Name: 規制カンジダバイオ フィルムの成長する赤い光で毎日光線 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: 学ぶ赤色光療法によるCandida albicansバイオフィム成長抑制法。635nmの非干渉性赤色光を用いて48時間のバイオフィム発育を評価し、従来療法への耐性を持つ真菌感染症治療の新たな可能性を探索する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本研究開発の博士ポーラ ダ · シルベイラ、博士 Cecília Atem ゴンサルベス デ · アラウージョ コスタ、ショーン ・ m ・ マウレ、シェーン ・ m ・ マウレ、博士・ マルヴィン (名) Janal、博士アントニア Zanin をありがとうございます。我々 も本研究で分析したひずみを寄付するため博士アレクサンダー D. ジョンソン (UCSF) を認めます。

1. 培地の調製
<ol><li>サブロー ・ ブドウ糖寒天培地 (SDA) を準備します。1,000 mL の蒸留水にクロラムフェニ コール (50 mg/L) を添加した SDA の 65 g を中断します。沸騰媒体を完全に溶解します。30 分 45-50 ° C に冷却 15 PSI (121 ° C) でオートクレーブに入れることによって殺菌しなさいよく混ぜ、滅菌のペトリ プレートに SDA の 20 mL を注ぐ (サイズ: 100 x 15 mm)。</li>
	<li>6.7 g YNB と 18 g を 1,000 mL の超純水のブドウ糖を混合することによって 100 mM グルコース添加酵母窒素ベース (YNB) メディアを準備します。スターラーを使用してミックス、0.22 μ m の真空フィルター システムを使用して培地を滅菌します。</li>
	<li>10.4 g RPMI 1640 と 34.32 g 3-(N morpholino) を混合することによって RPMI を準備 propanesulfonic 酸 (モップ) 1,000 mL 純水にします。熱なし攪拌機で混合し、1 N NaOH (水酸化ナトリウムの 50 mL の純水に追加 2 g) を追加することによって 7 の pH を調整します。0.22 μ m の真空フィルター システムを使用してメディアを滅菌します。</li>
</ol>2. 事前接種と接種
<ol><li>C. albicans SN425 微生物を −80 ° C 冷凍庫から外し、常温に解凍しましょう。SDA クロラムフェニ コール (50 mg/L) を添加した培養シャーレにストックの文化 10 μ L をシードします。48 h の 37 ° C 好気的でシャーレを孵化させなさい。</li>
	<li>培養 48 時間後 10 mL 酵母窒素培地 (YNB) 基本 100 mM グルコースを添加したし、, 事前接種の 16 h の 37 ° C で好気的にC. albicansの 10 の植民地を追加します。</li>
	<li>H, 16、1:10 で 100 mM グルコースと新鮮な YNB 培にスターター文化を希釈することによって、乳酸菌の準備のためのインキュベート後 (YNB 9 mL で希釈したスターター文化の 1 mL) の割合します。測定初期の光学濃度 (OD) 540 nm。</li>
	<li>系統中間ログ成長フェーズに到達し、540 で最終的な外径を測定まで 8 時間 37 ° C で好気性の乳酸菌を孵化させなさい nm。中間ログ成長期 (8 h)図 1に成長曲線に基づくのか、乳酸菌の OD を確認する初期の OD から最終的な OD を減算します。</li>
	<li>107セル mL-1接種まで、接種 5,500 × gで 5 分間遠心、上澄みを廃棄し、チューブの体積の半分に接種を集中します。</li>
</ol>3. バイオ フィルム形成と光線療法
<ol><li>24 ウェル ポリスチレン板の井戸に接種の 1 mL を追加します。井戸の底に接着できるように 90 分の 37 ° C 好気的で孵化させなさい。</li>
	<li>非コヒーレント赤使用ライト 635 ± 10 nm の波長と固定出力 1,460 mW cm− 2光源として (材料表を見なさい)。</li>
	<li>パワー メーターを使用すると、光のパワー密度を測定できます。適用される放射の露出は 87.6 J cm です-2露出の約 1 分に相当。エネルギー密度 (J/cm2) の式を使用して出力密度 (W/cm2) x 照射時間 (s) =。5 mm 光源と試料を地球温暖化を避けるためにバイオ フィルムとの間の距離を適用します。</li>
	<li>1 分の 0.12% クロルヘキシジンと肯定的な制御バイオ フィルムと 0.89% と陰性対照バイオ フィルムを扱う 1分間塩化ナトリウム。</li>
	<li>治療後、0.89 %nacl 水溶液で 2 回すべてのバイオ フィルムを洗ってください。</li>
	<li>RPMI 1640 3-(N morpholino) バッファーの 1 つの mL を追加、バイオ フィルムに pH 7 での propanesulfonic 酸 (モップ) し、37 ° C でプレートを一晩インキュベートします。</li>
	<li>朝は、同じ治療法を適用する手順 3.6 に 3.2 洗って二度 0.89% とバイオ フィルムとして NaCl、モップ (1 mL、pH 7) の井戸にバッファーされ新しい RPMI を追加し、37 ° C 好気的インキュベート</li>
	<li>同じ日に、6 時間後に赤い光にバイオ フィルムを公開します。1 分の 0.12% クロルヘキシジンと肯定的な制御バイオ フィルムと 0.89% と陰性対照バイオ フィルムを扱う 1分間塩化ナトリウム。治療後 0.89 %nacl 水溶液で二回バイオ フィルムを洗浄します。</li>
	<li>バイオ フィルム開発の 48 h を達成するまで 3.2 3.8 の手順を繰り返します。 注: 基本的には、1 つの治療は、朝起きるし、(6 h 離れて) 同日午後に他の 1 つが起こる。</li>
</ol>4. 処理
<ol><li>滅菌の 0.89 %1 mL を加えても塩化ナトリウムもピペット チップを使用して、掻くことによって、バイオ フィルムを除去。生殖不能の管に削除されたバイオ フィルムを追加します。</li>
	<li>滅菌 0.89% の別の 1 mL を加えても塩化ナトリウム。再びそれをスクラッチし、懸濁液を 2 mL の容量の同じ管に追加します。</li>
	<li>コロニー形成単位 (CFU)<ol>
<li>積極的に渦 1 分のバイオ フィルムのサスペンション。バイオ フィルムの中断からシリアル希釈に 0.1 mL を使用します。</li>
		<li>0.89 %nacl 溶液 10-4 10-1からバイオ フィルム懸濁液を希釈します。</li>
		<li>SDA プレート各希釈の 50 μ L をシードし、48 h の 37 ° C で版を孵化させなさい。</li>
		<li>コロニーをカウントし、数式 CFU/ml = 植民地 x 10nの数/q (n = 希釈; q = シード ボリューム)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>乾燥重量<ol>
<li>重さし、マイクロ遠心チューブ用のラベルします。</li>
		<li>バイオ フィルムの中断から乾燥重量 (バイオマス) を決定するため 0.1 mL を使用します。</li>
		<li>バイオ フィルムの 0.1 mL の無水エタノール 1 mL を追加し、18 時間-20 ° C で保存します。18 h 後 10,000 x gで 10 分間遠心分離機します。</li>
		<li>上澄みを廃棄、1 週間サンプルを乾燥させるとマイクロ遠心チューブ用の再度重量を量るデシケータにチューブを配置します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
水溶性多糖類 (Wsp) およびアルカリ可溶性多糖類 (Asp)
	<ol>
<li>バイオ フィルムの懸濁液、精力的に渦 1 分および 4 ° C で 10 分間 5,500 × gで遠心のボリューム (1.8 mL) の残りの部分から新しいチューブに上清を保存および沈殿物の滅菌超純水 (5,500 × g、4 ° C で 10 分間) と細胞外マトリックスの不溶性の成分を含む細胞で二回洗います。</li>
		<li>再滅菌超純水水 1.8 mL で不溶性のコンテンツを中断します。</li>
		<li>水溶性多糖類 (Wsp) 注: は、ヒューム フードにこの実験を実行します。<ol>
<li>ストアドの上澄みから水溶性多糖類 (Wsp) の定量化のための 1 mL を留保します。</li>
			<li>1 分のストアドの上澄みをホモジナイズしてください。生殖不能の管に転送し、95% のエタノールの 2.5 倍の量を追加します。Wsp の沈殿物のための-20 ° C で 18 h のチューブを格納します。</li>
