Name: 閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするためのインビボエストロゲン欠乏マウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: 学ぶ閉経後の心血管機能障害を評価するためのエストロゲン欠乏マウスモデル。両側卵巣摘出術を用いて外因性エストロゲン治療のスクリーニングを行い、apoE -/-マウスで動脈硬化の進行を解析する方法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、中国国立自然科学財団(81202526 to J.X.)、中国国立自然科学財団(81302769からB.S.)、北京市自然科学財団(47144226からB.S.)、中国のポスドクによって支援されました。科学財団(2010490325からJ.X.まで)、中国教育省博士プログラム財団(20121106120031からB.S.)。

すべての動物のケアと実験プロトコルは、中国医学アカデミーと北京連合医科大学の機関動物ケアと使用委員会によって承認されました (許可No.: SYXK (北京) 2013-0023).apoE-/-マウスの起源はC57BL/6J9、10です。
1. apoEにおける二重後部横切開による両側眼切開術-/-マウス
<ol><li>引き取り(28歳)で、アバーチン(トリブロモエタノール;200mg/kg;精前内)で雌のapoE-/-C57BL/6Jマウスを麻酔する。 注:32 apoE-/-マウスをランダムに4つのグループに分けた:SHAM、OVX、OVX/E2、およびOVX/PPD群(n=グループ当たり8)。</li>
	<li>動物を暖房パッドの上に置きます。麻酔中に目の保護のための目の潤滑剤を適用します。</li>
	<li>体温を36 ±0.5 °C以内に維持します。マウスの首の横面に鎮痛薬カルプロフェンの体重5mg/kgを皮下に投与する。</li>
	<li>腸の紋から3 x 5 cm2マウス領域の頭を剃ります。3 x 5 cm2絞り外科シートで動物を覆う前に、ヨウ素と70%エタノールで剃った領域を徹底的にきれいにします。実験中は無菌の器具と手袋を使用してください。</li>
	<li>はさみと鉗子を使用して、中線に1cm横に切開し、肋骨に1cm横に切開します。</li>
	<li>鉗子を使用して皮下組織を率直に解剖する。</li>
	<li>解剖ゴーグル(材料の表を参照)を使用して、腹腔内の白い脂肪組織を識別します。</li>
	<li>マイクロシサーとマイクロフォースを使用して、腹腔に達するまで筋膜を0.5〜1cm切開します。 注:シャム操作グループの場合は、傷口を直接閉じます。モノフィラメント縫合糸を用いて筋肉層と皮膚を別々に縫合する。</li>
	<li>腹腔内の白い脂肪組織が見えるとき、マイクロフォースを使用して脂肪組織をつかみ、穏やかに引き出します。腹腔内の脂肪組織で包まれたピンクの桑形の卵巣が見られます。</li>
	<li>0.5〜1cmの近位血管と子宮角をモノフィラメント縫合糸を使用してリゲートします。マイクロシサーを使用して卵巣を取り除き、残りの組織を腹腔に戻します。 注:OVX操作の主な有害症状は、OVX作動マウスの高い死亡率につながる尿管結節である。これは解剖ゴーグルを使用して組織を識別することによって避けることができる。</li>
	<li>傷口を閉じてモノフィラメント縫合糸を用いて筋肉層と皮膚を別々に縫合する。</li>
	<li>はさみと鉗子を使用して、中間線に1cm横に、反対側の肋骨に1cmの横に別の切開を行います。上記の手順を繰り返します (1.5 ~ 1.11)。</li>
	<li>動物に麻酔から目を覚まさせてください。手術後の最初の日にマウスを別々に保管してください。</li>
	<li>回復フェーズ中にケージを頻繁にクリーニングまたは交換します。</li>
	<li>手術後約24時間、鎮痛カルプロフェンの体重5mg/kgを皮下に投与する。</li>
</ol>2. ヘーゼルナッツスプレッドによる17βエストラジオールまたはPPDの経口投与
<ol><li>ゴマ油に17βエストラジオールまたはPPDを十分に溶解し、ごま油とヘーゼルナッツスプレッドを混ぜます(材料の表参照)。各30gマウスの1日当たり3μg、PPDの15μg、ゴマ油4μL、ヘーゼルナッツスプレッド60mgを含む。各30gマウスのプラセボを準備し、ゴマ油の4 μLとヘーゼルナッツスプレッドの60mgが含まれています。 注:17β-エストラジオールまたはPPDの毎日の投与部分は、以前の研究6、11および予備実験に基づいていました。</li>
	<li>OVXの1週間後、高コレステロール食(1.25%コレステロール、0%のコレート)でマウスに12週間給餌する。本研究で用いられる典型的な実験的処置スキームを図1に示す。</li>
	<li>第4週にヘーゼルナッツの浸透投与が広がる5日前に、約30mgのヘーゼルナッツスプレッドを含むプラセボを5日間5日間2〜5匹のマウスに食べさせるマウスを訓練する。最初の3日間、自宅のケージでグループでマウスを訓練します。トレーニングの4日目と5日目にマウスを別々のケージに入れ、実験状況に似た毎日の部分を提供します。</li>
	<li>最後の9週間の間に、マウスを別々のケージに入れ、その後、すべての摂食機会のためにヘーゼルナッツスプレッド部分を毎日提供します。 注:17β-エストラジオール(0.1 mg·kg-1)またはPPD(0.5 mg·kg-1)を含む毎日の部分を提供し、それぞれOVX/E2およびOVX/PPD群で広がるヘーゼルナッツを介して。シャムとOVXグループに広がるホルモンフリーヘーゼルナッツを含む毎日の部分を提供します。</li>
</ol>3. マイクロ超音波システムを用いた内分厚と心機能障害の判定
<ol><li>
超音波バイオ顕微鏡検査
	<ol>
<li>終了の1日前に、前述の21のように、マイクロ超音波システム(材料の表を参照)を使用して、内性媒体の厚さと心臓機能障害を調べる。</li>
		<li>検査の前に、各マウスに麻酔としてアバーチン(トリブロモエタノール)の200mg/kgのペリトネアル注射を与える(n = 8マウス/グループ)。</li>
		<li>各マウスの首の毛を慎重に剃ります。最適な画質を確保するために、暖かい超音波ゲルを自由に適用します。</li>
		<li>12.7 mm の焦点と 40 μm の解像度で 30 MHz スキャン ヘッドを使用して、大動脈根と上昇大動脈のベースライン超音波画像を取得します。</li>
		<li>監視のための鉛II構成の心電図を使用する。</li>
		<li>収縮期の1つの平面で上昇大動脈、大動脈アーチ、および上皮動脈の枝の右のパラスター的な長軸画像をキャプチャします(図3)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
内膜と最大プラーク厚さの測定
	<ol>
<li>トランスデューサと動脈部位との間の距離を容易に調整して、鮮明な画像を得ます。</li>
		<li>画像解析システム上のオフライン検査のために10sシネループをデジタルで保存します。</li>
		<li>さらなる測定のために、最適なフリーズフレーム超音波画像を手動で選択します。上昇大曲の小さな曲率の画像を確認します。上昇大動脈のプラークが見られる場合は、最大プラークの厚さを測定します。上昇大動脈のプラークが見えない場合は、最大IMTを測定します。</li>
		<li>IMT(血管発光親密なインターフェイスと中間臨度インタフェース間の距離)を測定します。最大プラークの厚さ(血管内膜とアドベンティタル層の境界間の最も厚い距離)を測定します。</li>
