Name: 等温滴定熱量測定による酵素の安定性を測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-26T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 学ぶ等温滴定熱量測定（ITC）による酵素の熱安定性評価法。従来法より短時間で酵素活性の安定性を直接測定し、産業応用に有用な安定性データを提供する。

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1. 試料の準備
<ol><li>
0.1 M 酢酸緩衝液 ph 4.6 の 1,000 mL
	<ol>
<li>800 mL の卒業 1,000 mL のビーカーに蒸留水を測定します。</li>
		<li>無水ナトリウムのアセテートの 8.2 グラムの重量を量る、それをビーカーに追加します。</li>
		<li>撹拌プレートにビーカーを置き、ビーカーに攪拌ロッドを置く、攪拌プレートをオンに、完全に溶けるまでかき混ぜます。</li>
		<li>無水ナトリウムのアセテートが完全に解散したときは、校正 pH メーターで、溶液の pH を測定します。</li>
		<li>目的 pH 4.6 を取得にそれに応じて 1 M 塩酸または水酸化ナトリウムを追加します。</li>
		<li>総容積が 1,000 mL になるまで蒸留水を追加します。</li>
		<li>使用するまで常温で保存します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
酵素液
	<ol>
<li>酵素ソリューション 15 mL に 0.1 M のナトリウム酢酸バッファー pH 4.6 の最初の測定 8 mL で 10-30 mg/mL の範囲内で卒業したシリンダー 10 mL を準備します。</li>
		<li>酵素と 15 mL の円錐管に緩衝液を追加し、酵素が溶けるまで、積極的に振る。</li>
		<li>総容積が 10 mL になるまでより多くの緩衝液を追加します。</li>
		<li>使用するまで 4 ° C で酵素液を格納します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
基板の解決
	<ol>
<li>300-600 mM の範囲で基板の解決を準備するには、望ましい集中にグラムで必要な基質の量を計算します。</li>
		<li>基板重量を量り、100 mL のガラス製ビーカーに</li>
		<li>25 mL のメスシリンダーのシリンダーを用いた緩衝液 20 mL を測定し、ガラス ビーカーに追加します。</li>
		<li>撹拌プレートにビーカーを置き、ビーカーに電磁攪拌棒を配置します。暖房をつけて、攪拌速度を調整します。</li>
		<li>基板が解散するまで継続する攪拌を許可します。</li>
		<li>50 mL の円錐管に基質溶液を注ぐし、総容量が 45 mL になるまで 0.1 M ナトリウム酢酸バッファー pH 4.6 を追加します。振って混ぜます。</li>
		<li>使用するまで保管常温基板ソリューションです。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 実験を実行します。
<ol><li>ITC 計測器の準備<ol>
<li>参照セルが蒸留水の 350 μ L でロードされていることを確認します。サンプル セルに酵素をロードする前に、サンプル細胞を掃除されていることを確認します。</li>