			<li>18 h 後 9,500 x g 4 ° C で 20 分間でチューブを遠心分離します。遠心分離後、上清を破棄します。</li>
			<li>75% エタノールで 3 回サンプルを洗浄し、ペレットを風乾します。再滅菌超純水水 1 mL にペレットを中断して、フェノール硫酸法を使用して WSP を定量化します。</li>
			<li>標準曲線の 0.1% ブドウ糖 (純水 10 mL にブドウ糖の 0.01 g) を使用 (0、2.5、5、10、15、20、および 25 μ L チューブあたりブドウ糖の)。</li>
			<li>200 μ L のサンプルを構成するガラス管に 5% フェノール (47.3 mL 純水に 90% フェノールの 2.7 mL) 200 μ L を追加または標準曲線 (サンプルあたり 3 通) でポイントし、慎重に混ぜます。</li>
			<li>管に硫酸 1 mL を加え、混ぜます。反作用のための 20 分を待ってから、分光光度計を使用して試料を測定 (490 nm)。</li>
		</ol>
</li>
		<li>アルカリ可溶性多糖類 (Asp) 注: は、ヒューム フードでこの実験を実行します。<ol>
<li>不溶性の再懸濁量から Asp の決定のための 1 mL を区切ります。各バイオ フィルムの懸濁液 (13,000 x g、4 ° C で 10 分間) の因数を遠心します。</li>
			<li>各チューブの上清を慎重に削除します。その後、ペレットを乾燥させる真空濃縮にサンプルを配置します。</li>
			<li>ペレットの重さし、乾燥重量の 1 mg 当たり 1 N NaOH (水酸化ナトリウムの超純水水 50 mL に 2 g) の 300 μ L を追加します。37 ° C で 2 時間インキュベートして 13,000 × g 10 分間遠心分離します。</li>
			<li>慎重に遠心チューブ、ペレットを維持するピペットと転送培養上清を収集します。</li>
			<li>もう一度、ペレットを構成する管に 1 N NaOH の等しいボリュームを追加し、ASP の抽出のため上記のように同じ手順を繰り返します。</li>
			<li>2 時間後、遠心分離機のサンプル (13,000 x gで 10 分間)、慎重に培養上清を収集し、以前に収集した培養上清を加えます。</li>
			<li>3 番目の抽出が、今回は、上記と同じ手順を繰り返して、遠心分離前に 2 h のサンプルをインキュベートしません。</li>
			<li>その後、各サンプルに 95% のエタノールの 3 つのボリュームを追加します。ASP の沈殿物のための 18 h の − 20 ° C にあるサンプルをストックします。</li>
			<li>チューブ (9,500 × gで 4 ° C で 20 分) を遠心し、上清を捨てます。</li>
			<li>3 回で 75% エタノール ペレットを洗浄し、空気乾燥 (WSP の同じ手順でした)。再 1 N NaOH で最初の抽出の総量が等しいペレットを中断します。</li>
			<li>フェノール-硫酸を使用して ASP の定量化のためのサンプルを読む (WSP 分析方法と同様)。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+species%3A+current+epidemiology%2C+pathogenicity%2C+biofilm+formation%2C+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).</li>
<li>Harriott, M. M., Noverr, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+and+Staphylococcus+aureus+form+polymicrobial+biofilms%3A+effects+on+antimicrobial+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Candida albicans and Staphylococcus aureus form polymicrobial biofilms: effects on antimicrobial resistance.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3914-3922 (2009).</li>
<li>Srinivasan, A., Lopez-Ribot, J. L., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+antifungal+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today+Technologies%22%5BJournal%5D)">Overcoming antifungal resistance.</a> Drug Discovery Today Technologies. 11, 65-71 (2014).</li>
<li>Finkel, J. S., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+control+of+Candida+albicans+biofilm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Genetic control of Candida albicans biofilm development.</a> Nature Reviews Microbiology. 9 (2), 109-118 (2011).</li>
<li>Zarnowski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+entries+in+a+fungal+biofilm+matrix+encyclopedia%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Novel entries in a fungal biofilm matrix encyclopedia.</a> MBio. 5, e013333 (2014).</li>
<li>Mitchell, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Community+participation+in+biofilm+matrix+assembly+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Community participation in biofilm matrix assembly and function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (13), 4092-4097 (2015).</li>
<li>Mitchell, K. F., Zarnowski, R., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fungal+super+glue%3A+the+biofilm+matrix+and+its+composition%2C+assembly%2C+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Fungal super glue: the biofilm matrix and its composition, assembly, and functions.</a> PLoS Pathogens. 12, e1005828(2016).</li>
<li>Dai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+light+rescues+mice+from+potentially+fatal+Pseudomonas+aeruginosa+burn+infection%3A+efficacy%2C+safety%2C+and+mechanism+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Blue light rescues mice from potentially fatal Pseudomonas aeruginosa burn infection: efficacy, safety, and mechanism of action.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (3), 1238-1245 (2013).</li>