		<li>3つの病変部位からの平均データ(図3)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
心エコー検査を用いた心機能障害の判定 注:前述の22.i.i.を用いて、マイクロ超音波システムを用いて心エコー検査を行う。<ol>
<li>乳頭筋の近くで、心臓に向かって超音波ビームを指示します。</li>
		<li>2次元心電図ベースのキロヘルツビジュアライゼーションを実現します。</li>
		<li>30 MHzスキャンヘッドを用いて左心室の生体経胸エコー検査を行う。</li>
		<li>Mモードトレースから心臓機能に関連するパラメータをデジタルで測定します。</li>
		<li>3~ 5 回の心臓周期のデータの平均値 (表1)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
観測内および観測間の変動
	<ol>
<li>観測点内変動の検証のために、2 つの異なる機会に 1 人のオペレータによってデータを分析します。</li>
		<li>観測値間変動の評価を行う場合は、別のオペレータ別のデータを分析します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 毎週の体重測定と血漿総コレステロール(TC)とトリグリセリド(TG)判定
<ol><li>毎週の体重測定
	<ol>
<li>週 -1 から第 12 週まで週に 1 回体重を測定します。 注:n = 1群あたり8匹のマウス。</li>
	</ol></li>
	<li>プラズマ調製
	<ol>
<li>心内穿刺を通じて血液サンプルを収集する前に、注射器とチューブを準備してください。抗凝固剤としてEDTAを使用してください。各 2 mL シリンジに 0.5 M EDTA の 10 μL を追加し、各 1.5 mL チューブに 0.5 M EDTA の 8 μL を追加します。</li>
		<li>第12週で、一晩の断食の後、アバーチン(トリブロモエタノール;200mg/kg;食後経)でマウスを麻酔する。 注:n = グループあたり3匹のマウス。</li>
		<li>70%エタノールで腹部胸部を準備します。</li>
		<li>はさみと鉗子を使用して胸腔を開き、心臓が露出するまで肋骨を切ります。</li>
		<li>25Gの針を右心室に挿入します。血液が注射器に流れ始めるまでゆっくりと吸引する。 注:私たちは、25 G針で無菌状態で使い捨て注射器を使用しています(材料の表を参照)。</li>
		<li>安定した、さらには圧力で吸引し続けます。血液が見られない場合は、針の位置を変更し、吸引を繰り返します。</li>
		<li>必要な血液量を収集する前に、マウスを深く麻酔しておいてください。通常、最大1mLの血液を採取することができます。この深い麻酔状態下で子宮頸部脱臼によってマウスを安楽死させる。</li>
		<li>ピペット血液サンプルを1.5mLチューブに入れ、血液を十分に反転させ、EDTAを血液中に混合することを確認します。その後、すぐに氷の上に血液サンプルを置きます。</li>
		<li>収集の30分以内に4 °Cで400 x gで20分の遠心分離機のサンプル。</li>
		<li>上清を慎重に収集します。アリコートと-80 °Cでプラズマサンプルを保存します。</li>
	</ol></li>
	<li>TC または TG コンテンツ測定用の標準曲線を構築する
	<ol>
<li>TC標準曲線の場合、コレステロール標準濃度は、0 mmol/L、0.52 mmol/L、1.03 mmol/L、2.07 mmol/L、4.14 mmol/L、6.20 mmol/L、8.27 mmol/L、10.34 mmol/L、10.34 mmol/Lの各標準量に対して調合します。各コレステロール標準の平均 O.D. を設定します。縦(Y)軸値として、水平(X)軸値として濃度を設定する。統計ソフトウェアを使用して標準曲線を作成します。</li>
		<li>TG標準曲線の場合は、TG規格の様々な濃度を調用意します:0 mmol/L、0.45ミリモル/L、0.90 mmol/L、1.81 mmol/L、3.62 mmol/L、5.42 mmol/L、7.23 mmol/Lおよび9.04 mmol/L.メジャーO.DG。各 TG 標準の平均 O.D. を垂直 (Y) 軸値として設定します。水平 (X) 軸値として濃度を設定します。統計ソフトウェアを使用して標準曲線を作成します。 注:本研究では、標準曲線構造に4パラメータのロジスティックカーブフィッティング(4pl)を用いた。プラズマサンプルを測定する前に標準曲線を確認し、r2が0.995より大きいことを確認してください。 </li>
	</ol></li>
	<li>TC含有量測定
	<ol>
<li>TCアッセイキットのカラー試薬ボトル(25mL)を「TCワーキングソリューション」としてラベル付けします。</li>
		<li>冷蔵標本を短時間渦にします。希釈を準備する:蒸留水の80 μLのプラズマの20 μL。簡単に渦希釈。</li>
		<li>96ウェルプレートの適切なウェルに2.5 μLのコレステロール値(5.17ミリモル/L)または希釈プラズマの2.5 μLまたは蒸留水(ブランク)の2.5 μLを追加します。三部張りをお勧めします。</li>
		<li>すべてのウェルに、カラー試薬の250 μLを追加します。</li>
		<li>37 °Cで10分間インキュベートします。</li>
		<li>マイクロプレートリーダーの電源を入れ、10分ウォームアップします。</li>
		<li>インキュベーターからプレートを取り出し、マイクロプレートリーダーを510nmで読み取ります。マイクロティターウェルまたはプレートの底部に気泡やほこりがそれぞれ存在しないことを確認します。</li>
		<li>TC 濃度を次のように計算します。 TC+コレステロール標準+(血漿試料O.D.ブランクO.D)/(コレステロール基準O.D.ブランクO.D)</li>
	</ol></li>
	<li>TG含有量測定
	<ol>
<li>TGアッセイキットのカラー試薬ボトル(25mL)を「TGワーキングソリューション」としてラベル付けします。</li>
		<li>冷蔵標本を短時間渦にします。</li>
		<li>希釈プラズマの 2.5 μL または 2.5 μL の希釈プラズマまたは蒸留水の 2.5 μL を 96 ウェルプレートの適切なウェルに 2.5 μL を追加します。三部張りをお勧めします。</li>
		<li>すべてのウェルに、カラー試薬の250 μLを追加します。</li>
		<li>37 °Cで10分間インキュベートします。</li>
		<li>マイクロプレートリーダーの電源を入れ、10分ウォームアップします。</li>
		<li>インキュベーターからプレートを取り出し、マイクロプレートリーダーを510nmで読み取ります。 注:マイクロティターウェルまたはプレートの底部に気泡やほこりが存在しないことを確認します。</li>
		<li>TG 濃度を次のように計算します。 TG コント = TG 標準続行 × (プラズマサンプル O.D.ブランク O.D)/(TG 規格 O.D.ブランク O.D)</li>
	</ol></li>
</ol>5. 大動脈硬化性硬化性病変の顔解析
<ol><li>大オルタの分離と切除
	<ol>
<li>第12週で、一晩の断食の後、アバーチン(トリブロモエタノール;200mg/kg;食後経)でマウスを麻酔する。この深い麻酔状態下で子宮頸部脱臼によってマウスを安楽死させる。 注:1群につき3匹のマウスを用いた。</li>
		<li>70%エタノールで腹部胸部を準備します。はさみと鉗子を使用して胸腔を開き、心臓が露出するまで肋骨を切ります。</li>
