Name: トランスレーショナル血管化複合体他家移植研究のためのラットにおける修正 Heterotopic 後肢 Osteomyocutaneous フラップモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: 学ぶラット後肢骨筋皮弁モデルを用いた血管化複合他臓器移植における拒絶反応と血管症の発生メカニズム。この再現性の高い手術モデルは、移植片の長期生存と治療戦略の評価に有用です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この作品は、賞を受けた Congressionally の医学研究プログラムを通じて、保健省国防長官の事務所によって支持されました。W81XWH-13-2-0057。意見、解釈、結論、および勧告は、著者のものであり、必ずしも国防総省によって承認されていません。

すべての動物の手術は、ルイビル大学の機関動物ケアと使用委員会 (IACUC-承認されたプロトコル 18198) とのケアと使用のための国立衛生研究所 (NIH) のガイドによって承認されるプロトコルに従って実施しました実験動物10.生後4ヶ月のオスブラウン-ノルウェー (RT1.An) と4ヶ月の男性ルイス (RT1.L) ラットは、それぞれ、VCA ドナーと受信者として使用された。
1. ドナー同種移植片収穫
<ol><li>イソフルランを通して塗布された気化したものを用いてドナー動物を鎮静する。</li>
	<li>移植片ドナー領域 (後肢) だけでなく、鼠径部と腹部領域を剃る。その後、バリカンで残っているファズの量を減らすために脱毛クリームで処理します。</li>
	<li>腹腔内 (IP) ケタミン (60 mg/kg)/xylazine (麻酔/kg)/acepromazine (2mg/kg) を用いてドナー動物を深く投与する。0.2 mL/100 g の体重と 0.2 mL の追加用量の投与をすべての h.便宜上、手順2の前にこの手順を実行することはオプションです。</li>
	<li>呼吸、体温、麻酔の深さのために麻酔下で継続的に動物を監視し、つま先のピンチ離脱反射テストを使用します。</li>
	<li>血液凝固を防ぐために、手術前に首筋領域で 30 U のヘパリン溶液を皮下投与する (SC)。</li>
	<li>マスク、ヘッドカバー、使い捨ての隔離ガウン、使い捨て手袋を着用してください。</li>
	<li>ドナー動物の仰向けを加熱パッドに置きます。足の腹部と背の両方の側面を含む外科領域を準備し、スクラブし、ドレープすることによって無菌手術場を生成する。無菌手袋をしてください。</li>
	<li>メスブレード #15 を用いて鼠径部くぼみに3cm の皮膚切開を行い、鼠径部の脂肪パッドを横方向に虹彩はさみを使用して反射させる。</li>
	<li>共通の大腿骨の容器を露出し、腹部筋肉を撤回するために伸縮性があるバンドが付いているワイヤーホックを置きなさい。</li>
	<li>解剖顕微鏡 (40 倍) を使用して、鼠径靱帯の下の一般的な大腿血管の出現から椎弓根近位を解剖し、膝窩の血管の合流を移植片に遠位。</li>
	<li>Microclips およびバイポーラ宝石の鉗子を使用して、結紮とそのような横曲折性大腿骨血管、表面上尾窩血管、伏在動脈、および近位尾大腿血管などの大きな動脈および静脈枝を分割し、動員する主要な大腿骨の容器。包む準備は細い両極鉗子を使用してあらゆる小さい枝を利用する。</li>
	<li>前の皮膚の中心から皮膚の切開を後肢の腹側に沿って切断し、足首領域に、虹彩はさみを使用した。</li>
	<li>Gracilis の筋肉だけでなく、その下の他の内転筋の筋肉をカット, 垂直方向に露出し、隣接する genicular 血管の内側を結紮します, 深部分枝小血管, および坐骨神経. 注:この時点で、別の手術台で、他の外科医は、intubate および麻酔 (2.5%-3% イソフルラン) レシピエント動物を必要とする。これは外科医が接木の配置の間に受信者の外科場所を準備し、接木の虚血性時間を最小にすることを可能にする。</li>
	<li>ドナー動物には、膝と足首のレベルで円周の皮膚切開を行います。膝と足首を Disarticulate、余分な筋肉や組織を取り除き、後肢の背側に垂直の皮膚切開を行い、移植片を遊離させる。この時点で、移植片 (腓骨および脛骨で構成され、その穿孔によって養われる関連筋肉および皮膚島で覆われる) は、椎弓根によってのみ接続される。</li>
	<li>大腿動脈と静脈に可能な限り小さなクランプを近位、鼠径靱帯の近くで、椎弓根を可能な限り近位に切断します。</li>
	<li>血液の移植片をフラッシュするために、27 G フラッシング鈍いカニューレを使用して大腿動脈にヘパリン処理生理食塩水 (30 U/mL) を注入する。 注:ヘパリンフラッシュの前に動脈を拡張することは、カニューレの挿入のための容易なアクセスを可能にする。フラッシュの間に、大腿静脈からの流出を注意深く監視してください。透明な流体が大腿静脈から出たら、フラッシュを停止します。</li>
