Name: マウスにおけるうつ病様行動を誘導する慢性固定化ストレスプロトコル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-15T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 28 s
Description: 学ぼう、マウスにおける慢性固定化ストレスプロトコルによるうつ病様行動誘導法。拘束装置を用いた行動・生理学的検証手法を解説し、神経科学研究の再現性向上に貢献する標準化プロトコルを紹介する。

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本研究は、文部科学省(NRF-2015R1A5A2008833、NRF-2016R1D1D1A1B03934279)の助成を受け、韓国国立研究財団(NRF)を通じて基礎科学研究プログラム(IHS)の助成を受けました。GNU-2016-02) 慶南国立大学

すべての実験プロトコルと動物ケアは、慶南国立大学動物研究のための大学動物ケア委員会(GLA-100917-M0093)のガイドラインに従って行われました。
1. 材料
<ol><li>マウス<ol>
<li>出生後第7週で22-24gのC57BL/6株の背景の男性を使用してください。実験の1週間前に飼育室で習慣化する。 注:すべてのマウスは、実験動物会社から購入しました。</li>
		<li>12時間の光/暗いサイクル(午前6:00に点灯)の下で温度制御されたビバリウム(22〜24°C)でマウスを個別に収容し、通常の実験室のチョウと水が利用可能なアドリビタムを使用します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>拘束者<ol>
<li>正方形の台座に固定された円筒形の透明なアクリルタンク(高さ= 8.5 cm、直径= 2.5 cm)を使用して、抑制的な動作を抑制し、抑制行動を生み出します(図1A)。このシリンダーの直径は、マウスが前後に回転したり動いたりできないように、本体にフィットするように作られました。拘束器は商業的に購入するか、または実験室で作ることができる。</li>
	</ol>
</li>
	<li>テールサスペンション装置<ol>
<li>半透明のアクリル製のリーズナブルなサイズのテールサスペンションボックス(高さ=30cm、幅=20cm、長さ=20、図1B)を使用してください。動物間の相互作用を防ぐために、床と4つの壁のうちの3つがアクリル板によってブロックするように、ボックス内の長方形のパーティションを使用します。ボックスの残りの2つの側面を開いたままにして、ビデオ録画を許可し、水平バーを固定します。箱は商業的に購入するか、または実験室で作ることができる。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ビデオ録画装置およびビデオトラッキングソフトウェア<ol>
<li>コンピュータに接続された白黒表示の閉回路テレビカメラ(「材料の表」を参照)と三脚(またはその他のサポート製品)を使用して、行動実験の記録を可能にします。少なくとも2匹のマウスが同時にテストされるため、ビデオ録画は、この実験で行動スコアリングを可能にするために不可欠です。</li>
		<li>カメラの解像度が十分に高く、接続されたコンピュータにインストールされているビデオトラッキング ソフトウェア (「材料の表」を参照) を使用してビデオ データを分析できるようにします。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. CIS拘束によるうつ病の誘導
注:マウスを穏やかに扱いますが、自信を持ってしっかりと取り扱ってください。ラフと仮の取り扱いの両方が実験のもう一つのストレス要因であり、マウスが苦労、噛み付き、引っ掻く重要な理由です。
<ol><li>デジタルルクスメーターを使用して、ルームライトをライト(200ルクス)条件に設定します。</li>
	<li>テストの少なくとも1週間前に別のケージにマウスを入れ、実験の少なくとも30分前に試験室にマウスを置きます。 注:実験の前に少なくとも3日間、少なくとも1日1回マウスを取り扱い、実験者に慣れられるようにする。実験の前に適応期間は、マウスが試験室などの状況に順応することを保証するために必要である。</li>
