マウスの腫瘍増殖を減少させるマイクロRNAの生体内阻害

甲状腺癌モデルのマイクロRNA阻害剤に基づく最初の治療を行う。これらの開発中の治療法は、この病気の治療のための約束を示しています。このタイプの正体異性体モデルは、全身的な治療経路を使用して、新しいマイクロRNAベースの薬物の検証を容易にする。

ヒト甲状腺がん細胞をマウス甲状腺に移植するための正腸モデルを使用していますが、これらのモデルは他の癌タイプの全身性である可能性があります。ジュリア・ラミレス=モヤとエイドリアン・アクーナとの手順を実証することは、ラケル・アロチャ・リースコになります。彼女は私たちの研究所の技術者です。

CAL-62ヒト甲状腺癌細胞株不完全培地を確立した後、摂氏4度でPBSの50マイクロリットルで6番目の細胞アリコートに10倍10回を懸濁し、同量の基体膜マトリックスと細胞を混合する。細胞を1ミリリットルの注射器にロードし、27ゲージの半インチ針を装備し、皮下6週齢の免疫不全弁Cヌードマウスの左脇腹に100マイクロリットルのサンプルを注入する。注射の2週間後、1ポイント5ミリリットルチューブでインビボ送達試薬の160マイクロリットルにアンタゴミRまたは制御処理緩衝液を加える。

そして、すぐに溶液を10秒間渦液し、混合物の複雑化を確実にする。処理液を摂氏50度で30分間インキュベートし、その後マイクロ遠心分離機で短い遠心分離を行います。次いで、新鮮なPBSと完全な混合で沈め処理複合体を6倍希釈する。

そして、治療の全体の200マイクロリットルの体積を腫瘍に直接注入する。1リットル当たり40ミリグラムの50マイクロリットルを週2回皮下に、各実験動物に注入する。イオブルラン麻酔後のつま先ピンチに対する応答の欠如を確認してください。

動物を生体発光イメージングシステムのチャンバーに入れ、標準的なプロトコルに従ってin vivoイメージングソフトウェアを用いて生物発光シグナルを画像化する。次いで腫瘍の成長を分析する。T検定を用いて、両方の治療と有意性と成長の違いを判断する。

異形性甲状腺腫瘍細胞接種については、5マイクロリットルのPBSでCAL-62細胞のアリコートを中断し、皮下7週齢のバルブCヌードマウスに100マイクロリットルの鎮痛薬と100マイクロリットルの抗生物質を注入する。足の指のピンチに対する応答不足を確認した後、動物を解剖顕微鏡の下に置き、動物の首をヨドポビドネで消毒する。次に、皮膚に約2センチメートルの切開を行い、唾液腺を置き換えて首を露出させる。

解剖鉗子、および/またははさみを使用して、ストラップの筋肉を解剖して気管および甲状腺を露出させ、10マイクロリットルの注射器を使用して、右甲状腺小葉に5マイクロリットルの腫瘍細胞を注入し、クロコイド軟骨の側面に位置する。すべての細胞が送達されたら、唾液腺を再配置し、シルク編組、コーティング、非吸収性縫合糸を使用して切開を閉じる。次に、ヨドポビドンを創傷領域に塗布し、完全に回復するまでモニタリングを行うサーミックブランケットの上にマウスを置きます。

甲状腺内細胞注射の2~3週間後に、示されるように治療液を調製し、麻酔甲状腺腫瘍担持動物の静脈内注射により静脈内に溶液を送達する。本代表的実験では、マイクロRNA146B阻害剤を用いない腫瘍内注射の腫瘍の増殖を、陰性対照に関して有意に抑制した。いくつかの増殖マーカーの腫瘍内発現レベルも低レベルで観察された、アンタゴミR治療腫瘍では、対照腫瘍と比較した。

さらに、マイクロRNA標的の回収は、腫瘍抽出RNA、またはタンパク質の分析を通じて検討することができる。個々のマイクロRNAのインビボ阻害が有効であり、甲状腺癌治療のために治療的に利用される可能性があることをまとめて明らかにする。マウスに確立された甲状腺腫瘍の組織学的解析は、マウスに示されるように、腫瘍を取り巻く上皮細胞の染色を可能にし、腫瘍組織の甲状腺卵胞アーキテクチャを明らかにする。

特に、マイクロRNA146B阻害剤をマウスに静脈注射すると、腫瘍が確立され、対照処理動物と比較して腫瘍容積が有意に減少する。また、新たに記載したマイクロRNA146B標的DICER1の発現は原発腫瘍において、抗マイクロRNA146B治療後に増加し、さらに甲状腺癌における治療としての標的遺伝子の回復とインドジナ性マイクロRNA発現の阻害の可能性を強調する。この技術、およびその後のリピンの結果は、甲状腺癌の治療のための非硬化RNAに基づいて新しい治療法を探求する可能性を開く。