<li>de Sousa, D. L., Lima, R. A., Zanin, I. C., Klein, M. I., Janal, M. N., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+twice-daily+blue+light+treatment+on+matrix-rich+biofilm+development%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effect of twice-daily blue light treatment on matrix-rich biofilm development.</a> PLoS One. 10 (7), e0131941(2015).</li>
<li>Fontana, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antibacterial+effect+of+photodynamic+therapy+in+dental+plaque-derived+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Periodontal+Research%22%5BJournal%5D)">The antibacterial effect of photodynamic therapy in dental plaque-derived biofilms.</a> Journal of Periodontal Research. 44 (6), 751-759 (2009).</li>
<li>Donlan, R. M., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms%3A+survival+mechanisms+of+clinically+relevant+microorganisms%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms.</a> Clinical Microbiology Reviews. 15 (2), 167-193 (2002).</li>
<li>Panariello, B. H. D., Klein, M. I., Pavarina, A. C., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+genes+TEC1+and+EFG1+in+Candida+albicans+influences+extracellular+matrix+composition+and+biofilm+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology.</a> Journal of Oral Microbiology. 9 (1), 1385372(2017).</li>
<li>Gulati, M., Lohse, M. B., Ennis, C. L., Gonzalez, R. E., Perry, A. M., Bapat, P., Valle Arevalo, A., Rodriguez, D. L., L, D., Nobile, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+culturing+and+screening+of+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms.</a> Current Protocols in Microbiology. 50 (1), e60(2018).</li>
<li>Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+limitations+of+in+vitro+experimentation+in+understanding+biofilms+and+chronic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection.</a> Journal of Molecular Biology. 427 (23), 3646-3661 (2015).</li>
<li>Kucharíková, S., Tournu, H., Lagrou, K., Van Dijck, P., Bujdáková, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+comparison+of+Candida+albicans+and+Candida+glabrata+biofilms+under+different+conditions+and+their+susceptibility+to+caspofungin+and+anidulafungin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Detailed comparison of Candida albicans and Candida glabrata biofilms under different conditions and their susceptibility to caspofungin and anidulafungin.</a> Journal of Medical Microbiology. 60 (Pt 9), 1261-1269 (2011).</li>
<li>Weerasekera, M. M., Wijesinghe, G. K., Jayarathna, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+media+profoundly+affect+Candida+albicans+and+Candida+tropicalis+growth%2C+adhesion+and+biofilm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Mem%C3%B3rias++Do++Instituto+Oswaldo+Cruz%22%5BJournal%5D)">Culture media profoundly affect Candida albicans and Candida tropicalis growth, adhesion and biofilm development.</a> Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz. 111 (11), 697-702 (2016).</li>
<li>Kadosh, D., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+the+Candida+albicans+filamentous+growth+program+by+relief+of+transcriptional+repression%3A+a+genome-wide+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">Induction of the Candida albicans filamentous growth program by relief of transcriptional repression: a genome-wide analysis.</a> Molecular biology of the cell. 16 (6), 2903-2912 (2005).</li>
<li>Paschoal, M. A., Lin, M., Santos-Pinto, L., Duarte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photodynamic+antimicrobial+chemotherapy+on+Streptococcus+mutans+using+curcumin+and+toluidine+blue+activated+by+a+novel+LED+device%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+Medical+Science%22%5BJournal%5D)">Photodynamic antimicrobial chemotherapy on Streptococcus mutans using curcumin and toluidine blue activated by a novel LED device.</a> Lasers in Medical Science. 30 (2), 885-890 (2015).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

