Name: 肝炎症と線維症の設定に起因する肝細胞癌の腫瘍性肝細胞誘発性オルコトピックマウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: 学ぶ肝細胞癌の免疫学的研究のためのマウスオルコトピック腫瘍モデル。C57BL/6マウスを用いた脾内注入法により、肝線維化環境下での腫瘍誘導免疫寛容を再現し、治療応答の解析に有用なプラットフォームを提供する。

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この作品は、NIH/NCI R01 CA164335-01A1(K. F. ステーブリー・オキャロル、PI)およびNIH/NCI R01CA208396(マーク・ケスター、グアンフー・リー、ケビン・F・ステーブリー・オキャロル)によってサポートされています。

注:動物の被験者を含むすべての手順は、ミズーリ大学のIACUCによって承認されています。すべてのマウスは、「実験動物のケアと使用のためのガイド」に概説された基準に従って人道的ケアを受けました。細胞の単離および接種のための次の手順はフードで行われるべきである。すべてのパフォーマーは、マウスおよび組織の取り扱いのための標準的な個人用保護具を着用する必要があります。
1. 脂肪塩化炭素のIP注入による肝線維症と肝硬変の誘導(CCl4)
注: 図 1 を参照してください。(CCl4は非常に危険な試薬であり、それは慎重に、耐薬品性手袋を着用して取り扱われるべきです)
<ol><li>生後6~8週の雄C57BL/6Jマウスを入手する(材料表参照)。</li>
	<li>遠心管にトウモロコシ油で10%CCl4(v/v)溶液を調調します。注入するマウスの数に基づいて総体積を決定する(ステップ1.6を参照)。</li>
	<li>適切なマウス処理技術を使用して、注射用に 1 つのマウスを選択します。</li>
	<li>手動でその後部(腹部)側を上にしてマウスを拘束します。</li>
	<li>70%のアルコールで洗うことによってマウスの腹壁に注射部位をきれいにします。</li>
	<li>25ゲージの使い捨て針を用いて食肉内(IP)注射により、160 μLの10%CCl4溶液を用いてオスのC57BL/6Jマウスを注入する。 </li>
	<li>針が腹壁(約4〜5mm)を通って、ベベル側を上にして15〜20度でわずかに角度を付けて突き刺さっていることを確認します。</li>
	<li>マウスを週2回注射し、合計4週間の合計4週間の注射を行い、合計8回の注射を受ける。 注:最後の注射の2週間後、治療されたマウスはMTD2マウスからの発死性肝細胞のISPL接種の準備ができている。</li>
</ol>2. ラインMTD2マウスからのタグトランス原性肝細胞の分離
注: ソリューションレシピについては、表 1を参照してください。
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>CaまたはMgなしの10xアールのバランス塩溶液(CaまたはMgなしのEBSS)</td>
			<td>4 g KCl 68 g ナクル 1.4 グラム NaH2PO4 ·H2o 10 g デキストロース 水を1リットルに、pHを4.32に加える パススルーフィルタ</td>
		</tr>
<tr>
<td>ソリューション 1</td>
			<td>Ca または Mg なしの 20 mL 10x EBSS 44 g ナフコ3 1.33 mL 1.5M ヘプ 10 mL EGTA の 10 mL 200 mLに水を加える</td>
		</tr>
<tr>
<td>ソリューション 2</td>
			<td>100 mL 10x EBSS 2.2 g ナフコ3 6.67 mL 1.5 M ヘプ 1リットルに水を追加</td>
		</tr>
<tr>
<td>0.75% コラゲナーゼ溶液</td>
			<td>15 mg コラゲナーゼ タイプ 1 20 mLの溶液 2</td>
		</tr>
<tr>
<td>完全なメディア</td>
			<td>2 RPMI 50 mL FBS 5 mL 100x ペニシリン連鎖マイシン</td>
		</tr>
</tbody></table>表 1: ソリューションのレシピ。
<ol><li>発細胞性肝細胞の供給源として役立つラインMTD2マウス38を得る。</li>
	<li>2.5%イソルランを用いて5週齢のMTD2マウスを麻酔する。 注:適切な麻酔はつま先のピンチ法によってチェックされます。簡単に言えば、2本の指を使用して、マウスのつま先/足に良いスクイーズを与えます。撤退反応がない場合、動物は手術を開始するのに十分な深さと判断される。</li>
	<li>十分に鎮静したら、マウスをサフィンの位置に置き、腹をテープで固定して腹部表面を十分に露出させます。</li>