	<li>マウスのしっぽをそっと持って、マウスを緊張させないようにし、荒れた面(ケージまたはケージの蓋のワイヤーバーの上)に慎重に置きます。</li>
	<li>小さな白いタオルで拘束者を覆い、マウスが自発的に拘束者に入るように、拘束者の開口部にマウスをそっと置きます。 注:この場合、マウスは拘束者に入る方向とは反対方向に配置されます。マウスを自発的に拘束者に入れさせるには、拘束者を小さなタオルで覆い、内側を暗くする。</li>
	<li>閉穴を閉じ、マウスをできるだけきつく締め、尾、足、睾丸などの身体への損傷を避けるように注意してください。</li>
	<li>マウスを2時間/日(午前9:00~午前11:00)15日間連続で拘束します。</li>
	<li>拘束(すなわち、運動拘束の開始前の48時間の間の食物摂取量)に曝露中に48時間毎に体重と食物摂取量を測定する。 注:体重と食物摂取量を測定する場合は、CIS中に試験室にコントロールマウスを自宅のケージに置きます。他の環境要因がCISマウスと同じであることを確認してください。</li>
	<li>ショ糖プリファレンステスト(SPT)やテールサスペンションテスト(TST)などの行動試験を行うことでうつ病の誘導を確認する(手順4および5を参照)。</li>
	<li>ELISAアッセイを用いてストレスマーカーコルチコステロンを測定してうつ病の誘導を確認する(セクション6参照)。</li>
</ol>3. ショ糖の好みテスト
<ol><li>試験の前に、マウスを2本の飲料ボトル(1本は0.1Mスクロースを含むもの、もう1つは普通の水を含む)の存在に慣れ、24時間後に2本のボトルの位置を切り替えて、サイドバイアスによって生み出される混乱を減らします。</li>
	<li>3日目に、24時間の水のマウスを奪う。</li>
	<li>SPT実験の日に、マウスを6時間の飲み物ボトル2本にさらす。3時間後、水ボトルの位置を切り替えます。</li>
	<li>スクロース溶液と消費水の体積(mL)を記録し、スクロースに対する動物の親和性を計算します。</li>
	<li>一般に、試験中の総流体消費量に対するスクロース消費量の量のパーセンテージとしてスクロースの好みを計算する。</li>
</ol>4. テールサスペンションテスト
<ol><li>TSTを開始する前に、少なくとも30分はCIS誘発マウスを試験室に持ち込む。</li>
	<li>部屋のライトを薄暗い(50 ルクス)条件に設定します。</li>
	<li>最高解像度のビデオ ファイルを取得するには、カメラをできるだけマウスの近くに配置します (マウスから約 40 cm)。</li>
	<li>セロファン粘着テープ(尾の先端からの距離は1cm)を使用して、水平バー(下線から30センチメートル)からしっかりとマウスを吊り下げます。他のストレス源を最小限に抑えるために、できるだけ早くマウスにテープを適用するプロセスを完了します。</li>
	<li>マウスがサスペンションボックスの中央に配置されたら、記録を開始し、6分間連続して動作の変化を観察します。 注: マウスが尾を登ろうとする場合は、スティックまたはクライムストッパーを使用して、その尾を防ぎます。</li>
	<li>実験の最後に、マウスをホームケージに移動し、テープを尾から慎重に取り外します。</li>
	<li>ビデオトラッキングソフトウェアを使用して、不動期間の累積時間を分析します。 注: 不動の持続時間は、最も重要な CIS パラメータです。これは、ソフトウェアのレベルフィルタリングデバイス内に含まれるモーションしきい値の観点から定義される、不動期間の累積時間として計算することができる。</li>
</ol>5. ELISAによる血液中のコルチコステロン濃度の測定
注:行動テストの翌日、マウスは採血のために犠牲になります。
<ol><li>麻酔まで誘導室で5%イソファルランでマウスを麻酔する。マウスが手術中に目を覚ますのを防ぐために誘導室(少なくとも2分)に十分な時間を持っていることを確認してください。</li>
	<li>1mL注射器を用いて心臓から血液を採取し、K3 EDTAを含む血液を氷上に貯蔵する(午前9時)</li>
	<li>1,000×gで遠心分離による別々のプラズマを4°Cで15分間。</li>
	<li>メーカーのプロトコルに従ってコルチコステロンELISAキット(材料の表を参照)を使用して血漿コルチコステロンレベルを定量します。</li>
</ol>

