Name: Ultrastructural のための新生ラット脳組織の調製 Morphometric 神経末端におけるシナプス小胞分布の解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: 学ぶ新生ラット脳組織の透過型電子顕微鏡標本作製法を用いた神経末端シナプス小胞分布の形態計測解析。この手法により高解像度画像からシナプス機能を定量的に評価できます。

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この原稿は、NIH/NIGMS K08 123321 (to N.L.) とバージニア大学麻酔科からの資金によって支えられました。研究者は Erisir (Alev、バージニア大学、シャーロッツビル、VA) に感謝し、TEM での優れたトレーニングと技術支援のために、そして、彼女の貴重な原稿批評のためにありがとうと思っています。また、バージニア大学の高度電子顕微鏡検査施設では、検体の断面化と染色後の技術支援にも感謝しています。

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</ol>

作者は何も開示することはありません。

TEM のための試料調製中の組織切片の処理は、かなりの程度の技巧、濃度および忍耐を必要とする。マイクロピペットを使用して溶液を添加および除去する場合、試料は表面張力によってピペットチップに吸入される可能性があるので、ピペットによる組織損傷を避けるために細心の注意が必要である。また、脱水シーケンスの特定のステップは、1分として迅速であることができるので、オペレータは、次の脱水ステップが時間通りに開始され、検体が乾燥またはしわにならないことを確実にするために迅速に作業する必要があります。特別な注意を必要とする1つの手順は、オスミウムとの事後固定です。セクションは、オスミウムでの処理後に硬くなり、容易に損傷することができます。オスミウムを追加する前に、セクションがバイアルの底部に平坦化されることが不可欠であり、他の任意の折り目は、組織の骨折をもたらすでしょう。Osmicated のティッシュの処理は平らな埋め込みのための aclar のフィルムにセクションを移すとき特に挑戦的である。断片化を避けるために、バイアルの底から試料を持ち上げるときや、フィルムサンドイッチから気泡を押し出すときには、特別な注意が必要です。閉じ込められた空気を押し出すこ...