	<li>肝臓の十分な露出を提供するのに十分な大きさのリニアアルバの長さに沿ってはさみを使用して中間腹腔切開を行います。</li>
	<li>肝臓とポータルトライアドのより良い露出を提供するために左に腸を置き換えます.</li>
	<li>肝臓の上で解剖して、劣った静脈カバ(IVC)を露出させる。</li>
	<li>動脈クランプを使用して肝臓の上にIVCをライゲートします。</li>
	<li>肝臓の劣った境界に戻り、蝶の針(材料を参照)を使用して、ポータル静脈へのIVアクセスを得る。手でカテーテルを修正します。</li>
	<li>溶液15mL、0.75%コラゲナーゼ溶液2の15mL、カテーテルを介して溶液2の15 mLを用いて8.9 mL/minの注射注射器を使用してマウス肝臓を連続的に浸透させる。</li>
	<li>10-15 mLのPBSを有する50 mL円錐管でMTD2マウスから腫瘍塊を切断し、取ることによって、注入された肝臓を収穫する。</li>
	<li>PBSを削除し、PBSで追加の時間を洗浄します。この手順では遠心分離しないでください。</li>
	<li>はさみを使って肝臓を小さく切り、PBS 2xで再度洗って残りの血液を取り除きます。</li>
	<li>円錐形のチューブに完全なRPMI媒体の5 mLを追加し、連続的に小片(<3ミリメートル)にはさみで肝臓をミンチ- 組織は滑らかに5 mLピペットを通過する必要があります。</li>
	<li>30 mL の最終容積に完全な RPMI を追加し、5 mL ピペットを使用して肝臓を中断します。.</li>
	<li>混合溶液を70 μmストレーナーで50 mL円錐管に濾過します。</li>
	<li>完全なRPMIでストレーナーを数回洗浄し、RPMI培地を追加して最終容積を50mLに調整します。</li>
	<li>遠心分離機でサスペンションを最大500rpmまで素早く回転させます。速度が50 x gに加速されたら、遠心分離機を停止する必要があります。</li>
	<li>PBSの20 mLで上清をデカントし、ペレットを中断します。</li>
	<li>トリパンブルーの除外と血球計を使用して細胞をカウントし、次の細胞接種のために細胞濃度を2.5 x 106/mLに調整します。 注:5グラムの腫瘍組織からの期待収量は、生存率>95%の8,000万肝細胞です。</li>
</ol>3. ISPL注射による野生型C57BL/6Jマウスの肝臓へのMTD2マウスからの肝細胞接種
<ol><li>無菌技術は、すべての手順で使用する必要があります</li>
	<li>CCl4-処置された雄C57BL/6Jマウスを2.5%イソファランで麻酔し、マウスは目が乾燥するのを防ぐために眼の潤滑油で治療されるべきである。</li>
	<li>注射用肝細胞の200 μLで注射器を調剤します。</li>
	<li>十分に鎮静したら、マウスを左上に位置を付します。</li>
	<li>マウスの左脇腹全体を剃り、その後、70%のアルコールとベタジンの間で交互に3回、領域をスクラブします。</li>
	<li>外科的切開の前に5 mg/kgのカルプロフェン皮下皮を投与する。</li>
	<li>背骨の筋肉のすぐ下から背部極端な始まりから13番目の肋骨に平行に左脇腹に1cmの切開を行います。</li>
	<li>脾臓を識別し、鈍い尖った鉗子を使用してそれを外装します。</li>
	<li>脾臓を2つの中型チタンクリップでクリップします。脾動脈と静脈の間に両方のクリップを配置し、接種後に後でカットするクリップの間にスペースを残します。 注:目標は、播種のリスクを低減するために脾臓の下の極を分離することです。</li>
	<li>27G針を用いて脾臓の下端の極に200μL(050万円)の肝細胞を注入する。</li>
	<li>ペディクルの下枝(下脾臓のポール容器)を中型のクリップ1本でクリップします。</li>
	<li>最初に配置された 2 つのクリップの間に脾臓を切ります。</li>
	<li>腫瘍細胞を直接注入した脾臓の劣った棒を取り除く。</li>
	<li>3-0 ポリグラクチン 910 中断縫合を使用して、内側の筋肉層を閉じる。</li>
	<li>殺菌されたスチール創傷クリップを使用して、外側の皮膚層を閉じます。 注:スチールクリップは、動物が縫合糸を噛み切るのを避けるために縫合糸よりも好ましく、隙間のある傷を残します。</li>
	<li>縫合後に皮下にカルプロフェンの5 mg/kgを投与する。</li>
	<li>すべての回復動物を温度管理された加熱パッドに置き、麻酔から完全に回復するまで注意深く監視します。</li>
	<li>手術後にマウスに水への無料アクセスを与えます。手術中にマウスが脱水状態になった場合は、皮下液(<1 mL)を投与する。</li>
	<li>術後7~10日でスキンクリップを取り外します。</li>
</ol>