	<li>暖かい生理食塩水に浸したガーゼで孤立した移植片を包み、レシピエント動物のテーブルにすぐに運びます。このとき、レシピエント手術部位はすでに血管吻合のために準備されなければならない。</li>
	<li>移植片を収穫した後、直ちに euthanize を介してドナーラットを再度採取する。</li>
</ol>2. レシピエント移植手術
<ol><li>チャンバを通して適用される気化イソフルランを用いた鎮静誘導に続いて、人工呼吸器制御の気管内チューブを介してレシピエント動物を深く麻酔し、2.5% 〜 3% イソフルラン。 注:この段階では、ドナーラットは依然として麻酔される。</li>
	<li>心拍数、呼吸数、体温、およびレシピエント動物の麻酔の深さを連続的に監視し、つま先のピンチ離脱反射試験を使用する。</li>
	<li>脱水症状と低血糖を予防するために、手術終了時に lactated リンガー溶液 2 mL と 2.5% デキストロースの皮下注射を行います。</li>
	<li>鼠径部を剃り、脱毛クリームで治療して、バリカンで残っているファズの量を減らします。</li>
	<li>マスク、ヘッドカバー、使い捨ての隔離ガウン、無菌手袋を着用してください。</li>
	<li>動物は、加熱パッドに仰向けに置きます。麻酔中に角膜の擦り傷を防ぐために眼科用軟膏を塗布する。外科区域を準備し、洗い、そしてドレープすることによって生殖不能の外科分野を作り出す。</li>
	<li>メスブレード #15 を用いて鼠径部くぼみに3cm の皮膚切開を行い、鼠径部の脂肪パッドを横方向に虹彩はさみを使用して反射させる。</li>
	<li>共通の大腿骨の容器を露出し、腹部筋肉を撤回するために伸縮性があるバンドが付いているワイヤーホックを置きなさい。</li>
	<li>マーフィーの枝を結紮て割る</li>
	<li>10-0 のナイロンの中断された縫合糸を使用して、anastomose は静脈のエンドツーサイド技術および幹線エンドツーエンドの技術によってレシピエントの容器にドナーの容器を提供する。徐々に動脈からクランプを解放し、その後静脈.出血のための吻合サイトを監視し、必要に応じて縫合糸を追加します。</li>
	<li>効果的な移植片再灌流を保証するために、血管吻合を視覚的に評価します。</li>
	<li>鼠径部のポケットに移植片をはめ込みと逆さまに、足首関節の優れたと膝関節の劣って向きます。</li>
	<li>タック縫合を使用して、隣接する筋肉に移植片を固定します。中断された水平マットレス皮膚吸収性4-0 縫合糸を介して皮膚を閉じる。</li>
	<li>レシピエント動物を麻酔から取り出し、それを人工呼吸器から引き離す。熱支持のための加熱パッドの上に動物を置きます。 注:全体の操作時間は3から 4 h の間に、外科医の経験および外科プロシージャの知人によってある。</li>
	<li>疼痛抑制のための皮下 (1 mg/kg) を投与し、動物が完全に回復し、移動するまで監視します。</li>
</ol>3. VCA 受信者モニタリング
<ol><li>レシピエントラットを単独で収容し、疼痛、脱水、体重減少、および外科的不全 (最初の48〜72時間) または拒絶に加えて活性の低下の臨床的徴候について毎日それらを監視する。疼痛抑制のための最初の3日間のメロキシカムの皮下 (1mg/kg) を毎日管理します。</li>
	<li>研究の終点に基づいて、投与する免疫抑制薬を選択します。</li>
</ol>4. 組織学
<ol><li>吸入イソフルラン麻酔下 (2.5% – 3%) で、所望の時点でドナー移植片から連続皮膚および基礎筋生検を得る。皮膚は、生検を得る前にスクラブしてドレープする必要があり、無菌のフィールドとテクニックを実行する必要があります。</li>
	<li>吸収性4-0 縫合糸を使用して、1〜2つのステッチで創傷を閉じます。動物をケージに戻し、麻酔から回復させます。</li>
	<li>10% ホルマリンで別々のチューブに生検組織を固定します。</li>
	<li>終末時点および吸入イソフルラン麻酔下 (2.5% – 3%) で、ドナー/レシピエントの境界にまたがるより大きな皮膚生検をとる。慎重に吻合のサイトで船のリーシュのペアを見つけます。縫合糸のために適切な部位が明らかになる。動脈および/または静脈から所望の血管サンプルを取る。10% ホルマリンで個別にすべてのサンプルを固定します。組織サンプルの収集後、および動物がまだイソフルラン麻酔下にある間、すぐに気胸を介して動物を euthanize。</li>
	<li>組織プロセッサ (または他の好ましい埋め込み技術) を使用して、パラフィン-それぞれの生検を独自のブロックに埋め込む。皮膚サンプルについては、すべての表皮層および真皮レイヤーが単一のスライスに見えるように組織を配向させる。容器サンプルの場合は、断面が得られるように容器の向きを合わせる。</li>
	<li>ミクロトームを使用し、6μ m 厚の切片を切断し、ヘマトキシリンおよびエオシン (H & E) 染色のスライドに塗布する。</li>
	<li>標準プロトコルを使用した H & E 用の染色。</li>
	<li>明視野の顕微鏡検査の技術を使用してすべての望ましいティッシュのサンプルの代表イメージを得なさい。</li>
</ol>