		<li>プロトコル-塗りつぶし 2% 洗浄液 (材料表) の 500 μ L で読み込みシリンジを洗浄、サンプル セルに慎重に針を挿入、セルを記入、同じ注射器を使用して液体をゆっくりと除去。ビーカーに液体を破棄します。70% のエタノールと 2% 洗浄液 (材料表) で 2 回この手順を 3 回繰り返すし、蒸留水で 10 倍を洗います。</li>
		<li>450 μ L の酵素液で読み込みシリンジをいっぱいサンプル セルの下部に針を挿入、慎重にゆっくりと気泡の形成を防ぐために 100 μ L の線までプランジャーを押します。</li>
		<li>針の先端を水の中に配置し、ゆっくりと、注射器に水を取って、廃棄物容器に水を分配して 3 回蒸留水 50 μ L 滴定シリンジを洗浄します。</li>
		<li>基板の解決と 3 回洗浄によって残留水を削除します。</li>
		<li>注射器は空気の泡なしいっぱいまでソリューションを描画することによって基板の解決の滴定シリンジを入力します。</li>
		<li>基板の解決にまだシリンジとプランジャーを取り外し、約 2 μ L の空気注射器の上部に入力し、プランジャーを挿入を許可します。</li>
		<li>ITC のビュレットのハンドルを取り外してビュレット ハンドル内注射器を配置までタイトなネジします。</li>
		<li>糸くずの組織と攪拌機の先端を拭く、ITC 楽器にビュレットのハンドルを配置し、慎重に場所でロックします。</li>
	</ol>
</li>
</ol>3 ITCrun の設定
<ol><li>コンピューターで、 ITCrunを開き、設定をクリックします。</li>
	<li>攪拌率をクリックし、350 RPM に設定します。シリンジ サイズ (μ L) を確認し、50 μ L であることを確認します。</li>
	<li>温度を設定し、更新を押します。この手順を実行することをお勧めしますが、ITC を準備する前に少なくとも 1 時間。これはヒートアップまたは必要に応じて冷却器に十分な時間をことができます。</li>
	<li>実験のセットアップでは、増分の滴定を選択します。</li>
	<li>注射をセットアップする挿入をクリックします。5,400 に射出間隔を調整 s、4 と番号 4 に注入する注入量 (μ L)。設定を確認する[ok]を押します。</li>
	<li>平衡ボックス、自動平衡し、大予想加熱を選択します。(1 つが期待される加熱下で小さな選択できます予想される加熱が小さい場合; ただし、この平衡化時間が長くなります)。</li>
	<li>最初のベースラインは 300 に設定 s。</li>
	<li>実行、クリックを開始するには、開始攪拌率の横にある記号し、開始レンチ シンボルの横にあるをクリックします。</li>
	<li>ファイルを保存し、実行する楽器を許可します。</li>
</ol>4 データの分析
<ol><li>NanoAnalyze でファイルを開きます。データをクリックし、データの列を選択します。</li>
	<li>すべてのデータを選択、コピー、および Microsoft Excel にデータを貼り付けます。</li>
	<li>300 で必要な値を追加することによってゼロのベースラインを調整する s ゼロします。この補正を熱率値の列全体に適用されます。</li>
	<li>式を使用して各注射用熱率の最小値または最大値を見つける: =MIN(cell:cell) または MAX(cell:cell)。各データ ポイントは、各注入で酵素の酵素の活動のピークを表します。</li>
	<li>滴定の間に値が発生した時間に対して MIN または MAX 値のグラフをプロットします。</li>
</ol>