C. アルビカンスバイオ フィルムの培養に成功の最も重要な手順は、: 1) 事前接種と 100 mM グルコース; 混じって YNB 培地で接種を行う2) 90 分を待って接着相と二度 0.89% と井戸を慎重に洗うに塩化ナトリウム非付着細胞を削除するには・ 3) RPMI は菌糸の成長を刺激するためにバイオ フィルム形成を開始する付着細胞に RPMI 培地を追加します。C. アルビカンスを培養染色体異常が起こります。その結果、7 日以上経過、4 ° C でしていない既存の版から再縞セル板を格納しないことは、植民地を使用することが重要です。同様に、系統を一晩成長13の 18 時間前まで使用する必要があります。
研究の制約は、それが生体外で行われたことです。In vitro 試験では、バイオ フィルムの生物学の理解を増加している大きくしながら体内の条件14を正確に反映しません。ただし、生体外でテストは、antibiofilm の新しい治療法に関する質問に...

糖尿病、免疫抑制療法のアプリケーション、HIV 感染、エイズの流行、侵襲の臨床的および過去数年間の広域スペクトルの抗生物質消費の発生率の増加は、カンジダの発生率を増加しています。関連疾患1,2。C. albicans感染症一般的バイオ フィルム開発に関連しているし、カンジダ症やカンジダ性敗血症1,2などの全身症状などの臨床症状を引き起こす可能性があります。バイオ フィルムの成長の最も注目すべき病原因子の 1 つは細胞外多糖類マトリックス設立です。既存の抗真菌薬、環境ストレス、ホスト免疫機構3への抵抗を高めるためにバイオ フィルム形成が協力しています。
C. albicansのバイオ フィルムの成長は、基板、基板表面と菌糸の生育酵母の伝播によって後に浮遊性細胞の初期付着によって始まります。バイオ フィルムの成長の最後の段階は、成熟段階、前記酵母のような開発を抑制、菌糸の開発拡大、および細胞外マトリックスを囲むバイオ4です。C. アルビカンスポリサッカライド (EPS) マトリックスの相互マンナン グルカン複合5,6を形成します。細胞外多糖類の相互作用は薬7に対してバイオ フィルムの防衛のために重要です。したがって、 C. albicansの細胞外マトリックスから EPS の削減は口腔カンジダ症コントロールの新しい antibiofilm プロトコルの開発をサポート可能性があります。
光は、成長、開発、およびいくつかの生物8の動作を調節して光線力学的抗菌化学療法 (協定) において、抗菌薬として適用されています。協定は、可視光線の特定の波長と光吸収の光増感剤9を適用されます。ただし、感光でも苦労して、バイオ フィルムを貫通低い有効性10の原因します。完全にバイオ フィルムを浸透させる治療薬の失敗では、バイオ フィルムが時折伝統的な抗菌療法3,5を抵抗です。囲まれた微生物細胞を非アクティブ化、抗菌薬は細胞外のマトリックスを透過する必要があります。それにもかかわらず、EPS、バイオ フィルムにキャリッジのレベルのプロンプトまたは11マトリックス自体に抗菌の応答に影響を与えるそのような分子の拡散障害の特徴です。
協定の欠点を考える自体による光の使用は、貴重な改善として現れます。予備的なデータでは、青色光と 1 日 2 回の治療が EPS 不溶性のミュータンス連鎖球菌バイオ フィルムの生産と有意に抑制したことを明らかにしました。EPS 不溶性の減少、青い光は、バイオ フィルムの成長を減少しました。それにもかかわらず、 C. albicansのバイオ フィルムの赤い光を使った光線療法の結果が不足しています。したがって、この調査の目的は、成長とC. albicansのバイオ フィルムの配置に影響を及ぼす赤色光を使用してどのような方法の光線療法の評価でした。1 日 2 回治療のため我々 が研究室の前のプロトコル9,12生存率についての答えを提供する簡単で再現性のあるバイオ フィルム モデルを提供する適応乾物重および細胞外多糖類赤光治療.後の金額他の治療法をテストするため、同じプロトコルを使用できます。