		<li>pH 7.4でリン酸緩衝生理食べ物で50 mLシリンジを充填してください(材料の表を参照)。左心室に25Gの針を挿入し、灌流からの高圧を避けるために右心房を切る。</li>
		<li>0.05-0.08 mL/minの流量で灌流を行い、組織で灌流液を吸収します。</li>
		<li>胸腔内の肋骨と肺をはさみと鉗子で取り除く。その後、腹腔を開き、大動脈のより良いビューのために内部の器官を削除します。</li>
		<li>心臓をマイクロフォースで保持し、大腸骨分離までマイクロサイザーで背骨から背部に大疹を分離することにより、大腸を取り除きます。 注:腎心房の枝の近くで解剖するときは、大抗断を避けるためにマイクロシサーを使用して深く切断します。</li>
		<li>4%のパラホルムアルデヒドで48時間の心臓と大器を固定します。大小のいくつかを室温または2-8 °Cで生理食生理食(生理食)で数時間保存します。 注:この手順により、クリーニングが容易になります。</li>
	</ol></li>
	<li>大器の調製
	<ol>
<li>心臓を取り除く。ステレオ顕微鏡下でマイクロフォースとマイクロシサーを使用して、大官から気性組織を慎重に取り除きます。洗浄中に組織を湿らせておくために生理生理生理を使用してください。 注:大動脈や、一般的な頚動脈を残した動脈、左鎖骨下動脈などの重要な枝を引き裂いたり、傷つけたりしないように注意してください。</li>
		<li>1mmのイノミツを残し、一般的な頚動脈を残し、左鎖骨下動脈全体を切り取る。</li>
		<li>外側の曲率を切り開き、次に左の一般的な頚動脈に切り開き、次に左鎖骨下動脈に切り取る。</li>
		<li>腹部部分の底部に昇る部分の内側の曲率に沿って開いて切る。</li>
		<li>黒いプラスチックシートに大器を平らに固定し、大断が乾燥するのを防ぐために生理生理を適用します。</li>
	</ol></li>
	<li>大器の親密な領域の画像
	<ol>
<li>ステレオ顕微鏡で顔大通りの写真を撮ります。測定を校正するために、画像にミリメートルスケールの定規を含めます。</li>
		<li>同じ画像にアーチと胸部領域を含め、別の画像に腹部領域を含めます。JPEG または TIFF としてイメージを保存します。 注:アーチ領域は心筋の接合部から左鎖骨下動脈から3mm遠位に、胸部領域は左鎖骨下動脈から最後の肋間動脈まで3mm遠位であり、腹部領域は腸骨への最後の肋間動脈である。分岐。</li>
	</ol></li>
	<li>アテローム硬化性病変体法の定量化
	<ol>
<li>校正<ol>
<li>画像解析ソフトウェアで画像を開き(「材料の表」を参照)、空間キャリブレーションに進み、指示に従います。</li>
			<li>ルーラーをライン上に配置して、参照単位を mm に変更します。</li>
		</ol>
</li>
		<li>測定<ol>
<li>各画像に正しいキャリブレーションを設定します。</li>
			<li>定規で3mmを測定します。</li>
			<li>アーチと胸部領域の測定: 心筋の接合部から左鎖骨下動脈から3mm遠位までのアーチ領域と、左鎖骨下動脈から最後の肋間動脈まで3mmの胸部領域の輪郭を描く。アーチおよび胸部領域の病変をトレースし、顕微鏡を通して大器を見る。</li>
			<li>腹部領域測定:胸部領域の終わりから腸分泌分岐までの腹部領域の概要を説明する。腹部の病変をトレースし、顕微鏡を通して大動脈を見ます。</li>
			<li>大陸の内面に対する病変領域を計算します。</li>
			<li>研究グループに盲目の2人目の観察者を通じて定量を確認します。</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update%3A+A+Report+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), e38-e360 (2016).</li>
<li>Packard, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+health+and+disease+in+women%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular health and disease in women.</a> The New England Journal of Medicine. 329 (4), 247-256 (1993).</li>
<li>Samaan, S. A., Crawford, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+and+cardiovascular+function+after+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Estrogen and cardiovascular function after menopause.</a> Journal of the American College of Cardiology. 26 (6), 1403-1410 (1995).</li>
<li>Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inflammation in atherosclerosis.</a> Nature. 420 (6917), 868-874 (2002).</li>
<li>Tremollieres, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+hormone+replacement+therapy+on+age-related+increase+in+carotid+artery+intima-media+thickness+in+postmenopausal+women%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women.</a> Atherosclerosis. 153 (1), 81-88 (2000).</li>
<li>Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+reduces+atherosclerotic+lesion+development+in+apolipoprotein+E-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (3), 10022-10027 (1996).</li>
<li>Squadrito, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genistein+supplementation+and+estrogen+replacement+therapy+improve+endothelial+dysfunction+induced+by+ovariectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats.</a> Cardiovascular Research. 45 (2), 454-462 (2000).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction+and+enhanced+contractility+in+microvessels+from+ovariectomized+rats%3A+roles+of+oxidative+stress+and+perivascular+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue.</a> Hypertension. 63 (5), 1063-1069 (2014).</li>
