閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするためのインビボエストロゲン欠乏マウスモデル

動脈硬化ポンデータを提示するエストロゲン欠損マウスを含む実験室モデルが欠けている。この手順は、閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするのに特に有用である。この技術の主な利点は、二重のドーソララル切開を伴わない卵巣切除術は、重度の腹腔接着および炎症を回避する、より簡単で時間のかかる方法である。

この手順のデモンストレーションは、私の研究室の大学院生であるYue-Zhang Yinです。APOEノックアウトマウスで両側卵巣切除術を行うために、まずペダル反射に対する応答の欠如を確認し、動物を加熱パッドの上に起こりやすい位置に置く。動物の目に軟膏を塗布し、外科用ドレープで動物を覆います。

1センチの切開を正中線に、そして1センチメートルを肋骨に横に切り込み、鉗子を使って皮下組織をぶっきらぼうに解剖する。ゴーグルを解剖して、腹腔内の白い脂肪組織を同定する。マイクロハサミとマイクロ鉗子を使用して、腹腔に達するまで筋膜を通して0.5〜1センチメートルの切開を行い、マイクロ鉗子を使用して白い脂肪組織を穏やかに引き込みます。

脂肪組織に包まれたピンクの桑形の卵巣は、腹腔内で観察されるべきである。モノフィラメント縫合糸を使用して、0.5〜1センチメートルの近位容器と子宮ホーンをリゲートし、マイクロハサミを使用して卵巣を収穫します。残りの組織を腹腔に戻し、個々のモノフィラメント縫合糸を使用して、筋肉と皮膚層を別々に閉じる。

その後、ちょうど実証したように、動物の反対側の卵巣を収穫し、マウスが完全な再発するまで、監視と加熱パッド上で回復することができます。週に1回、手術前の週から12週間後に、各シャムと実験動物の体重をバランスで測定する。血漿総コレステロールおよびトリグリセリド測定の場合、第12週に、70%エタノールで腹側胸部領域を調製し、右心室に25ゲージの針を挿入する。

ゆっくりと吸引し、1ミリリットルの血液が注射器に流れ込むまで、0.5モルEDTAの10マイクロリットルを含む1.5ミリリットルの採取管にサンプルを分配する。チューブを数回完全に反転してEDTAを血液中に混ぜ、すぐにチューブを氷の上に置きます。採取から30分以内に、G400倍と摂氏4度で20分間サンプルを遠心分離します。

マイナス80°Cで保存するために慎重にプラズマ上清を収集します。大大通りを分離するには、第12週に、PBSで満たされた50ミリリットルの注射器に25ゲージの針を取り付け、実験動物の左心室に針を挿入する。右心房を切って灌流からの高圧を避け、毎分の流速で05〜08ミリリットルのPBSで心臓組織を浸透させる。

ラボ組織で灌流液を吸収し、はさみと鉗子を使用して肋骨と肺を取り除きます。腹腔を開いて内臓を取り除き、大動脈をよりよく見る。心臓をマイクロ鉗子で捉え、背部大通り、背骨から腸骨の分岐まで分離できるようにします。

その後、4%パラホルムアルデヒドで48時間心臓と大オルタを固定し、組織サンプルを室温または2〜8°Cで数時間保存します。高コレステロール食の12週間後、卵巣核化マウスは、血漿総コレステロールおよびトリグリセリド濃度の顕著な増加を示す。卵巣切開マウスは、17-βエストラジオールで経口投与された、またはヘーゼルナッツスプレッドを介してPPDに投与され、シャム作動マウスよりも有意に低い血漿総コレステロール濃度を示す。

血漿トリグリセリドレベルは、卵巣化マウスにおいて減少し、17-βエストラジオールで経口投与されるが、PPDでは投与しない。卵巣摘出マウスでは体重増加の傾向が認められるが、シャム作動マウスと比較して、4群の動物間では体重に有意な変化は認められない。上昇大オルタの最大プラークは、卵巣切除マウスにおいて増加し、他のすべての群と比較して、心機能の全体的な低下と併せて、これらの動物において観察される。

また、大動脈病変領域の平均割合は、大動脈領域全体に対して、卵巣切除マウスにおいて有意に増加する。予想通り、これらの病変の存在は17-βoestradiol、またはPPD治療によって減少する。卵巣切り出し手術の主なリスクは尿管結紮であり、その結果、高い死亡率が生じる。

また、大動脈損傷を避けるために、腎動脈枝の近くに深く切断することを忘れないでください。