<ol><li>Gilbert Fernandez, J. J., Febres-Cordero, R. G., Simpson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Untold+Story+of+the+First+Hand+Transplant%3A+Dedicated+to+the+Memory+of+one+of+the+Great+Minds+of+the+Ecuadorian+Medical+Community+and+the+World%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">The Untold Story of the First Hand Transplant: Dedicated to the Memory of one of the Great Minds of the Ecuadorian Medical Community and the World.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. , (2018).</li>
<li>Dubernard, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+hand+allograft%3A+report+on+first+6+months%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Human hand allograft: report on first 6 months.</a> Lancet. 353 (9161), 1315-1320 (1999).</li>
<li>Jones, J. W., Gruber, S. A., Barker, J. H., Breidenbach, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+hand+transplantation.+One-year+follow-up.+Louisville+Hand+Transplant+Team%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Successful hand transplantation. One-year follow-up. Louisville Hand Transplant Team.</a> The New England Journal of Medicine. 343 (7), 468-473 (2000).</li>
<li>Devauchelle, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+human+face+allograft%3A+early+report%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">First human face allograft: early report.</a> Lancet. 368 (9531), 203-209 (2006).</li>
<li>Broyles, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+abdominal+wall+reconstruction+using+an+innervated+abdominal+wall+vascularized+composite+tissue+allograft%3A+a+cadaveric+study+and+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Functional abdominal wall reconstruction using an innervated abdominal wall vascularized composite tissue allograft: a cadaveric study and review of the literature.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 31 (1), 39-44 (2015).</li>
<li>Kollar, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovations+in+reconstructive+microsurgery%3A+Reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innovations in reconstructive microsurgery: Reconstructive transplantation.</a> Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 800-806 (2018).</li>
<li>Kaufman, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+vasculopathy+in+clinical+hand+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Graft vasculopathy in clinical hand transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 12 (4), 1004-1016 (2012).</li>
<li>Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+basic+and+translational+research+in+reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+Part+C%3A+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation.</a> Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).</li>
<li>Kaufman, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+in+VCA%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+International%22%5BJournal%5D)">Immunobiology in VCA.</a> Transplantation International. 29 (6), 644-654 (2016).</li>
<li>Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Institute for Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies, National Research Council of the National Academies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%2C+8th+edition%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition</a>. , National Academies Press. Washington, DC. (2011).</li>
<li>Nazzal, J. A., Johnson, T. S., Gordon, C. R., Randolph, M. A., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+limb+allotransplantation+model+to+study+skin+rejection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Heterotopic limb allotransplantation model to study skin rejection in the rat.</a> Microsurgery. 24 (6), 448-453 (2004).</li>
<li>Ulusal, A. E., Ulusal, B. G., Hung, L. M., Wei, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+hindlimb+allotransplantation+in+rats%3A+an+alternative+model+for+immunological+research+in+composite-tissue+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Heterotopic hindlimb allotransplantation in rats: an alternative model for immunological research in composite-tissue allotransplantation.</a> Microsurgery. 25 (5), 410-414 (2005).</li>
</ol>