我々は、新生ラット脳組織の調製方法について、神経ターミナル1、2におけるシナプス小胞空間分布の詳細な morphometric 分析のための高品質の電子顕微鏡写真を得るために記述する。これらの方法に従って検体を処理することによって得ることができるハイコントラスト顕微鏡写真は、多数の細胞成分およびそれらの寸法構造関係3,4の詳細な形態を研究するためにも使用することができる。
透過型電子顕微鏡 (TEM) は、オルガネラや他の細胞構造の形態を定量的に研究する強力なツールです。この十年のように、高圧凍結による cryofixation を除いて、免疫タグ付けなしで脂質膜およびオルガネラの同じ程度の分解能を提供できる他の調査方法はない。しかし、凍結置換技術は広く使用されておらず、通常は高価な装置と長い準備時間を必要とします。
TEM の高い分解力を活かすためには、最適な試料調製が最も重要です。検体調製の主な目的は、生体状態からの変化を最小限に抑えて組織構造を保存し、検体のコントラストを高め、処理中の細胞成分の抽出や電子への曝露に対する組織の安定化を図ることである。ビーム。TEM のティッシュの準備のための多数の議定書は長年にわたっていくつかの実験室によって導入され、完成した。それらの多くは、シナプス小胞5、6、7、8、9、10、11の最適な可視化のための方法に焦点を当てています。現在使用されている多くの確立された、金の標準的な方法の中で、私達は最適のティッシュの構造を維持することを目指す化学固定、ポスト固定、en ブロックの染色、連続的な脱水、樹脂の埋め込みおよびポストの染色のためのプロシージャを選びました優れた画像コントラストを実現します。注目すべきは、新生児ラット脳組織で作業する場合、微細 ultrastructure の保存は特に困難な場合があります。実際には、非常に若い動物の中枢神経系は、成体の脳よりも高い水分含量、細胞外空間のより顕著な拡大、および細胞12間のより緩い接続によって特徴付けられる。これにより、新生ラット脳組織はオスモル濃度の変化に深く敏感であり、異なる張度12の逐次溶液を通して処理されたときに、artifactual 収縮および/または腫脹を生じやすい。したがって、我々の方法は、ラット新生児の脳のそれにできるだけ近いオスモル濃度の標本処理のためのソリューションを採用しています。私たちの目標は、神経末端のシナプス小胞空間分布を定量的に評価する高品質・高分解能の電子顕微鏡像を得ることでした。具体的には、神経終末内の小胞の数、シナプス前の形質膜からのシナプスの小胞の距離、シナプス前膜に停泊している小胞の数、シナプス小胞の大きさ、間小胞距離1.
十分な化学的固定は、シナプス小胞形態および空間的組織を研究するために必要な形態学的詳細を提供することができる高品質の電子顕微鏡写真を得るための前提条件である。固定のいくつかのモードが存在するが、血管灌流による脳組織の固定は、他の方法より明らかに優れている。血管灌流による固定は、全身循環の停止の直後に始まるので、脳組織の脱酸素とタンパク質の固定剤との架橋の間の間隔が短くなり、細胞内での最小変化が生じる構造。さらに、それは、血管床から細胞外および細胞区画12、13、14までの固定液の急速な流れのために、迅速かつ均一な浸透を達成する。グルタルアルデヒドとの主な固定は、続いて、四酸化オスミウムとの二次固定 (後固定) によって、微細構造15,16,17の優れた保存をもたらす。グルタルアルデヒドとパラホルムアルデヒドの混合物は、組織12へのより迅速な浸透の追加の利点を有する。
生物学的組織は、樹脂マトリックスを支持せずに薄い切片に切断するのに十分な剛性がないので、薄い断面化する前に培地に埋め込まれている必要がある。水非混和性エポキシ樹脂は、TEM に埋め込み媒体として一般的に使用されている。このタイプのマトリックスを使用する場合、すべての試料の自由水は、樹脂浸潤の前に有機溶媒に交換する必要があります。水は、エタノールおよび/またはアセトン12の上昇濃度の一連の溶液を通して標本を通過させることによって除去される。この議定書では、標本は柔軟な aclar シートの間で最初に平らに埋め込まれ、次にカプセルに埋め込まれる。最終結果は円筒形樹脂ブロックの先端に位置する組織で、ミクロトームの断面化中に生じる振動の影響を最小限にする理想的な形状を有しています。