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<li>Kudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+checkpoint+blockade+in+hepatocellular+carcinoma%3A+2017+update%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Cancer%22%5BJournal%5D)">Immune checkpoint blockade in hepatocellular carcinoma: 2017 update.</a> Liver Cancer. 6, 1-12 (2017).</li>
<li>Kudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+checkpoint+inhibition+in+hepatocellular+carcinoma%3A+Basics+and+ongoing+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology%22%5BJournal%5D)">Immune checkpoint inhibition in hepatocellular carcinoma: Basics and ongoing clinical trials.</a> Oncology. 92, 50-62 (2017).</li>
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このプロトコルにより、ヒトHCCの開始と進行を模倣するHCCの信頼性と再現性の高いマウスモデルを確立しました。臨床的には、多くの危険因子が肝損傷、肝線維症、肝硬変およびHCCの最終段階を連続的に誘導する。我々のプロトコルでは、CCl4のIP注射は、最初に野生型マウスで肝線維症を生成するために使用され、その後の発生性肝細胞が肝線維症の設定で腫瘍を形成することを可能にする。CCl4治療の2週間後に肝細胞接種を受けたマウスでは、他の時点で注射を受けたマウスと比較して、腫瘍形成が最も成功したことがわかった。さらに、CCl4注射後4ヶ月以内に肝線維症を検出できることがわかった。このアプローチは、CCl4に曝露せずにマウスと比較してHCC腫瘍を発症するマウスの90%以上をもたらす。我々のモデルでは、ラインMTD2マウスからC57BL/6Jマウスに移された肝細胞は、TAgを組織抗原として発現する肝細胞として組み込まれる肝臓へのトラフィックである。MTD2からの肝細胞の単離は、このプロトコルの間に重要なステップです。MTD2マウス肝臓は、肝臓内の循環赤血球を完全に除...