作者は何も開示することはありません。

VCA のこのモデルの開発では、いくつかの重要な問題を検討しました。まず、移植片中に無傷の骨 (脛骨および腓骨)、骨髄、および皮膚を含むことが重要であった。成人ドナーからの臨床的な手の移植は、積極的に造血骨髄のかなりの量を転送しませんが, 骨髄ニッチの役割の研究は、より良いミラーリングされた長い骨ではなく、無傷の血管化骨を使用して, 結果露出した骨髄の線維症。さらに、閉鎖した骨の osteomyocutaneous のフラップの設計は伝染および出血の危険を減らす。骨髄および皮膚はいずれも、高度に免疫原性の組織であり、所望であれば免疫応答を誘発するために使用され得る。第2に、移植片が機能するために必要ではなく、複雑な骨接合および移植片の再 enervation を必要とする orthotopic モデルの必要性を排除する。これはまた、長期の外科的処置および動物の不快感11、12などの orthotopic モデルのよく知られた厄介な結果のいくつかを防ぐ。しかし、heterotopic の設計は、そのすべてが VCA 研究に...

切断、ブラスト傷害、悪性腫瘍、および先天性欠損症による壊滅的な組織損失のための再建手術は、患者からの組織の利用可能性およびドナー部位で生じる追加の罹患率によって制限される。いくつかのケースでは、熱傷犠牲者または四辺形切断者など、再建のための生存可能な組織は、患者から入手できない。1964年、エクアドルで初めての近代的な手の移植が行われました。これは技術的な成功でしたが、現時点で利用可能な免疫抑制は拒絶を防ぐには不十分であり、移植片は3週間未満で失われました。1998および1999では、免疫抑制の現代における最初の手移植は、リヨン、フランス2とルイビル、ケンタッキー州、USA3で行われました。初めて、再建外科医は同じように置き換えることができます。顔面移植は 20054で最初に行われ、多くの他の VCA 移植片が、腹壁5、子宮、および泌尿生殖器移植6のような現在日常的に行われている。
固形臓器移植とは異なり、ほとんどの VCA 技術は、高抗原性ドナー皮膚の存在を伴います。臨床経験は、皮膚の急性拒絶反応が比較的容易に制御されることを決定したが、治療7によく反応しない基礎組織および血管の慢性拒絶に寄与し得る。同種免疫応答に関連付けられている血管機能障害は、VCA7のフィールドのためのより不吉な障害物です。Macrovasculopathies は、灌流障害、治癒の遅延、および炎症誘発性の状態につながります。両方のコンフルエント積極的な大血管 vasculopathy および焦点 intimal 過形成は、手移植レシピエント7において生じる。さらに、microvasculopathies は、おそらく VCA 合併症にも貢献し、拒絶イベントにつながる可能性もあります。免疫と非免疫系の両方の要因は、おそらく、手の移植のレシピエントの vasculopathy において役割を果たすが、VCA における遠位血管機能不全を促進する特定のメカニズムは、特に低悪性度、慢性拒絶反応の文脈においては知られていない。これらの未回答の質問は、VCA 拒否/メンテナンスと vasculopathy の臨床コース中に移植片の連続評価を可能にする動物 VCA モデルの開発を要します。このようなモデルは、免疫抑制、感染性チャレンジ、および/または他の術後外傷性損傷8,9に直面して拒絶および vasculopathy に関する洞察を提供する。
ここで紹介したのは同種ラット VCA heterotopic 後肢 osteomyocutaneous フラップモデルです。以前に公開された VCA モデルに基づいて、この手順は技術的に簡単に実行でき、多数で再現性があり、レシピエント動物に最低の罹患率と不快感を呈する。このモデルは、VCA 承認と拒否の臨床的および病理組織学的評価を可能にするように設計されており、拒絶に関与する根底にある免疫および非免疫系のメカニズムを評価する機会を提供します。