内因性組織のコントラストを高めるために重金属で染色することは、試料調製のもう一つの重要な側面です。TEM における画像コントラストは、組織内の原子による電子散乱によるものである。しかし、生物学的材料は、主に、低原子量分子 (すなわち、炭素、水素、酸素および窒素) からなる。したがって、十分な散乱コントラストの生成は、組織の細胞成分に高い原子量の原子を組み込むことを必要とする。これは、重金属12、18、19を用いた試料の染色によって達成される。脂質に強く結合するオスミウム四酸化、ウラン、鉛は、電子染色として用いられる最も一般的な重金属です。
オスミウム (原子番号 76) は、存在する最も密金属の一つです。それは、固定剤および染色剤の両方であり、TEM におけるその主な役割は、信頼性の高い定着性12としてである。使用中の様々な固定プロトコルの中で、オスミウムに続くグルタルアルデヒドとの二重固定の方法は、検体調製中の細胞成分の抽出を減少させるのに最も効果的である。これらの2つの固定剤は、異なる種類の分子、特にタンパク質および脂質の最大数を安定化するために使用され、組織 ultrastructure の優れた保存をもたらす12、14、15、16,17.
ウラン (原子番号 92) は、電子染色として使用される最も重い金属であり、最も典型的には酢酸ウラニルの形態である。オスミウムと同様に、それは、染色剤および固定剤として作用し、TEM におけるその主な役割は、染色20、21としてのものである。核酸含有および膜構造は、アルデヒド固定組織22、23においてウラニル塩で強くかつ優先的に染色される。Osmication および脱水前のウラニルによる組織の治療は、膜および核酸含有構造の安定化、ならびに強化されたコントラストをもたらし、そして、そうではないいくつかの構造的な細部の同定を可能にする、オスミウム単独で染色された検体においては12,24,25に容易に検出することができる。酢酸ウラニルは、osmication24中に脂質膜上に堆積した低オスミウムと組み合わせることで微細な構造を安定化させることが考えられる。最大コントラストは、ウラニル酢酸が埋め込む前に適用され、薄いセクション12でポストステインとして達成されます。
鉛 (原子番号 82) TEM のために使用される最も一般的な染色であり、主に薄い切片の後染色のために採用されています。鉛塩は、高い電子不透明度を有し、膜、核および細胞質蛋白質、核酸及びグリコーゲン26、27を含む細胞構造の広い範囲のための親和性を示します。二重染色法が採用されている場合 (すなわち、ウラニル酢酸塩による染色は、鉛による治療が続く)、後者はウラニル酢酸染色の開発者として作用する。例えば、グルタルアルデヒドによって固定されたクロマチンのリードポスト染色では、ウラニルの酢酸摂取量は28、29、30、31、32の3倍に増加します。鉛はまた、オスミウムなどの他の金属によって付与される染色を増強する。鉛塩は、減少したオスミウム33の存在下でホスファチドの極性基に付着することにより、オスミウム固定組織の膜を染色すると考えられている。酢酸ウラニルおよび鉛の両方による染色の潜在的な欠点は、特に長期間にわたって、多くの異なる構造的な要素が等しくかつ非特異的に染色され、したがって、互いに容易に区別できない可能性があることである12.
光学超解像の写真活性化された局在の顕微鏡検査のような代わりとなる光源の最近の導入は、かなり改善される光顕微鏡検査の決断を持っている34。しかし、光顕微鏡は、個々に標識されたタンパク質または酵素を視覚化するために組織化と免疫 cytochemical 法に依存しているため、TEM の力は、一度にすべての構造要素を表示するために、そのままの綿密な研究のために卓越しています。組織構造の形態と寸法関係特に、他の技術は、シナプス前神経 boutons におけるシナプス小胞分布の morphometric 分析を行うために必要な形態学的詳細を提供することができる。それにもかかわらず、電子顕微鏡写真は、生物が死亡した後に組織の構造を捕捉し、したがって、シナプス前小胞輸送およびエキソサイトーシスのダイナミクスに関する情報を提供することができないことに注意することが重要である。したがって、FM 色素ライブイメージングやパッチクランプ電気生理学などの他のツールは、主な目的がシナプス小胞輸送およびエキソサイトーシスの動的および/または機能的側面を研究することであると考える必要があります。