<li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+Hypercholesterolemia+and+Arterial+Lesions+in+Mice+Lacking+Apolipoprotein+E%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li>
<li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ApoE-Deficient+Mice+Develop+Lesions+of+All+Phases+of+Atherosclerosis+Throughout+the+Arterial+Tree%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+and+Thrombosis%22%5BJournal%5D)">ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree.</a> Arteriosclerosis and Thrombosis. 14 (1), 133-140 (1994).</li>
<li>Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovariectomy+and+17-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice%3A+A+Visual+Demonstration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. 64 (e4013), 1-4 (2012).</li>
<li>Rossouw, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+and+benefits+of+estrogen+plus+progestin+in+healthy+postmenopausal+women%3A+principal+results+From+the+Women%27s+Health+Initiative+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial.</a> The Journal of the American Medical Association. 288 (3), 321-333 (2002).</li>
<li>Kumle, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Declining+breast+cancer+incidence+and+decreased+HRT+use%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Declining breast cancer incidence and decreased HRT use.</a> Lancet. 372 (9639), 608-610 (2008).</li>
<li>Jager, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+comparison+of+triptorelin+and+tamoxifen+as+treatment+of+progressive+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Research%22%5BJournal%5D)">A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer.</a> Anticancer Research. 15 (6B), 2639-2642 (1995).</li>
<li>Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+role+of+dietary+phytoestrogens+in+obesity+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes.</a> The American Journal of Clinical Nutrition. 76 (6), 1191-1201 (2002).</li>
<li>Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effects+of+a+Chinese+herbal+medicine+in+atherosclerosis+via+estrogen+receptor+beta+mediating+nitric+oxide+production+and+NF-kappaB+suppression+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells.</a> Cell Death and Disease. 4 (e551), 1-13 (2013).</li>
<li>Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+mediates+the+effects+of+pseudoprotodiocsin+on+adipogenesis+in+3T3-L1+cells%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (1), C128-C138 (2010).</li>
<li>Guivarc'h, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominant+Role+of+Nuclear+Versus+Membrane+Estrogen+Receptor+alpha+in+Arterial+Protection%3A+Implications+for+Estrogen+Receptor+alpha+Modulation+in+Cardiovascular+Prevention%2FSafety%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety.</a> Journal of the American Heart Association. 7 (13), 1-17 (2018).</li>
<li>Osako, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+inhibits+vascular+calcification+via+vascular+RANKL+system%3A+common+mechanism+of+osteoporosis+and+vascular+calcification%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification.</a> Circulation Research. 107 (4), 466-475 (2010).</li>
