Name: 骨肉腫に対する三次元骨細胞外マトリックス モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 学ぶ三次元骨細胞外マトリックスモデルを用いた骨肉腫研究の手法。脱細胞化骨マトリックスで骨肉腫細胞の生存と異形性を観察し、薬物感受性や腫瘍進行のメカニズム解明に役立つ実験モデルを構築する。

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著者らは、骨細胞外マトリックス足場の構築時に優れた技術的な援助の彼女の行政支援と長い趙柳営陳のサポートを値します。本研究は、中国の国家自然科学基金 (31871413) からの助成金によってサポートされます。

アニマル ・ ケアおよび使用の行われています健康ガイドの国家機関によると、ケア実験の動物の使用 (NIH 文書第 80-23、1996 年に改訂) 孫逸仙大学動物倫理委員会から承認された後。
1. 骨の準備
<ol><li>6 週齢 BALB/c マウス (なしセックス固有要件) に 4 を取得します。頚部転位によって無菌マウスを安楽死させるし、新鮮な腓骨、脛骨と大腿骨、後肢を滅菌手術用はさみでカットします。上皮性のティッシュをはがし、はさみとピンセットを使用して、できるだけ多くの軟部組織から削除します。</li>
	<li>滅菌 10 mM リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 6 cm 皿に血を削除する 2 回と脚の骨をすすいでください。3 分、75% エタノールに骨を浸すし、PBS で 2 回すすぎます。きれいな骨は、3ヶ月必要になるまで-80 ° C で滅菌 PBS で滅菌 50 mL 遠心チューブに格納できます。 メモ: 次のすべての手順で使用される PBS 10 mM PO43−があります。</li>
</ol>2. 骨の脱灰・ decellularization
<ol><li>常温、冷凍骨を解凍し、再び凍結-80 ° C で 1 h. は対象セル換散およびティッシュの破壊のための以上 2-3 凍結融解の骨の。</li>
	<li>0.5 と滅菌 50 mL 遠心管中骨を孵化させなさい骨の完全かつもカバレッジを確保する穏やかなロッキング振動ロッキング プラットフォームまたは軌道シェーカーで室温で一晩 N HCl。 注: 骨完全酸のモーション中に没頭しているし、処理中に解決してはいけないことを確認します。塩酸溶液の量は、骨の 10 倍以上にする必要があります。</li>
	<li>脱灰後、塩酸溶液を完全にデカント、1 h の流水ですすいでください。ロッキングのプラットフォームまたは軌道シェーカーに蒸留水で洗浄あたり 15 分間 2 回骨を洗います。 メモ: は、ソリューションまたは蒸留水水洗浄の間最終的な洗浄の後、完全に削除することを確認してください。</li>
	<li>メタノールの 1:1 混合物と脱灰骨の脂質と部屋の温度10の 1 h の錫箔巻き 50 mL 遠心管中のクロロホルム抽出します。</li>
	<li>その後、転送メタノール 30 分の錫箔巻きの別の管に骨メタノールを完全に削除し、すすぎは軽く振とうしながら 15 分間 2 回蒸留水。最終的な洗浄水をデカントし、無菌状態の下で次の手順に進みます。 注: 抽出段階では、光はクロロホルムの分解を防ぐために避けなければなりません。混合物は、光耐性コンテナーに格納できるまたは遠心管はスズ箔で包まれました。すべての治療を行い、ささやかな回転やロッキングの下の手順を洗います。</li>
	<li>3 分間滅菌 PBS の 6 cm 皿の骨を洗浄し、新しい 50 mL の遠心管に骨を転送します。チューブに 40 mL 滅菌 0.05% トリプシン-EDTA (TE) を追加し、37 ° C18で CO2インキュベーターで 23 時間骨を孵化させなさい。</li>