<ol><li>Anastas, P., Eghbali, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+chemistry%3A+principles+and+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Green chemistry: principles and practice.</a> Chemical Society Reviews. 39 (1), 301-312 (2010).</li>
<li>Jin, L. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+Recombinant+Glucose+Isomerase+for+Efficient+Production+of+High+Fructose+Corn+Syrup%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Biochemistry+Biotechnoiogy%22%5BJournal%5D)">Immobilization of Recombinant Glucose Isomerase for Efficient Production of High Fructose Corn Syrup.</a> Applied Biochemistry Biotechnoiogy. 183 (1), 293-306 (2017).</li>
<li>Budak, ŞÖ, Koçak, C., Bron, P. A., de Vries, R. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudak%2C+%C5%9E%C3%96+%22Microbial+Cultures+and+Enzymes+Dairy+Technology%22">Microbial Cultures and Enzymes Dairy Technology</a>. , 182-203 (2018).</li>
<li>van Donkelaar, L. H. G., Mostert, J., Zisopoulos, F. K., Boom, R. M., van der Goot, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+enzymes+for+beer+brewing%3A+Thermodynamic+comparison+on+resource+use%5BTitle%5D)+AND+%22Energy%22%5BJournal%5D)">The use of enzymes for beer brewing: Thermodynamic comparison on resource use.</a> Energy. 115, 519-527 (2016).</li>
<li>Rodriguez-Colinas, B., Fernandez-Arrojo, L., Ballesteros, A. O., Plou, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galactooligosaccharides+formation+during+enzymatic+hydrolysis+of+lactose%3A+Towards+a+prebiotic-enriched+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Galactooligosaccharides formation during enzymatic hydrolysis of lactose: Towards a prebiotic-enriched milk.</a> Food Chemistry. 145, 388-394 (2014).</li>
<li>Lawrence, P. B., Price, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+PEGylation+influences+protein+conformational+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinions+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">How PEGylation influences protein conformational stability.</a> Current Opinions in Chemical Biology. 34, 88-94 (2016).</li>
<li>Bernal, C., Rodriguez, K., Martinez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+enzyme+immobilization+and+protein+engineering%3A+An+alternative+path+for+the+development+of+novel+and+improved+industrial+biocatalysts%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Advances%22%5BJournal%5D)">Integrating enzyme immobilization and protein engineering: An alternative path for the development of novel and improved industrial biocatalysts.</a> Biotechnology Advances. 36 (5), 1470-1480 (2018).</li>
<li>Rigoldi, F., Donini, S., Redaelli, A., Parisini, E., Gautieri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Engineering+of+thermostable+enzymes+for+industrial+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Bioengeneering%22%5BJournal%5D)">Review: Engineering of thermostable enzymes for industrial applications.</a> Applied Bioengeneering. 2 (1), 011501(2018).</li>
<li>Johnson, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+scanning+calorimetry+as+a+tool+for+protein+folding+and+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Differential scanning calorimetry as a tool for protein folding and stability.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 531 (1), 100-109 (2013).</li>
<li>Chen, N. G., Gregory, K., Sun, Y., Golovlev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+model+of+thermal+deactivation+of+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+biophysica+acta%22%5BJournal%5D)">Transient model of thermal deactivation of enzymes.</a> Biochimica et biophysica acta. 1814 (10), 1318-1324 (2011).</li>
<li>Mason, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorimetric+Methods+for+Measuring+Stability+and+Reusability+of+Membrane+Immobilized+Enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Jounal+of+Food+Science%22%5BJournal%5D)">Calorimetric Methods for Measuring Stability and Reusability of Membrane Immobilized Enzymes.</a> Jounal of Food Science. , (2017).</li>
<li>Leksmono, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Lactase+Enzymatic+Activity+in+the+Teaching+Lab%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+Journal+of+Visual+Experiments%22%5BJournal%5D)">Measuring Lactase Enzymatic Activity in the Teaching Lab.</a> Journal of visualized experiments : Journal of Visual Experiments. (138), e54377(2018).</li>
</ol>

