクチック指数値のシグモイド増加を示し、単純な数学的方法を用いてゼブラフィッシュレオタクシスを定量化することを可能にした。これらの曲線からは、異なる方向の磁場の下で、プロアクティブな魚のレオタクティブ応答性が影響を受けず、2つの実験群の応答が同じ曲線で表されているのが分かります。一方、反応性魚は磁場に応じてレオタクティブの向きを変化させ、応答は著しく異なる曲線に表される。これは行動実験であり、魚の行動はストレスの影響を受ける可能性があることを覚えておいてください。魚の取り扱いと移送は難しい場合があります。だから、実験の前に自分自身を訓練します。このレオタクティック磁気技術は、ゼブラフィッシュや他の水生脊椎動物および無脊椎動物の磁気感受性に対する人格の影響をさらに探求することを可能にしました。

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Research

JoVE Journal

Behavior

行動

このビデオでは、ゼブラフィッシュのレオタキシスアッセイについて説明しています。この方法では、異なる磁場の影響下で異なる水流量に応じたゼブラフィッシュの配向挙動を測定します。...

ゼブラフィッシュレオタキシスアッセイ:異なる水流量に応答した配向挙動を測定する方法

この原稿は、ゼブラフィッシュの大胆さ、攻撃性、浅瀬の設定、実装、分析、および行動症候群の存在の試験について説明しています。行動定量化のための標準化されたアプローチにより、研究間での比較が容易になります。このプロトコルは、各アッセイを個別に実行できるため、変更することができます。...

ゼブラフィッシュ行動症候群のための大胆、攻撃的、および浅水アッセイ

&gt;jove_content&lt;ここで説明するプロトコルは、ゼブラフィッシュの胚をin...

生きたゼブラフィッシュ胚における運動ニューロン膜電位のバイオセンシング

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ゼブラフィッシュ幼虫に対する環境汚染物質の神経行動効果の研究

脊髄損傷後の機能回復が可能な成体ゼブラフィッシュは、神経再生の先天的なメカニズムを解明するための最高のモデルシステムです。ここでは、脊髄再生の機能的読み出しとしての水泳持久力および水泳行動アッセイについて説明する。...

成体ゼブラフィッシュの水泳持久力と水泳行動の評価

ここでは、ゼブラフィッシュの成魚に対する化学物質(メタンフェタミンやグリホサートなど)の潜在的な神経毒性効果を1つの水槽で効果的に判定するために、新しい水槽、ショーリング、社会的選好試験など、包括的な行動試験バッテリーを紹介します。この方法は、神経毒性および環境研究に関連しています。...

単一水槽内の一連の行動試験を用いた成獣ダ ニオ・レリオ の神経毒性評価

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ゼブラフィッシュ振動驚愕応答スクリーニングシステムを用いた化学物質の毒性評価

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行動実験に基づくゼブラフィッシュ幼虫におけるMPTP誘導パーキンソン様行動表現型の表現型プロファイリング

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ゼブラフィッシュ(Danio rerio)における社会的嗜好を調査するための低コスト代替案:3室オープンタンク自由泳ぎ課題

学ぶゼブラフィッシュの個性が水流や磁場などの環境刺激に対する方向反応に与える影響を評価する方法です。行動生態学と感覚生物学の研究に応用可能です。

ゼブラフィッシュにおける磁界感度に人格の影響を評価します。

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