	<li>TE 液を捨て、90 μ g/mL アンピシリンと 90 μ g/mL カナマイシンを添加した滅菌 PBS で 2 回すすいでください。デカント決勝後 PBS を完全に洗って、40 mL 滅菌 PBS で補充します。穏やかな揺動するか抗生物質のソークの揺れで部屋の温度で 24 時間を徹底的に洗浄します。 注: この手順と次の手順で使用されているすべての滅菌 PBS には 90 μ g/mL アンピシリンと 90 μ g/mL カナマイシンが含まれています。回転やロッキングの下一晩洗浄、気孔スペースの効果的な滅菌を達成するために抗生物質を浸漬を徹底的な長時間実行されます。</li>
	<li>PBS を取り外して滅菌 PBS でいっぱい新鮮な 50 mL の遠心管に骨を転送します。準備脱灰して 2 ヶ月必要になるまでの 4 ° C で保存できる脱骨骨細胞外マトリックス (BEM) と呼びます。</li>
</ol>3. 細胞播種と文化
<ol><li>4 ° C の冷蔵庫から解法を取り出すし、2 回 30 秒、その後、PBS で洗浄するために 75% エタノールでそれを浸します。きれいな 6 も細胞培養プレート上に境界を転送します。2 mL の完全培 (ダルベッコ改変イーグルの中/F12 (DF12) を 5% ウシ胎児血清、90 μ g/mL アンピシリンおよび 90 μ g/mL カナマイシンを含む) を追加します。37 ° C で CO2インキュベーターで一晩 BEM を孵化させなさい</li>
	<li>ヒトの OS 細胞株 (MNNG/HOS と MG 63) を取得します。指標としてフェノールレッドを含む 100 μ L の PBS で 105 OS 細胞 x 約 1.0 を中断します。 注: に追跡し、三次元境界要素法モデル内で多層細胞観察、MNNG/HOS と MG 63 に感染しているレンチウイルスベクター蛍光 mCherry と緑色蛍光タンパク質 (GFP) を表現します。</li>
	<li>解法は完全に培地に浸漬後、は、針が BEM の髄腔に達したら BEM に近位または遠位の骨端から OS セルを挿入します。加湿 5% で 2 h の最小の OS 境界要素法モデルをインキュベート挿入された細胞はしっかりと境界要素法に従うように 37 ° C で CO2雰囲気。 注: は、細胞培養で使用されるすべてのメディアを事前暖かい。細胞培養用インキュベーターは、加湿が 37 ° C で 5% CO2の大気</li>
	<li>37 ° C で CO2インキュベーターで一晩境界文化の表面を完全にコートにプレートに完全培地 1 mL を追加します。</li>
	<li>6 ウェル プレート滅菌ピンセットや新鮮な培地 1 mL の再フィードの新しい井戸の中へ優しく転送 OS 境界要素法モデル。37 ° C で CO2インキュベーターで 14 日間培養モデルと OS 細胞の増殖状況に応じて培養液を更新します。</li>
	<li>文化プロセス中に倒立蛍光顕微鏡下で培地の色とセルの状態を監視してください。OS 細胞をプレートに展開、そっと別滅菌ピンセットでうまく新しい OS 境界要素法モデルを転送します。 注: 培養培地は、ほとんどの哺乳類の細胞培養のための最適な pH 値である ph 7.4 では、鮮やかな赤です。培地はオレンジ色あるいは黄色に変身する場合、すぐに OS 細胞の健康的な環境を維持するために媒体を更新します。</li>
	<li>ピンセットで新しい井戸に OS 境界要素法モデルを転送し、培養培地を削除する PBS で優しく洗い。15 mL 遠心管に転送し、組織学的同定のための 10% ホルマリンで固定します。</li>
</ol>