ここで説明した ITC 酵素安定性分析の主な利点は自動化です。すべての適切なバッファーおよび解決が行われると、各測定のセットアップ時間はアッセイを行う人のため約 15 分です。対照的に、インベルターゼ、ラクターゼの活動の従来の試金はアッセイを行う人の継続的な関与と約 2 時間を必要とし、多くの酵素活性アッセイを取るかなり増えた。前の文書では、インベルターゼ活性11より伝統的な spectrophotrometric 方法と ITC メソッドからデータを比較する方法を説明してきました。
ITC 試験の別の利点は、ほぼすべての酵素12への適用性です。したがって、特定の条件下での異なる酵素の安定性のテストにはいくつかの異なるアッセイの設定必要はありません。また、ITC の試金は新規酵素または適切な比色定量法を持たない酵素の活性の安定性を判断するのに役立ちます。 ITC アッセイは、食品科学の主要な利点である不透明なメディアで行うことができます。以来、酵素のほとんどの前のアッセイは、酵素活性を測...

酵素は、蛋白質多彩な有機反応を触媒することができます。過酷な溶剤の使用を避けるため中性付近の水溶液でほとんど酵素機能。選択性が高く、酵素触媒反応生成少ない (いくつかのケースでは、副産物) 酸および塩基の1のような非選択性触媒よりも副産物。これは最終製品が人間の消費のために安全であるのですべての化学反応を行う必要がある食品の製造に特に関連します。現在、酵素は、高果糖コーン シロップ2チーズ3ビール4牛乳の乳糖無料5、およびその他の重要な食品の製造に使用されます。本稿では、食品産業における酵素利用、緑の化学、医薬品合成などの酵素のための他の多くの用途があります。
酵素の有用性は、酵素の立体構造を維持するのに依存する酵素活性の安定性によって制限されます。酵素の構造は、peg 修飾操作6、しっかりサポート7、遺伝の修正の8、および製剤の固定化などの変更により安定化することができます。現在、示差走査熱量測定 (DSC) で酵素の安定性通常計測、エンドポイント酵素試金9。DSC 測定温度で酵素が繰り広げられます。温度が高いほど安定した構造。ただし、活動の損失は多くの場合酵素または酵素10内のドメインを展開するために必要なよりも低い温度で発生します。したがって、DSC は酵素修飾酵素活性の安定性が向上するかどうかを判断するのに十分ではありません。エンドポイント酵素試金は通常集中の時間、複数のサンプルを必要とする、高い色または不透明なソリューションまたは懸濁液には適用されません結合比色反応も多い。
この作品は、等温滴定熱量測定 (ITC) による酵素活性の安定性の直接測定法を示します。ITC は、リリースや反応の中に吸収される熱の率を測定します。ほぼすべての反応生成熱を吸収するので、ミルクなど不透明なメディアの結合反応を持っていないか、発生する反応を含む、ほとんどの酵素触媒反応の ITC を使用できます。ITC は、反応の多くの種類の化学動力学的パラメーターを計測する何十年も使用されていますが、ここで提示されたプロトコル ITC を使用して酵素触媒反応のピーク熱率の計測に着目し、酵素活性が直線状にあることを示して熱のピークの速度と相関した.ピーク熱率の ITC 測定主自律やほとんど人件費をセットアップし、分析が必要です。

<table><tbody><tr><td>A-ラクトース</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>不明(古すぎる)</td><td>500g</td></tr><tr><td>酢酸ナトリウム、無水99%分</td><td>Alfa Aesar</td><td>A13184-30</td><td>250g</td></tr><tr><td>ラクターゼ&nbsp;</td><td>MP Bio</td><td>100780</td><td>5g</td></tr><tr><td>ヒドロコール酸溶液、1N&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>SA48-500</td><td>500mL</td></tr><tr><td>ベンチトップメーター - pH</td><td>VWR</td><td>89231-622</td><td></td></tr><tr><td>エタノール 70%</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>BP8231GAL</td><td>1ガロン</td></tr><tr><td>Micro-90</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>NC024628</td><td>1L(洗浄液)</td></tr></tbody></table>

等温滴定熱量測定による酵素の安定性を測定

Measuring Enzymatic Stability by Isothermal Titration Calorimetry

この作品は、等温滴定熱量測定 (ITC) による酵素活性の安定性を測定するための新しいメソッドを示します。酵素活性と相関している酵素液に基板の解決の単回投与後の観察のピーク熱速度。時間をかけて同じ酵素溶液に基板の複数の注射は、酵素活性の損失を示します。アッセイ、自律、非常に少しの担当者の時間を必要とするほとんどのメディアおよび酵素に適用されます。

図 1と図 5に代表的な結果は、2 つの酵素ラクターゼおよびインベルターゼからデータを表示します。ラクターゼおよびインベルターゼは、endothermically と発熱を汎って、それぞれに 2 つの単糖類に、二糖類の加水分解を触媒します。両方の酵素反応は、酵素の飽和を妨げ濃度で実行しました。
ラクターゼ データは、ITC データことができます使用して酵素の安定性を推定する方法をデモンストレーションします。600 mM 乳糖 (図 1) の 4 連続 4 μ L 注入で 20 mg/mL ラクターゼに滴定します。5,400 の間隔各注入の間 s を適用し、これにより、各注入の前に最初のベースラインに戻るのに十分な時間。上記で説明したプロトコルは 25 ° C、35 ° C、45 ° C、および 55 ° C で行われました。また、600 mM の乳糖は混合熱のコントロールとして 100 mM 酢酸緩衝液の...