肝細胞癌(HCC)は、米国(米国)1、2、3で最も急速に増加しているタイプの癌である。毎年、約85万人の新しい症例がこの致死性疾患6、7、8、9、10で死亡する4、5、700,000人と診断されている。世界で2番目に高いがん関連死の原因となっています。HCCの管理は、外科的切除、移植、切除、化学的化、またはソラフェニブ11のような全身療法を含む。外科的切除または移植を伴う早期診断および管理は、全体的な生存利益が最も高い4を有する。残念ながら、患者の大半は、後の段階に存在し、アブレーション、化学oembolizationまたはソラフェニブ12で管理を必要とします。ソラフェニブは、受容体チロシンキナーゼ阻害剤(RTKI)であり、切除不能なHCCの治療に利用可能な唯一の全身性薬物療法として2008年に食品医薬品局によって承認されました。薬物は、全体的な生存のわずかな増加を提供するが、7.9から10.7ヶ月13に、それはHCCを管理するために利用することができる新しい治療戦略を提供した。
確立された癌を排除するために免疫系を操作することは、がん研究14の急速に成長している分野です。免疫チェックポイント研究は、がん治療における免疫療法薬開発をかなり進めました15,16.FDAは、細胞傷害性Tリンパ球抗原4(CTLA-4)に対する抗体(Abs)、プログラムされた細胞死タンパク質1(PD-1)、および黒色腫、肺癌、頭頸部癌、および膀胱癌17の治療のためのリガンドPD-L1の使用を承認した。18歳,19歳,20.高度なHCCの治療のためのPD-1、PD-L1、またはCTLA-4に対する1つまたは複数の抗体を用いた単剤療法または併用療法の臨床試験は、進行中の21、22、23、および一部である試験は良好な結果を示している。2017年、FDAはソラフェニブに対する耐性を有するHCC患者を治療するための抗PD-1抗体の承認を加速したが、この治療の全体的な応答率はわずか14.3%である。他の戦略は、この時点で臨床実践に翻訳されていません24,25.免疫チェックポイント療法を改善するために腫瘍誘発深い免疫寛容を克服26;免疫チェックポイント療法の有効性を予測する;免疫関連の有害事象を防ぐ;投与経路、投与量、および頻度の最適化;そして、治療の効果的な組み合わせを見つける27,28,29すべてが非常に困難なタスクのまま.
現在、マウスモデルでHCCを誘導するために使用されるいくつかの従来のアプローチがあり、研究者の特定の研究質問30に応じて利用されている。ケノ毒性化合物を有する化学的に誘発されたHCCマウスモデルは、傷害誘発性悪性腫瘍を模倣する。HCC細胞株の異所性またはオルコトピック移植を介した異種移植片モデルは、薬物スクリーニングに適している。遺伝子組み換えマウスの数は、HCCの病態生理学を調査するために設計されています。ウイルス遺伝子、オンコ遺伝子および/または成長因子を発現するトランスジェニックマウスは、肝発癌に関与する経路の同定を可能にする。固有の制限により、これらのモデルはヒトHCCに見られる典型的な免疫特性を要約せず、基礎となるメカニズムの解明と革新的な免疫療法戦略の開発を著しく妨げている14 、15.我々は最近、臨床的に関連するマウスモデルを作成した。この新しいモデルは、ヒトのHCCの開始と進行を模倣するだけでなく、免疫機能障害を含むヒト疾患の最も典型的な特徴を反映している。その生物学的および免疫学的特性を特徴付けた。この新しいモデルを利用して、我々はHCC 31、32、33、34、35、36を治療するための様々な免疫療法戦略を探求してきた。37.このユニークなプラットフォームにより、腫瘍誘発免疫トレランスのメカニズムを研究し、最終的な臨床翻訳に向けたHCCの概念実証治療戦略を開発することができます。

<table><tbody><tr><td>麻酔器</td><td>VETEQUIP</td><td>IMPAC6</td><td>手術用麻酔器</td></tr><tr><td>バタフライニードル</td><td>BD</td><td>8122963</td><td>肝臓灌流に使用されるニードル</td></tr><tr><td>C57BL/6</td><td>マウス ジャクソンラボ</td><td>000664&nbsp;</td><td>プロトトールに使用したマウス</td></tr><tr><td>カルプロフェン</td><td>クレセントケミカル</td><td>20402</td><td>痛みの解放のためのカルプロフェン</td></tr><tr><td>セルストレーナー&nbsp;</td><td>CORNING</td><td>REF 431751</td><td>セルストレーナー、70&micro;m、肝細胞単離用</td></tr><tr><td>遠心分離</td>機<td>ベックマン・コールター</td><td>、アレグラX-30R</td><td>細胞単離用遠心分離</td></tr>機<tr><td>クリップ&nbsp;</td><td>Teleflex Medical</td><td>REF 523700</td><td>脾臓</td></tr><tr><td>顕微鏡</td>用チタンクリップ <td>Zeiss</td><td>Primovert&nbsp;</td><td>細胞観察用顕微鏡</td></tr><tr><td>Mtd2マウス</td><td>N/A</td><td></td><td>ウィリアム博士からの贈り物 2002年にロズウェルパークがん研究所で開催され、私たちの研究室で維持</td></tr>されています <tr><td>ニードル</td><td>BD</td><td>REF 305109</td><td>BD精密グライド針、27G x 1/2 (0.4mm x 13mm)</td></tr><tr><td>縫合</td>糸 <td>ETHICON</td><td>J303H</td><td>コーティング VICRYL縫合糸</td></tr><tr><td>SV40 T Ag抗体</td><td>Abcam</td><td>ab16879</td> IHCシリンジ<td>BD用抗SV40 T抗原抗体</td></tr><tr><td></td><td></td><td>REF 309626</td><td>細胞注射用1mL TBシリンジ</td></tr><tr><td>トリパンブルー</td><td>SIGMA</td><td>T 8154</td><td>細胞生存率試験用トリパンブルー溶液</td></tr><tr><td>創傷クリップ</td><td>Reflex</td><td>reflex9, Part. No. 201-1000</td><td>ステンレス製創傷クリップ クローズ</td></tr></tbody></table>