<ol><li>Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bone+osteosarcoma+in+the+pediatric+age%3A+State+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+Reviews%22%5BJournal%5D)">Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art.</a> Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).</li>
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</ol>

著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。

一般的には、OS は、骨芽細胞分類できます、chondroblastic と ﬁbroblastic は、その支配的な組織のコンポーネントによってサブタイプします。その予後はだけではなく、また、その解剖学的部位の組織学的パラメーターに依存します。それは表面の骨と extraosseous サイト19(髄または皮質内コンパートメント) で骨の内部に起こるかもしれない。出現および OS の不均一性、発癌イベントや遠隔臓器20,21,22 に、増加の開発と移行に続く十分なアイソレータケージ ブーストの活用として解明されうる ,23。OS 環境やニッチをターゲットの臨床的意義を概説する適切なモデル OS の進化過程で謎を解読する可能性があります。
プラスチック製の食器または培養</...

骨肉腫 (OS) は、思春期成長分野、長骨の骨幹端が積極的に通常発生します。OS の影響を受けたサイトの 80% 以上には、脛骨近位端、上腕骨近位成長板1の位置に対応する、遠位、近位大腿骨の骨幹端のための好みがあります。OS には、間葉系組織学的特徴とグレードのかなりの多様性と複数の細胞サブタイプが装備されています。証拠は、起源2,3,4、5の細胞と間葉系幹細胞 (Msc)、骨芽細胞前駆体コミットとペリサイトをサポートします。これらの細胞は、遺伝やエピジェネティックな変化を蓄積し、OS を生じさせる特定の骨アイソレータケージ信号の影響の下でできます。組み込みと外因性のメカニズムは、ゲノム不安定性と複数の形態学的および臨床的表現型6,7OS の不均一性。個別療法や新薬のスクリーニングは、新しいモデルが不均一性やその他の疾患に対して生成される必要があります。
OS は、内骨の悪性固形腫瘍です。複雑さと周囲の微小環境要素の活動、腫瘍の場所が異なる OS 細胞に表現型および機能に違いを与えます。骨の細胞外マトリックス (BEM) は、鉱物の堆積と骨リモデリングの構造および生化学的足場を提供します。細胞外マトリックス (ECM) の有機性部分主に成っているタイプ私ハイドロキシアパ タイト8の形でリン酸カルシウムの石灰化部分を作曲しながら骨芽細胞系細胞から分泌されるコラーゲン。ECM ネットワークの動的な役割は細胞接着を調整することは、差別化、クロストーク、組織機能メンテナンス9。
脱灰の BEM と ECM のゲルは、細胞培養で正常に使用されているおよび細胞増殖10,11を高めることができます。合成の骨のような ECM は、プールのサイズ、運命の決定と MSCs12,13,14系統進行を調整できます。さらに、結果は、骨形成と再生15,16,17の中に刺激的な細胞プロセスによって貪食を提供する臨床的意義を証拠します。
この記事で私たちのグループは、変更されたモデルと長期培養の好ましい代わりを確立します。OS 細胞組織由来 BEM に注入はプラスチックの二次元文化に比べて容易に異質間葉系表現型を紹介します。境界要素法はその劇的な利点サイト固有の同種組織をから派生した OS のネイティブ ニッチをされている培養細胞し、OS 理論と臨床的研究では大きな可能性があります。この特徴の BEM プラットフォームはシンプルですが生体外で研究効率と他臓器重複癌のモデリングに拡張可能性があります。

<table><tbody><tr><td>15 mL 遠心チューブ</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 遠心チューブ</td><td>Greiner</td><td>227270</td><td></td></tr><tr><td>6 cm 細胞培養皿</td><td>Greiner</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>6 ウェルプレート</td><td>Greiner</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>C57-BL/6J マウス</td><td>孫文大学研究室動物センターCO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2インキュベータ</td><td>ーSHEL LAB</td><td>SCO5A</td><td></td></tr><tr><td>二塩基性リン酸ナトリウム</td>広<td>州化学試薬工場</td><td>BE14-GR-500G</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0547</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Hyclone</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>血球計算盤</td><td>BLAU</td><td>717805</td><td></td></tr><tr><td>カナマイシン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1487</td><td></td></tr><tr><td>MG-63</td><td>中国科学院、上海細胞バンク</td><td></td><td>ヒト骨肉腫細胞株</td></tr><tr><td>MNNG/HOS</td><td>中国科学院、上海細胞バンク</td><td></td><td>ヒト骨肉腫細胞株</td></tr><tr><td>フェノールレッド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4633</td><td>フェノールレッドの溶液はpHインジケーターとして使用されます:その色は、pH範囲6.6〜8.0にわたって黄色から赤に徐々に変化します。</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>サンゴンバイオテック</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>リン酸カリウム一塩基</td>性 <td>サンゴンバイオテック</td><td>A501211</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>サンゴンバイオテック</td><td>A501218</td><td></td></tr></tbody></table>