酵素の熱安定性は、等温滴定型熱量計 (ITC) によって容易に測定されます。ほとんどの蛋白質の安定性の試金は現在メジャー タンパク質の変性を使用、酵素活性についての情報を提供しません。ITC は、酵素活性の安定性に関する酵素の変更の効果の直接測定できます。

This work demonstrates a new method for measuring the stability of enzyme activity by isothermal titration calorimetry (ITC). The peak heat rate observed ...

反応に酵素を触媒として使用すると、反応に必要なエネルギー量を減らし、有毒な副産物を減らすことができます。しかし、酵素は安定しておらず、高価であり得るため、産業における酵素の使用は限られている。このプロトコルは、条件が酵素活性に有害であるかどうかを判断するためにかかる時間、または酵素への修飾がその安定性を増加したかどうかを判断するのにかかる時間を減らすことができます。この技術の主な利点は、従来の酵素安定性アッセイよりも少ない時間を必要とすることです。さらに、このプロトコルは、熱を放出または吸収する任意の反応で使用することができるので、酵素の広い範囲で使用することができます。開始するには、0.1酢酸ナトリウムの大臼歯を調製します。1,000ミリリットルの段階的なビーカーで蒸留水の800ミリリットルを測定します。その後、8.2グラムの無水酢酸ナトリウムを秤量し、ビーカーに加えます。ビーカーを攪拌板の上に置きます。ビーカーに攪拌棒を入れ、攪拌板をオンにして完全に溶解するまでかき混ぜます。無水酢酸ナトリウムが完全に溶解したら、較正されたpHメーターを使用して溶液のpHを測定する。ピペットを使用して、4.6で所望のpHを得るために、それに応じて1モル塩酸または水酸化ナトリウムを加えます。総体積が1,000ミリリットルに達するまで、蒸留水をビーカーに加えます。酵素溶液を調製するために、15ミリリットルの段階的なシリンダーで、0.1酢酸ナトリウム緩衝液の8ミリリットルを測定する。その後、酵素を用いて15ミリリットルの円錐管に緩衝液を加え、酵素が溶解するまで激しく振る。総体積が10ミリリットルに達するまで、より多くのバッファー溶液を追加します。酵素溶液は使用するまで摂氏4度で保存します。基質溶液を調製するには、基板を計量し、100ミリリットルのガラスビーカーに入れます。段階的なシリンダーを使用してバッファー溶液の20ミリリットルを測定し、ガラスビーカーに追加します。ビーカーを攪拌プレートに置き、ビーカーに磁気攪拌棒を入れる。火をつけて、それに応じて攪拌速度を調整します。基材が溶解するまで撹拌を続けます。基質溶液を15ミリリットル円錐形チューブに注ぎ、前に調製した酢酸ナトリウム緩衝液を加え、全容量が45ミリリットルになるまで添加する。チューブを振って混ぜます。使用するまで、基板溶液を室温で保管してください。コンピュータで、[ITC の実行] を開き、[セットアップ] をクリックします。撹拌速度をクリックし、350rpmに設定します。シリンジサイズが50マイクロリットルであることを確認してください。温度を摂氏55度に設定し、更新を押します。ITC機器が必要に応じて加熱または冷却するのに十分な時間を与えるために、続行する前に少なくとも1時間待ちます。酵素をロードする前に、参照セルに350マイクロリットルの蒸留水がロードされていることを確認してください。サンプルセルを洗浄するには、2%の洗浄液を500マイクロリットルで充填します。慎重にサンプルセルに針を挿入し、細胞を満たし、同じ注射器を使用してゆっくりと液体を取り除きます。ビーカーに液体を処分します。このステップを2%洗浄液で2回、エタノール70%で3回繰り返し、蒸留水で10回洗浄します。サンプルセルを洗浄した後、450マイクロリットルの酵素溶液で装填注射器を充填します。