<table><tbody><tr><td>クロレキシジン 20%&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9394</td><td></td></tr><tr><td>デキストロース (D-グルコース) 無水</td><td>フィッシャーケミカル</td><td>D16-500</td><td></td></tr><tr><td>エタノール 200 プルーフ</td><td>デコンラボラトリーズ</td><td>DSP-MD.43</td><td></td></tr><tr><td>LumaCare LC-122 A&nbsp;</td><td>LumaCare Medical Group、米国カリフォルニア州ニューポートビーチ&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>フィッシャーケミカル</td><td>S641-500</td><td></td></tr><tr><td>NaOH&nbsp;</td><td>フィッシャーバイオ試薬&nbsp;</td><td>BP 359-500</td><td></td></tr><tr><td>フェノール 5%</td> <td>ミリポア シグマ</td><td>843984</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 3-(N-モルフォリノ)</td><td>シグマ</td><td>R7755</td><td></td></tr><tr><td>サブロー デキストロース寒天にクロラムフェニコール</td><td>Acumedia</td><td>7306A</td><td></td></tr><tr><td>硫酸を添加&nbsp;</td><td>フィッシャーケミカル</td><td>SA200-1</td><td></td></tr><tr><td>酵母窒素ベース&nbsp;</td><td>Difco</td><td>DF0392-15-9</td><td></td></tr><tr><td>3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸MOPS</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>M1254</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;24ウェルポリスチレンプレート&nbsp;</td><td>ファルコン</td><td>353935</td><td></td></tr></tbody></table>

規制カンジダバイオ フィルムの成長する赤い光で毎日光線

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

ここでは、カンジダバイオ フィルムの発育に日当赤光治療の成果を評価するためのプロトコルを提案する.C. アルビカンスSN425 の浮遊性の成長を高めるため、乳酸菌は酵母窒素ベースのメディアに成長しました。バイオ フィルム形成アミノ酸の高濃度を持っている, RPMI 1640 メディアはバイオ フィルムの成長を助けるに適用されました。48 h のバイオ フィルムは、非コヒーレント光デバイスと 1 分の期間の 1 日 2 回を扱われた (赤色光; 波長 = 635 nm; エネルギー密度 = 87.6 J·cm-2)。肯定的な制御 (PC)、0.12% クロルヘキシジン (CHX) が適用されると否定的な制御 (NC)、0.89% 塩化ナトリウムがバイオ フィルムに適用されました。コロニー形成単位 (CFU) 治療後ドライ重量、水溶性と不溶性の細胞外多糖類の定量を行った。簡単に言えば、ここで提示されたプロトコルは、簡単に再現できると赤光治療.後の乾物重と細胞外多糖類量、生存率についての回答を提供します