骨肉腫に対する三次元骨細胞外マトリックス モデル

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

骨肉腫 (OS) は、最も一般的な非常に積極的な原発性骨腫瘍です。診断や予後の難しさと共に解剖学的および組織学的変化が特徴です。OS には、際と表現型異種癌細胞が装備されています。骨の微小環境要素は腫瘍の多様性と疾患の進行が証明しました。骨の細胞外マトリックス (BEM) は、微細構造のマトリックスおよびネイティブの細胞外マトリックスの生化学成分を保持します。この組織固有のニッチは、OS の細胞播種の増殖有利と長期的な足場を提供します。この資料では、境界要素法モデルとそのさらに実験アプリケーションの準備のため、プロトコルを提供します。OS 細胞が成長し、OS 臨床検体の病理組織学的複雑さと一貫性のある複数の表現型に分化することができます。モデルには多様な形態と遺伝子異常や根本的な規制メカニズムとの関連付けの可視化ができます。相同性の高い人間の OS、としてこの BEM OS モデルを開発し、病理学および OS の臨床研究に適用できます。

脱灰と decellularization、BEM は強い弾力性と粘り強さのネイティブ マウスの骨に比べて半透明に表示されます。少し筋肉残渣と髄腔の空間明確に観察できる (図 1A, B)。境界要素法の効果的な decellularization を決定するには、境界要素法は固定後パラフィンに埋め込まれ、ヘマトキシリン-エオシン (H &amp; E) 汚損のため 3-5 μ m のセクションにスライスします。明視野イメージングによる細胞核の徹底的な除去が表示されます。自然な多孔質構造とコラーゲンのネットワークの配置も、脱境界要素法 (図 1C D) で維持されます。さらに、I と IV コラーゲンで ECM の部品の破壊を示すコラーゲンなどの骨基質の主要な有機成分の染色 (IHC) は BEM (図 1E) ネイティブの骨と比較して脱。したがって、境界要素法...

骨肉腫 (OS) の骨細胞外マトリックス (BEM) モデルは、よく確立され、表示をここでです。原発腫瘍の成長の in vitro真似をして OS の組織学的および cytogenic の多様性を研究するための理想的なモデルを提供するため、適切な足場として使用できます。