慎重にサンプルセルの底まで針を挿入し、気泡の形成を防ぐために100マイクロリットルラインまでゆっくりとプランジャーを押し下げる。その後、50マイクロリットルの滴定シリンジを水に針先を入れて3回蒸留水で洗浄し、水をゆっくりとシリンジに取り込み、水を廃液に分配します。基質溶液で3回リンスし、残留水を除去する。その後、滴定シリンジを、気泡なしでシリンジが満杯になるまで溶液を引き上げて、基質溶液で充填する。シリンジを基板溶液に残したまま、プランジャーを取り外し、約2マイクロリットルの空気がシリンジの上部に入り、プランジャーを再挿入します。ITCのビュレットハンドルを取り外し、ビュレットハンドルの内側に注射器を置き、ネジを締め付けます。滴定シリンジの先端を糸くずのないティッシュで拭き取り、それから慎重にITCの器械にビュレットのハンドルを置き、それを所定の位置にロックする。実験の設定で、増分滴定を選択します。挿入をクリックして、挿入を設定します。射出間隔を5、400秒、注入量を4マイクロリットル、注射回数を4に調整します。[OK] をクリックして設定を確認します。平衡ボックスで、自動平衡化と大きな予想熱を選択します。初期ベースラインを 300 秒に設定します。実行を開始するには、攪拌速度の横にある開始記号をクリックし、レンチ記号の横にある開始ボタンをクリックします。ファイルを保存し、インストゥルメントの実行を許可します。データを分析するには、ナノ分析でファイルを開きます。[データ] をクリックし、データ列を選択します。すべてのデータを選択し、コピーして、Excel に貼り付けます。0 にする必要がある値を 300 秒に加算して、0 のベースラインを調整します。この補正を熱レート値の列全体に適用します。次に、滴定中に発生した時間に対する最小値または最大値のグラフをプロットします。このプロトコルでは、ラクターゼ活性のITCデータトレースは、55°C、摂氏45度、摂氏35度、摂氏25度のpH 4.6バッファでラクターゼ溶液にラクトーゼの4回の連続注入で示されている。混合熱のため、55°Cで酵素制御を行なった。酵素の注入ごとに、混合の初期発熱熱があり、その後、ラクトースのラクターゼ触媒吸水分解が反応が完了するまで起こり、熱速度はベースラインに戻る。各注射後の吸気ピーク最小値は、酵素活性の低下のために前噴射よりも少し少ない。予想通り、各注入の酵素安定性は温度の上昇に伴って低下する。コントロール実験は、4回の注射後の希釈のために、摂氏25度のラクターゼ活性が酵素活性の8%減少したことを示している。4回目の注射はアッセイの73%の減少を示すことを考えると、酵素活性の実際の損失は65%であった。したがって、各注射から生じるラクターゼの希釈は、酵素活性に対して11%の比較的小さな効果を有していた。酵素と基質溶液を作るために使用されるバッファーができるだけ密接に一致することが重要です。pHまたは濃度の不一致は、反応熱をマスクすることができる混合のより大きな熱をもたらすことができます。このプロトコルを適用して酵素を研究し、反応の過程で放出または吸収される熱の速度を測定することによって、その安定性を決定することができます。

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環境

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DNAグリコシラーゼ活性の定常状態、プレ定常状態、およびシングルターンオーバー速度論的測定

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本プロトコルは、等温滴定熱量測定(ITC)を使用して、DNAアプタマーとテトラサイクリンの間の結合の会合および解離速度論を分析し、サンプル調製、標準およびサンプルの実行、および結果のデータの解釈を含むことを説明しています。...

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