<table><tbody><tr><td>アセプロマジン</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>5700850</td><td></td></tr><tr><td>アドベンティシア はさみ</td><td>ASSI&nbsp;</td><td></td><td></td>SAS15R8</tr><tr><td>近似器クランプ(ダブル)</td><td>ASSI</td><td>ABB2V、ABB22V</td><td></td></tr><tr><td>近似器クランプ(シングル)</td><td>FST</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>鉗子を適用するクランプ</td><td>ASSI&nbsp;</td><td>CAF4</td><td></td></tr>解<tr><td>剖はさみ</td><td>ASSI</td><td>SDS18R8</td><td></td></tr><tr><td>フラッシング鈍い針27 G</td><td>SAI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヘパリンナトリウム</td><td>Sagent</td><td>25021-400-30</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>パターソン獣医</td><td>14043-704-06</td><td></td></tr><tr><td>宝石商バイポー</td>ラ<td>ASSI</td><td>103000BPS03</td><td></td></tr>宝石<tr><td>商鉗子#3</td><td>FST</td><td>11231-30</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン HCl 100 mg/mL</td><td>ゾエティス</td><td>043-304</td><td>DEA ライセンスが必要</td></tr><tr><td>乳酸リンガー溶液</td><td>ホスピーラ</td><td>0409-7953-03</td><td></td></tr><tr><td>乳酸リンガー溶液 + 5% デキストロース</td><td>ホスピーラ</td><td>0409-7953-09</td><td></td></tr><tr><td>メロキシカム</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>11695-6925-2</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ鉗子</td><td>ASSI&nbsp;</td><td>JFAL3</td><td></td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー</td><td>ASSI</td><td>B138</td><td></td></tr><tr><td>Prograf (Tacrolimus) 5 mg/mL</td><td>アステラス</td><td>0469-3016-01</td><td></td></tr><tr><td>縫合糸、10-0 Prolene</td><td>Ethicon</td><td>W2790</td><td>または 10-0 Ethilon (2830)</td></tr><tr><td>縫合糸、4-0 コーティング Vicryl</td><td>Ethicon</td><td>J714D</td><td></td></tr><tr><td>血管拡張鉗子</td><td>ASSI</td><td>D5AZ</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>ベトワン</td><td>13985-612-50</td><td></td></tr></tbody></table>

トランスレーショナル血管化複合体他家移植研究のためのラットにおける修正 heterotopic 後肢 osteomyocutaneous フラップモデル

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

血管化コンポジット他家移植 (VCA) は、再建手術で比較的新しい分野です。人間の VCA で臨床的な成果には、手と顔の移植と、より最近では、腹壁、子宮、および泌尿生殖器移植が含まれます。機能的な成果は当初の期待を上回り、ほとんどの受信者は生活の質の向上を享受しています。しかし、臨床経験が蓄積するにつれて、免疫抑制からの慢性拒絶および合併症が対処されなければならない。移植片が失敗した多くの場合、その原因となる病理は虚血性 vasculopathy であった。<span style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">VCA、特に虚血性 vasculopathy に関連した急性および慢性拒絶反応の生物学的メカニズムは、研究の重要な領域である。しかし、VCA 患者の数が非常に少ないため、実験モデルでは提案されたメカニズムの評価の方が適切です。複数のグループは、VCA 拒否と vasculopathy の関連する未解決の質問のいくつかに対処するために動物モデルを使用しています。様々な種を含むいくつかのモデルデザインが文献に記載されている。ここでは、トランスレーショナル VCA 研究に利用できる、ラットの VCA heterotopic 後肢 osteomyocutaneous フラップの再現性のあるモデルを紹介します。このモデルは罹患率の低いレベルを維持している間、バイオプシーおよび異なったイメージ投射様相を含む接木の連続的な評価を、可能にする。