<table><tbody><tr><td>4% 四酸化オスミウム</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>19170</td><td>水性</td></tr><tr><td>50% グルタルアルデヒド</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>16310</td><td>EM グレード、水性</td></tr><tr><td>Aclar 33 C 埋め込みフィルム</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>50425-25</td><td>7.8 ミル 厚さ、サイズ 8 インチ x 10</td></tr> <tr><td>インチ BEEM カプセルホルダー</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>69916</td><td>保持サイズ「00」カプセル</td></tr><tr><td>BEEM埋め込みカプセル</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>70021</td><td>「サイズ00、フラット(カットボトム)」</td></tr><tr><td>バトラーブロックトリマー</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>69945-01</td><td></td></tr><tr><td>キャメルヘアペイントブラシ</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>65576-01</td><td></td></tr><tr><td>ディスクパンチ</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>77850-09</td><td></td></tr><tr><td>812キットを埋め込む</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>14120</td><td></td></tr><tr><td>酢酸鉛</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>17600</td><td></td></tr><tr><td>クエン酸鉛</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>17800</td><td></td></tr><tr><td>硝酸鉛</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>17900</td><td></td></tr><tr><td>ライカUC7ウルトラカットミクロトーム</td><td>ライカ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロスケール</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>62091-23</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>19208</td><td>EMグレード、粒状</td></tr><tr><td>精密 Thelco 実験オーブン</td><td>Thelco</td><td>51221159</td><td></td></tr><tr><td>アジ化ナトリウム</td><td>Sigma-Aldricht</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>StatMark ペン</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>72109-01</td><td></td></tr><tr><td>チロード溶液</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>11760-05</td><td></td></tr>酢<tr><td>酸ウラニル</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>22400</td><td>粉末</td></tr></tbody></table>