図 2は、1 分赤色光大幅削減ログ10 CFU/mL NC と比較しての赤い光で日当治療後ログ10 CFU/mLの c.albicansの結果を表示 (p = 0.004)。図 3は、毎日治療後c.albicansバイオの現存量 (mg) の成果を提示します。すべて治療グループ NC に比べてバイオマスの減少を示した (p = 0.000) 赤色光治療 PC で観察するバイオマスの同様なリスク減少を発表したグループ。図 4と図 5 NC と比較して PC に劣る量のc.albicans EPS 水溶性と不溶性 EPS を表示 (p = 0.000)。にもかかわらず統計的にC. albicansバイオ フィルムに 1 分用の...

ここでは、カンジダバイオ フィルムの発育に赤色光アプリケーションの結果を評価するためのプロトコルを提案する.635 nm の波長とエネルギー密度が 87.6 J·cm-2非コヒーレント赤光デバイスは、48 h のカンジダバイオ フィルムの成長を通して適用されました。

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

カンディダは、免疫不全宿主における真菌感染の最も一般的な原因である。マトリックスのためにバイオフィルムを完全に浸潤させる治療薬の失敗は、バイオフィルムが従来の治療法に抵抗する理由の1つです。私たちのプロトコルは、赤い光を使用して光療法がカンディダ・アルビカンスのバイオフィルムの成長と配置をどのように妨げるかを評価します。この研究で使用された菌株は細胞外マトリックスを特徴としており、軽いデバイスは他のプランクトン微生物懸濁液およびバイオフィルムにうまく適用されているため、適用される方法は十分に確立されている。この装置の最大の利点は、治療時間の短縮であり、臨床用途に対してより目に見えるようにします。カンディダ・アルビカンスを培養する際には抗体を獲得できることに注意してください。したがって、7日以上前のコロニーを使用しないこと、摂氏4度でプレートを開始しないこと、および既存のプレートから細胞を再ストリークしないことが重要です。同様に、株は、一晩の成長の18時間前に使用する必要があります。分光光度計を初めて用いる場合は、まず、単位数でコロニーファームを得て、光学密度値に相関させることが重要である。したがって、実験は、1ミリリットル当たり10〜7個の細胞の初期細胞濃度での成長期の中間を使用して開始されます。この細胞濃度は、最も依存性および安定物質バイオフィルムを提供することが示されている。まず、65グラムのSDAを中断し、クロラムフェニコール1リットル当たり50ミリグラムをビーカーに1,000ミリリットルの蒸留水で加えます。ビーカーをヒーターの上に置き、沸騰させ、媒体を完全に溶解させる。その後、ガラス瓶にメディアを転送します。キャップをボトルの上に置きますが、ボトルが通気できるように完全にねじ込まないでください。ボトルをオートクレーブに入れ、溶液を15 PSI、摂氏121度で30分間殺菌します。約45°Cに溶液を冷却します。使い捨ての無菌ピペットを使用してよく混ぜ、20ミリリットルのSDAを無菌ペトリプレートにピペットします。YNB培地を調製するには、100ミリモルグルコースを補充し、6.7グラムのYNBと18グラムのデキストロースをビーカーに1,000ミリリットルの超純水に混ぜる。ビーカーに攪拌バーを置き、攪拌プレートにビーカーを置いて混ぜます。0.22マイクロメートル真空フィルターシステムを介して媒体をフィルタリングして滅菌します。10.4グラムのRPMI-1640と34グラムのMOPSを、1,000ミリリットルの超純水に混合してRPMI培地を調製します。熱を入れずに撹拌機に混ぜ、通常の水酸化ナトリウムを1つ加えてPHを7に調整します。0.22マイクロメートル真空フィルターシステムを使用して培地を殺菌します。まず、微生物カンディダ・アルビカンSN425を周囲温度で解凍する。SDAを含む以前に調製されたペトリ皿上の停止培養の種子10マイクロリットルは、クロラムフェニコールを補った。ペトリ料理を摂氏37度で48時間加えてインキュベートします。プレイノキュラムのために殺菌潤滑油を使用して、ペトリ皿からカンジダ・アルビカンの10コロニーを選び、グルコースを補った10ミリリットルのYNB培地を含む遠心分離管に入れる。チューブを摂氏37度で16時間好気的にインキュベートします。次に、このスターター培養液を新鮮なYNB培地に添加して接種物を調製し、グルコースを添加し、希釈のために1〜10の割合で調製する。分光光度計を使用して、540ナノメートルでの初期ODを測定します。イノキュラムを摂氏37度で8時間好気的にインキュベートし、540ナノメートルで最終ODを測定する。初期 OD から最終 OD を引き、接種の OD が中間ログ成長フェーズにあるかどうかを確認します。