著者は何も開示していない。

脳の複雑さとMDDの不均一性は、完全に状態を再現する動物モデルを作成することは困難です。多くの研究者は、アンヘドニア(刺激に対する関心の欠如)と絶望が進化的に保存され、動物モデルで定量化可能な行動と考えられている内方線型ベースのアプローチ32を使用して、この困難を克服しました。うつ病33の患者にも見られる。本論文では,CISとMDDの翻訳的関連性を示す,アンヘドニアと絶望を誘発するのに十分な方法を提示した.さらに、多くの研究は、CISを使用して、うつ病様行動を引き起こし、正常な行動9、19、20、30を回復することができる抗うつ薬を評価するために使用されています。 31、34。<sup class=...

大うつ病性障害(MDD)は、世界的な精神障害の主な原因であり、発生率は予想よりも速く増加しています。2001年、世界保健機関(WHO)は、MDDが2020年までに世界で2番目に一般的な疾患になると予測しました。しかし、それはすでに2013年1で2番目に一般的でした.さらに、現在の抗うつ薬には、遅延効果、薬剤耐性、再発、および様々な副作用2、3を含む多くの制限がある。したがって、研究者は、より効果的な抗うつ薬を開発する必要があります。しかし、MDDのあいまいな病態生理学は、新規抗うつ薬の開発に障害を提示する。
長期ストレスはMDDの主な危険因子です。それはまた、MDD病因4、5に関連している視床下部下垂体副腎(HPA)軸で機能不全を誘発することができます。前述したように、HPA軸は、コルチコステロンレベル6、7、8を増加させることにより、うつ病や不安障害を含むストレス誘発性精神病態生理学において重要な役割を果たしている。9.多くの動物モデルは、MDD4の患者で観察されるHPA軸の持続的な活性化に基づいている。さらに、慢性的なストレスによって誘発される高いグルココルチコイドと皮下注射されたグルココルチコイドは、神経細胞死、神経過程の萎縮、げっ歯類の脳における成人神経新生の減少と共にうつ病行動を引き起こす10,11.うつ病に関連するもう一つの重要な脳領域は、中間前頭前皮質(mPFC)である。mPFCは、視床下部や扁桃体などの脳のサブ領域を制御する上で重要な役割を果たし、感情的な行動およびストレス応答8,9を制御する。例えば、後部mPFCにおける病変は、拘束ストレス12、13に起因するHPA軸機能障害および増強コルチコステロン分泌を誘発した。最近の研究はまた、繰り返し拘束ストレスがコルチコステロンレベルを増加させ、これはmPFC9のニューロンとアストロサイト間のグルタミン-グルタミンサイクルを介してグルタミン補充によって減少させることができることを示した。
MDDの病因を研究するために使用される最初の慢性ストレスパラダイムは、Katz14によって示唆された。ウィルナーらは、カッツの所見に基づいて慢性軽度ストレス(CMS)モデルを提案した。彼らは、抗うつ薬がCMS誘発性非ヘドニック様挙動15,16を回復したことを観察することによって、モデルが予測的妥当性を持っていることを確認した。一般的に、CMSモデルは、軽度の騒音、ケージの傾き、濡れた寝具、変化した明暗サイクル、ケージの揺れ、強制水泳、社会的敗北などの様々な軽度のストレスの組み合わせで構成されています。CMSモデルは研究者によって広く利用されている;ただし、このモデルは再現性が低く、時間とエネルギー効率が低下します。したがって、うつ病を評価するためのうつ病様行動および生理学的分析の誘導のための標準化された簡素化されたプロトコルの需要が高まっています。CMSモデルと比較して、慢性固定化ストレス(CIS;慢性拘束ストレスとも呼ばれる)モデルは、より簡単かつ効率的です。したがって、CISモデルは、慢性ストレス研究17、18、19、20、21、22、23、および、 24.さらに、CISは、うつ病行動25、26を開発するために、雄と雌の両方のマウスで使用することができる。CISの間、動物は2または4週間9、27、28のために1日あたり1〜8時間のボディフィットサイズのシリンダーに置かれる。このうち、1日2時間の拘束ストレス状態は、マウス9、28における痛みを最小限に抑えたうつ病行動を引き起こすのに十分である。拘束条件下では、血中コルチコステロンレベルは9、28、29と急速に増加した。いくつかの研究は、CISモデルが予測的な妥当性を有することを示しており、CIS誘発うつ病様症状が抗うつ薬19、20、30、31によって回復することを確認した。本明細では、CISの詳細な手順、ならびにマウスにおけるCIS後のいくつかの行動および生理学的結果を報告する。

<table><tbody><tr><td>1 ml使い捨てシリンジ</td><td>Sungshim Medical</td><td>P000CFDO</td><td></td></tr><tr><td>Balance</td><td>A&D社</td><td>FX-2000i</td><td></td></tr><tr><td>ボールノズル</td><td>チョンド B&P</td><td>JD-C-88</td><td></td></tr><tr><td>CCTVカメラ</td><td>KOCOM</td><td>KCB-381</td><td></td></tr><tr><td>コルチコステロン ELISAキット</td><td>ケイマン化学</td><td></td><td></td></tr><tr><td>デジタルルクスメーター</td><td>TES</td><td>TES-1330A</td><td></td></tr><tr><td>Ethovision XT 7.1</td><td>ノルダス情報技術</td><td></td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>HANA PHARM CO., LTD.</td><td></td><td>イフラン溶液</td></tr><tr><td></td><td>マウス コアテック</td><td></td><td>C57BL/6 ひずみ</td></tr><tr><td>拘束具</td><td>大宗 楽器工業</td><td>DJ-428</td><td></td></tr><tr><td>サッカロース (スクロース)</td><td>大中</td><td>7501-4400</td><td></td></tr><tr><td>小動物イソフルラン麻酔システム</td><td>サミット</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アクリルバー</td><td></td><td></td><td>装置はTSTテストのために研究室で作られました</td></tr><tr><td>テールサスペンションボックス</td><td></td><td></td><td>装置はラボで作られました</td></tr><tr><td>タイマー</td><td>エレクトロニクス 明日</td><td>TL-2530</td><td></td></tr><tr><td>ウォーターボトル</td><td>Jeung Do B&P</td><td>JD-C-79</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスにおけるうつ病様行動を誘導する慢性固定化ストレスプロトコル