肝炎症と線維症の設定に起因する肝細胞癌の腫瘍性肝細胞誘発性オルコトピックマウスモデル

An Oncogenic Hepatocyte-Induced Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Cancer Arising in the Setting of Hepatic Inflammation and Fibrosis

肝細胞癌(HCC)の典型的な免疫特性に対処する臨床的に関連する動物モデルの欠如は、基礎となるメカニズムの解明と革新的な免疫療法戦略の開発を著しく妨げている。ヒトHCCを要約する理想的な動物モデルを開発するために、免疫能力のある雄C57BL/6Jマウスは、まず肝臓線維症を誘導するために四塩化炭素(CCl4)注射を受け、次いで若い雄から組織学的に正常な発血性肝細胞を受け取る。SV40 T抗原(TAg)-トランスジェニックマウス(MTD2)を脾臓内(ISPL)接種により用いる。思春期のレシピエント雄マウスで生成されたアンドロゲンは、肝臓特異的プロモーターの制御下でTAg発現を開始する。その結果、転移した肝細胞は癌細胞となり、肝線維症/肝硬変の設定で腫瘍塊を形成する。この新しいモデルは、肝線維症/肝硬変のコンテキストでヒトHCCの開始と進行を模倣し、免疫機能障害を含むヒトHCCの最も典型的な特徴を反映する。

TAg-トランスジェニックマウス(図2)から単離した発血性肝細胞を、脾臓内注射により野生型マウスの肝臓に播種した(図3)。移植された肝細胞は正常かつ確実に肝細胞を成長させ、肝炎症および線維症の設定において腫瘍特異的抗原SV40 TAg(図5)を有する正頭不最小HCC腫瘍(図4)を成長させた(図1)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59368/59368fig1.jpg"> 図1:HCCのマウスモデルを準備するための回路図。HCCの革新的なマウスモデルを確立するための実験設計。C57BL/6Jマウスは、肝線維症を誘発するために週2回CCl4のIP注射で4週間治療される。最後のIP注射の2週間後、...

ここでは、肝細胞癌(HCC)の典型的な免疫特徴を要約した肝癌の臨床的に関連するマウスモデルの開発について述べた。

The absence of a clinically relevant animal model addressing the typical immune characteristics of hepatocellular cancer (HCC) has significantly impeded ...