ultrastructural のための新生ラット脳組織の調製 morphometric 神経末端におけるシナプス小胞分布の解析

Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals

私たちの研究室や他の多くは、シナプス小胞の形態と空間的組織化を研究するために、透過型電子顕微鏡検査の高い分解力を利用しています。シナプス前小胞分布の定量分析に必要な形態学的詳細の程度を得られる高品質の電子顕微鏡写真を得るためには、最適な試料調製が重要である。化学的固定は、試料調製のプロセスの第一歩であり、微細な ultrastructure を維持するために最も重要です。グルタルアルデヒド溶液を用いた血管固定、続いて四酸化オスミウムを用いたビブラトーム切片標本の治療により、分子の最大数、特にタンパク質と脂質を安定化し、優れた保存をもたらすの ultrastructure。その後、組織は、切片、シーケンシャル脱水および樹脂包埋で処理されます。酢酸ウラニル (すなわち、樹脂埋め込み前のビブラトームによる組織の染色) による En ブロック染色は、内因性のコントラストを高め、検体処理中の抽出に対して細胞成分を安定化させます。コントラストは、超薄断面の後染色として酢酸ウラニルを適用することによってさらに増加させることができる。酢酸ウラニル処理後のクエン酸鉛を用いた極薄の切片の二重染色により、ウラニルへの鉛の選択的結合による核酸含有構造の電子不透過性を強化することにより、画像分解能も向上させる。透過型電子顕微鏡法は、シナプスベシクルの形態学的詳細の特徴付けと、末端 bouton におけるそれらのサイズおよび空間的組織の定量化のための強力なツールである。しかし、固定された組織を使用しているため、透過型電子顕微鏡は、生きているプロセスや進化する過程に関する間接情報しか提供できません。したがって、主な目的は、シナプスの小胞の人身売買およびエキソサイトーシスの動的または機能的側面を研究することである場合、他の技術を考慮する必要があります。

TEM 用の検体の保存が良好または不良の指標として主に認められている一般的な基準が確立されている。これらの基準は、4つの選択された電子顕微鏡写真 (最適な調製の2つの例、欠陥製剤の2つの例) において、このプロトコールに記載された方法に従って若年ラット脳組織を処置することによって得られる。
一般に、良質の電子顕微鏡写真は、整然とした、明瞭で、全体的に灰色がかった画像として現れる。良好に調製された標本では、膜間の空間は粒状物質で満たされるべきであり、空であってはならない。同様に、細胞内の基底物質または細胞小器官の中に空のスペースが見つからないようにします (図1aと図2aを図3および図4と比較してください)。それにもかかわらず、非常に若い動物の中枢神経系は、成体の脳と比較したときの細胞外空間の拡大のある程度を示しており、細胞間のより緩やかな接続と全...

我々は、新生ラット脳組織を処理して、神経終末におけるシナプス小胞分布の morphometric 分析のための高分解能電子顕微鏡写真を得るための手順を説明する。これらの方法で得られた顕微鏡写真は、多数の他の細胞成分およびそれらの寸法構造関係の形態を研究するためにも使用することができる。

Ultrastructural のための新生ラット脳組織の調製 Morphometric 神経末端におけるシナプス小胞分布の解析

Our laboratory and many others have exploited the high resolving power of transmission electron microscopy to study the morphology and spatial ...