A Chronic Immobilization Stress Protocol for Inducing Depression-Like Behavior in Mice

うつ病はまだ完全に理解されていないが、様々な原因要因が報告されている。最近、うつ病の有病率が増加している。しかし、うつ病の治療法やうつ病の研究は少ない。そこで本論文では、運動制限によるうつ病のマウスモデルを提案する。慢性軽度ストレス(CMS)は、うつ病のような行動を誘発するよく知られている技術です。しかし、それは様々な軽度のストレスの組み合わせからなる複雑な手順を必要とする。対照的に、慢性固定化ストレス(CIS)は、容易にアクセス可能な慢性ストレスモデルであり、一定期間の拘束を用いて動きを制限することによって抑うつ行動を誘発する拘束モデルから改変される。うつ病様挙動を評価するために、ショ糖優先試験(SPT)、テールサスペンション試験(TST)、およびストレスマーカーコルチコステロンレベルを測定するELISAアッセイを組み合わせた実験である。記載されたプロトコルは、CISの誘導およびうつ病の検証のための行動および生理学的要因の変化の評価を示す。

代表的な実験では、全てのデータを1群あたり6〜8匹のマウスから得た。代表的な材料と、マウスを自発的に拘束者に挿入する方法を図1に示す。
CIS誘導後の行動試験及び採血を行うために、マウスを図2Aに要約した実験手順に供した。図2および図3に示すように、CISはうつ病様の行動をうまく誘導し、ストレスマーカーコルチコステロンを放出する。さらに、これらの指標は、図3に示すようにグルタミン補充(マウスは、実験期間中にグルタミン補充食を与えられた、150mg/kg)によって回収された。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59546/59546fig1.jpg">...

この記事では、拘束を用いて慢性固定化されたマウスにおける抑うつ様行動の誘導のための簡略化された標準化されたプロトコルを提供する。また、うつ病の誘導を検証する行動や生理学的手法について説明する。

Depression is not yet fully understood, but various causative factors have been reported. Recently, the prevalence of depression has increased. However, ...

デジタルルクスメーターを使用して200ルクスで点灯する部屋を設定することで始めます。テストの少なくとも1週間前にマウスを別のケージに入れ、実験の少なくとも30分間は検査室にマウスを置きます。マウスの尻尾を軽く持ってマウスを引き張らないようにし、粗い表面に慎重に置きます。小さな白いタオルで拘束剤を覆い、マウスが自発的に拘束者に入るように、拘束器の開口部にマウスをそっと置きます。次に、閉じ込めを配置して、尾、足、睾丸などの身体への損傷を避けるように注意して、マウスをできるだけしっかりと拘束します。最後に、拘束剤への暴露の間に、体重および食物摂取を48時間ごとに測定する。試験の前に、マウスを2つの飲用ボトル(1つは0.1モルスクロースを含み、もう1つはプレーンウォーターを含む)の存在を48時間習慣付けます。サイドバイアスによって生成される任意の交位を減らすために24時間後に2本のボトルの位置を切り替えます。3日目にマウスの水を24時間奪う。その後、実験の日に6時間2つの飲用ボトルにマウスを露出させます。3時間後、水筒の位置を切り替えます。消費されたスクロース溶液と水のミリリットルで体積を記録し、次に動物のショ糖への親和性を計算します。最後に、テスト中の総流体消費量に対するスクロース消費量の割合として、スクロースの好みを計算します。尾の懸濁液試験を開始する少なくとも30分前に、慢性拘束ストレス誘発マウスを試験室に持ち込むことから始める。部屋のライトを50ルクスの状態を薄暗くするように設定します。次に、マウスから約40センチメートルのカメラを置きます。粘着テープを使用して、水平バーからしっかりとマウスを吊り下げます。マウスがサスペンションボックスの中央に配置された後、記録を開始し、6分間連続的に動作変化を観察します。マウスが尾を登ろうとする場合は、スティックを使用するか、ストップを登って停止しないようにします。実験の最後にマウスをホームケージに移動し、テープを尾部から慎重に取り外します。最後に、ビデオトラッキングソフトウェアを使用して、不動の期間の累積時間を分析します。結果は、CIS群の体重の減少と4日目の食物摂取量の有意に減少を示す。対照と比較して、CIS群におけるスクロース好みの減少が示されたが、不動時間およびコルチコステロンの有意な増加があった。また、グルタミンサプリメントダイエットは、体重、食物摂取、スクロース嗜好、不動性、コルチコステロンに対して示されるように、うつ病のような行動を改善する。