ラット VCA heterotopic 後肢 osteomyocutaneous フラップモデルは、免疫抑制の下で長期的な移植片生存を可能にします。このモデルは信頼性が高く、再現性があり、簡単に実行できます。フラップは、鼠径部によく隠されており、動物には最低の罹患率と不快感を構成しています。皮膚の提示は、同種移植片の生存および拒絶反応の臨床症状である (図 1)。折り返しの設計は総体の臨床監視を可能にし、レーザーのドップラーのようなさまざまなイメージ投射技術のための機会を作成する (図 2)。皮膚、筋肉、および動脈のシリアル生検は、異なる拒絶段階で組織病理学的フォローアップおよび分析を達成することを可能にする (図 3)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/...

血管化複合同種移植片は、移植患者に生命を変える利点を提供するが、移植片拒絶および vasculopathy の生物学的原因はあまり理解されないままである。ここに提示されたげっ歯類外科手術モデルは、再現性のある、臨床的に関連する移植モデルを提供し、研究者がその発生を防ぐために拒絶事象および潜在的な治療戦略を評価することを可能にする。

トランスレーショナル血管化複合体他家移植研究のためのラットにおける修正 Heterotopic 後肢 Osteomyocutaneous フラップモデル

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

臨床的に行われた少数の血管化複合同種移植は、移植片拒絶の根本的な原因を研究するために、信頼性の高い再現性のある動物モデルを必要とする。皮膚、筋肉、骨などの臨床的に関連する組織はすべてモデルに存在する。さらに、私たちのモデルの非機能的な性質は、より速い手術、フラップのためのより少ない虚血時間、およびVCAの異形性モデルと比較して低い罹患率を可能にする。手移植レシピエントでは、ドナー血管の血管障害は、血管の完全閉鎖、および移植された手への虚血損傷につながる可能性があります。このモデルは、これらの血管性事象の開発を研究するためのツールです。この外科モデルを試みる前に、一次外科医は大血管外科技術に精通し、熟練しているべきである。これは複雑で長い手順です。視覚的なデモンストレーションは、他のラボがそれに応じて準備し、手術のステップを理解するのに役立ちます。まず、鼠径部の顆窩に皮膚切開を行い、大腿骨血管を露出させることによって、ドナーラットの後肢を収穫する。腹側皮膚切開を行い、ペディクルの解剖に役立ちます。膝と足首の崩壊後、後部皮膚切り傷を行い、ペディクルを移植片を解放し、移植片を受け手の手術台に直ちに輸送し、レシピエント動物の手術部位を事前に準備して移植片の虚血時間を最小限に抑える。レシピエント動物では、以前のように大腿血管を露出して解剖し、移植片、静脈エンドツーサイド、動脈をエンドツーエンドで吻合する。移植片をイングイナルポケットに入れ、逆さまに向けます。最後に、皮膚を縫合する。処置を開始するには、麻酔ドナーラットを剃り、脱毛クリームを使用します。スクラフ領域に皮下に30単位のヘパリンを注入する。動物のスパインを加熱パッドに置き、脚の後ろ面を含む外科領域を準備、スクラブ、およびドレープすることによって無菌外科分野を作り出す。メスの刃番号15を使用して、ドナーラットの鼠径部の凹部に3センチメートルの皮膚切開を行います。虹彩はさみを使用して、イングイナル脂肪パッドを横に反射させます。綿棒で鈍い解剖を使用して、一般的な大腿血管を露出させ、弾性バンドを持つワイヤーフックを置いて腹筋を引き込みます。最大40倍の顕微鏡の下で、マイクロハサミ、3番目のストレートジュエラー鉗子、および数5つの45度角の鉗子を使用して、うつれ状靭帯下の一般的な大腿血管の出現から近位的にペディクルを解剖し、ポピタル血管の合流に遠位する。マイクロクリップとバイポーラジュエラーを使用して鉗子、リゲートし、主要な大腿骨血管を動員するために大きな動脈および静脈枝を分割する。