<li>Ivanova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+of+some+saponins+and+phenolic+components+of+Tribulus+terrestris+and+Smilax+excelsa+as+MDR+modulators%5BTitle%5D)+AND+%22In+vivo%22%5BJournal%5D)">Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators.</a> In vivo. 23 (4), 545-550 (2009).</li>
<li>Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notoginsenoside+R1%2C+a+unique+constituent+of+Panax+notoginseng%2C+blinds+proinflammatory+monocytes+to+protect+against+cardiac+hypertrophy+in+ApoE%28-%2F-%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice.</a> European Journal of Pharmacology. 833 (15), 441-450 (2018).</li>
<li>Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notoginsenoside+R1+attenuates+cardiac+dysfunction+in+endotoxemic+mice%3A+an+insight+into+oestrogen+receptor+activation+and+PI3K%2FAkt+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling.</a> British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1758-1770 (2013).</li>
<li>Adams, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+coronary+artery+atherosclerosis+by+17-beta+estradiol+in+ovariectomized+monkeys.+Lack+of+an+effect+of+added+progesterone%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%22%5BJournal%5D)">Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone.</a> Arteriosclerosis. 10 (6), 1051-1057 (1990).</li>
<li>Keaney, J. F. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17+beta-estradiol+preserves+endothelial+vasodilator+function+and+limits+low-density+lipoprotein+oxidation+in+hypercholesterolemic+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine.</a> Circulation. 89 (5), 2251-2259 (1994).</li>
<li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ApoE-deficient+mice+develop+lesions+of+all+phases+of+atherosclerosis+throughout+the+arterial+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14 (1), 133-140 (1994).</li>
<li>Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen-induced+recovery+of+autonomic+function+after+middle+cerebral+artery+occlusion+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-+Regulatory%2C+Integrative+and+Comparative+Physiology%22%5BJournal%5D)">Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats.</a> American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281 (5), R1531-R1539 (2001).</li>
<li>Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrimental+effects+of+17beta-oestradiol+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 25 (3), 414-420 (2005).</li>
<li>Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intimal+plus+medial+thickness+of+the+arterial+wall%3A+a+direct+measurement+with+ultrasound+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging.</a> Circulation. 74 (6), 1399-1406 (1986).</li>
<li>Hodgin, J. B., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minireview%3A+estrogen+and+mouse+models+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis.</a> Endocrinology. 143 (12), 4495-4501 (2002).</li>
<li>Bush, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+mortality+and+noncontraceptive+use+of+estrogen+in+women%3A+results+from+the+Lipid+Research+Clinics+Program+Follow-up+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study.</a> Circulation. 75 (6), 1102-1109 (1987).</li>
<li>Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+against+atherosclerosis+by+estrogen+is+independent+of+plasma+cholesterol+levels+in+LDL+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice.</a> Journal of Lipid Research. 40 (5), 893-900 (1999).</li>
</ol>