a-chronic-immobilization-stress-protocol-for-inducing-depression-like

Research

JoVE Journal

Behavior

行動

この動画では、マウスの固定化を繰り返すことで慢性的なストレスを誘発し、コルチコステロンの放出とニューロンのグルタミン酸受容体活性の低下を引き起こし、うつ病のような行動を引き起こす方法を実演しています。...

固定化ストレスによるマウスのうつ病様行動の誘導

出典:Yan, Z., et al. Evaluating the Anti-depression Effect of Xiaoyaosan on Chronically-stressed mice.J. Vis. Exp.

慢性ストレスばく露によるマウスのうつ病の誘発と評価

このプロトコルは、げっ歯類の抑うつ的な行動の研究に使用される強制水泳テストを説明しています。この手順では、水で満たされた容器に動物を入れ、最終的には不動行動を示すことになり、これは行動の絶望を反映していると考えられています。...

うつ病のような動作のモデルとしての強制水泳試験

ここでは、亜慢性軽度ソーシャル敗北ストレスのマウスモデルを開発するための方法が記載され、体重増加、以下hyperphagia-および多渇症様症状を含むうつ病の病原性の特徴を調べるために使用されます。...

ストレスによって誘発される行動や生理障害を理解するための亜慢性マイルド社会敗北ストレスのマウスモデル

予測不可能な慢性軽度ストレス(UCMS)プロトコルは、慢性ストレスや抑うつ症状に関連する行動的および生理学的変化を研究するための有効な方法です。UCMSプロトコルの8週間の賦課は、性別を問わず、げっ歯類の行動変化と健康状態の悪化を誘発します。...

げっ歯類での抑うつ症状を扇動、行動の変化と負の健康アウトカムのための予測不可能な慢性的な軽度のストレスプロトコル

ここでマウスで予測不可能な慢性的な軽度ストレス...

マウスで無快感を誘導するため予測不可能な慢性的な軽度ストレス プロトコル

・ フット プリント分析から成ると拘束ストレスがマウス モデルの運動障害の評価に有用テスト...

・ フット プリント分析とマウスのテスト ボックスをぶら下げの低コスト プロトコル適用慢性拘束応力

Y迷路バリアタスクは、報酬のために努力を費やす動機を調べる行動テストです。ここでは、この行動を伴う慢性コルチコステロンや社会的敗北ストレスを含む複数の十分に検証された慢性ストレッサーの検査と、女性に有効な新しい慢性非差別的社会的敗北ストレス(CNSDS)について議論する。...

慢性ストレスは、マウスのY迷路バリアタスクにおける努力関連選択行動をシフトさせる

うつ病の慢性絶望マウスモデル(CDM)は、反復的な強制水泳セッションと、読み出しとしての別の遅延水泳段階からなる。これは、少なくとも4週間安定な慢性抑うつ様状態の誘導のための適切なモデルを表し、亜慢性および急性治療介入を評価するために修正可能である。...

うつ病の動物モデル - 慢性絶望モデル(CDM)

このプロトコルでは、思春期初期の雄マウスで 10 日間の慢性的な社会的敗北ストレスを実行する方法を詳しく説明しています。マウスの 60%...

思春期初期の雄マウスにおける慢性的な社会的敗北ストレス

本研究では、4つの日常的な社会的ストレス要因を統合することにより、雌のC57BL/6Jマウスにおける精神障害に対する多重統合社会的ストレス(MISS)モデルについて説明しています。10日間の反復MISS曝露の後、マウスは抑うつおよび不安のような表現型を発症し、したがって、女性被験者の精神障害を研究するための自然な病因ベースの動物モデルを提供しました。...

雌C57BL/6Jマウスにおける精神疾患に対する多重統合社会的ストレスモデル

学ぼう、マウスにおける慢性固定化ストレスプロトコルによるうつ病様行動誘導法。拘束装置を用いた行動・生理学的検証手法を解説し、神経科学研究の再現性向上に貢献する標準化プロトコルを紹介する。

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