1ミリリットル当たり7個の細胞に10個の接種物を得るために、5分間5分間、500回G.次亜塩素酸ナトリウムを含むビーカーに上澄みを注ぎ、新鮮なYNBを加えて接種液を前の体積の半分に濃縮する。24ウェルポリスチレンプレートの各ウェルに接種物の1ミリリットルを追加します。ウェルの底に細胞接着を可能にするために90分間摂氏37度で好気的にインキュベート。正のコントロールバイオフィルムの場合は、1ミリリットルの0.12%クロルヘキシジンで1分間バイオフィルムを治療します。陰性対照のために、1ミリリットルの無菌、0.89%の塩化ナトリウムでバイオフィルムを1分間扱います。続いて、ウェルを2回、それぞれ1分間、無着着地0.89%塩化ナトリウム1ミリリットルで洗浄し、非接着細胞を除去する。次に、コヒーレントでない赤色のライトを点灯し、パワーメーターを使用して光の電力密度を測定します。1 平方センチメートルあたり 87.6 ジュールのエネルギー密度要件に基づいて、露出時間を決定します。プレートを赤い光の下に置きます。サンプルの温めを避けるために、光源とバイオフィルムの距離を5ミリリットルに保ちます。1分間の露出後、殺菌したRPMI培地を1ミリリットルずつ各ウェルに加え、プレートを一晩で摂氏37度でインキュベートします。午前中には、同じ洗浄、軽い治療、陽性および陰性の対照処理、およびRPMI培地で6時間のインキュベーションを繰り返します。再び、バイオフィルムを2回洗浄し、赤色光にさらし、正および陰性のコントロール治療を行います。ウェル内の溶液を吸引し、RPMI培地を加えます。48時間のバイオフィルム開発を達成するまで、インキュベーション、洗浄、光処理、および正および陰性対照治療を繰り返す。処理を開始するには、培地を廃棄し、滅菌の1ミリリットル、0.89%の塩化ナトリウムをウェルに加え、ピペットチップを使用して井戸からバイオフィルムを傷つけます。除去したバイオフィルムを滅菌チューブに移します。もう1ミリリットルの無菌、0.89%塩化ナトリウムを井戸に加えます。もう一度傷つけ、同じチューブにサスペンションを追加し、合計容量は2ミリリットルです。バイオフィルム懸濁液を1分間激しく渦液する。CFU分析では、バイオフィルム懸濁液から0.1ミリリットルのアリコートを、希釈ごとに0.89%の塩化ナトリウム溶液の900マイクロリットルを含むマイクロ遠心管に移します。バイオフィルム溶液を10からネガティブ溶液、10~ネガティブ4に、生理食塩水で希釈する。SDAプレートに希釈した各希釈液の種子50マイクロリットル、および48時間摂氏37度でプレートをインキュベートする。コロニーを数え、式を適用します。乾燥重量分析のために、最初の重量を量り、マイクロ遠心分離管を標識する。バイオフィルム懸濁液0.1ミリリットルと絶対エタノール1ミリリットルをチューブに加え、マイナス20°Cで18時間保存します。次いで、遠心分離機を10,000回G10分間行う。上清を捨て、デシケータにチューブを入れ、サンプルを1週間乾燥させます。マイクロ遠心管を再度秤量し、その減算を行ってバイオマス重量を求める。本実験では、カンジダ・アルビカンスバイオフィルムに対して1分間赤い光で日当処理を行った後、CFUを還元し、塩化ナトリウムで処理した陰性対照と比較した。カンギダ・アルビカンスバイオフィルムのバイオマスの結果は毎日の処理後に、赤色光処理群が陽性対照群で観察されたものと同様の還元量を示し、クロルヘキシジンで処理した。2つのグループはまた、互いに統計的な類似性を示した。両者ともバイオマスの減少を示したが、塩化ナトリウムで処理された陰性対照と比較した。可溶性および不溶性EPSのカンジダ・アルビカンスの劣った量は、陽性対照において観察された、陰性対照と比較した。統計的に有意ではないが、赤い光の日当適用はEPS可溶性およびEPS不溶性の量を数値的に減少させた。負の対照と赤色光処理群は、統計的類似性を示した。光の電力密度を測定し、処理を開始する前にパワーメーターを使用して、適用の正確な期間を決定する。このステップでは、エネルギー密度は常に 87.6 ジュール/センチメートル平方になります。前述の数式を使用します。測定は、プレートのボトルに光から同じ、5ミリメートルを使用して行われます。光療法と抗真菌薬の関連を調べ、赤い光による前処理、続いて薬物適用がバイオフィルムへの薬物浸透を改善しているかどうかを確認することができる。1日2回の治療のために、私たちは、赤信号処理後の生存率、乾燥重量、および細胞外多糖量に関する回答を提供する、簡単で再現可能なバイオフィルムモデルを提供する、実験室のプロトコルを適応させました。このプロトコルは一般的であり、薬物、他のライト、または光と薬物の組み合わせを含む赤色光に加えて、他の治療法のテストに使用できます。微生物の操作には、安全メガネ、ボタンラボコート、ニトロ手袋などの特別な装置が必要です。