細かいバイポーラ鉗子を使用して、小さな枝を焼灼します。アイリスはさみを使用して、前の皮膚の中心から、後肢の腹側に沿って足首の領域に切り取られた皮膚切開を行います。肉体の筋肉とその下の他の内転筋を垂直に切断し、内側近位性血管、深く分岐する小さな血管、坐骨神経を露出させ、液化する。この時点で、別の外科用表で、他の外科医は、移植片の配置に間に合うようにレシピエント手術部位を準備するためにレシピエント動物を挿管し、麻酔し、移植片の虚血時間を最小限に抑えるべきである。膝と足首のレベルで周回皮膚切開を行い、膝と足首を分別し、余分な筋肉と組織を取り除きます。後肢の後肢側に垂直皮膚切開を行い、線維と脛骨だけで構成された移植片を解放し、今ではペディクルによってのみ接続される。大腿動脈と静脈にできるだけ近い位置に小さなクランプを置き、脳靱帯にできるだけ近いペディクルを切断します。血液の移植片をフラッシュするために大腿動脈にヘパリン化生理的な生理を注入するために27ゲージのフラッシュ鈍いカニューレを使用してください。分離された移植片を温かい生理的に浸したガーゼで包み、レシピエント動物と一緒にすぐにテーブルに運び、外科的部位はすでに血管吻合のために準備されている。受け取ったラットを挿管し、2.5〜3%気化したイソファルランで深く麻酔し、1分あたり1リットルの酸素とバランスを取る。動物のスパインを加熱パッドの上に置き、外科部位をスクラブしてドレープする。最初の外科医がドナー動物から移植片を解放することに取り組んでいる間、メスの刃番号15を使用して、麻酔を受けたレシピエントラットの鼠径部の小ささの3センチメートルの皮膚切開を行う。虹彩はさみを使用して、イングイナル脂肪パッドを横に反射させます。ドナー動物と同じ方法で一般的な大腿血管を露出させた後、腹部の筋肉を引っ込めるために弾性バンドを持つワイヤーフックを置きます。その後、マーフィーの枝をリゲートし、分割します。10-0ナイロン中断縫合糸、吻合ドナー容器を使用して。静脈エンドツーサイド技術を介して船舶を受け取る。次に、エンドツーエンドの技術を介して動脈吻膜を行う。徐々にクランプを解放した後、出血のための鼻血のサイトを監視し、必要に応じて、追加の縫合を追加します。効果的な移植片再灌流を保証するために、血管吻合を目視で評価する。次に、移植片をインギナルポケットに入れ込み、足首関節を上にして逆さまに向け、膝関節を劣る。隣接する筋肉に移植片を固定するために縫合糸をタックを使用してください。最後に、中断された水平マットレス皮膚吸収性4〜0縫合を介して皮膚を閉じ、原稿に記載されているように術後のケアを続ける。ラットVCA異所性後肢骨髄切片フラップモデルは、免疫抑制下での長期同種移植片の生存を可能にする。フラップは鼠径部に十分に隠されており、動物に対する罹患率と不快感を最小限に抑えます。免疫抑制治療を停止すると、移植片は拒絶された。同種移植片のドップラー画像は、VCA後すぐに最小限の血液拡散から64日目のフラップの完全な再血管化へのシフトを示す。45日目の同種同種同種移植片の皮膚生検は、皮膚成分の正常な形態を示すが、75日目の拒絶反応では同種同種同種移植片中に萎縮および単核細胞浸潤があるのに対し、免疫抑制剤の低用量で毎日治療される。45日目の同系同種同種移植片の筋生検は正常形態を示すのに対し、筋肉萎縮および単核細胞浸潤は98日目の拒絶反応において同種同種同種移植片において明らかであり、免疫抑制剤の低用量で毎日治療される。45日目の同種同種同種移植片の大腿動脈生検は、98日目の拒絶反応における同種同種同種移植片の大腿動脈とは対照的に、免疫抑制剤の低用量で毎日治療される動脈の正常な形態を示す。このモデルは、急性拒絶反応、慢性拒絶反応、および感染や外科的侮辱などの環境要因が血管障害の発症に及ぼす影響をテストするためのツールを提供する。免疫抑制薬は、移植片の長期生存のために必要とされる。これらの薬物は化学的に危険であり、注意深く、適切な人員保護具で取り扱われるべきである。