肝細胞癌質量モデルを開発するためにモデルを使用するだけで、人々は腫瘍誘発性免疫寛容および特異的治療誘発、任意の腫瘍免疫応答を解明するのに役立つ可能性があります。肝線維化技術で発症する異所性腫瘍は、ヒト肝癌の臨床的特徴を模倣する。この方法は、肝細胞癌免疫学的研究に有用なツールを提供することができる。この方法の視覚的なデモンストレーションは、このプロトコルの実行を成功させるために不可欠な、より技術的に困難なステップ(脾臓内注入など)を示すことができます。次に、男性を手動で拘束し、6〜8週齢のC57黒6マウスの後側を上に立たします。代替70%エタノールとベタジンスクラブを使用して、注射部位を3回洗浄します。その後、腹腔内注射により四塩化炭素160マイクロリットルをマウスに送り込み、動物を自宅のケージに戻します。足の指のピンチに対する応答の欠如を確認した後、5ヶ月齢のシミアンウイルス40 T抗原トランスジェニックマウスで、マウスを膝の位置に置き、テープで手足を固定する。リネアアルバの長さに沿って中線開腹を行い、肝臓の十分な暴露を提供するのに十分な大きさを作り、腸を左に置き換える。肝臓の上を解剖して、下の大静脈を暴露する。血管をリゲートするために動脈クランプを誘導する。蝶の針を使用して、ポータル静脈への静脈内アクセスを取得し、手動でカテーテルを固定します。各溶液の注射器を慎重に切り替え、15ミリリットルの溶液1、0.75%コラゲターゼ溶液2の15ミリリットル、カテーテルを介したコラゲターなしの溶液2を15ミリリットルの溶液を、毎分流量あたり約8.9ミリリットルの溶液で正常に供給します。灌流の終わりに、腫瘍質量をPBSの10〜15ミリリットルを含む50ミリリットル円錐管に収穫する。ちょうど実証したように、次のMTD2マウスから腫瘍を物品切除する。はさみを使って肝臓を小さく切ります。組織片を完全なRPMI培地の5ミリリットルを含む50ミリリットルの円錐管に移す前に、組織の残りの部分を組織から除去するために、新鮮なPBSの新しい容器に組織を移します。5ミリリットルのピペットの先端を通して簡単に収まるまで、洗浄された肝臓サンプルをミンチします。30ミリリットルの最終容積に達するためにチューブに十分な媒体を追加します。5ミリリットルのピペットを使用して組織断片をトリチュレートし、70マイクロメートルのストレーナーを通して溶液を新しい50ミリリットルチューブに濾過します。ストレーナーを完全な媒体で数回洗います。追加の完全な媒体で50ミリリットルに最終的なボリュームを調整します。遠心分離を停止し、上清をデカントする前に、遠心分離によって懸濁液を最大50倍に素早く回転させます。次に、数えるPBSの20ミリリットルでペレットを再懸濁する。MTD2肝細胞の脾臓内注射の場合、1匹のレシピエント動物ごとに27ゲージの注射器を1本ずつ、1匹のマウスにつき220マイクロリットルの肝細胞を搭載した注射器を積み込みます。麻酔を施した四塩化炭素処理動物におけるつまみつまみへの応答の欠如を確認する。脊椎筋のすぐ下から始まり、次に、左脇腹の1センチの切開を背側の極端から13番目の肋骨と平行にし、鈍い尖った鉗子を使用して脾臓を外装する。脾臓の動脈と静脈の間に2つの中型チタンクリップで脾臓をクリップし、脾臓の下極に200マイクロリットルの細胞を送達します。ペディクルの下枝を1つの中型クリップでクリップし、最初に配置された2つのクリップの間で脾臓を切ります。腫瘍細胞を直接注射した脾臓の下極を取り除き、3-0ポリグラクチン910を使用して縫合を中断して内筋層を閉じる。その後、滅菌されたスチール創傷クリップを使用して外皮層を閉じ、皮下にカープロフェンの1キログラム当たり5ミリグラムを投与する。示されるようにT抗原トランスジェニックマウスから単離した後、肝細胞および腫瘍浸潤細胞の両方が観察され得る。細胞は通常、処理後にほぼ100%生存率を示す。野生型四塩化炭素処理動物への脾臓内接種後、移植された肝細胞は腫瘍特異的シミアンウイルス40T抗原を発現する正体性肝細胞癌腫瘍を正常かつ確実に増殖させる。MTD2質量からの肝細胞の私達の生存および純粋な集団の調製および脾臓内注射の正確な投与は、手順の成功にとって重要である。我々のチームは、血管内および腹腔内注射を介してレシピエントマウスへの肝細胞接種を試験したが、これらの他の方法は、正腸肝細胞癌を誘導することはできなかった。このモデルは、免疫監視の調査と腫瘍進行の初期および後期段階での耐性を可能にするユニークなプラットフォームを提供します。四塩化炭素は有毒であるためご注意ください。

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

主要な人間の自己抗原を発現するアデノウイルスによるマウスの感染は、CYP2D6の広範な肝炎、線維化と世代を特徴とする自己免疫介在性肝疾患の永続的な形式で、2型自己免疫性肝炎の結果を患っている患者の血清によって認識されるP450...