daily-phototherapy-with-red-light-to-regulate-candida-albicans

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

我々は3次元ナノバイオフィルムから成る高密度マイクロアレイプラットフォームを開発しました...

ハイスループット抗真菌薬スクリーニングのためのカンジダバイオチップ（ カルシウム BChip）

出典: Zhao, K. ほか5-アミノルブリン酸介有光力学療法が黄色 ブドウ球菌 バイオフィルムに与える影響を研究するin vitroモデル。 J. Vis. Exp.

光感作前駆体を用いた細菌バイオフィルムの光活性処理

カンジダ・アルビカンスのバイオフィルムの内部特徴を見て定量化するために、屈折率マッチングによって明らかにされた固定無傷の標本を用意します。そして、光学断面顕微鏡を用いれば、バイオフィルムの厚みを完全にもった3次元画像データを得ることができる。...

カンディダ・アルビカンスバイオフィルムの明確化とイメージング

薬剤耐性カン ジダ・アルビカンス の発生率の増加は、世界中で深刻な健康問題です。抗菌光線力学療法(aPDT)は、薬剤耐性真菌感染症と戦うための戦略を提供するかもしれない。本プロトコールは、多剤耐性 C.アルビカン ス株に対するローズベンガル媒介性aPDT有効性を インビトロで記載する。...

カンジダ・アルビカンスを阻害するローズベンガル媒介光線力学療法

C. tropicalisによって形成されるバイオフィルムに対する抗体の影響を研究するために、2,3-ビス(2-メトキシ-4-ニトロ-5-スルホフェニル)-5-カルボキシアニリド-2H-テトラゾリウム(XTT)還元アッセイを使用した96ウェルマイクロタイタープレートベースのプロトコルが本明細書に記載されています。このin...

カンジダ・トロピカリス・バイオフィルムに対する抗体の効果を評価するための可溶性テトラゾリウムベースの還元アッセイ

このプロトコルは口頭カンジダ症のマウスモデルに抗菌光線力学療法(aPDT)の適用を記述する。aPDTは、クルクミノイドと青色LED光の水溶性混合物を用いて実施した。...

口腔カンジダ症のマウスモデルに対するクルクミノイド媒介抗菌光線力学療法

カンジダ属の薬剤耐性におけるプチコロニーの重要性は、十分には解明されていない。抗菌光線力学療法(aPDT)は、薬剤耐性真菌感染症に対する有望な戦略を提供します。この研究は、ローズベンガル媒介aPDTが カンジダグラブラタ...

ローズベンガル媒介光線力学療法によるカンジダ炾粒体におけるプチコロニーの誘導

405nmのブルーライトLEDデバイスは、コラーゲンベースの合成皮膚モデルで評価したことで、幅広い創傷病原体に対して抗菌効果を示します。この簡略化された in vitro...

コラーゲンベースの合成皮膚モデルを用いた創傷病原体抑制のためのブルーライトLEDデバイスの研究

我々はの形成のための、シンプルで迅速かつ堅牢な方法を説明します...

監視形成との抗真菌薬感受性試験のための96ウェルマイクロタイタープレートベースの方法カンジダアルビカンスバイオフィルム

アッセイは、細菌および真菌の早期のバイオフィルム形成を測定する迅速な手段を説明します。このメソッドは、微生物のバイオフィルム形成のための基層としてのマイクロタイタープレートを使用し、バイオフィルムは、クリスタルバイオレットの菌株を用いて可視化です。アッセイは、どちらかの初期のバイオフィルム形成のための定性的または定量的なアッセイを提供する。...

マイクロタイター皿のバイオフィルム形成アッセイ

学ぶ赤色光療法によるCandida albicansバイオフィム成長抑制法。635nmの非干渉性赤色光を用いて48時間のバイオフィム発育を評価し、従来療法への耐性を持つ真菌感染症治療の新たな可能性を探索する。

規制カンジダバイオフィルムの成長する赤い光で毎日光線

さらに動画を探す

規制カンジダバイオ フィルムの成長する赤い光で毎日光線

さらに動画を探す

規制カンジダバイオフィルムの成長する赤い光で毎日光線