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

この方法は、骨腫瘍研究のための機能的な足場を調製するための効率的な戦略を提供する。骨外細胞化マトリックスを脱細胞化し、骨肉腫細胞の生存および活動に対する可変的な血清相溶性を示した。この技術の主な利点は、骨由来マトリックス中の骨肉腫細胞培養が臨床骨肉腫組織病理学と同様に非常に異種形態を示していることである。この方法は、骨肉腫、ユーイング肉腫、および骨への転移の他の悪性腫瘍などの骨腫瘍の発達、薬物感受性の進行を調査するための理想的なモデルを提供する。まず、4〜6週齢のBALB/cマウスを得て、無菌手術用ハサミを使用してマウスを安楽死させた後、後肢から新鮮な脛骨、脛骨、大腿骨を切断する。ピンセットの助けを借りて、上皮組織を剥がし、できるだけ多くの軟部組織を取り除きます。無菌10 mM PBS溶液で脚の骨を2回洗い流し、6センチメートルの皿の中の血液を取り除きます。骨を75%エタノールで3分間皿に浸し、PBSで2回洗いすます。清潔な骨を無菌の50ミリリットル遠心管に保管し、滅菌PBSチューブを摂氏80度で保存します。凍った骨を室温で解凍し、摂氏80度で再び1時間凍結します。骨を細胞のリシスと組織の分解のための2つ以上の凍結融解サイクルに服従させる。その後、0.5正常なHClで満たされた無菌50ミリリットル遠心管に骨を入れ、骨の完全かつ均等なカバレッジを確保するために穏やかな揺れで軌道シェーカーの室温で一晩インキュベートします。脱灰後、塩酸溶液を完全に脱栓し、流水の下で骨を1時間リンスします。その後、蒸留水を使用して、軌道シェーカーで1回15分間骨を2回洗浄します。ソリューションを完全にデカンスします。脱塩した骨の脂質を抽出するには、メタノールとクロロホルムの1:1混合物で50ミリリットル遠心管に骨を入れます。クロロホルム分解防止のため、チューブをスズ箔で包み込んで光を避けます。そして、1時間軌道シェーカーにチューブを置きます。その後、ピンセットを使用して、30分間スズ箔でメタノールの別のチューブに骨を移します。メタノールを完全に取り出し、眼窩シェーカーで蒸留水を15分間2回洗います。デカント最終洗浄水と滅菌条件下で進みます。滅菌PBSで6センチメートルの皿で骨を3分間洗いすみます。無菌0.05%TE溶液40ミリリットルを50ミリリットルの遠心管に加え、37°Cの二酸化炭素インキュベーターで23時間骨をインキュベートします。TE溶液を廃棄し、90 g/mLアンピシリンと90 g/mLカナマイシンをオービタルシェーカーでそれぞれ15分間補充した滅菌PBSで2回リンスします。最終洗浄を完全にデカントした後、抗生物質で滅菌PBSの40ミリリットルで再び補充する。多孔質空間の効果的な滅菌を達成するために穏やかな揺れで室温で24時間十分に洗います。次に、抗生物質で滅菌PBSで満たされた50ミリリットル遠心分離管に骨を移す。調製された骨細胞外マトリックスは、摂氏4度で2ヶ月間保存することができる。BEMを75%エタノールに入れ、30秒間手で軽く振ります。その後、PBSで30秒間、2回リンスします。BEMを清潔な6ウェル細胞培養プレートに移します。各ウェルに完全な培養培地の2ミリリットルを追加します。37°Cの二酸化炭素インキュベーターでBEMを一晩インキュベートします。標識フェノールレッドを含む予め温めたPBSの100マイクロリットルでヒトOS細胞株を得る。ピペットを使用して、およそ10倍から5日までの濃度のOS細胞を一時停止します。BEMが培地に完全に浸漬された後、近位または遠位の骨端から、針をBEMの髄腔に穿孔し、OS細胞をBEMに注入する。37°Cの加湿された5%の二酸化炭素雰囲気で最低2時間、OS-BEMモデルをインキュベートし、注入された細胞がBEMにしっかりと付着するようにします。次に、インキュベーターからプレートを取り出します。プレートに1ミリリットルの培養培地を加え、一晩インキュベーターに保管してBEM培養物の表面を完全にコーティングします。OS-BEMモデルを滅菌用トゥイザー付きの6ウェルプレートの新しいウェルにそっと移し、1ミリリットルの新鮮な培養培地を再供給します。インキュベーターで14日間モデルを培養する。14日間のインキュベーション中は、中色をモニタリングし続けてください。メディアがオレンジ色、あるいは黄色に変わったら、古い媒体の半分を捨てて新しい媒体を追加して、すぐにメディアをリフレッシュして、OSセルの健全な環境を維持します。反転蛍光顕微鏡下で細胞の状態を監視し続けます。OS細胞がプレートに膨張したら、OS-BEMモデルを滅菌ピンセットで別の新しいウェルにそっと移します。14日間培養した後、PBSでOS-BEMモデルをそっとすすいで培養液を除去します。その後、15ミリリットル遠心分離管に移し、組織学的同定のために10%緩衝ホルマリンを加える。脱塩・脱細胞化後、BEMはネイティブマウスの骨に比べて強い弾力性と粘り強さを持つ半透明であるように見えます。髄腔の空間に少し筋残渣が明確に観察される。天然骨および脱細胞化BEMの明視野イメージングは、細胞核の徹底的な除去を示す。コラーゲンネットワーク配置における自然多孔質構造は、脱細胞化BEMにおいて十分に維持される。さらに、コラーゲンIおよびコラーゲンIVの免疫ヒストリカル染色は、細胞外マトリックスの主成分が脱細胞化後にマウス脛動物に保存されていることを示す。14日間の培養中、骨膜とエンドステウムの両方がOS細胞の増殖によって浸透する。細胞化されたBEM上のOS細胞は、OSセクションの細胞病理学的特徴と同様に、非常に異種の形態を示す。14日間のBEMモデルで培養した後の免疫学的分析は、長期培養において大きな利点を示す。また、OS細胞およびBEM培養は、骨マトリックス糖タンパク質を高度に発現し、これは、骨マトリクスに特異的である。このin vitroの3次元モデルは、表現型の異質性と骨肉腫脱分化の調節メカニズムを実証するために使用されています。

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Cancer Research

がん研究

標準的な培養法では、細胞は、それらの生理的環境から採取し、皿のプラスチック表面上に成長した。初代ヒト骨髄細胞の挙動を研究するために、我々は、細胞が組織の天然の微小環境をrecapitulating条件下で増殖される3-D培養系を作成した。...