CYP2D6の動物モデル：マウスにおける自己免疫性肝炎を誘導する方法

免疫不全マウスにおけるヒト腫瘍の異種移植は、癌の生物学を研究するための貴重なツールです。ヒト肝細胞癌細胞または腫瘍断片の皮下および肝臓内異種移植片を生成するための特定のプロトコルが記載されている。レシピエントマウスにおいて、部分肝切除により誘発される肝臓再生は、肝移植を容易にするための戦略として提示される。...

免疫不全マウスの皮下および肝内ヒト肝細胞癌異種移植片の生成

胆汁の流れの混乱は、特徴的な時間依存性の形態学的変化を伴う重度の炎症性胆汁うっ滞性肝障害を引き起こします。ここでは、マウスの総胆管の外科的結紮のためのプロトコルを提示します...

マウスにおける胆管結紮：閉塞性胆汁うっ滞による炎症性肝障害と線維症の誘発

癌の転移拡散は、癌関連死の主要な原因です。私たちは、固形臓器腫瘍で転移のメカニズムを研究するための「患者様」同所同系マウスモデル系を確立するための私たちの生存の手術方法の詳細な説明を提供します。...

肝細胞癌転移の「患者様」同所同系マウスモデル

このプロトコルは、ヒト免疫系および肝細胞の両方を有するヒト化マウスを確立するための信頼性の高い方法を提供する。ヒト肝細胞およびCD34+造血幹細胞の脾臓内注射を介して達成される二重再構成免疫不全マウスは、ヒト免疫不全ウイルス-1感染の影響を受けやすく、肝臓損傷を再キャパチレートするHIVに感染した患者...

HIV関連肝病因に対する二重ヒト化TK-NOGマウスモデルの確立

このプロトコルは、繊維質間質コンパートメントを伴う3Dバイオミメティックモデルを提示する。細胞間相互作用、腫瘍増殖および転移の活性メディケーターである細胞外基質の生物物性を模倣した比率で生理学的に関連するヒドロゲルを調製した。...

神経癌の生物模倣モデルが、調整可能な生体特性を有する3D環境における腫瘍-ストロマ相互作用を研究する

結腸直腸癌(CRC)オルガノイドの門脈注入は、間質に富む肝転移を生じる。CRC肝転移のこのマウスモデルは、腫瘍間質相互作用を研究し、アデノ随伴ウイルス媒介遺伝子治療などの新規間質指向性治療薬を開発するための有用なツールである。...

肝転移間質を研究するための結腸直腸癌オルガノイドの門脈注入

ここでは、肝動脈結紮の有無にかかわらず同所性肝細胞癌異種移植片を作成し、[18 F]フルオロミソニダゾール([18 F]FMISO)および[18...

肝細胞癌の同所性モデルマウスにおける非侵襲的PET/MRイメージング

患者の腫瘍から生成されたオルガノイドをマウスの肝臓に同所的に注入します。非腫瘍性肝組織の切除は、腫瘍が位置する肝臓組織に再生環境をもたらします。...

肝臓再生が腫瘍増殖に及ぼす影響を調査するための肝細胞癌患者由来オルガノイド異種移植モデル

部分的な2/3(66%)肝切除術のマウスモデルは文献でよく説明されていますが、肝移植後のスモールフォーサイズ症候群を模倣したより広範な肝切除術はほとんど使用されていません。マウスモデルにおける拡張78%肝切除術手順について説明し、健康なマウスで術後致死率が約50%になります。...

マウス手術モデルにおける拡張78%肝切除術

本プロトコルは、肝臓の完全な肝組織における星状細胞の形態を可視化・モデル化するための包括的な画像パイプラインを提供します。このアプローチは、マウス遺伝学を用いた線維芽細胞の蛍光標識、in situ 肝灌流ベースの組織調製、そして光学的透明性を得るための修正iDISCO組織クリアリング法を組み合わせています。...

肝線維症マウスモデルにおける肝星状細胞形態のマッピング

学ぶ肝細胞癌の免疫学的研究のためのマウスオルコトピック腫瘍モデル。C57BL/6マウスを用いた脾内注入法により、肝線維化環境下での腫瘍誘導免疫寛容を再現し、治療応答の解析に有用なプラットフォームを提供する。

肝炎症と線維症の設定に起因する肝細胞癌の腫瘍性肝細胞誘発性オルコトピックマウスモデル

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