modified-heterotopic-hindlimb-osteomyocutaneous-flap-model-rat-for

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

ここでは、ゴールドスタンダードと思われる同所性ラット後肢移植の手順を、説明します。...

ラット同所性後肢移植

全組織転送が広く腫瘍切除および外傷後の形態および機能を回復させる再建手術で使用される。手術前に、この組織を前処理すると、結果を改善することがあります。この記事では説明し...

筋皮虚血再灌流傷害のラットモデル： 現場横腹直筋皮フラップで

血管化コンポジット同種移植（VCA）は、臨床現実のものとなっている。ただし、VCAの広範な臨床応用は、慢性多剤免疫抑制によって制限されます。著者らは、最小化または潜在的にVCAにおける免疫抑制の必要性を排除することができる新規免疫調節戦略を変換するために、信頼性と再現性のある大規模な動物モデルを提示する。...

トランスレーショナル血管柄コンポジット同種移植（VCA）研究用に修正異豚後肢移植モデル

超微小血管吻合のための非縫合カフ技術を適用したマウスにおける同所後肢移植のためのこの新規モデルは、血管新生複合同種移植（VCA）に関連したin vivoでのメカニズムの免疫学的研究のための強力なツールを提供します。...

マウスで同所後肢移植

現在血管柄付き複合移植の任意の種類は、長期-的-免疫抑制、生活の重要な徴候のサポートが困難に依存します。モデルを提案、新しい豚脛骨 VCA 骨 VCA...

豚脛骨移植外科的血管新生: 新しい大型動物の骨血管複合移植モデル

この論文は、ラットの筋膜上皮の遊離皮弁を持ち上げ、それを首に移すために必要な手順を説明しています。...

無料組織転送のモデル：ラット心窩部無料フラップ

このプロトコルは、免疫学と機能回復の同時研究に向けた血管化複合同種移植(VCA)の堅牢で再現可能なモデルを提示します。手縫い血管アナストモーセと神経凝集を伴う右大腿後肢整形移植に細心の注意を払った技術に投資した時間は、機能的回復を研究する能力をもたらす。...

次のステップを踏む:ラットの機能回復を最大化するための神経凝集整体交位後肢移植モデル

本論文は、ラットにおける部分的な異所性骨髄性骨切りばん移植プロトコルと、中期的なフォローアップにおけるその潜在的な結果を提示する。...

ラットにおける部分的な異所性後肢移植モデル

本プロトコルは、ブタ筋膜皮膚皮弁モデルおよび血管新生複合組織研究におけるその潜在的な使用について説明しています。...

血管化複合同種移植片バイオエンジニアリング研究のための信頼性の高いブタ筋膜皮膚フラップモデル

我々は、異所性後肢から首への血管化複合異種移植の再現可能なマウスモデルを提示します。この超顕微外科プロトコルは0.3〜0.5mmの血管吻合を含み、ナイロンフィラメント誘導と静脈カフを統合しています。この研究は、血管化複合型異種移植における寛容性、虚血再灌流損傷、免疫学的メカニズムに関する翻訳研究の信頼できるプラットフォームを提供します。...

マウスにおける異所性後肢から頸部への移植:血管化複合型アロ移植の超顕微外科モデル

学ぶラット後肢骨筋皮弁モデルを用いた血管化複合他臓器移植における拒絶反応と血管症の発生メカニズム。この再現性の高い手術モデルは、移植片の長期生存と治療戦略の評価に有用です。

トランスレーショナル血管化複合体他家移植研究のためのラットにおける修正 Heterotopic 後肢 Osteomyocutaneous フラップモデル

さらに動画を探す