著者は利益相反を宣言しない。

ここで説明する方法論は、閉経期の女性に見られる脂質破壊およびアテローム性動脈硬化症に似たマウスモデルである。閉経後の女性におけるエストロゲン欠乏は、徐々に複雑で広範囲に広がるアテローム性動脈硬化病変1を伴う既存または進行中の高コレステロール血症の発生率を悪化させることができることが十分に文書化されている。診療所におけるアテローム性動脈硬化症を起こしやすい状態を模倣するために、apoE欠損マウスは、アテローム発生23、24、25を研究する動物の再現性と便利な供給源を適用した。本研究で示されているように、ウィーニング時の雌OVXapoE-/-マウスは、卵巣機能を有する女性apoE-/-マウスと比較して大動脈におけるアテローム硬化性病変の増加を示した。この動物モデルでは、制御された食事条件下でのアテローム硬化性病変サイズに対する様々な外因性エストロゲン置換療法の効果を...

疫学的および臨床的研究は、閉経後の女性が閉経前の女性よりも心血管疾患のリスクがかなり高いことを示しています 1,2.ホルモン補充療法(HRT)は、心血管疾患の相対的なリスクを0.37-0.793に減らすことができます。他の合併症の中で、心血管疾患によって引き起こされるアテローム性動脈硬化症は、世界的な死亡原因の主要な原因である4.しかし、アテローム性動脈硬化を起こしやすい状態を示すエストロゲン欠損マウスを含む実験室モデルは欠けている。このプロトコルは、閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするための生体内エストロゲン欠乏マウスモデルを提供する。
以前の研究は、高コレステロール食を与えたアテローム硬化性げっ歯類におけるOVXの適用は、アテローム性動脈硬化症5、6、7、8に苦しむ閉経後の女性を模倣できることを示している。閉経期の女性のアテローム硬化状態に似た再現性と便利な動物モデルは、外因性エストロゲン研究の基礎です。ここで、アテローム性動脈硬化症を起こしやすいアポリポプロテインEノックアウト(apoE-/-)マウス9、10に両側側切開の二重後側切開を適用した。中腹部または背部切開と比較して、二重背部横切開は、重度の腹腔の接着および炎症を避けることができるより簡単で、より少ない時間のかかる方法である。ヘーゼルナッツスプレッドを介した経口投与(材料の表を参照)は非侵襲的で便利であり、長期投与モード11として広く適用可能である。スローリリースペレット注入も人気6.しかし、インプラントは、特にOVXを受けたマウスにおける感染の発生率を悪化させる可能性がある。経口ガバゲージや水投与などの他の非侵襲的投与モードにも多くの欠点がある。経口ゲージは、典型的にはマウスにストレスを与え、経口損傷を引き起こす可能性がある。飲料水を介してホルモンを投与することは非常に有益です。しかし、外因性エストロゲンが水中に不溶性であるため、乳化剤としてのDMSOの添加は避けられません。ここでは、長期投与のためのヘーゼルナッツスプレッドを介したペラル17βエストラジオールまたはフィトエストロゲンホルモン置換を選択した。
最近、閉経後女性の心血管系に対するHRTの有益な効果は、女性の健康イニシアチブ(WHI)試験12で争われている。一方で, 外因性エストロゲン単独で心血管系に有益な効果を発揮;一方、それは心血管イベントのリスクを高めるために酢酸メトヒドロキシプロゲステロンと組み合わせることができます。より深刻に、HRTは乳房および子宮腫瘍の進行につながる可能性があり、この効果は著しくその使用を制限している13,14.腫瘍細胞15、16、17における有人活性を欠く外因性エストロゲンの心血管保護効果に、より多くの関心が集まっている。ヒトおよび動物における複数の研究は、エストロゲンと同様の構造を有する植物エストロゲンが心血管保護15,18において有益な役割を果たすことができることを示唆している。
したがって、本研究の目的は、(i)apoE-/-マウスおよび(ii)の心血管保護効果を比較するために、二重後体横切開を介して両側眼球切開による生体内エストロゲン欠乏マウスモデルを構築する(i)。ヘーゼルナッツスプレッドを介して17β-エストラジオールおよび擬似プロトジオシン(PPD)を投与した。17β-エストラジオールは、女性の性ホルモン6、11、19に属する外因性エストロゲンの一種である。PPDは、ジオスコア植物由来のステロイドサポニンおよびフィトエストロゲンであり、以前に抗腫瘍特性20を発揮することが報告されている。

<table><tbody><tr><td>17&beta;-エストラジオール、>98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8875-250MG</td><td>エストロゲン</td></tr><tr><td>使い捨て注射器(25 G針付き)</td><td>湖南省盧州恵康開発有限公司</td><td>0.5 * 19TWLB</td><td>心臓出血</td></tr><tr><td>高コレステロールマウスダイエット</td><td>Huafukang</td><td>バイオテクノロジーN / A</td><td>1.25%コレステロール、0%チョレート</td></tr><tr><td>高解像度生体内マイクロイメージングシステム</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo&reg;770</td><td>内膜中膜の厚さと心機能障害の測定</td></tr><tr><td>2-メチル-2-ブタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>152463-250ML</td><td>アバーチン</td></tr><tr><td>マイクロ解剖鉗子の調製、湾曲 8mm</td><td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>マイクロ解剖鉗子、ストレート 8mm</td><td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>マイクロ解剖はさみ、湾曲/シャープ 8 mm</td><td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>マイクロ解剖はさみ、ストレート/シャープ 8 mm</td><td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>モノフィラメント縫合糸 4-0 1/2 5 x 12 19 mm</td><td>上海浦東金環医療用品 Co., Ltd</td><td>R413</td><td>組織の縫合糸と結紮</td></tr><tr><td>ナットクリーム(ヌテラ)</td><td>フェレロ</td><td>N / A</td><td>、経口17&β;-エストラジオールまたはPPD</td></tr><tr><td>オプティバイザー光学ガラス双眼拡大鏡</td>用ミディアム、<td>ドヒーガンオプティカルカンパニー、株式会社</td><td>N/A</td><td>卵巣摘出術中の組織同定アシスタント</td></tr><tr><td>pH 7.4</td><td>SIGMA</td><td>P3813</td><td>1 L生理食塩水</td></tr><tr><td>の準備 Pro MultiLabel マイクロプレートリーダー</td><td>Tecan</td><td>Infinite M1000</td><td>血漿TCおよびTG測定</td></tr><tr><td>偽原虫類</td><td>Shanghai Winherb Medical S &T Development</td><td>W-0427</td><td>CAS registry no. 102115-79-7</td></tr><tr><td>Rimadyl, 50 mg/mL</td><td>Pfizer Pharma GmbH</td><td>462986</td><td>卵巣摘出術後の術後鎮痛</td></tr><tr><td>ゴマ油</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3547-1L</td><td>17&beta;-estradiol or PPD</td></tr><tr><td>Solcoseryl Eye-Gel</td><td>Menarini, Solco Basle Ltd.</td><td></td><td>麻酔中の目の保護</td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>MCALON</td><td>MCL-6STV</td><td>大動脈の内膜領域の画像</td></tr><tr><td>テーブルモデル 高速遠心分離機</td><td>SIGMA</td><td>1-14K</td><td>血漿の準備</td></tr><tr><td>はさみ、わずかなカーブ (14 cm)</td><td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>はさみ、ストレート フラット (14 cm)</td><td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>組織鉗子、鋸歯状、わずかな 湾曲 (14 cm)</td><td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>組織鉗子、鋸歯状、ストレート フラット (14 cm)</td><td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>トリブロモエタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402-5G</td><td>アバーチン</td></tr><tr><td>トリグリセリド (TG) アッセイキット</td><td>の調製南京建城生物学工学研究所</td><td>A110-1</td><td>血漿TG測定</td></tr><tr><td>総コレステロール(TC)アッセイキット</td><td>南京建城生物学工学研究所</td><td>A111-1</td><td>血漿TC測定</td></tr></tbody></table>

閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするためのインビボエストロゲン欠乏マウスモデル

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

閉経後の女性は閉経前の女性よりも心血管疾患を発症するリスクが高い。卵巣摘出時の雌マウスは卵巣摘出術(OVX)で、無傷の卵巣機能を有する雌マウスと比較して大動脈におけるアテローム硬化性病変を増加させた。しかし、アテローム性動脈硬化症を起こしやすいエストロゲン欠損マウスを含む実験室モデルは欠けている。この赤字は、閉経期の女性の臨床的なエストロゲン欠乏は、既存または進行中の脂質破壊およびアテローム性動脈硬化症の発生率を悪化させる可能性があるため、重要である。本研究では、アポリポタンパク質E(apoE)-/-マウスにおける二重後体横切開による両側眼欠切による生体内エストロゲン欠損マウスモデルを確立する。次に、ヘーゼルナッツスプレッドを介して経口投与した17β-エストラジオールとシュードプロトジオスチン(PPD)(フィトエストロゲン)の効果を比較する。我々は、PPDがOVX apoE-/-マウスの最終的な体重および血漿TGを減少させる上で何らかの効果を発揮するが、その17β-エストラジオールに匹敵する抗アテローム硬化および心臓保護能力を有することを見出した。PPDは、抗腫瘍特性を発揮することが報告されているフィトエストロゲンである。したがって、提案された方法は、閉経後の女性における伝統的なホルモン補充療法に代わるペラル投与を介して植物エストロゲンをスクリーニングするために適用可能であり、これは潜在的に有害な腫瘍遺伝学を有することが報告されている。容量。ヘーゼルナッツスプレッドを介した経口投与は非侵襲的であり、多くの患者に広く適用可能である。この記事には、ヘーゼルナッツスプレッドを介したapoE-/-マウスおよび前腔17βエストラジオールまたはフィトエストロゲンホルモン置換における二重後側切開による両側眼耳切開のステップバイステップのデモンストレーションが含まれています。心エコー検査を用いて血漿脂質と心血管機能解析を行う。

本研究で用いられる典型的な実験的処置スキームを図1に示す。引き取り(28日目)において、雌のapoE-/-C57BL/6Jマウスをアバーチン(トリブロモエタノール;200mg/kg;精米内)で麻酔した。マウスは、1cmの後部切開を介して両側OVXまたはシャムを操作した。両側OVXの1週間後、マウスに高コレステロール食(1.25%コレステロール、0%のコレート)を12週間送った。17β-エストラジオール(0.1mg·kg-1)またはPPD(0.5mg·kg-1)は、治療の最後の9週間の間にヘーゼルナッツ広がりを介して並行して並行して投与した。全てのマウスを毎週計量した。図2に示すように、エストロゲン欠乏後の血漿脂質およびapoE-/-マウスの週次体重に対する外因性エストロゲン(17β-estradiolおよびPPD)の両方の影響を評価した。高コレステロール食の12週間後...

臨床的には、閉経期の女性のエストロゲン欠乏は脂質破壊およびアテローム性動脈硬化症の発生率を悪化させる可能性がある。apoE-/-マウスの二重後体横切開を介した両側眼欠法による生体内エストロゲン欠乏モデルを確立した。マウスモデルは閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療のスクリーニングに適用可能である。

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

動脈硬化ポンデータを提示するエストロゲン欠損マウスを含む実験室モデルが欠けている。この手順は、閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするのに特に有用である。この技術の主な利点は、二重のドーソララル切開を伴わない卵巣切除術は、重度の腹腔接着および炎症を回避する、より簡単で時間のかかる方法である。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の大学院生であるYue-Zhang Yinです。APOEノックアウトマウスで両側卵巣切除術を行うために、まずペダル反射に対する応答の欠如を確認し、動物を加熱パッドの上に起こりやすい位置に置く。動物の目に軟膏を塗布し、外科用ドレープで動物を覆います。1センチの切開を正中線に、そして1センチメートルを肋骨に横に切り込み、鉗子を使って皮下組織をぶっきらぼうに解剖する。ゴーグルを解剖して、腹腔内の白い脂肪組織を同定する。マイクロハサミとマイクロ鉗子を使用して、腹腔に達するまで筋膜を通して0.5〜1センチメートルの切開を行い、マイクロ鉗子を使用して白い脂肪組織を穏やかに引き込みます。脂肪組織に包まれたピンクの桑形の卵巣は、腹腔内で観察されるべきである。モノフィラメント縫合糸を使用して、0.5〜1センチメートルの近位容器と子宮ホーンをリゲートし、マイクロハサミを使用して卵巣を収穫します。残りの組織を腹腔に戻し、個々のモノフィラメント縫合糸を使用して、筋肉と皮膚層を別々に閉じる。その後、ちょうど実証したように、動物の反対側の卵巣を収穫し、マウスが完全な再発するまで、監視と加熱パッド上で回復することができます。週に1回、手術前の週から12週間後に、各シャムと実験動物の体重をバランスで測定する。血漿総コレステロールおよびトリグリセリド測定の場合、第12週に、70%エタノールで腹側胸部領域を調製し、右心室に25ゲージの針を挿入する。ゆっくりと吸引し、1ミリリットルの血液が注射器に流れ込むまで、0.5モルEDTAの10マイクロリットルを含む1.5ミリリットルの採取管にサンプルを分配する。チューブを数回完全に反転してEDTAを血液中に混ぜ、すぐにチューブを氷の上に置きます。採取から30分以内に、G400倍と摂氏4度で20分間サンプルを遠心分離します。マイナス80°Cで保存するために慎重にプラズマ上清を収集します。大大通りを分離するには、第12週に、PBSで満たされた50ミリリットルの注射器に25ゲージの針を取り付け、実験動物の左心室に針を挿入する。右心房を切って灌流からの高圧を避け、毎分の流速で05〜08ミリリットルのPBSで心臓組織を浸透させる。ラボ組織で灌流液を吸収し、はさみと鉗子を使用して肋骨と肺を取り除きます。腹腔を開いて内臓を取り除き、大動脈をよりよく見る。心臓をマイクロ鉗子で捉え、背部大通り、背骨から腸骨の分岐まで分離できるようにします。その後、4%パラホルムアルデヒドで48時間心臓と大オルタを固定し、組織サンプルを室温または2〜8°Cで数時間保存します。高コレステロール食の12週間後、卵巣核化マウスは、血漿総コレステロールおよびトリグリセリド濃度の顕著な増加を示す。卵巣切開マウスは、17-βエストラジオールで経口投与された、またはヘーゼルナッツスプレッドを介してPPDに投与され、シャム作動マウスよりも有意に低い血漿総コレステロール濃度を示す。血漿トリグリセリドレベルは、卵巣化マウスにおいて減少し、17-βエストラジオールで経口投与されるが、PPDでは投与しない。卵巣摘出マウスでは体重増加の傾向が認められるが、シャム作動マウスと比較して、4群の動物間では体重に有意な変化は認められない。上昇大オルタの最大プラークは、卵巣切除マウスにおいて増加し、他のすべての群と比較して、心機能の全体的な低下と併せて、これらの動物において観察される。また、大動脈病変領域の平均割合は、大動脈領域全体に対して、卵巣切除マウスにおいて有意に増加する。予想通り、これらの病変の存在は17-βoestradiol、またはPPD治療によって減少する。卵巣切り出し手術の主なリスクは尿管結紮であり、その結果、高い死亡率が生じる。また、大動脈損傷を避けるために、腎動脈枝の近くに深く切断することを忘れないでください。