初代ヒト骨髄およびその悪性腫瘍を研究する三次元組織培養モデル

がん細胞をコラーゲンゲルに包埋し、その後、無細胞フィブリンゲルに挟み込むことで、浸潤性と衛星腫瘍の形成をモニタリングできる3D培養システムを生成します。...

癌細胞の浸潤や衛星腫瘍形成を探検するための三次元培養アッセイ

癌由来細胞の小胞 (Ev) の直噴は骨髄腫瘍進行をサポートのリプログラミングにつながるただし、セルは、この効果を仲介する明確ではありません。ここで、我々 転移の MSCs の EV 教育に重要な役割を明らかに EV を介する腫瘍間葉系幹細胞 (MSC) 相互作用は生体内で、調査するステップバイ ステップ...

腫瘍と間葉系幹細胞の間細胞小胞を介した通信を定義する骨肉腫のマウスの前臨床モデル

ここでは、プロトコルを提案誘導多能性幹細胞 (Ips) の世代の李 Fraumeni シンドローム (LFS) 患者派生繊維芽細胞、間葉系幹細胞 (MSCs) 経由で Ips の分化から骨芽細胞、およびモデリングの体内にLFS...

李 Fraumeni 症候群患者由来の誘導多能性幹細胞を用いた骨肉腫をモデリング

骨転移モデルは、一様に転移を発症したり、発生率が100%であったりすることはありません。骨内腫瘍細胞を直接注射すると、肺の塞栓術を引き起こす可能性があります。固形腫瘍移植による骨への移植を用いて原発性骨腫瘍と骨転移をモデル化し,再現性のある生着と成長に導く技術を紹介します。...

固形腫瘍移植による骨原発性骨腫瘍と骨転移のモデリング

この論文では、神経芽腫細胞株を以前に説明した3次元コラーゲンベースの足場に播種し、所定の時間枠で細胞増殖を維持し、さまざまな実験目的を満たすために適応可能な、いくつかの細胞増殖および細胞挙動分析およびダウンストリームアプリケーション用の足場を回収するために必要な手順をリストしています。...

コラーゲンベースの足場を用いた神経芽細胞腫の3次元 in vitro 生体模倣モデル

本プロトコールは、同所性骨肉腫および肺転移病変を有するマウスモデルを生成するための脛骨内骨肉腫細胞注射を記載する。...

同所性骨肉腫および肺転移マウスモデルを生成するための脛骨内骨肉腫細胞注射

ここでは、ヒト骨髄の in vivo...

生理学的または子宮頸部の文脈における常在細胞間のダイナミクスと相互作用を調査するためのヒト骨髄3Dモデル

本プロトコールは、ヒト骨肉腫組織を用いて患者由来異種移植片(PDX)マウスモデルを確立する方法を記載している。...

ヒト骨肉腫組織を用いた患者由来異種移植マウスモデルの樹立

骨再生をさまざまな階層レベルで評価するためのプロトコルを提案します。このマルチモーダル手法により、異なる長さスケールでの構造解析が可能となり、試料準備の課題に効果的に対処できます。また、骨再生促進におけるバイオマテリアルの効果を評価する信頼性の高いワークフローも提供しています。...

骨再生と足場性能を評価するマルチモーダルアプローチ

このプロトコルは、メタクリル化ゼラチン(GelMA)ハイドロゲルに埋め込まれたヒト骨細胞を用いて、脱細胞化細胞外マトリックスを補完した3D骨構造の製造を説明しています。この方法は低コストで拡張性が高く、基本的な実験機器と互換性があり、筋骨格系疾患の研究のための翻訳プラットフォームを提供します。...

ヒト骨細胞と脱細胞化細胞外マトリックスを用いて筋骨格系疾患をモデル化する3D骨培養プラットフォーム

学ぶ三次元骨細胞外マトリックスモデルを用いた骨肉腫研究の手法。脱細胞化骨マトリックスで骨肉腫細胞の生存と異形性を観察し、薬物感受性や腫瘍進行のメカニズム解明に役立つ実験モデルを構築する。

骨肉腫に対する三次元骨細胞外マトリックスモデル

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