透過型電子顕微鏡のための組織調製のためのいくつかの既存のプロトコルの中で、シナプス前末端でシナプス小胞分布の形態測定分析を行うために最適な構造保存と高解像度顕微鏡を得る方法を選択しました。これらの方法で得られた高コントラスト画像は、シナプス前膜にドッキングされた小胞のシナプス前膜数と小胞間距離からのシナプス小胞の距離などのパラメータを定量化することを可能にする。これらのパラメータはすべてシナプス機能を示しています。シナプス小胞の空間組織における変化はシナプス機能の破壊に関連している可能性があるため、これらの方法はシナプス開発に対する全身麻酔薬の影響を調べるために使用されてきた。これらの方法は、シナプスの詳細な形態に対する薬物または治療の効果を調べ、その機能に関する洞察を提供するためにも使用できる。血管灌流を介してパラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドで以前に固定されたラット脳切片の後の固定のためのオスミウム四酸化症を準備することで始めます.四酸化オスミウムで処理した後、セクションが硬くなります。したがって、組織の取り扱いはそれ以来注意を必要とします。また、オスミウムを追加する前に、任意の折り畳みが組織骨折をもたらす可能性が高いように、あなたのセクションが平らにされていることを確認してください。4%オスミウム四酸化窒素と水の1つの5ミリリットルガラスアンプルを開き、茶色のガラス瓶の中に落とします。0.2モルリン酸緩衝液の5ミリリットルを加え、0.1モルリン酸緩衝液の追加10ミリリットルを加えて、1%の最終溶液を達成する。長い針を取り付けた20ミリリットルのシリンジを使用して1%オスミウム四酸化を引き上げ、オスミウム四酸化オスミウムをアルミ箔で覆われた茶色のガラス瓶に加えます。標本が展開され、平らにされていることを確認した後、標本バイアルに1%オスミウム四酸化および0.1モルPBを加える。試料をオスミウム四酸化スに室温で1時間インキュベートする。インキュベーションが終了した後にマイクロピペットで四酸化オスミウムを抽出し、プロトコルに記載されているようにセクションをすすいでください。酢酸ウラニルを調製するには、攪拌板に100ミリリットルの70%エタノールを含む200ミリリットルの体積ガラスフラスコを置きます。フラスコに酢酸ウラニルの4グラムを追加し、光による沈殿を防ぐためにアルミニウム箔を包み、連続的に攪拌します。50%エタノールでセクションを脱水します。4%の酢酸を1時間調製した染色し、原稿に記載されているように連続脱水およびすすいで続ける。60ミリリットルのギャージ注射器から注射器プランジャーを取り出し、安全針でキャップします。開いた側を上にしてシリンジを置き、樹脂ミックスの各成分を1つずつ加えます。525マイクロリットルのDMP30をピペットで追加して仕上げ。DMPが非常に粘性であるように非常にゆっくりとピペットのプランジャーを移動します。プランジャーを注射器に戻します。シリンジを数回反転して内容を混ぜます。色は黄色から琥珀色に変わります。注射器の中の空気を避難させる。その後、少なくとも30分間連続的に揺れるロッカーの上に置きます。1ボリュームのエポキシ樹脂と1ボリュームのアセトンをシンチレーションバイアルに加え、振って混ぜます。アセトンの蒸発を避けるために、最後のアセトンリンスを覆った後、組織セクション上のアセトン混合物に1つの樹脂にこれを適用します。2~4時間後に樹脂とアセトンの混合物を1対1で取り出し、フルレジンに交換し、4時間インキュベートします。すべての樹脂廃棄物をボンネットの下の回収容器に入れて重合し、後で処分する。透明なポリクロロトリフルオロエチレンフィルムを2枚切り、70%エタノールで拭きます。セクションの各側面に少なくとも1.5センチメートルのティッシュフリープラスチックが存在するようにトリミングし、同じ幅を持っていますが、上のシートの高さは底面の約2/3であることを確認します。ゆっくりとバイアルを傾け、細かいラクダの絵筆と柔軟なマイクロヘラを使用して、標本を底から非常に穏やかに持ち上げます。その後、慎重にバイアル壁に沿ってセクションを移動し、下部PCTFEシートに転送します。余分な樹脂をマイクロヘラで取り除き、上のシートで標本をそっと覆います。組織部分に直接圧力をかけずに閉じ込められた気泡を静かに押し出し、余分な樹脂を拭き取ります。溶剤耐性ペンを使用してシートにラベルを付け、オーブンに2〜3日間摂氏60度で置き、重合します。サンドイッチされたPCTFEシートをそっと引き離して開きます。溶剤耐性ペンを使用して、組織の近くに付着したシートの側面をマークします。ディスクパンチを使用して、ペンマークがパンチアウト組織の一部であることを確認するセクションの円サンプルを取得します。試料に光が光を当てたとき、ペンマークが輝きます。埋め込みカプセル側のキャップをカプセルホルダーの上に置きます。キャップに樹脂を一滴置き、パンチドディスクをキャップの内側に挿入し、組織セクションを上に向けます。穏やかなコルクスクリューの動きを使用してキャップにカプセルを挿入します。細かいピンセットを使用して、印刷された長さ2センチメートルの紙のラベルをカプセルに転がし、カプセルの側壁の湾曲に収まることを確認します。カプセルの中に埋め込み樹脂を注ぎ、カプセルの端まで満たし、尖った木製の棒を使用して組織標本を底に押し下げます。カプセルをオーブンに60°Cで2~3日間置き、重合します。そして、プロトコルに記載されているように、切り分けと染色を続行します。神経細胞構造の十分な保存の電子顕微鏡写真は、破断のない層状細胞膜を示す。細胞質は最終的に粒状で、空のスペースはありません。ミトコンドリアは、保存された外側の二重膜と無傷の内部クリステで腫れたり縮めたりしていません。シナプス小胞を可視化し、シナプス前膜からの距離を測定するためには、神経の超構造と微細な形態学的詳細の最適な保存が不可欠です。シナプス小胞は、切れ目のない単一の膜によって明確かつ並べられるべきです。シナプス小胞分布の形態測定解析を容易にするためには、シナプス前膜と心内膜は、その連続性に平行に保存されるべきである。組織構造の欠陥保存の電子顕微鏡写真は、神経細胞膜の歪みや破損、および著しく拡大した細胞外空間の存在を示す。ミトコンドリアは膨張し、クリステが腫れているように見える。欠陥組織構造保存の別の例では、細胞外空間が拡大した細かい粒状の細胞質物質の代わりに、細胞質内に大きな白い空きスペースがあった。全体として人工膜はグルタルアルデヒドとの固定中に脂質の動員に起因する可能性が高い。若い脳組織を働くとき、新生児ラットの脳の中にできるだけ近い間にトニシティを保ち、関節の実際の組織の収縮および腫れを最小限に抑えるように、すべての溶液のための溶媒として1モルリン酸塩緩衝液を使用する。これらの方法で得られた顕微鏡写真は、シナプス小胞以外の多くの細胞成分の詳細な形態および次元構造関係を研究するために使用することができる。例えば、ミトコンドリア、ゴルジ装置および核クロマチンが挙げられる。このプロトコルのいくつかのステップは、有毒である可能性のある化学物質を必要とします。常にヒュームフードの下で動作し、アルデヒド、オスミウム、ウラン、鉛化合物を扱うときは、個人的な保護具を着用してください。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