an-vivo-estrogen-deficiency-mouse-model-for-screening-exogenous

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

シラスティックカプセル及び経口ヌテッラによる卵巣摘出および17β-エストラジオールの後続の置換は、ラットとマウスで実証されています。...

ラットとマウスにおける卵巣摘出および17β-エストラジオールの交換：ビジュアルデモ

二つの運動パラダイムは、運動能力や運動に対する心臓の適応上の閉経の影響を調べるために新たに開発された化学的に誘発された更年期マウスモデルで試験した。...

マウスにおける運動耐容能および心臓適応に関する化学的に誘発卵巣障害の影響を研究するための方法

ここでは、マウスに移植した蛍光に分類されたひと子宮内膜片のライブ...

子宮内膜症の異種マウスモデルで病巣の大きさの非侵襲的モニタリング

PCOS とこれらの PCOS のようなダムから子孫の病態を検討するジヒドロテストステロン ペレット リーン PCOS のようなマウス モデルの開発について述べる.

多嚢胞性卵巣症候群を研究するハイパーアンドロゲン マウス モデル

子宮内膜症の多くのげっ歯類モデルは、技術的な複雑さ、再現性、および/または免疫不全動物または特別なレポーターマウスの必要性によって制限されています。我々は、独立して検証可能な客観的なスコアリングシステムを有し、卵巣切り出しまたは生存手術の要件を持たない任意の実験マウスを使用して、病変誘導の簡略化されたシステムを提示する。...

自然サイクリングマウスを用いた子宮内膜症のシンジニアスマウスモデル

さまざまな性腺外組織および臓器における卵胞刺激ホルモン(FSH)は、複数の疾患の病因と関連しています。卵巣摘出術およびFSH処理マウスモデル(OVF)を使用して、FSHの性腺外作用を調べることができます。...

マウスモデルにおける卵胞刺激ホルモンの in vivo での独立効果の探索

この記事では、95%エタノールをマウスの子宮に1〜3分以内に注入することにより、死亡率が非常に低く、子宮内癒着が最小限に抑えられた、信頼性と再現性のある薄い子宮内膜を作製するための詳細なプロトコルについて説明します。...

薄い子宮内膜のマウスモデルの確立

従来のチップベースの段階希釈中にプラスチック製品へのペプチド吸着は、効力の決定に大きな影響を与え、創薬のリード同定およびリード最適化フェーズに使用される構造活性相関の理解を混乱させる可能性があります。ここでは、ペプチドサンプルの自動音響非接触段階希釈の方法について説明します。...

効力決意アッセイにおけるペプチドアゴニストの連続希釈のために調剤自動アコースティック

ここでは、アクティビティベースのプローブの調製および使用を記載する（ARN14686、ウンデカ-10- ynyl- N - [（3 S）-2-オキソアゼチジン-3-イル]カルバメート）の検出および定量を可能にします前炎症性酵素Nの活性形態は、in vitroおよびex vivoの両方、酸アミダーゼ（NAAA）を-acylethanolamine。...

調製と<em&gt;インビボ</em&gt;アクティビティベースのプローブの使用のために<em&gt; N</em&gt; -acylethanolamine酸アミダーゼ

代謝率の変化を測定は、様々 な疾患や老化の進行を理解するための中心です。ここより密接に生理学的状態に似ており、ミトコンドリア活性を変更する新薬を明らかに役立つ可能性があります頭全体の酸素消費を測定する手法を提案する.

測定と酸素消費量全体の解釈飛ぶ頭セグメント

学ぶ閉経後の心血管機能障害を評価するためのエストロゲン欠乏マウスモデル。両側卵巣摘出術を用いて外因性エストロゲン治療のスクリーニングを行い、apoE -/-マウスで動脈硬化の進行を解析する方法です。

閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするためのインビボエストロゲン欠乏マウスモデル

さらに動画を探す