胎児ラット脳の集合体の培養系のためのプロトコルが記述されています。凝集体の多能性前駆細胞は、開発し、神経細胞、アストロサイト、オリゴデンドロサイトに分化することができる。...

ニューロンとグリアの開発研究ラットの脳の集計文化の調製

我々は経心臓的マウスの灌流、脳の除去と切片だけでなく、免疫ペルオキシダーゼ染色、樹脂の埋め込み、および脳切片の切片極薄のためのプロトコルについて説明します。これらの手順が完了すると、免疫染色の材料は、透過型電子顕微鏡による検査のための準備ができています。...

免疫電子顕微鏡のためのマウスの脳組織の準備

この報告書は、添付されたシナプス前boutonsを保持する個々の実行可能な神経細胞の機械的な分離のためのテクニックを示しています。...

シナプス伝達とイメージシナプス前終末を研究するために齧歯類の脳スライスからの神経細胞のVibrodissociation

神経回路網の構造を理解するために、個々のニューロンの機能的および形態学的特徴付けが必要である。ここで、我々はまだ、細胞内で樹状および軸索建築の事後再構築のために、ニューロンを標識する能力を維持し、細胞外の構成で電気生理学的記録を可能にするjuxtasomalビオシチンラベルを示しています。...

Juxtasomalビオシチン標識は、個々の皮質ニューロンの構造機能相関を研究するために、

人工多能性幹細胞(iPSC)に由来するニューロン、初代皮質ニューロン、およびアストロサイトからなる共培養システムを生成するためのプロトコルが説明されています。この共培養システムにより、新しいiPS細胞由来ニューロンとチャネルロドプシン-2を発現する既存の皮質ニューロンとの間のシナプス接触および回路の形成を検出することができます。...

共培養系における神経結合の形成を評価するための光遺伝学的アプローチ

ここでは、我々は簡単に、低コストを提供し、時間効率のよいプロトコルは、化学的に透過型電子顕微鏡のための免疫組織化学を事前に埋め込むと互換性のある長期保存を可能に、アクロレイン固定液と霊長類の脳組織を修正します。...

プレ埋め込み免疫組織化学および電子顕微鏡のための非ヒト霊長類脳組織の調製

このプロトコル両方視覚脳幹脊髄標本を通信し、包括的なステップバイ...

リズミカルにアクティブな準備体外新生児齧歯動物脳幹-脊髄損傷で薄くスライス

透過型電子顕微鏡と子宮内で伝達の組み合わせは、開発中に神経系の細かい微細構造の形態学的変化を研究するための強力なアプローチです。これらの併用は、神経可塑性の地形表現に関しての基になる構造の詳細の変更への深い洞察をことができます。...

子宮内開発のマウスの脳および脊髄の伝達の後の微細構造神経可塑性パラメーターの評価

ここでは、近赤外染料と免疫組織化学、高分解能走査を併用し、脳領域におけるアッセイタンパク質を測定するプロトコルを紹介します。...

げっ歯類の脳におけるタンパク質発現を測定するために近赤外蛍光と高解像度走査を用いること

神経化学的および行動異常の根本にある可能性のあるニューロンおよび樹状脊椎の形態変化の可能性を評価するために重要な錐体ニューロンを標識し、分析するプロトコルを提示する。...

脳スライスと一次細胞培養における錐体ニューロンの弾道標識

ここでは、ラットの実質的なニグラ・パルス・コンパクでのドーパミン作動性ニューロン数の半定量的決定のための自動化された方法を提示する。...

自動画像解析を用いたげっ歯類モデルのサブスタチングニグラにおけるドーパミン作動性ニューロン密度の半定量的決定

学ぶ新生ラット脳組織の透過型電子顕微鏡標本作製法を用いた神経末端シナプス小胞分布の形態計測解析。この手法により高解像度画像からシナプス機能を定量的に評価できます。

Ultrastructural のための新生ラット脳組織の調製 Morphometric 神経末端におけるシナプス小胞分布の解析

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